CN107179405A - 一种量化信息化的心脏疾病相关特异抗原检测装置及其检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种快速量化信息化的心脏疾病相关特异抗原的检测装置，包括心脏疾病相关特异抗原检测条、定量检测仪、网络传输装置以及终端读数装置。所述心脏疾病相关特异抗原包括肌钙蛋白、激动异物酶、血红蛋白、C反应蛋白、纳尿肽、酸性结合酶和D一二聚体的一种或几种。加入样品后形成“固相包被标记抗体—待测抗原—标记抗体”免疫复合物，其颜色强度与待测标记抗原浓度成正比。在特定检测时间如10～15分钟，将层析检测条(盒)用肉眼观察记录结果或定量分析仪中读取结果或通过网络传输装置的传输至所述终端读数装置。如将相关信息通过电脑或任何网络设备，或智能手机，储存传送给待测者，如操作人员、医生，或传送至检测中心。
Description
技术领域
本发明属于生物医学检验领域，尤其涉及一种量化信息化的心脏疾病相关特异抗原检测装置及其检测方法。
背景技术
根据流行病统计，心脏疾病患者每年有数十万，甚至上百万的患者，数字都在不断的上升。目前筛查方法为酶联法或发光法，PCR，CT，或MRI。程序复杂，需专业设备和专业人员操作。目前市场上亦有少量的快速层析法，没有量化信息化，无法适用心脏疾病急诊需求，且需要静脉抽血，此法导致患者不适，且延误诊断时间。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种快速量化信息化的心脏疾病相关特异抗原的检测装置，包括心脏疾病相关特异抗原检测条；
定量检测仪，通过所述定量检测仪上设置的卡槽与所述食品感染病原检测条连接，得到所述食品感染病原检测条的定量检测结果；
网络传输装置，用于传输所述定量检测仪检测的定量检测结果；
终端读数装置，用于读取所述传输装置传输的定量检测结果。
优选地，本发明所述的快速量化信息化的心脏疾病相关特异抗原的检测装置中，所述心脏疾病相关特异抗原检测条包括样品吸收区、过滤区、固相化标记抗体区、层析区与吸水区。
优选地，本发明所述的快速量化信息化的心脏疾病相关特异抗原的检测装置包括底板，样品吸收区、过滤区、固相化标记抗体区、层析区和吸水区粘贴在粘胶底板上，得到组装的底板；本发明对所述组装优选为底板由下而上依次粘帖样品吸收区(第1区)、过滤区(第2区)、固相化标记抗体区(第四区)、层析区(第3区)、吸水区(第7区)，粘帖在粘胶板上，粘贴时使所述各区的交叠1～1.5mm。本发明对所述底板的材质、尺寸和来源没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的用于免疫检测条中的底板即可。在本发明中，所述底板的材质优选为塑料或胶片材料。得到组装的底板后，将组装的底板进行切条，得到免疫试纸条。本发明对所述切条的方法没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的切条方法即可。本发明中，所述切条的宽度优选为3.0～5.0mm，优选为4mm。
本发明提供的免疫检测条包括样品吸收区。在本发明中，所述样品吸收区的材料优选为玻璃纤维。本发明对所述玻璃纤维的来源没有任何限制，本领域技术人员所熟知的玻璃纤维即可。本发明对所述样品吸收区粘帖在底板的下端，将所述样品吸收区的下边缘与底板下边缘平齐。
本发明中，所述样品吸收区吸收的样品为血液，血清或血浆。所述血液的来源没有限制，采用本领域技术人员所熟知的血液或血清、血浆即可。本发明实施例中添加的样品也可以为手指血。
本发明提供的免疫检测条包括固相标记抗体区。所述固相标记抗体区设置在所述底板上，位于过滤区上方，并且所述固相标记抗体区与过滤区的重叠1.5mm。在本发明中，所述固相标记抗体区的材料优选为玻璃纤维。
优选地，本发明所述的快速量化信息化的心脏疾病相关特异抗原的检测装置中，所述层析区包括检测线与对照线。
优选地，本发明所述的快速量化信息化的心脏疾病相关特异抗原的检测装置中，还包括设置在层析区的检测线T，所述检测线T紧邻所述固相标记抗体区，位于所述固相标记抗体区的上方，并且所述层析区和所述固相标记抗体区重叠1.5mm。在本发明中，所述层析区的材料优选为硝酸纤维素膜。
优选地，本发明所述的快速量化信息化的心脏疾病相关特异抗原的检测装置中，设置在层析区的对照线，或称质控线C。所述质控线C位于检测线T的上面，所述质控线C靠近吸水区。所述质控线C与检测线T之间间隔5mm。
本发明所述心脏疾病相关特异抗原检测条的制备方法，包括下列步骤：
