CN107102125B - 血栓弹力图仪的校准方法 - Google Patents

血栓弹力图仪的校准方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种血栓弹力图仪的校准方法，包括步骤：配制缓冲液：配制包括Tris、NaCl、CaCl2的混合液，在混合液中添加盐酸调节pH至7.0‑8.0。根据缓冲液，配制凝血酶和不同浓度的纤维蛋白原；测标准MA值和校准MA值：分别向标准血栓弹力图仪和待校准血栓弹力图仪中先后加入凝血酶和纤维蛋白原，测出不同浓度纤维蛋白原的标准MA值和校准MA值；根据校准MA值与所述标准MA值，计算对已校准血栓弹力图仪的实时测量进行修正的校准系数。本发明提供的血栓弹力图仪的校准方法，本发明利用纤维蛋白原在凝血酶作用下发生凝固的性质，将纤维蛋白原作为校准品，校准过程完善，校准准确度高。

Description

血栓弹力图仪的校准方法
技术领域
本发明涉及临床凝血检验仪器定标技术领域，更具体地说，本发明涉及一种血栓弹力图仪的校准方法。
背景技术
血栓弹力图仪是一款非侵入型诊断仪器，通过对血样凝结过程的监测和分析协助临床医师对临床病人凝血状况做出准确判断，根据凝血评估结果对临床状况做出预测，比如术后出血、心外手术中或术后的血栓、器官移植、外伤和心脏手术过程中或术后发生的血栓症。
随着血栓弹力图仪在临床上的作用日益凸显，血栓弹力图仪的准确性、重复性和稳定性显得尤为重要。目前，临床上主要采用正常血浆和异常血浆对血栓弹力图仪进行日常的质量控制以保证仪器的准确性。然而，随着时间的推移或者仪器零件的更改，血栓弹力图仪的测量值可能会发生较大的偏移，超出正常范围，这时候需要用定标品对仪器进行定标校准。另外，仪器在出厂时，为保证每台仪器各通道和每台仪器之间测量的准确性和精密度，也需要对仪器进行定标校准。因此，开发出能够用于血栓弹力图仪定标的校准品以及校准方法显得非常必要的。
发明内容
针对上述技术中存在的不足之处，本发明提供一种血栓弹力图仪的校准方法，利用纤维蛋白原在凝血酶作用下发生凝固的性质，将纤维蛋白原作为校准品，校准过程完善，校准准确度高。
为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，本发明通过以下技术方案实现：
本发明提供一种血栓弹力图仪的校准方法，其包括以下步骤：
配制缓冲液：配制包括Tris、NaCl、CaCl2的混合液，在混合液中添加盐酸调节pH至7.0-8.0。
根据所述缓冲液，配制凝血酶和不同浓度的纤维蛋白原；
测标准MA值和校准MA值：分别向标准血栓弹力图仪和待校准血栓弹力图仪中先后加入凝血酶和纤维蛋白原，测出不同浓度纤维蛋白原的标准MA值和校准MA值；
计算所述校准MA值与所述标准MA值之间的校准系数；通过所述校准系数对已校准血栓弹力图仪进行实时测量的修正，输出实时MA值。
优选的是，计算所述校准系数，包括步骤：以所述标准MA值为纵坐标、所述校准MA值为横坐标，拟合出校准曲线，求出校准公式。
优选的是，所述混合液中，Tris的含量为40-60mM，NaCl的含量为120-160mM，CaCl2的含量为40-50mM。
优选的是，根据所述缓冲液，配制浓度分别为2.00％、1.75％、1.50％、1.25％、1.00％、0.75％、0.50％的纤维蛋白原和浓度为30-100IU/ml的凝血酶。
优选的是，所述凝血酶的含量为10-20ul，所述纤维蛋白原的含量为300-360ul。
优选的是，测MA值，包括向同一血栓弹力图仪的不同通道或不同待血栓弹力图仪的至少一个通道中分别先后加入所述凝血酶和所述纤维蛋白原。
