CN107151686A - 一种高溶解性的鳕鱼蛋白 - Google Patents

一种高溶解性的鳕鱼蛋白 Download PDF

Info

Publication number
CN107151686A
CN107151686A CN201710340578.5A CN201710340578A CN107151686A CN 107151686 A CN107151686 A CN 107151686A CN 201710340578 A CN201710340578 A CN 201710340578A CN 107151686 A CN107151686 A CN 107151686A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cod
albumen
protein
water
highly dissoluble
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201710340578.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN107151686B (zh
Inventor
刘楚怡
李八方
王长伟
马晓明
车帅
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ocean University of China
Original Assignee
Ocean University of China
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ocean University of China filed Critical Ocean University of China
Priority to CN201710340578.5A priority Critical patent/CN107151686B/zh
Publication of CN107151686A publication Critical patent/CN107151686A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107151686B publication Critical patent/CN107151686B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/12—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by hydrolysis, i.e. solvolysis in general

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明提供一种高溶解性鳕鱼蛋白的，是以鳕鱼肉为原料，利用等电点沉淀技术提取鳕鱼分离蛋白，并通过真空冷冻干燥，得到鳕鱼分离蛋白粉。将鳕鱼分离蛋白粉溶于水中配成鳕鱼蛋白分散液，用碱性溶液调节pH到7.0‑10.0，然后加入蛋白酶水解得到鳕鱼分离蛋白水解液。将鳕鱼蛋白水解液于85～100℃水浴灭活蛋白酶5～15分钟，冷却至室温后，在2000～5000r/min转速下离心5～15分钟，取上清液进行减压蒸发浓缩和真空冷冻干燥，得到高溶解性鳕鱼蛋白粉。通过上述工艺获得的鳕鱼蛋白粉溶解性从11.22％提高到80.35％，且具有良好的乳化性和起泡性。

