CN107164509A - 一套毛花猕猴桃和中华猕猴桃物种间杂交子代的鉴定引物 - Google Patents

一套毛花猕猴桃和中华猕猴桃物种间杂交子代的鉴定引物 Download PDF

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赵婷婷
李大卫
陈美艳
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Abstract

本发明公开了一套毛花猕猴桃和中华猕猴桃物种间杂交子代的鉴定引物，属于植物遗传育种领域。本引物包括3个叶绿体和3个线粒体引物对：SEQ ID NO：7/8，SEQ ID NO：9/10，SEQ ID NO：11/12，SEQ ID NO：13/14，SEQ ID NO：15/16，SEQ ID NO：17/18。本方法步骤包括：①待检测个体及亲本基因组DNA的提取；②使用上述6对引物进行PCR扩增；③PCR产物的DNA测序；④序列分析及多态位点基因型的统计；⑤杂交子代的鉴定。与现有技术相比，本发明具有操作简单、重复性好、不受环境影响等优点，可节省育种成本及加快猕猴桃育种进程。

Description

一套毛花猕猴桃和中华猕猴桃物种间杂交子代的鉴定引物
技术领域
本发明属于植物遗传育种领域，具体涉及一套毛花猕猴桃和中华猕猴桃物种间杂交子代的鉴定引物，可加快猕猴桃育种进程。
背景技术
猕猴桃（属名：Actinidia）为雌雄异株的大型落叶木质藤本植物，其果实口味俱佳，且具有丰富的营养价值，被誉为“水果之王”。目前，我国猕猴桃产量和面积均居世界第一，在世界猕猴桃产业中具有举足轻重的地位。
原产于我国的猕猴桃共有52个种，具有广泛的果实表型、品质特性和遗传变异的丰富多样性。常用于驯化、栽培和选育的物种有中华猕猴桃和毛花猕猴桃等。中华猕猴桃雌花多为单花，雄花多为聚伞花序，花为白色。果实多为褐色，果面被短茸毛，成熟时脱落，平均果重约20-120g，风味甜，余味酸，质嫩，汁多。毛花猕猴桃，雌雄花均为多歧聚伞花序，花为红色。果实果面被长白色茸毛，果皮绿色，果肉青绿色，细致，果重约10-40g，风味甜酸，有青草香气味，果实维生素C含量极高，是培育高维生素C含量物种的特殊种质资源。
在新物种培育过程中，以果形美观、优质耐贮、丰产和抗逆等为育种目标，常选择多个猕猴桃物种或种类进行杂交，从杂交子代中选出具有优良性状的个体进行培育。一个关键的环节是准确辨别所有子代个体的遗传背景。然而，基于形态特征的子代判别存在一定的缺陷，如周期长、子代早期的物种特征性状不明显等。分子鉴定方法具有操作简单、稳定、不受环境影响等优点，在遗传背景鉴定中具有重要意义，从而加快新种质的培育。常用的分子标记有叶绿体和线粒体标记，其中，叶绿体标记属于父系遗传，线粒体标记属于母系遗传，这两类标记可组合一起进行亲本关系鉴定。
发明内容
本发明的目的是开发一套猕猴桃物种间杂种子代的鉴定引物，适用于鉴定毛花猕猴桃和中华猕猴桃杂交子代是否为真实的杂种后代，在童期就可以开展分子鉴定、节省育种成本。
本发明的目的是这样实现的：
一、一套鉴定毛花猕猴桃和中华猕猴桃猕猴桃物种间杂交子代的引物
本发明通过比较毛花猕猴桃和中华猕猴桃的叶绿体和线粒体基因组序列，开发出一套用于鉴定毛花猕猴桃和中华猕猴桃杂交子代的引物，分别包含叶绿体和线粒体分子标记的3对引物：
叶绿体标记引物为：
1）Trnt-nl：
F: 5’-CGAAATCGGTAGACGCTACG-3’,
R: 5’-GGGGATAGAGGGACTTGAAC-3’；
2）Trnl-nf：
F：5’-AAAATCGTGAGGGTTCAAGTC-3’，
R：5’-GATTTGAACTGGTGACACGAG-3’；
3）Pid1：
F：5’-GTTATGCATGAACGTAATGCTC-3’，
R：5’-CGCGCATGGTGGATTCACAATC-3’；
线粒体标记引物为：
1）Kiwi-mt7：
F：5’-AAGGCAAGGGTACTGACTGC -3’，
R：5’-CTTTGAAACATGGGCCGGTG -3’；
2）Kiwi-mt18：
F：5’-GTAAAGAACCACCCCGAGCA -3’，
R：5’-GGATTGCTCTTTTCGACGGC -3’；
3）Kiwi-mt22：
F：5’-TCTGCACGCATGAGACCATT -3’，
R：5’-CCACCAAGGGCTTACTCCAG -3’。
二、一种准确快速鉴定毛花猕猴桃和中华猕猴桃物种间杂交子代的方法
本方法在童期就可以开展分子鉴定、节省育种成本、且不受环境影响。
本方法包括以下步骤：
①待检测个体及亲本基因组DNA的提取：利用CTAB法从毛花猕猴桃和中华猕猴桃及待检测样品树皮中提取基因组DNA；