1)将标记抗体溶解于缓冲液中，得到稀释的标记抗体，将所述的稀释的标记抗体喷涂在玻璃纤维膜，然后在真空干燥器进行干燥，得到固相标记抗体膜；
2)将包被抗体溶液划线于层析区上形成检测线，将兔抗鼠IgG溶液划线于层析区上制作质控线形成对照区，将划线后的硝基纤维膜放在37℃环境下烘干25分钟，得到包被标记抗体层析膜；
3)将先在底板由下而上依次粘帖样品吸收区、过滤区、固相化标记抗体区、层析区、吸水区，粘帖在粘胶板上得到组装的底板后，将组装的底板进行切条，得到心脏疾病相关特异抗原检测条。
本发明所述的快速量化信息化的心脏疾病相关特异抗原的检测装置是基于以下原理：
样品为血样：血液，或指血，或血清，或血浆。滴加到加样区(第1区)，血样不需要处理，借或不借助展开液上行至过滤区(第2区)，血样中红细胞血球滞留于过滤区，滤过的液体溶解固相标记抗体区(第4区)的标记抗体进入层析区(第3区)。血样中如存在抗原，则与标记抗体形成“抗原—标记抗体”复合物。该复合物按毛细管原理在层析条上上行，至第5区检测线上，与T区一条固相线的另一特异标记抗体形成“标记抗体—抗原—固相标记抗体”复合沉淀线。该沉淀线的颜色将与强度抗原血样中浓度成正比例。双抗体夹心法原理—在T检测线形成“固相包被标记抗体—待测抗原—标记抗体”免疫复合物，其颜色强度与待测标记抗原浓度成正比。在特定检测时间如10—15分钟，将层析检测条(盒)用肉眼观察记录结果或定量分析仪中读取结果。
优选地，本发明所述的快速量化信息化的心脏疾病相关特异抗原的检测装置中，所述定量检测仪为手持便携式检测仪。
优选地，本发明所述的快速量化信息化的心脏疾病相关特异抗原的检测装置中，所述手持便携式检测仪由智能手机为基础的读数仪、检测软件、云端服务组成。
优选地，本发明所述的快速量化信息化的心脏疾病相关特异抗原的检测装置中，所述网络传输装置的传输方式包括以下方法的一种或几种：
通过所述云端服务，经微信下载数据；
经由所述检测仪输出软件，经USB输出数据；
从微信或蓝牙印刷机打印输出；
从所述读数仪通过邮件方式发送。
优选地，本发明所述的快速量化信息化的心脏疾病相关特异抗原的检测装置中，所述手持便携式检测仪的检测软件中已储存待测样品的心脏疾病相关特异抗原浓度与检测仪的颜色强度之间的线性关系曲线。
优选地，本发明所述的快速量化信息化的心脏疾病相关特异抗原的检测装置中，所述心脏疾病相关特异抗原包括肌钙蛋白、激动异物酶、血红蛋白、C反应蛋白、纳尿肽、酸性结合酶和D一二聚体的一种或几种。
本发明的另一方面是提供一种快速量化信息化的心脏疾病相关特异抗原的检测方法，包括以下步骤：
1)将样品滴加至上述特异抗原检测条的样品加样区；
2)所述样品借助或不借助展开液，进入上述过滤区、层析区；
3)如果在层析区出现“标记抗体-抗原-固相包被抗体”复合沉淀线，则说明检测结果为阳性，如果没有出现所述复合沉淀线，则说明检测为阴性；当所述样品进入对照区时，应出现对照线，如没有对照线时，检测失败；
4)应用上述定量检测仪对所述“标记抗体-抗原-固相包被抗体”复合沉淀线进行颜色强度测定，获得样品中抗原浓度，通过上述网络传输装置传输至所述终端读数装置。
本发明与现有技术相比，本发明具有以下优点：
1、特异性高：所需配对标记抗体仅作用于高特异性检测心脏疾病相关特异抗原。
2、灵敏性高：所需配对标记抗体以高灵敏度检测心脏疾病相关特异抗原，与酶标法，发光法相近，能达到0.1ng/ml的检测水平。
3、所需配对抗体制作成的检测盒检测心脏疾病相关特异抗原试验区(T)颜色深浅或测试线强度与心脏疾病相关特异抗原浓度呈线性关系，通过储存在云端服务的检测仪与网络传输装置，可以方便地获得定量检测结果。
4、能够一步快速检测，所需配对标记抗体制作成的检测盒只需滴加待测血样，在10～15min便能测得结果。
5、检测结果量化信息化，通过将心脏疾病相关特异抗原检测条插入检测仪器，当即进入数字化程序显示，并可将相关信息通过电脑或任何网络设备，或智能手机，储存传送给待测者，如操作人员、医生，或传送至检测中心。
附图说明
图1为本发明快速量化信息化的心脏疾病相关特异抗原检测条结构示意图；
图2为本发明实施例中单项心脏疾病特异性抗原检测条的检测结果示意图；
图3为本发明实施例中单项心脏疾病特异性抗原检测盒的检测结果示意图；
图4为本发明实施例中双项心脏疾病特异性抗原检测盒的检测结果示意图；
图5为本发明实施例中的心脏疾病特异性抗原检测装置中手持便携式检测仪的外观示意图；
图6为本发明实施例中的心脏疾病特异性抗原检测装置中智能手机位置示意示意图；