Description

一种高溶解性的鳕鱼蛋白
技术领域
本发明属于食品领域中的食品蛋白改性技术领域，具体涉及一种高溶解性的鳕鱼蛋白。
背景技术
鳕鱼是一种世界范围内重要的经济鱼类，年捕获量可达1000万吨，约占海洋渔业总产量的12％。鳕鱼含有丰富的蛋白质，含量高达18.2％，含有人体所需所有氨基酸，且氨基酸配比与人体需求比值极为接近，被公认为是世界范围内重要的优质食用蛋白质来源。然而，鱼蛋白质难溶于水的问题一直是制约其蛋白加工利用的重要因素，这些蛋白的疏水特性不仅给蛋白产品的多元化开发带来了很大困难，也不利于人体吸收，降低了其作为营养素的利用率及应用价值。只有改善鱼蛋白在水中的溶解性，才能使其在食品中的应用更广泛。因此，如何提供一种溶解性高，且具有较好营养价值及功能特性的鳕鱼蛋白制品，成为目前亟需解决的问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种高溶解性的鳕鱼蛋白，所提供的鳕鱼蛋白产物的溶解度从处理前的11.22％提高到80.35％，并具有安全性高、乳化性、起泡性好以及氨基酸配比合理等特点。
本发明首先提供鳕鱼蛋白，其在25℃下，水溶液的溶解度不小于80％；
本发明所提供的高溶解性鳕鱼蛋白，其制备方法如下：
1)鳕鱼分离蛋白制备：将鳕鱼鱼肉加水匀浆后用碱性溶液调节pH至10.0-12.0，离心收集上清后，用酸性溶液调节pH至4.5-5.5，离心，收集沉淀，将沉淀加水复溶后用碱性溶液调节pH至中性，真空冷冻干燥冻干，得到鳕鱼分离蛋白；
2)酶法改性：将鳕鱼分离蛋白按照1％-5％(w/v)比例溶于水中配成鳕鱼蛋白分散液，用碱性溶液调节pH到7.0-10.0，然后加入蛋白酶2000-5000U/g，在30-70℃恒温水浴中震荡水解1-8小时，使水解度达到7.8-25.5％时停止酶解，得到鳕鱼分离蛋白水解液；将鳕鱼蛋白水解液于85-100℃水浴灭活蛋白酶5-15分钟，冷却至室温后，得到分子量分布于112Da-6511Da之间的鳕鱼蛋白水解液；
将水解液进行减压蒸发浓缩和真空冷冻干燥，得到高溶解性鳕鱼蛋白。
上述步骤2)使用的蛋白酶为中性蛋白酶。
所述的处理过程中的碱性溶液为氢氧化钠溶液，酸性溶液为盐酸溶液。
作为优选，所述的步骤1)中碱性溶液调节pH至11.0，酸性溶液调节pH至5.0。
本发明制备的具有高溶解性的鳕鱼分离蛋白酶解产物具有安全性高、以及氨基酸配比合理等特点，在食品领域有着广阔的市场前景。所提供的制备方法工艺简单、反应温度低，能提高鳕鱼分离蛋白的溶解性能，所得到的鳕鱼蛋白产物的溶解度从处理前的11.22％提高到80.35％，并且本方法制得的高溶解性鳕鱼蛋白产物具有安全性高、乳化性、起泡性好以及氨基酸配比合理等特点。可作为食品、医药等行业提供优质的蛋白原料。
附图说明
图1：高溶解性分离蛋白的SDS-PAGE分析图谱。
图2：高溶解性分离蛋白的HPLC分子量分析图谱。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行详细的描述
实施例1：
一种高溶解性鳕鱼蛋白的制备方法，其特征在于所述方法步骤如下：
A)鳕鱼分离蛋白制备：以鳕鱼为原料，除头、去皮，清理内脏，冰水洗净后剔取鳕鱼鱼肉，加水匀浆后用氢氧化钠溶液调节pH至11.0，离心收集上清后，用盐酸溶液调节pH至5.0，离心，收集沉淀，加水复溶后用氢氧化钠溶液调节pH至中性，真空冷冻干燥冻干，得到鳕鱼分离蛋白。
B)酶法改性：将鳕鱼分离蛋白按照4％(w/v)比例溶于水中配成鳕鱼蛋白分散液，用氢氧化钠溶液调节pH到7.8，然后加入中性蛋白酶3100U/g，在50℃恒温水浴中震荡水解5小时，得到鳕鱼分离蛋白水解液。反应结束后，将鳕鱼蛋白水解液于95℃水浴灭活蛋白酶10分钟，冷却至室温后，在4000r/min转速下离心5分钟，取上清液进行减压蒸发浓缩和真空冷冻干燥，得到高溶解性鳕鱼蛋白。溶解性的检测方法为：将100mg冷冻干燥的样品以4000r/min分散在10mL蒸馏水中30秒后，在25℃下保持60分钟，然后以13000r/min离心15分钟。用凯氏定氮法(N×6.25)测量水相中的蛋白和总蛋白。蛋白质溶解度以水相中蛋白含量与总蛋白质含量的百分比计算。经过三次平行实验，其溶解度从11.22％达到了80.35％。