②PCR扩增：以权利要求1所述6个引物对为扩增引物，以上一步骤提取的基因组DNA为模板，进行PCR扩增反应；PCR反应体系为50μL，包含DNA模板30～50ng，正/反向引物各0.25μM，2×PCR Mastermix 25.0μL，ddH2O补足至50μL；PCR反应参数为：94℃预变性4min；35个循环：变性，94℃、35s，退火，54℃、35s和延伸，72℃、40s；72℃终延伸4min；
③DNA测序：将上述PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，扩增子大小参考SEQ ID NO：1-6，以每对引物的上游引物为测序引物，对PCR产物进行测序，获得毛花猕猴桃和中华猕猴桃及待检测样品的6个片段的DNA序列；
④序列分析：利用ClustaW软件分别对每个扩增片段的测序序列进行比对，统计亲本和待检测子代所有变异位点的基因型；
⑤杂交子代的鉴定：根据叶绿体父系遗传和线粒体母系遗传的规律，判别子代是毛花猕猴桃和中华猕猴桃的杂交后代，真实子代的叶绿体标记基因型与父本完全相同，线粒体标记基因型与母本完全相同。
与现有技术相比，本发明具有操作简单、重复性好、不受环境影响等优点，可节省育种成本及加快猕猴桃育种进程。
附图说明
图1为3个叶绿体分子标记和3个线粒体分子标记在毛花猕猴桃和中华猕猴桃及待检测子代中的基因分型；
所展示的2个子代的叶绿体标记基因型与毛花猕猴桃相同，线粒体标记基因型与中华猕猴桃相同，因此，子代被鉴定为以毛花猕猴桃为父本、中华猕猴桃为母本的杂交子代。
具体实施方式
下面结合附图和实施例详细说明。
实施例中所用材料为：用于杂交育种的亲本毛花猕猴桃和中华猕猴桃，及2个候选杂交子代品种，即满天红和红花金果。
1、分子标记开发及引物设计
对毛花猕猴桃和中华猕猴桃的叶绿体基因组序列进行线性比对，鉴定出叶绿体和线粒体基因组变异位点；分别随机挑选3个叶绿体和线粒体基因组变异位点进行引物设计，设计参数和要求如下：（1）上下游引物序列离变异位点至少有100 bp；（2）引物序列长度控制在18～25 bp；（3）引物序列GC含量为30%～70%；（4）退火温度范围在52℃-63℃；（5）扩增的PCR产物长度为500～1000 bp。最终我们筛选获得3对线粒体和3对叶绿体引物，其序列见下表：
2、基因组DNA提取
利用CTAB法从毛花猕猴桃和中华猕猴桃及待检测子代的树皮样本中提取基因组DNA，步骤如下：（1）用液氮对新鲜树皮进行研磨，并转移至2mL离心管中；（2）向离心管中加入1mL60℃预热的洗液，震荡摇匀后，10000rpm离心10min，去上清；（3）向离心管中加入1mL 60℃预热的3×CTAB提取缓冲液，60℃水浴60min，然后10000rpm离心8min，取上清至另一新的2mL离心管中；（4）加入等体积的苯酚-氯仿-异戊醇（25：24：1），震荡摇匀10min，12000rpm离心10min，取上清至另一新的2mL离心管中；（5）向离心管中加入等体积的氯仿-异戊醇（24：1），震荡摇匀10min，12000rpm离心10min，取上清至另一新的2mL离心管中；（6）加入等体积的预冷的异丙醇和1/10体积的3M NaAc，混匀后置于-20℃至少30min，10000rpm 4℃离心10min，弃上清；（7）用预冷的75%乙醇清洗沉淀，然后干燥DNA（自然风干或37℃风干）；（8）利用50μLTE缓冲液溶解DNA。
3、PCR扩增
以上述毛花猕猴桃和中华猕猴桃及待检测子代的基因组DNA为模板，分别以Trnt-nl 、Trnl-nf 、Pid1、Kiwi-mt7、Kiwi-mt18、Kiwi-mt22为扩增引物进行PCR反应。PCR反应体系为50μL，包含DNA模板30～50ng，正/反向引物各0.25μM，2×PCR Mastermix 25.0μL，ddH2O补足至50μL；PCR反应参数为：94℃预变性4 min；35个循环：变性，94℃、35s，退火，54℃、35s和延伸，72℃、40s；72℃终延伸4min。
4、DNA测序
将上述PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，扩增子大小参考SEQ ID NO：1-6。以每对引物的上游引物为测序引物，对相应的PCR产物进行Sanger法测序，获得毛花猕猴桃和中华猕猴桃及待检测样品的6个片段的DNA序列。
5、序列分析和基因分型
分别对每个标记的所有样品的序列进行比对，统计亲本和待检测子代所有变异位点的基因型；如图1所示，叶绿体分子标记引物Trnt-nl 、Trnl-nf 、Pid1扩增的片段序列中，分别发现有4、5和1个SNP位点，且还存在插入缺失位点；线粒体分子标记引物Kiwi-mt7、Kiwi-mt18、Kiwi-mt22扩增的片段序列中，分别发现有1、1和3个SNP位点。
6、杂交子代鉴定