图7为本发明实施例中的心脏疾病特异性抗原检测装置中量化信息化结果输出显示示意图。
具体实施方式
本发明的一个实施例提供了一种快速量化信息化的心脏疾病相关特异抗原的检测装置，包括心脏疾病相关特异抗原检测条；
定量检测仪，通过所述定量检测仪上设置的卡槽与所述食品感染病原检测条连接，得到所述食品感染病原检测条的定量检测结果；
网络传输装置，用于传输所述定量检测仪检测的定量检测结果；
终端读数装置，用于读取所述传输装置传输的定量检测结果。
在本发明的一个实施例中，所述心脏疾病相关特异抗原检测条具有以下结构，如图1所示：
第1区为样品吸收区(加样区)，
第2区为过滤区，
第3区为层析区(硝基纤维层析膜)，
第4区固相化标记抗体区A，
第5区为检测线T，其中包括标记抗体喷涂区带，
第6区为对照区C,
第7区为吸水区，
其中，所述层析区包括固相化标记抗体区、检测线与对照线。
在本发明的一个实施例中，本发明所述的快速量化信息化的心脏疾病相关特异抗原的检测装置的样品吸收区、过滤区、固相化标记抗体区、层析区和吸水区设置于底板上；本发明对所述组装优选为先在底板由下而上依次粘帖样品吸收区(第1区)、过滤区(第2区)、固相化标记抗体区(第4区)、层析区(第3区)、吸水区(第7区)，粘帖在粘胶板上，粘贴时使所述各区的交叠1～1.5mm；本发明中，所述切条的宽度优选为3.0～5.0mm，优选为4mm。
本发明对所述底板的材质、尺寸和来源没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的用于免疫检测条中的底板即可。在本发明中，所述底板的材质优选为塑料或胶片材料。得到组装的底板后，将组装的底板进行切条，得到免疫试纸条。本发明对所述切条的方法没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的切条方法即可。
本发明提供的免疫检测条包括设置在所述底板上的样品吸收区。在本发明中，所述样品吸收区的材料优选为玻璃纤维。本发明对所述玻璃纤维的来源没有任何限制，本领域技术人员所熟知的玻璃纤维即可。本发明对所述样品吸收区粘帖在底板的下端，将所述样品吸收区的下边缘与底板下边缘平齐。
本发明中，所述样品吸收区吸收的样品为血液，血清或血浆。所述血液的来源没有限制，采用本领域技术人员所熟知的血液或血清、血浆即可。本发明实施例中添加的样品也可以为手指血。
在本发明的一个实施例中，所述固相标记抗体区设置在所述底板上，位于过滤区上方，并且所述固相标记抗体区与过滤区的重叠1.5mm。在本发明的一个实施例中，所述固相标记抗体区的材料优选为玻璃纤维。
在本发明的一个实施例中，所述层析区紧邻所述固相标记抗体区，位于所述固相标记抗体区的上方，并且所述层析区和所述固相标记抗体区重叠1.5mm。在本发明的一个实施例中，所述层析区的材料优选为硝酸纤维素膜。
在本发明的一个实施例中，所述反层析区设置有检测线T和质控线C。所述检测线T位于质控线C的下面，所述检测线T靠近固相标记抗体区，所述质控线C靠近吸水区。
在本发明的一个实施例中，提供了心脏疾病相关特异抗原的检测条的制备方法，包括下列步骤：
1)将标记抗体溶解于缓冲液中，得到稀释的标记抗体，将所述的稀释的标记抗体喷涂在玻璃纤维膜，然后在真空干燥器进行干燥，得到固相标记抗体膜；
2)将包被抗体溶液划线于层析区上形成检测线，将兔抗鼠IgG溶液划线于层析区上制作质控线形成对照区，将划线后的硝基纤维膜放在37℃环境下烘干25分钟，得到包被标记抗体层析膜；
3)将先在底板由下而上依次粘帖样品吸收区(第1区)、过滤区(第2区)、固相化标记抗体区(第4区)、层析区(第3区)、吸水区(第7区)，粘帖在粘胶板上，粘贴时使所述各区的交叠1～1.5mm得到组装的底板后，将组装的底板进行切条，得到心脏疾病相关特异抗原检测条
本发明中，将标记抗体加入胶体金标记溶液，搅拌10～15分钟后，加入浓度为1％的小牛血清蛋白液，所述小牛血清蛋白液与胶体金标记溶液体积比为1：7～15，经高速(12000rpm)离心十分钟后，得到有色沉淀物，所述有色沉淀物为标记抗体。抽取上血清液，沉淀物溶解于特定缓冲液中。
本发明对所述胶体金标记溶液的来源没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的胶体金标记溶液即可。
本发明中，所述离心转速优选为12000rpm，所述离心的温度为4℃。
在本发明中，所述标记抗体的方法没有特殊限制，本领域技术人员熟知的稀释方法即可。