高溶解性鳕鱼蛋白和鳕鱼分离蛋白的化学组成如表1所示，获得的鳕鱼分离蛋白中，脂质，糖和水的含量与鳕鱼肉相比显著降低，而鳕鱼分离蛋白含量则显著增高，从18.8％增加到了91.3％，表明上述的处理可以分离脂质并去除不适合人类消费的材料，获得更高纯度的蛋白质。并且通过酶解制备高溶解性鳕鱼蛋白过程中，通过离心进一步除去了脂质，使脂肪含量低至3％，并且由于调节系统pH值使用了酸碱液，使其灰分含量提高，最后获得高溶解性鳕鱼蛋白的蛋白质含量为80.2％。
表1：鳕鱼分离蛋白及高溶解性鳕鱼蛋白的化学组成成分
如图1所示，通过SDS-PAGE研究了鳕鱼分离蛋白和高溶解性鳕鱼蛋白的分子量分布。在电泳图谱上观察到鳕鱼分离蛋白条带广泛分布于约7-170kDa的范围内。而通过酶水解，大于10kDa的多肽的完全降解，使高溶解性鳕鱼肽的分子量小于10kDa。
图2显示了高溶解性鳕鱼蛋白的高效液相色谱(HPLC)图，通过GPC软件分析了其相对分子质量分布，其分子量分布在112Da-6511Da之间，平均分子量为1415Da,1000-3000Da的肽含量占总蛋白的52.47％小于1000Da的肽含量占41.06％。
高溶解性鳕鱼蛋白和鳕鱼分离蛋白的氨基酸组成如表2所示，表格中还给出了2-5岁儿童和成人的粮农组织/世卫组织(2007)必需氨基酸的推荐配比。根据粮农组织/世卫组织建议的蛋白质最佳配比，除了儿童苯丙氨酸以外，该蛋白中所有氨基酸的分数均超过1.0(FAO/WHO，2007)，并且高溶解性鳕鱼蛋白的总必需氨基酸含量(56.90g/100g蛋白质)高于鳕鱼分离蛋白的总必需氨基酸含量(56.19g/100g蛋白质)。其总必需氨基酸含量远高于婴儿推荐值39％，更高于儿童的26％和成人的11％，因此其具有高水平的必需氨基酸品种和营养可接受的氨基酸谱，可被认为是理想的蛋白质食物。
同时，高溶解性鳕鱼蛋白的物理性质如表3所示，蛋白质的乳化活性(EA)和乳液稳定性指数(ESI)的检测方法如下：将冷冻干燥的样品溶于0.02mol的磷酸盐缓冲液(pH 7.0)中，将终浓度调节至10mg/ml。将25ml植物油和75ml上述蛋白质溶液组成的混合物在10000r/min下匀浆2分钟。然后取50μL该乳液溶于10mL 0.1％的十二烷基硫酸钠(SDS)溶液中。在0分钟(A0)和10分钟(A10)下测量500nm处的稀释样品的吸光度。EA和ESI计算如下：
A0:0分钟时在500nm处的吸光值；A10:10分钟时在500nm处的吸光值；Φ:油相的体积分数,0.25；c:制备乳液前水解液的浓度(mg/ml)；L：比色皿的光径长度。
发泡能力(FC)的检测方法为：将蛋白质样品溶于10mL的pH 7的0.1mol/L磷酸盐缓冲液中，配成浓度为0.3％(w/v)的溶液，然后在10000r/min下均质1min后测试溶液的体积。FC表示为混合前后体积增加的百分比。起泡沫稳定性(FS)表示为室温下静置10分钟后剩余体积的百分比。如表3所示，高溶解性鳕鱼蛋白的乳化活性和起泡能力显著高于(P<0.05)鳕鱼分离蛋白。鳕鱼分离蛋白与高溶解性鳕鱼蛋白的乳液稳定性差异无统计学意义(P>0.05)。因此，与鳕鱼分离蛋白相比，高溶解性鳕鱼蛋白不仅具有更好的溶解度，而且具有更好的乳化活性和起泡能力。
表2：鳕鱼分离蛋白及高溶解性鳕鱼蛋白的氨基酸组成(g/100g).
PPI:鳕鱼分离蛋白；PPIH:高溶解性鳕鱼蛋白；TEAA:总必需氨基酸含量,CSA:基于成人数据的化学评分；CSC:基于儿童数据的化学评分.
表3：鳕鱼分离蛋白及高溶解性鳕鱼蛋白的功能特性
平均(n＝3)±标准偏差。
在同一行中具有不同字母表示两组数据存在显著差异(P<0.05)。
实施例2：
一种高溶解性鳕鱼蛋白的制备方法，其特征在于所述方法步骤如下：
A)鳕鱼分离蛋白制备：以鳕鱼为原料，除头、去皮，清理内脏，冰水洗净后剔取鳕鱼鱼肉，加水匀浆后用氢氧化钠溶液调节pH至11.0，离心收集上清后，用盐酸溶液调节pH至5.0，离心，收集沉淀，加水复溶后用氢氧化钠溶液调节pH至中性，真空冷冻干燥冻干，得到鳕鱼分离蛋白。
B)酶法改性：将鳕鱼分离蛋白按照4％(w/v)比例溶于水中配成鳕鱼蛋白分散液，用氢氧化钠溶液调节pH到8.0，然后加入中性蛋白酶3000U/g，在50℃恒温水浴中震荡水解4.5小时，得到鳕鱼分离蛋白水解液。反应结束后，将鳕鱼蛋白水解液于95℃水浴灭活蛋白酶10分钟，冷却至室温后，在3000r/min转速下离心10分钟，取上清液进行减压蒸发浓缩和真空冷冻干燥，得到高溶解性鳕鱼蛋白。
按照实施例1所记载的方法剂型检测，本实施例所制得的鳕鱼分离蛋白酶解产物蛋白含量为80.1％，分子量分布在112Da-6511Da之间，溶解度为79.6％，比等电点沉淀法得到的鳕鱼分离蛋白溶解度增加7.09倍。