本发明至少包括以下有益效果：
1)本发明提供的血栓弹力图仪的校准方法，基于纤维蛋白原在凝血酶作用下发生凝固的性质，将纤维蛋白原作为校准品，与凝血酶一起，分别加入标准血栓弹力图仪和待校准血栓弹力图仪，进行标准MA值和校准MA值的测量，计算校准系数，校准过程完善，校准准确度高；
2)对标准血栓弹力图仪和待校准血栓弹力图仪中分别加入凝血酶和纤维蛋白原，测出不同浓度纤维蛋白原的验证参数的标准值和校验值作比较，进行血栓弹力图仪的校准校验，提高校准精度。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
附图说明
图1为本发明所述的待校准血栓弹力图仪一通道的校准曲线示意图；
图2为本发明所述的待校准血栓弹力图仪另一通道的校准曲线示意图；
具体实施方式
下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不排除一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
本发明提供一种以纤维蛋白原为校准品的血栓弹力图仪的校准方法，包括以下步骤：
S10，配制缓冲液：配制包括Tris、NaCl、CaCl2的混合液，在混合液中添加盐酸调节pH至7.0-8.0。
S20，根据缓冲液，配制凝血酶和不同浓度的纤维蛋白原；
S30，测标准MA值和校准MA值：分别向标准血栓弹力图仪和待校准血栓弹力图仪中先后加入凝血酶和纤维蛋白原，测出不同浓度纤维蛋白原的标准MA值和校准MA值；
S40，根据校准MA值与标准MA值，计算对已校准血栓弹力图仪的实时测量进行修正的校准系数。
上述实施方式中，考虑到血栓弹力图仪对血液凝固过程的监测，实际上是对血液凝固过程中血凝块粘弹性变化的监测，并把监测数据转化为临床参数。因此，血栓弹力图仪测量的本质是对血凝块粘弹性的检测，对血栓弹力图仪的校准，即为对血栓弹力图仪检测血凝块粘弹性能力的校准。血栓弹力图仪测量参数中，MA值代表的是血液凝固所能达到最大强度或者硬度，反映的是血液粘弹性，因此，通过对MA值进行校准即可实现对血栓弹力图仪的校准。溶液中，纤维蛋白原在凝血酶的作用下水解成纤维蛋白单体，纤维蛋白单体相互交联而使溶液发生凝固(类似于血液凝固的过程)，凝固强度随溶液中纤维蛋白原含量的增加而增大。
基于上述原理，本发明上述步骤S10-S40提供的血栓弹力图仪校准方法，基于纤维蛋白原在凝血酶作用下发生凝固的性质，将纤维蛋白原作为校准品。
具体地，步骤S10中，混合液的Tris的含量为40-60mM，NaCl的含量为120-160mM，CaCl2的含量为40-50mM。
步骤S20中，凝血酶的来源和纤维蛋白原的来源相同，凝血酶的来源包括人源或动物源，动物源可以是牛、猪等。配制的纤维蛋白原可凝固蛋白含量不低于90％。标准血栓弹力图仪采用Haemonetics公司的血栓弹力图仪TEG-5000作为标准仪器。配制不同浓度的纤维蛋白原，为步骤S30中标准MA值和校准MA值提供多次测量数据以供后续对比分析，提高校准的正确性。凝血酶的含量为10-20ul，纤维蛋白原的含量为300-360ul。
步骤S30中，本发明以具有两个通道的待校准血栓弹力图仪为例，优选Tris、NaCl、CaCl2的含量分别是50mM、150mM、40mM，配制浓度分别为2.00％、1.75％、1.50％、1.25％、1.00％、0.75％、0.50％的纤维蛋白原360ul和浓度为100IU/ml的凝血酶10ul，其中，纤维蛋白原的可凝固蛋白含量为96.6％，则标准血栓弹力图仪和待校准血栓弹力图仪中分别测出的不同浓度纤维蛋白原的标准MA值和校准MA值统计如表1所示。