得到标记抗体后，标记抗体喷涂在玻璃纤维膜上。所述喷涂优选为浸泡、手动涂布或仪器喷涂，本发明实施例中采用浸泡的方法。标记抗体随后将浸泡后的纤维膜在真空干燥器下，进行真空干燥，得到固相标记抗体区。在本发明中，所述干燥的温度优选为35～38℃，8小时左右制得固相标记抗体膜。
包被抗体的制备：
将标记抗体溶液真空干燥划线于硝基纤维膜上制作检测线T线(第5区)，将兔抗鼠IgG溶液划线于层析区上制作质控线C线(第6区)，形成对照线。本发明对所述划线的方式并没有限制，采用本领域技术人员熟知的标记抗体喷涂方式即可。本发明实施例中划线采用划线仪进行划线，所述划线仪的型号为Biojet,Biodot CA,USA。在本发明一个实施例中，所述包被液的浓度优选为2mg/ml；所述包被液喷涂量优选为每30cm硝基纤维膜喷涂80ul/秒。
划线后，本发明将硝基纤维膜放在37℃环境下烘干25分钟，得到包被标记抗体层析膜。本发明对所述烘干的方法没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的烘干方法即可。在本发明一个实施例中，将样品吸收条、过滤条、标记层析条和吸水条粘贴在粘胶底板上，得到组装的底板。在本发明一个实施例中，对所述组装优选为先在底板由下而上依次粘帖样品吸收区(第1区)、过滤区(第2区)、固相化标记抗体区(第4区)、层析区(第3区)、吸水区(第7区)，粘帖在粘胶板上，粘贴时使所述各区的交叠1～1.5mm。
得到组装的底板后，将组装的底板进行切条，得到心脏疾病相关特异抗原的检测条。本发明对所述切条的方法没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的切条方法即可。本发明实施例中切条采用切条机切条，所述切条机型号为K：nematic2360 CA，USA。在本发明一个实施例中，所述切条的宽度优选为3.0～5.0mm，更优选为4mm。
在本发明一个实施例中，所述的抗体标记颗粒可为胶体金，磁颗粒，碳颗粒，晒粒，胶金体粒，银粒，有色乳胶粒，荧光，纺织染料，酶，量子点，脂质体，其它颗粒等。在本发明一个实施例中，所述的抗体标记颗粒优选胶体金。
在本发明一个实施例中，所述的心脏疾病相关特异抗原优选为肌钙蛋白、激动异物酶、血红蛋白、C反应蛋白、纳尿肽、酸性结合酶或D一二聚体。
本发明的实施例中，所述心脏疾病标志物对应的抗体和标记抗体的抗体相关抗原标准品来源均来自JAJ international，Inc.San Diego，CA，USA。本发明实施例中所述的心脏疾病特异性抗原的的包被抗体与标记抗体的产品型号见下表1。
表1 心脏疾病相关特异抗原配对标记抗体产品型号名称
| 心脏病相关特异抗原 | 抗原序号 | 检测区T包被抗体 | 标记抗体 | 灵敏度/临界值 | 线性范围 |
| 肌钙蛋白(Tni) | T002 | T-0245 | T-0126 | 0.5ng/ml | 0.5-200ng/ml |
| 激动异物酶(CKMB) | C012 | C-0124 | C-0122 | 5ng/ml | 5.0-100ng/ml |
| 血红蛋白(MMgoGLobin) | M1004 | M-0204 | M-0128 | 50ng/ml | 50-500ng/ml |
| C反应蛋白(CRP) | C014 | R-0118 | R-0104 | 3ug/ml | 3-36ug/ml |
| 钠尿肽(MT-Pro-BNP) | W016 | N-0876 | N-0822 | 160pg/ml | 160-20000pg/ml |
| 酸性结合蛋白(FABP) | F007 | F-0146 | F-0104 | 10ng/ml | 5-160ng/ml |
| D-二聚变(D-dimer) | D-002 | D-0232 | D-0242 | 250ng/ml | 250-2500ng/ml |
本发明所述的快速量化信息化的心脏疾病相关特异抗原的检测装置是基于以下原理：
样品为血样：血液，或指血，或血清，或血浆。滴加到加样区(第1区)，血样不需要处理，借或不借助展开液上行至过滤区(第2区)，血样中红细胞血球滞留于过滤区，滤过的液体溶解固相标记抗体区(第4区)的标记抗体进入层析区(第3区)。血样中如存在抗原，则与标记抗体形成“抗原—标记抗体”复合物。该复合物按毛细管原理在层析条上上行，至第5区检测线上，与T区一条固相线的另一特异标记抗体形成“标记抗体—抗原—固相标记抗体”复合沉淀线。该沉淀线的颜色将与强度抗原血样中浓度成正比例。双抗体夹心法原理—在T检测线形成“固相包被标记抗体—待测抗原—标记抗体”免疫复合物，其颜色强度与待测标记抗原浓度成正比。在特定检测时间如10～15min，将层析检测条(盒)用肉眼观察记录结果或定量分析仪中读取结果。