Claims (7)

1.一种鳕鱼蛋白，其特征在于，所述的鳕鱼蛋白，在25℃下，该蛋白的水溶液的溶解度不小于80％。
2.如权利要求1所述的鳕鱼蛋白，其特征在于，所述的鳕鱼蛋白的制备方法包括如下的步骤：
1)鳕鱼分离蛋白制备：将鳕鱼鱼肉加水匀浆后用碱性溶液调节pH至10.0-12.0，离心收集上清后，用酸性溶液调节pH至4.5-5.5，离心，收集沉淀，将沉淀加水复溶后用碱性溶液调节pH至中性，真空冷冻干燥冻干，得到鳕鱼分离蛋白；
2)酶法改性：将鳕鱼分离蛋白按溶于水中配成鳕鱼蛋白分散液，用碱性溶液调节pH到7.0-10.0，然后加入蛋白酶进行水解，使水解度达到7.8-25.5％时停止酶解，得到鳕鱼分离蛋白水解液；将鳕鱼蛋白水解液于85-100℃水浴灭活蛋白酶5-15分钟，冷却至室温后，得到分子量分布于112Da-6511Da之间的鳕鱼蛋白水解液；取水解液进行减压蒸发浓缩和真空冷冻干燥，得到高溶解性鳕鱼蛋白。
3.如权利要求2所述的鳕鱼蛋白，其特征在于，所述的步骤1)中用碱性溶液调节pH至11.0。
4.如权利要求2所述的鳕鱼蛋白，其特征在于，所述的步骤1)中用酸性溶液调节pH至5.0。
5.如权利要求2所述的鳕鱼蛋白，其特征在于，所述的步骤2)使用的蛋白酶为中性蛋白酶。
6.权利要求2所述的鳕鱼蛋白，其特征在于，所述的碱性溶液为氢氧化钠溶液。
7.权利要求2所述的鳕鱼蛋白，其特征在于，所述的酸性溶液为盐酸溶液。
CN201710340578.5A 2017-05-15 2017-05-15 一种高溶解性的鳕鱼蛋白 Expired - Fee Related CN107151686B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710340578.5A CN107151686B (zh) 2017-05-15 2017-05-15 一种高溶解性的鳕鱼蛋白

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710340578.5A CN107151686B (zh) 2017-05-15 2017-05-15 一种高溶解性的鳕鱼蛋白

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107151686A true CN107151686A (zh) 2017-09-12
CN107151686B CN107151686B (zh) 2021-03-26

Family

ID=59792997

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710340578.5A Expired - Fee Related CN107151686B (zh) 2017-05-15 2017-05-15 一种高溶解性的鳕鱼蛋白

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107151686B (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109678926A (zh) * 2019-02-25 2019-04-26 大连工业大学 一种可溶性鳕鱼蛋白的提取方法
CN109680028A (zh) * 2019-01-08 2019-04-26 广东海洋大学 一种改善水产蛋白溶解性的方法
CN110050871A (zh) * 2019-04-26 2019-07-26 集美大学 一种高乳化性鱼蛋白粉的制备方法
CN110521849A (zh) * 2019-08-26 2019-12-03 大连工业大学 一种具有高消化吸收特性的鳕鱼蛋白肽的制备方法及其应用
CN114403455A (zh) * 2022-01-10 2022-04-29 大连工业大学 一种具有免疫调节活性的鳕鱼肽及其应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6136959A (en) * 1998-06-22 2000-10-24 University Of Massachusetts High efficiency alkaline protein extraction
CN1547437A (zh) * 2000-09-06 2004-11-17 �Ϻ���ͨ��ѧ 高效蛋白提取
CN1751062A (zh) * 2003-02-19 2006-03-22 普罗蒂厄斯工业有限公司 水溶性动物肌肉蛋白质产品
CN103315126A (zh) * 2013-06-09 2013-09-25 江南大学 一种低分子量鱼水解蛋白粉的制备方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6136959A (en) * 1998-06-22 2000-10-24 University Of Massachusetts High efficiency alkaline protein extraction
CN1547437A (zh) * 2000-09-06 2004-11-17 �Ϻ���ͨ��ѧ 高效蛋白提取
CN1751062A (zh) * 2003-02-19 2006-03-22 普罗蒂厄斯工业有限公司 水溶性动物肌肉蛋白质产品
CN103315126A (zh) * 2013-06-09 2013-09-25 江南大学 一种低分子量鱼水解蛋白粉的制备方法