子代鉴定的理论依据为：叶绿体基因组为父系遗传；线粒体基因组为母系遗传。如图1所示，满天红和红花金果叶绿体标记的基因型全与毛花猕猴桃相同；线粒体标记的基因型全与中华猕猴桃相同；因此，所鉴定的满天红和红花金果两个品种确实为以毛花猕猴桃为父本、以中华猕猴桃为母本的杂交子代品种。
序列表
<110>中国科学院武汉植物园
<120>一套毛花猕猴桃和中华猕猴桃物种间杂交子代的鉴定引物
<140>
<141>
<160>18
<210>1
<211>532
<212>DNA
<400>
TGAGCTTGGTATGGAACCTACTAAGTGATAACTTTCAAATTCAGAGAAACCCTGGAATTAATAAAAATGGGCA
ATCCTGAGCCAAATCCTTTTTTTCGAAAACAAACAAAGATTCAGAAAGCGAAAATAAAACAAGGATAGGTGCA
GAGACTCAATGGAAGCTGTTCTAACAAATGGGGTTAACTGCGTTGGTAGAGGAATCCTTCCATCGAAACTTCA
GAAAGGATGAAAGAGAAACCTATATACATACGCATACGTACTGAAATACTTAATCAAATGATTAATGACGGGG
TATCCGTATTTTTTTTATGAAAAATGGACGAATTGTTGTGAATCGATTCCCCATTGAATAAAGAATTGAATAT
TTATTTATTGATCAAATCATTTACTCCATAGTCTGATAGATCTTTTTAAGAACTGATTAATCGGACAAGAATA
AAGATAGAGTCCCATTCTACATGTCAATACCGACAACAATGAAATTGATAGTACGAGGAAAATCCGTCGACTT
TAGAAATCGTGAGGGTTCAAG；
<210>2
<211>363
<212>DNA
<400>
CTATTTATCCTATCCTTTTTTGTTAGCAATTTAAAATTCGTTATCTTTCTCATTCACTCTACTCTTTCACAAA
CGGATCTGAGCGGAAATGCTTTTCTCTTATCACAATGTTATATATGATACACGTACAAATAAACATCTTTGAG
CAAGGAATCTCCATTTGAATGATTCCCGATCCATCTCATTATTCGTACTGAAACTTCAAAAGTTTTCCTTTTG
AAAATCCAAAAAATTACAGGGCCTGGATAAGACTTTGTAATACCCTTTCGTTCTTTTAATTGACATAGACCCA
AGTCTTCTAGTAAAATGAAGATGATGCATCGGGAATGGTCGGGATAGCTCAGGTGGTAGAGCAGAGGACTG；
<210>3
<211>431
<212>DNA
<400>
TATTGAGCTCCATCTACAAATGGATAAGACTTTGGTCTTAGTGTATACGAGTTTTTGAAAGTAAGGGAGCAAT
AACCAAATTCTTGTTCTATCAAGAGGGCATTATTGCTCCTTTACTTTTCTTTTATTTAATAGTAGTATTTTAT
TTACATATACTTTTTTTCGTTACAAGAAAAAGAAAAGATTCTTATGGGTTGGTTCATGATTGAGTATCGTCTT
TTCTTTTCGTTTTGTATTCATTTTGAATTTATATACCTTGTGAAATTGTTATTTGCCATTTAAAATAAAAGAT
AAAATTTGGAATTTTTGCTTAACATTTGTATCTCAGAAATAAGATAAGAAAGAAATAATGATGAATGGTTGAA
ATGGAATCCTTTAGAATGTAAATAGTGGAGTAAGGGGGCGGATGTAGCCAAGTGGATTAAGGCAGT；
<210>4
<211>477
<212>DNA
<400>
TATGATATCAATCTCAAGGATCTCGCTCTCACGATCAAGAATAAGGAGAATGAAGTCATCGCAAAGGTGGACA
TGTCTAAGAACAGGCTGTTTACCCTCAATATCAAGACAGACTCGGTGAAGTGTTTCAAAGCCATTTTGAAGGA
CAGCTCCTGGCTATGGCATCTACGCTTCGGGCATCTCGGATTCAGTGGATTGAAGCTATTGTGGAAGACAAAG
ATGGTGAAAGGATTGCCGGAAATGAACCACCCAAATAAAATATTGGAAGGGTGTATTATGGGTAAACAACATA
GGAAGAGCTTCCCAGTCGGAAAATCATGGAGAGCTTCGAGGCCGCTGCAGCTTGTACACACGGATATTGCTGG
ACCGTTCGGTGTAATATCAAATGGTGGAAATTGAAAATCCTGACCTTTATCGATGATTTCAGTAGAAAGTAGA