本发明中，在本发明的一个实施例中，所述定量检测仪优选为手持便携式检测仪。
本发明中，在本发明的一个实施例中，所述手持便携式检测仪优选由智能手机为基础的读数仪、检测软件和云端服务组成。
本发明中，在本发明的一个实施例中，所述网络传输装置的传输方式优选包括以下方法的一种或几种：
通过所述云端服务，经微信下载数据；
经由所述检测仪输出软件，经USB输出数据；
从微信或蓝牙印刷机打印输出；
从所述读数仪通过邮件方式发送。
在本发明的实施例中，所用之量化信息化读数仪为QikTech-4000(JAJinternational,Inc.San Diego,CA,USA)，是一种影像免疫测定整套设备，由“在智能手机为基础的读数仪；检测软件；云端服务”组成。
QikTech-4000为手持便携式检测仪，其外观如图5所示，使用时将检测盒(检测条外层设置塑料壳的检测盒)插入检测仪，基于智能快速诊断测试(RDT)阅读器，进行图像采集，处理和分析。
检测盒中检测线的颜色强度与待测物质成比例关系。这种颜色或光强度或为颜色强度如金标记，或为荧光强度，或为发光强度。颜色强度读数仪可以对检测结果先影像读出结果，然后数字化软件分析。最终将整套结果输入至云端。一旦将检测盒插入读数仪，智能手机硬件通讯开放照明装置，此照明装置在检测盒下面(智能手机及其与其他部分的连接关系如图6所示)，这种狭窄的LED光，透过检测盒，检测出检测线(T)的颜色强度，通过智能手机进入数字影录程序。待测强度与软件里已储存的标准曲线(见实施例)作比较，直接显示出待测物质的浓度：单位/毫升，量化信息化的检测结果如图7所示。
本发明中，在本发明的一个实施例中，所述手持便携式检测仪的检测软件中已储存待测样品的心脏疾病相关特异抗原浓度与检测条的显色强度之间的线性关系曲线。
在本发明的一个实施例中，提供了一种快速量化信息化的心脏疾病相关特异抗原的检测方法，包括以下步骤：
1)将样品(血，或血清，或血浆)滴加至上述特异抗原检测条的样品加样区；
2)所述样品借助或不借助展开液，进入上述过滤区、层析区；
3)如图2所示，如果在层析区出现“标记抗体-抗原-固相包被抗体”复合沉淀线，则说明检测结果为阳性，如果没有出现所述复合沉淀线，则说明检测为阴性；当所述样品进入对照区时，应出现对照线(图2所示)，如没有对照线时，检测无效；
4)应用上述定量检测仪对所述“标记抗体-抗原-固相包被抗体”复合沉淀线进行颜色强度测定，获得样品中抗原浓度，通过上述网络传输装置传输至所述终端读数装置。
本发明中，在本发明的另一个实施例中，所述心脏疾病特异抗原检测条外层可以设置有塑料外壳，如图3所示，为单项(样品中仅有一种心脏疾病特异性抗原)检测盒(检测条)的结果示意图，其中，出现“标记抗体-抗原-固相包被抗体”复合沉淀线T，则说明检测结果为阳性，如果没有出现所述复合沉淀线(T)，则说明检测为阴性；当所述样品进入对照区时，应出现对照线C(图3所示)，如没有对照线时，则检测失败。
本发明中，在本发明的另一个实施例中，所述心脏疾病特异抗原检测条可以测试两种或两种以上的心脏疾病特异性抗原，如图4所示，为双项(样品中仅有两种心脏疾病特异性抗原)检测盒(检测条)的结果示意图，其中，出现“标记抗体-抗原-固相包被抗体”复合沉淀线T1、T2，则说明检测结果对于心脏疾病特异性两种抗原(例如卵巢心脏疾病特异抗原CA125、CA153)为阳性结果，如果没有出现所述复合沉淀线(T)，则说明检测为阴性；当所述样品进入对照区时，应出现对照线C(图3所示)，如没有对照线时，则检测失败。
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1 心脏疾病特异抗原肌钙蛋白检测装置的配置
1)心脏疾病特异抗原肌钙蛋白检测条的制备
将产品型号为T-0126的肌钙蛋白标记抗体(JAJ international,Inc.San Diego,CA,USA)加入胶体金标记溶液，搅拌10～15分钟后，加入浓度为1％的小牛血清蛋白液，所述小牛血清蛋白液与胶体金标记溶液体积比为1：7～15，经高速(12000PM)4℃离心10min后，得到有色沉淀物，所述有色沉淀物为标记抗体。抽取上血清液，沉淀物溶解于特定缓冲液中。将稀释后的标记抗体标记浸泡在玻璃纤维膜上，将浸泡后的纤维膜在真空干燥器下，35～38℃进行真空干燥，8小时左右制得固相标记抗体膜。包被抗体溶液的浓度为2mg/ml；所述包被液喷涂量为每30cm硝基纤维膜喷涂80ul/s。将兔抗鼠IgG溶液(产品型号#125-3401)3毫克/毫升速度划线于层析区上制作质控线C线(第6区)，得到划线的对照区。划线采用划线仪进行划线，所述划线仪的型号为Biojet,Biodot CA,USA。划线后，本发明将硝基纤维膜放在37℃环境下烘干25分钟，得到标记抗体层析膜。