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LAURA GILMARTIN，LES JERVIS: "Production of Cod (Gadus morhua) Muscle Hydrolysates. Influence of Combinations of Commercial Enzyme Preparations on Hydrolysate Peptide Size Range", 《JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY》 *
R.E.VEGA等: "Enzymic hydrolysis of fish offal without added water", 《JOURNAL OF FOOD ENGINEERING》 *
丁利君，钟森辉: "鳕鱼蛋白酶解工艺优化及其酶解液抗氧化研究", 《食品科学》 *
付湘晋等: "酸碱提取鲢鱼蛋白功能特性的研究", 《食品工业科技》 *
史策等: "鳕鱼和鲅鱼鱼肉蛋白酶解产物功能", 《肉类研究》 *
郭珊珊等: "鱼肉蛋白酶解产物加工特性及抗氧化性评价", 《中国食物与营养》 *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109680028A (zh) * 2019-01-08 2019-04-26 广东海洋大学 一种改善水产蛋白溶解性的方法
CN109678926A (zh) * 2019-02-25 2019-04-26 大连工业大学 一种可溶性鳕鱼蛋白的提取方法
CN110050871A (zh) * 2019-04-26 2019-07-26 集美大学 一种高乳化性鱼蛋白粉的制备方法
CN110521849A (zh) * 2019-08-26 2019-12-03 大连工业大学 一种具有高消化吸收特性的鳕鱼蛋白肽的制备方法及其应用
CN114403455A (zh) * 2022-01-10 2022-04-29 大连工业大学 一种具有免疫调节活性的鳕鱼肽及其应用
CN114403455B (zh) * 2022-01-10 2023-06-27 大连工业大学 一种具有免疫调节活性的鳕鱼肽及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN107151686B (zh) 2021-03-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107151686A (zh) 一种高溶解性的鳕鱼蛋白
CN109414036A (zh) 获得油菜籽蛋白质分离物的方法以及由此获得的蛋白质分离物
CN107136295B (zh) 一种部分水解乳清蛋白粉及其制备方法
CN1286595A (zh) 醋蛋粉的制造方法
CN109475147A (zh) 油菜籽蛋白质分离物、包含所述分离物的食品以及作为发泡剂或乳化剂的用途
RU2331202C1 (ru) Способ получения пищевых белковых продуктов
KR100734720B1 (ko) 혈관 확장성 약제학적 제조물 및 건강식품 조성물
CN114304369A (zh) 一种乳清蛋白组合物及其制备方法和应用
US3970614A (en) Nutrient protein from keratinaceous material solubilized with N,N,-dimethylformamide
EP3742906B1 (fr) Hydrolysat proteique de fabacees comme source proteique hypoallergenique dans des compositions alimentaires
CN105085605B (zh) 一种大米清蛋白和球蛋白混合蛋白的提取方法
EP0357776A1 (en) Egg white hydrolyzate
JP3366770B2 (ja) 抗アレルギー栄養組成物
JP2001046851A (ja) 乳化剤組成物及びこれを用いた酸性水中油型乳化物
BR112020015369A2 (pt) Hidrolisado de proteína marinho com baixo teor de fluoreto e trimetilamina
CN112143767B (zh) 一种双齿围沙蚕蛋白源ace抑制肽的制作方法
ES2208105B1 (es) Procedimiento de elaboracion de un concentrado proteico funcional a partir de musculo de cefalopodos y producto asi obtenido.
CN113519626A (zh) 一种无乳糖奶粉及其制备方法
Palupi et al. The effect of enzymatic hydrolysis on the properties of protein hydrolysate from paddy mushroom
JP4050799B2 (ja) タイトジャンクション形成促進剤
JP3126481B2 (ja) アレルゲン低減化された米調製物、その製造方法及びそれを含む加工食品
CN110547464A (zh) 一种提高姜黄素生物利用率的抗氧化乳化物及其制备方法和应用
JPH06211690A (ja) 血中脂質抑制用摂食物
JPH0362382B2 (zh)
CN115500425B (zh) 一种低消化凝固性大豆分离蛋白及其制备方法与应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20210326