表1TEG-5000与待校准血栓弹力图仪分别测得不同浓度纤维蛋白原的MA值
纤维蛋白原浓度 TEG-MA(mm) MA-L(mm) MA-R(mm)
2.00％ 65.3 66.8 71.5
1.75％ 55.9 61.4 66.0
1.50％ 45.5 51.5 56.2
1.25％ 36.4 42.5 47.0
1.00％ 23.8 28.8 32.9
0.75％ 11.0 13.4 15.6
0.50％ 2.8 2.7 4.1
表1中，TEG-MA表示标准血栓弹力图仪测得的标准MA值，MA-L、MA-R分别表示待校准血栓弹力图仪的两个通道各自测得的校准MA值。由表1可知，与标准血栓弹力图仪的标准MA值相比，待校准血栓弹力图仪的两个通道测得的校准MA值偏差较大，需要进行校准。
步骤S40中，计算校准系数，包括步骤：以标准MA值为纵坐标、校准MA值为横坐标，拟合出校准曲线，求出校准公式。该校准公式，即为对已校准血栓弹力图仪的实时测量进行修正的校准系数。具体地，首先，结合表1中测得的标准MA值和校准MA值，分别拟合待校准血栓弹力图仪两个通道的校准曲线，并定义校准MA值与标准MA值的相关系数为R，R越接近1，说明校准曲线拟合的程度越好。图1和图2分别给出了待校准血栓弹力图仪两个通道的校准曲线的示意图，图1中R2＝0.99917，图2中R2＝0.99917，则两个通道的校准曲线拟合程度均较高。其次，根据两个通道的校准曲线，计算各个通道的校准公式，则图1和图2对应的校准公式分别为：y＝0.00375x2+0.70338x；y＝0.00456x2+0.56558x；其中，x为两个通道各自的校准MA值，y为标准MA值。
将步骤S40计算得出的校准公式输入计算机系统，用于对已校准血栓弹力图仪实时测出的MA值进行修正，以输出准确性较高的实时MA值，实现定标，从而体现校准的高准确率。例如，结合计算机存储的校准公式，重复步骤S10-S30，获得实时测得的已校准血栓弹力图仪与标准血栓弹力图仪分别基于不同浓度纤维蛋白原的MA值，如表2所示。
表2TEG-5000与待校准血栓弹力图仪测得不同浓度纤维蛋白原的MA值
纤维蛋白原浓度 TEG-MA(mm) MA-L(mm) MA-R(mm)
2.00％ 65.3 67.2 67.2
1.75％ 55.9 58.0 57.7
1.50％ 45.5 47.6 47.9
1.25％ 36.4 37.9 37.2
1.00％ 23.8 22.4 22.3
0.75％ 11.0 9.1 10.2
0.50％ 2.8 2.0 2.0
表2中，TEG-MA表示实时测量时标准血栓弹力图仪测得的标准MA值，MA-L、MA-R分别表示实时测量时已校准血栓弹力图仪的两个通道各自测得的实时MA值。根据表2可知，通过校准公式的修正，已校准血栓弹力图仪各通道测出的实时MA值与标准MA值之间的偏差非常小，接近标准MA值，校准准确度高。
上述实施方式中，测MA值，包括向同一血栓弹力图仪的不同通道或不同血栓弹力图仪的至少一个通道中分别先后加入凝血酶和所述纤维蛋白原。上述表1和表2均是以一个待校准血栓弹力图仪的两个通道为例分别同时进行测量获得数据的示例，现在以均含有两通道的两台血栓弹力图仪(共计两台仪器、四个通道)为例，按照上述实施例方法对这两台血栓弹力图仪分别进行校准。校准前各通道测得1.5％纤维蛋白原的MA值(每个通道重复1次)以及校准后各通道测得浓度为1.5％的纤维蛋白原的MA值(每个通道重复1次)如表3所示。
表3定标前后给通道测得浓度为1.5％的纤维蛋白原MA值