将样品吸收条、过滤条、标记层析条和吸水条粘贴在粘胶底板上，得到组装的底板。组装方法为先在底板由下而上依次粘帖样品吸收区(第1区)、过滤区(第2区)、层析区(第3区)、吸水区(第7区)，粘帖在粘胶板上，粘贴时使所述各区的交叠1～1.5mm。得到组装的底板后，将组装的底板进行切条，切条采用切条机切条，所述切条机型号为K:nematic2360CA,USA。所述切条的宽度为4mm。得到心脏疾病特异抗原肌钙蛋白的检测条。
2)心脏疾病特异抗原肌钙蛋白检测装置中定量检测仪的设置：
将肌钙蛋白标准品按下列浓度稀释至阴性血清中，0、35、70、140、280、560(u/ml单位/毫升)。加入上述40ul微升(1滴)于检测条加样区中，随即加入展开剂40ul微升，于15分钟将检测盒置于定量检测仪读数，读数结果汇总表储存于检测仪QikTech-4000(JAJinternational，Inc.San Diego，CA，USA)自带软件中备用，仪器通过下表2获得沉淀线的颜色强度(OD值)与血样中肌钙蛋白抗原浓度分布曲线，并储存在云端服务器中。
表2 不同抗原浓度肌钙蛋白的颜色强度检测结果
| 抗原浓度ng-ml | 检测线T颜色强度O.D |
| 0.5 | 1.02 |
| 1.0 | 1.98 |
| 5.0 | 3.24 |
| 10.0 | 5.41 |
| 30.0 | 12.12 |
| 200.0 | 30.04 |
3)心脏中肌钙蛋白的检测装置中网络传输装置的设置
上述数据通过所述云端服务，数据接收端(例如检测中心医生)经微信下载数据；或经由检测仪QikTech-4000输出软件，经USB输出数据；或者从微信或蓝牙印刷机打印输出；从所述检测仪的读数仪通过邮件方式发送。
实施例2 心脏疾病激动异物酶特异抗原检测装置的配置
1)心脏疾病激动异物酶特异抗原检测条的设置：心脏疾病激动异物酶特异抗原检测条的制备同实施例1(制备检测条中使用的抗体浓度与喷涂速率是一样)，仅将包被抗体与标记抗原按照上述产品型号进行替换。
2)心脏疾病激动异物酶特异抗原检测装置中定量检测仪的设置：
将心脏疾病激动异物酶的标准品按下列浓度稀释至阴性血清中，0，35，70，140，280，560，(U/ml单位/毫升)。加入上述40ul微升(1滴)于检测条加样区中，随即加入展开剂40ul微升(PBS)，于15分钟将检测盒置于定量检测仪读数，读数结果汇总表3储存于检测仪QikTech-4000(JAJ international，Inc.San Diego，CA，USA)自带软件中备用，仪器通过下表获得沉淀线的颜色强度(OD值)与血样中心脏疾病激动异物酶抗原浓度分布曲线，并储存在云端服务器中。
表3 不同浓度激动异物酶颜色强度检测结果
| 抗原浓度ng-ml | 检测线T颜色强度O.D |
| 2.5 | 1.12 |
| 5.0 | 1.87 |
| 25.0 | 3.09 |
| 50.0 | 4.21 |
| 100.0 | 8.82 |
3)心脏疾病激动异物酶检测装置中网络传输装置的设置
上述数据通过所述云端服务，数据接收端(例如检测中心医生)经微信下载数据；或经由检测仪QikTech-4000输出软件，经USB输出数据；或者从微信或蓝牙印刷机打印输出；从所述检测仪的读数仪通过邮件方式发送。
实施例3
1)心脏疾病血红蛋白特异抗原检测条的设置：
卵巢心脏疾病特异抗原血红蛋白检测条的制备同实施例1(制备检测条中使用的抗体浓度与喷涂速率是一样)，仅将包被抗体与标记抗原按照上述产品型号进行替换。
2)卵巢心脏疾病特异抗原血红蛋白检测装置中定量检测仪的设置：
将心脏疾病血红蛋白标准样品按下列浓度稀释至阴性血清中，0，35，70，140，280，560，(u/ml单位/毫升)。加入上述40ul微升(1滴)于检测条加样区中，随即加入展开剂(磷酸(PBS)缓冲液)40ul微升，于15分钟将检测盒置于定量检测仪读数，读数结果汇总表3储存于检测仪QikTech-4000(JAJ international，Inc.San Diego，CA，USA)自带软件中备用，仪器通过下表获得沉淀线的颜色强度(OD值)与血样中心脏疾病血红蛋白抗原浓度分布曲线，并储存在云端服务器中。