CCCACGTCTTTGGTAGGGTTAACGACCCTTCTTGATCGG；
<210>5
<211>667
<212>DNA
<400>
GGCTAGGCAGGAACCAGGTAATTAAGGAGACACACTGTGAGAACACCTCGAAACAATAATAATCGTAGCCAGA
TCGGGAATATGAATAGGTGTGTAAGGAACCTGACCGAGAGCCCAACGAATCACGTTAAGAGTGTGTCGAGATC
CACTGAAATAGGCACAGATACGGCCCAAATCCTTCGCTCCGGAGTGGTCCAGAACCGTATATTACAGTTAAGT
GAGATCTAGCATGAGATGGATCCAAATGGGATCGAAATGCACTTGATTCTCTCGGTTTCGAAGGGGTAAACGG
TGAGGATTTACTATATGATGCAACGTTGATCGTCAGATCCAATTGCTTTGCTAGAATGGATCATGATCATATC
GAGGTGGCGGAACTGCGCGTATTGATTCACTGGCTCTGTATCCGCCATATGGCTTTGGAACAATCCAATAGTA
AAGTATACTGCTATTACTTCTTTTTCCCTAATGCTCTTACCCCTATCTTTGTCTTAGCCGCCCATACTATAGC
TGCTACCTTATGCTCCTGCTACTCCCTCCTCTGGCACCCTTGCTTCTGTTGTTATTGCTGCTGTTGCTAGCTT
TGCTCTCGACAGTAGCACTTTTTTAGATGTGGGGTCAACCGGTTCGACGTTCATTAGCTCGGTAAACTGCCCC
CACTCTAATA；
<210>6
<211>663
<212>DNA
<400>
TTCTTTTGATCAACCGAGTACCCAGCTCTACTGACTTGATTTACTAACAGCAGCACCTGCCGTGGGCTTTACT
GACTAACGAGTTATCTGACGGCACCTAAGCCTAGCTCCCGGAAAGAGATAGGTTTTATTCATCTGCCCTCCGC
CTGGAAAGAAATAATCTGTCAATCTGCCTACTTCCTTCTCGCTACCAGCACGAGATAGATTTTATGATCCACT
TGCTTTCTCGCTTGACTTGAGGATTGCTGGTGAAACTCGGCTTCCTAGCTATCGGAAAGAGAACGAGGAGTTT
ACTACGACCCTCGGAGCTTGAGCGCTTCGCTTTCCCTGAACCAGAAGTCAACTGCAACTTGAACCTAAGAGCA
AGTTTACGAAGCGAGCCCAGAGGAGCGAGGGACTCTATCACAGCACCTATCGGTGATCAACTGGCATTCTCTC
TGATCTCAAACTAAAGCGAGCAAGGGGAAAGGATGGGTGGCCCATCAGTCCGCCGCCAGCAGCATCACTATAC
CACAATGATAGGAACCAAGGCGGCATGAGGTAACGACACAATAGGCAACGAAGCTATATGTATCGAAGTACGT
AGCACCATAGCACTATGTGTGGCTAAGTT；
<210>7
<211>20
<212>DNA
<400>
CGAAATCGGTAGACGCTACG ；
<210>8
<211>20
<212>DNA
<400>
GGGGATAGAGGGACTTGAAC；
<210>9
<211>20
<212>DNA
<400>
AAAATCGTGAGGGTTCAAGTC；
<210>10
<211>20
<212>DNA
<400>
GATTTGAACTGGTGACACGAG；
<210>11
<211>20
<212>DNA
<400>
GTTATGCATGAACGTAATGCTC；
<210>12
<211>20
<212>DNA
<400>
CGCGCATGGTGGATTCACAATC；
<210>13
<211>20
<212>DNA
<400>
AAGGCAAGGGTACTGACTGC；
<210>14
<211>20
<212>DNA
<400>
CTTTGAAACATGGGCCGGTG；
<210>15
<211>20
<212>DNA
<400>
GTAAAGAACCACCCCGAGCA；
<210>16
<211>20
<212>DNA
<400>
GGATTGCTCTTTTCGACGGC；
<210>17
<211>20
<212>DNA
<400>
TCTGCACGCATGAGACCATT；
<210>18
<211>20
<212>DNA
<400>
CCACCAAGGGCTTACTCCAG。

Claims (2)