根据表3中定标前MA值与定标后MA值的对比，可以看出，基于浓度为1.50％的纤维蛋白原，两台血栓弹力图仪各通道测得的MA值的精密度有很大的提高，CV值从7.5％提高到3.3％。
另外，为验证通过MA值的校准是否能够对另外的三个主要参数(R、K以及α)进行校准并保证已校准血栓弹力图仪在检测血液样本时四个主要参数(R、K、α、MA)的准确度和精密度，采健康志愿者血液10ml，继续以两台已校准的血栓弹力图仪对该血液样本进行检测(共计四个通道，每个通道重复检测一次)，并将检测结果与标准血栓弹力图仪的检测结果进行对比，如表4所示。
表4标准血栓弹力图仪和校准后血栓弹力图仪基于同一血液样本的测量结果
从表4可以看出，经过本发明提供的校准方法校准定标后，针对相同的血液样本，不同的血栓弹力图仪与标准血栓弹力图仪分别测得的R、K、α以及MA四个测量参数的数值之间，相对偏差均小于10％，各参数的CV值均小于10％，各通道的准确度以及各通道间的精密度得到了提高和保证。
本发明基于纤维蛋白原在凝血酶作用下发生凝固的性质，通过配制凝血酶和不同浓度的纤维蛋白原分别加入标准血栓弹力图仪和待校准血栓弹力图仪，测出不同浓度纤维蛋白原的标准MA值以及不同通道的不同浓度纤维蛋白原的校准MA值；再根据校准MA值以及目标MA值，计算校准系数，校准系数用于对已校准血栓弹力图仪的实时测量进行修正，从而实现对待校准血栓弹力图仪的校准，校准过程完善。通过校准系数的修正，已校准血栓弹力图仪的实时测量结果准确度以及各通道间的精密度得到提高。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用。它完全可以被适用于各种适合本发明的领域。对于熟悉本领域的人员而言可容易地实现另外的修改。因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。

Claims (6)

1.一种血栓弹力图仪的校准方法，其特征在于，其包括以下步骤：
配制缓冲液：配制包括Tris、NaCl、CaCl2的混合液，在混合液中添加盐酸调节pH至7.0-8.0；
根据所述缓冲液，配制凝血酶和不同浓度的纤维蛋白原；
测标准MA值和校准MA值：分别向标准血栓弹力图仪和待校准血栓弹力图仪中先后加入凝血酶和纤维蛋白原，测出不同浓度纤维蛋白原的标准MA值和校准MA值；
根据所述校准MA值与所述标准MA值，计算对已校准血栓弹力图仪的实时测量进行修正的校准系数。
2.如权利要求1所述的血栓弹力图仪的校准方法，其特征在于，计算所述校准系数，包括步骤：以所述标准MA值为纵坐标、所述校准MA值为横坐标，拟合出校准曲线，求出校准公式。
3.如权利要求1所述的血栓弹力图仪的校准方法，其特征在于，所述混合液中，Tris的含量为40-60mM，NaCl的含量为120-160mM，CaCl2的含量为40-50mM。
4.如权利要求1所述的血栓弹力图仪的校准方法，其特征在于，根据所述缓冲液，配制浓度分别为2.00％、1.75％、1.50％、1.25％、1.00％、0.75％、0.50％的纤维蛋白原以及浓度为30-100IU/ml的凝血酶。
5.如权利要求1或4所述的血栓弹力图仪的校准方法，其特征在于，所述凝血酶的含量为10-20ul，所述纤维蛋白原的含量为300-360ul。
6.如权利要求1所述的血栓弹力图仪的校准方法，其特征在于，测MA值，包括向同一血栓弹力图仪的不同通道或不同待血栓弹力图仪的至少一个通道中分别先后加入所述凝血酶和所述纤维蛋白原。
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