表4 不同浓度血红蛋白的检测结果
| 抗原浓度ng-ml | 检测线T颜色强度O.D |
| 25 | 1.01 |
| 50 | 1.94 |
| 100 | 2.88 |
| 250 | 4.11 |
| 500 | 6.02 |
3)心脏疾病血红蛋白特异抗原检测装置中网络传输装置的设置
上述数据通过所述云端服务，数据接收端(例如检测中心医生)经微信下载数据；或经由检测仪QikTech-4000输出软件，经USB输出数据；或者从微信或蓝牙印刷机打印输出；从所述检测仪的读数仪通过邮件方式发送。
实施例4 C反应蛋白CRP检测装置的设置
1)C反应蛋白CRP检测条的设置：
反应蛋白CRP检测条的制备同实施例1，仅将包被抗原与标记抗原按照上述产品型号进行替换。
2)C反应蛋白CRP检测装置中定量检测仪的设置：
将C反应蛋白CRP标准品按下列浓度稀释至阴性血清中，0，2.5，5.0，10，25，50，(ng/ml单位/毫升)。加入上述40ul微升(1滴)予检测条加样区中，随即加入展开剂40ul微升(PBS)，于15分钟将检测盒置定量仪读数，读数结果汇，储存于检测仪软件中备用。
表5 C反应蛋白CRP定量检测结果
| 抗原浓度ug-ml | 检测线T颜色强度O.D |
| 3 | 0.98 |
| 6 | 1.40 |
| 12 | 2.12 |
| 24 | 4.01 |
| 36 | 5.82 |
3)C反应蛋白CRP检测装置中网络传输装置的设置
上述数据通过所述云端服务，数据接收端(例如检测中心医生)经微信下载数据；或经由检测仪QikTech-4000输出软件，经USB输出数据；或者从微信或蓝牙印刷机打印输出；从所述检测仪的读数仪通过邮件方式发送。
实施例5 纳尼肽NT-Pro-BNP检测装置的设置
1)纳尼肽NT-Pro-BNP检测条的设置：
纳尼肽NT-Pro-BNP检测条的制备同实施例1，仅将包被抗体与标记抗原替换。
2)纳尼肽NT-Pro-BNP检测装置中定量检测仪的设置：
将纳尼肽NT-Pro-BNP标准品按下列浓度稀释至阴性血清中，0，2.5，.0，10，25，50，(ng/ml单位/毫升)。加入上述40ul微升(1滴)予检测盒加样孔中，随即加入展开剂(PBS)40ul微升，于15分钟将检测盒置定量仪读数，读数结果汇总表6储存于检测仪软件中备用。
表6 纳尼肽NT-Pro-BNP定量检测结果
| 抗原浓度pg-ml | 检测线T颜色强度O.D |
| 160 | 1.10 |
| 500 | 3.24 |
| 2000 | 11.08 |
| 5000 | 20.02 |
| 20000 | 31.22 |
3)纳尼肽NT-Pro-BNP检测装置中网络传输装置的设置
上述数据通过所述云端服务，数据接收端(例如检测中心医生)经微信下载数据；或经由检测仪QikTech-4000输出软件，经USB输出数据；或者从微信或蓝牙印刷机打印输出；从所述检测仪的读数仪通过邮件方式发送。
实施例6 酸性结合蛋白FABP检测装置的设置
1)酸性结合蛋白FABP检测条的设置：
酸性结合蛋白FABP检测条的制备同实施例1，仅将包被抗体与标记抗原按照上述产品型号进行替换。
2)酸性结合蛋白FABP检测装置中定量检测仪的设置：
将酸性结合蛋白FABP标准品按下列浓度稀释至阴性血清中，0，2.5，.0，10，25，50，(ng/ml单位/毫升)。加入上述40ul微升(1滴)予检测盒加样孔中，随即加入展开剂(PBS)40ul微升，于15分钟将检测盒置定量仪读数，读数结果汇总表6储存于检测仪软件中备用。
表6 酸性结合蛋白FABP定量检测结果
| 抗原浓度ng-ml | 检测线T颜色强度O.D |
| 5 | 0.94 |
| 20 | 2.12 |
| 40 | 3.08 |
| 80 | 5.01 |
| 160 | 9.44 |
3)酸性结合蛋白FABP检测装置中网络传输装置的设置
上述数据通过所述云端服务，数据接收端(例如检测中心医生)经微信下载数据；或经由检测仪QikTech-4000输出软件，经USB输出数据；或者从微信或蓝牙印刷机打印输出；从所述检测仪的读数仪通过邮件方式发送。
实施例7D-二聚体检测装置的设置
1)D-二聚体检测条的设置：
D-二聚体检测条的制备同实施例1，仅将包被抗体与标记抗原按照上述产品型号进行替换。
2)酸性结合蛋白FABP检测装置中定量检测仪的设置：