1.一套毛花猕猴桃和中华猕猴桃猕猴桃物种间杂交子代的鉴定引物，其特征在于包括3个叶绿体和3个线粒体引物对：
3个叶绿体引物对为：SEQ ID NO：7/8；SEQ ID NO：9/10；SEQ ID NO：11/12；
3个线粒体引物对为：SEQ ID NO：13/14；SEQ ID NO：15/16；SEQ ID NO：17/18。
2.一种鉴定毛花猕猴桃和中华猕猴桃物种间杂交子代的方法，其特征在于：
①待检测个体及亲本基因组DNA的提取：利用CTAB法从毛花猕猴桃和中华猕猴桃及待检测样品树皮中提取基因组DNA；
②PCR扩增：以权利要求1所述6个引物对为扩增引物，以上一步骤提取的基因组DNA为模板，进行PCR扩增反应；PCR反应体系为50μL，包含DNA模板30～50ng，正/反向引物各0.25μM，2×PCR Mastermix 25.0μL，ddH2O补足至50μL；PCR反应参数为：94℃预变性4min；35个循环：变性，94℃、35s，退火，54℃、35s和延伸，72℃、40s；72℃终延伸4min；
③DNA测序：将上述PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，扩增子大小参考SEQ ID NO：1-6，以每对引物的上游引物为测序引物，对PCR产物进行测序，获得毛花猕猴桃和中华猕猴桃及待检测样品的6个片段的DNA序列；
④序列分析：利用ClustaW软件分别对每个扩增片段的测序序列进行比对，统计亲本和待检测子代所有变异位点的基因型；
⑤杂交子代的鉴定：根据叶绿体父系遗传和线粒体母系遗传的规律，判别子代是否是毛花猕猴桃和中华猕猴桃的杂交后代，真实子代的叶绿体标记基因型与父本完全相同，线粒体标记基因型与母本完全相同。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108977575A (zh) * 2018-09-30 2018-12-11 中国科学院武汉植物园 用于猕猴桃rc197品种鉴定的分子标记引物及应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010100346A1 (fr) * 2009-03-02 2010-09-10 Clause Plantes du genre diplotaxis porteuses d'une sterilite male cytoplasmique
CN104611443A (zh) * 2015-02-06 2015-05-13 中国科学院武汉植物园 猕猴桃种间杂交品种金艳的分子鉴定方法
CN106367496A (zh) * 2016-08-30 2017-02-01 中国科学院华南植物园 一套猕猴桃物种关联特异单核苷酸分子标记及其检测引物组和应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010100346A1 (fr) * 2009-03-02 2010-09-10 Clause Plantes du genre diplotaxis porteuses d'une sterilite male cytoplasmique
CN104611443A (zh) * 2015-02-06 2015-05-13 中国科学院武汉植物园 猕猴桃种间杂交品种金艳的分子鉴定方法
CN106367496A (zh) * 2016-08-30 2017-02-01 中国科学院华南植物园 一套猕猴桃物种关联特异单核苷酸分子标记及其检测引物组和应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DAWEI LIET AL.: "Maternal inheritance of mitochondrial genomes and complex inheritance of chloroplast genomes in Actinidia Lind.: evidences from interspecific crosses", 《MOL GENET GENOMICS》 *
贾爱平等: "猕猴桃种间及种内杂交亲和性研究", 《西北植物学报》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108977575A (zh) * 2018-09-30 2018-12-11 中国科学院武汉植物园 用于猕猴桃rc197品种鉴定的分子标记引物及应用
CN108977575B (zh) * 2018-09-30 2021-05-11 中国科学院武汉植物园 用于猕猴桃rc197品种鉴定的分子标记引物及应用

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