将D-二聚体标准品按下列浓度稀释至阴性血清中，0，2.5，5、10，25，50，(ng/ml单位/毫升)。加入上述40ul微升(1滴)予检测盒加样孔中，随即加入展开剂(PBS)40ul微升，于15分钟将检测盒置定量仪读数，读数结果汇总表6储存于检测仪软件中备用。
表7 D-二聚体定量检测结果
| 抗原浓度ng-ml | 检测线T颜色强度O.D |
| 250 | 1.04 |
| 500 | 2.01 |
| 1000 | 3.24 |
| 1500 | 4.12 |
| 2500 | 5.04 |
3)D-二聚体检测装置中网络传输装置的设置
上述数据通过所述云端服务，数据接收端(例如检测中心医生)经微信下载数据；或经由检测仪QikTech-4000输出软件，经USB输出数据；或者从微信或蓝牙印刷机打印输出；从所述检测仪的读数仪通过邮件方式发送。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种快速量化信息化的心脏疾病相关特异抗原的检测装置，包括心脏疾病相关特异抗原检测条；
定量检测仪，通过所述定量检测仪上设置的卡槽与所述食品感染病原检测条连接，得到所述食品感染病原检测条的定量检测结果；
网络传输装置，用于传输所述定量检测仪检测的定量检测结果；
终端读数装置，用于读取所述传输装置传输的定量检测结果。
2.根据权利要求1所述的检测装置，其特征在于，所述心脏疾病相关特异抗原检测条包括样品吸收区、过滤区、固相标记抗体区、层析区与吸水区。
3.根据权利要求2所述的检测装置，其特征在于，所述层析区包括检测线与对照线。
4.根据权利要求1～3任意一项所述的检测装置，其特征在于，所述心脏疾病相关特异抗原检测条的制备方法，包括下列步骤：
1)将标记抗体溶解于缓冲液中，得到稀释的标记抗体，将所述的稀释的标记抗体喷涂在玻璃纤维膜，然后在真空干燥器进行干燥，得到固相标记抗体膜；
2)将包被抗体溶液划线于层析区上形成检测线，将兔抗鼠IgG溶液划线于层析区上形成对照线，将划线后的硝基纤维膜放在37℃环境下烘干25分钟，得到包被标记抗体层析膜；
3)从底板由下而上依次粘帖样品吸收区、过滤区、固相标记抗体区、层析区、吸水区，粘帖在粘胶板上得到组装的底板后，将组装的底板进行切条，得到心脏疾病相关特异抗原检测条。
5.根据权利要求1所述的检测装置，其特征在于，所述定量检测仪为手持便携式检测仪。
6.根据权利要求5所述的检测装置，其特征在于，所述手持便携式检测仪由智能手机为基础的读数仪、检测软件、云端服务组成。
7.根据权利要求6所述的检测装置，其特征在于，所述网络传输装置的传输方式包括以下方法的一种或几种：
通过所述云端服务，经微信下载数据；
经由所述检测仪输出软件，经USB输出数据；
从微信或蓝牙印刷机打印输出；
从所述读数仪通过邮件方式发送。
8.根据权利要求6所述的快速量化信息化的心脏疾病相关特异抗原的检测装置，其特征在于，所述手持便携式检测仪的检测软件中已储存心脏疾病相关特异抗原标准品的浓度与检测条的显色强度之间的线性关系。
9.根据权利要求1～8任意一项所述的检测装置，其特征在于，所述心脏疾病相关特异抗原包括肌钙蛋白、激动异物酶、血红蛋白、C反应蛋白、纳尿肽、酸性结合酶和D一二聚体的一种或几种。
10.一种快速量化信息化的心脏疾病相关特异抗原的检测方法，包括以下步骤：
1)将待测样品滴加至权利要求2～8任意一项所述的特异抗原检测条的样品吸收区；
2)所述样品层析进入权利要求2～8任意一项所述的过滤区、层析区；
3)如果在层析区出现“标记抗体-抗原-固相包被抗体”复合沉淀线，则说明检测结果为阳性，如果没有出现所述复合沉淀线，则说明检测为阴性；当所述样品进入对照区时，应出现对照线，如没有对照线时，检测无效；
4)应用权利要求1～8任意一项所述的定量检测仪采集所述“标记抗体-抗原-固相包被抗体”复合沉淀线的颜色强度信号，经与标准曲线比对后，获得样品的抗原浓度，通过权利要求1～8任意一项所述的网络传输装置传输至所述终端读数装置。
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|---|---|---|---|
| CN201710542835.3A CN107179405A (zh) | 2017-07-05 | 2017-07-05 | 一种量化信息化的心脏疾病相关特异抗原检测装置及其检测方法 |
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