CN107099542A

CN107099542A - 一个参与桃α‑Farnesene生物合成的基因及其应用

Info

Publication number: CN107099542A
Application number: CN201710318261.1A
Authority: CN
Inventors: 张波; 柳洪入; 陈昆松
Original assignee: Zhejiang University ZJU
Current assignee: Zhejiang University ZJU
Priority date: 2017-05-08
Filing date: 2017-05-08
Publication date: 2017-08-29

Abstract

本发明提供了一个来源于桃的基因PpTPS2，具有SEQ:NO.1所示的核苷酸序列。通过PCR扩增获得PpTPS2全长序列，进化树分析得到PpTPS2聚类在TPS b家族，通过序列比对得到其具有b家族的保守域。在大肠杆菌中进行体外功能验证表明，PpTPS2可以FPP为底物催化形成倍半萜类挥发性物质α‑法尼烯。在桃果实中过量表达PpTPS2，显著促进了果肉组织α‑Farnesene含量的积累，可改善果实的风味、提高对逆境的抗性，是桃果实开展基因工程与改良育种的重要候选基因，改善桃果实品质和提高抗性能力，可在基因工程中的应用。

Description

一个参与桃α-Farnesene生物合成的基因及其应用

技术领域

本发明属于植物分子生物技术和基因工程领域，涉及一个参与桃挥发性萜烯类物质生物合成的基因及其应用。

背景技术

萜烯类物质广泛存在于植物中。挥发性萜烯类物质具有独特的气味，在植物生长发育过程中具有重要生物学功能。近年来对薄荷、罗勒等香料作物的萜烯类物质代谢研究较多，但是对果实萜烯类物质代谢机制研究相对较少。

桃作为重要的大众经济水果，其基因组较小，可以作为蔷薇科植物研究的模式材料。通过50个桃品种的挥发性物质研究表明，萜烯类物质在不同遗传背景桃果实中差异很大，表明挥发性萜烯类物质在适应自然环境和人工驯化过程中可能具有重要作用。通过全基因组关联分析筛选出了与许多重要农艺性状连锁的桃候选基因，由于萜烯类物质代谢的复杂性，目前尚未在桃中鉴别出参与萜烯类挥发性物质合成基因。

随着消费者对果实消费品质的要求变高，以及可持续农业发展需要，农药减量使用是今后的发展趋势。萜烯类物质，尤其是α-Farnesene不仅本身具有很强的抗菌驱虫生物活性，还可以作为信号物质，激活相关免疫系统抵抗病虫害。同时α-Farnesene也是一种信息素，能够作为植物预警物质吸引害虫天敌。因此，鉴别参与α-Farnesene合成关键基因具有重要生物学和产业意义。

发明内容

本发明的目的是提供一个参与α-Farnesene生物合成的基因PpTPS2，具有SEQ:NO.1所示的核苷酸序列。

该基因的特征功能如下：

1.基因的表达特征：PpTPS2在桃叶片组织中的表达含量显著高于果实，与叶片组织中α-Farnesene的积累呈正相关关系。

2.基因重组蛋白定位特征：烟草瞬时表达证明其在细胞质。

3.基因的功能特征：在大肠杆菌中表达pET6xHN-N-PpTPS2重组载体，通过纯化蛋白，体外检测活性，证明PpTPS2编码的蛋白能够将法尼烯基二磷酸(FPP)转化为倍半萜烯类挥发性物质α-Farnesene。

本发明另一个目的是提供PpTPS2在基因工程中的应用，是在桃果实实施基因工程与改良育种的重要候选基因，可改善桃果实品质和提高抗性能力。通过将pGreen0029062SK–PpTPS2重组载体在桃果实过量表达，GC检测结果证明PpTPS2编码的蛋白能够促进挥发性物质α-Farnesene在桃果实组织中的积累。α-Farnesene在桃果实中的积累可以改善果实风味，同时也可提高对逆境的抗性，因此具有SEQ:NO.1序列的PpTPS2是桃果实实施基因工程与改良育种的重要候选基因。

本发明提供了一个新的来源于桃的萜类合成酶PpTPS2基因，可以在体外利用FPP作为底物，合成α-Farnesene，表明利用基因工程生产这种物质具有应用前景。进一步利用瞬时表达方法，在桃果实中进行体内过量表达PpTPS2基因，显著提高了桃果实组织中α-Farnesene含量，为利用稳定转基因方法提高该物质含量提供了参考。考虑到α-Farnesene物质的功能，既是果实香气的重要组成部分，又在植物与逆境互作中承担重要角色，我们鉴别出的PpTPS2可以催化α-Farnesene生物合成，显示该基因在利用基因工程大规模生产α-Farnesene物质，以及采用转基因技术改善桃果实品质和抗性能力具有重要应用前景。

附图说明

图1：桃PpTPS2的表达与α-Farnesene含量在不同组织具有正相关关系(*P<0.05)。

图2：桃PpTPS2的表达与α-Farnesene含量在UV-B处理下具有正相关关系(*P<0.05)。

图3：桃PpTPS2的表达与α-Farnesene含量在茉莉酸甲酯处理下具有正相关关系(*P<0.05)。

图4：PpTPS2编码蛋白定位在细胞质。

图5：原核表达结果显示PpTPS2催化FPP产生α-Farnesene。

图6：过量表达PpTPS2显著提高桃果实α-Farnesene含量(***P<0.001)UD，低于检测限度。

具体实施方式

下面结合具体实施例和附图对本发明做进一步的阐述，但实施例不限制本发明保护范围。实施例1：PpTPS2基因克隆

(一)实验方法

以苹果中具有α-Farnesene合成功能的MdAFS-RG1氨基酸序列为参考序列，应用Blastp算法在桃基因组数据库Peach Genome V2.0中，查找同源序列。设计引物对SEQ:NO.2和SEQ:NO.3，以桃cDNA为模板，进行PCR扩增获得PpTPS2序列SEQ:NO.1，并进行测序验证。PCR反应体系为50μl，成分分别为：0.5μl Taq酶(Roche)，5μl缓冲液(10×)，4μl dNTP(2.5mM)，上下游引物(10μM，Invitrogen)各2μl，4μl cDNA，32.5μl H₂O。RT-qPCR反应程序为95℃反应5min；95℃反应30s，58℃反应30s，72℃延伸1.5min，35个循环；最后72℃延伸7min，4℃保存。

(二)、实验结果

经测序验证，获得与桃果实基因组数据相匹配的PpTPS2序列SEQ：NO.1。

实施例2：PpTPS2表达与α-Farnesene含量

(一)实验方法

1.桃果实材料

桃果实商业成熟度采后，叶片选取叶型工整正常的成熟叶片，叶片与果肉组织经液氮冷冻后存放于-80℃冰箱待用。为了进一步明确基因表达和物质含量相关性，分别以果实和叶片组织为材料，开展了紫外线B(UV-B)和茉莉酸甲酯(MeJA)处理。设置三个生物学重复，每个重复5个果实，或20片叶片。

2.RNA提取和CDNA合成

用CTAB法提取桃果实和桃叶片的总RNA，用TURBO DNase Kit(Ambion)试剂盒去除基因组DNA污染后，取1.0μg RNA按iScript cDNA Synthesis Kit(Bio-Rad)试剂说明书操作合成cDNA。RNA检测合格后送测序公司进行RNA-seq。

3.挥发性物质的检测

取1g桃叶片液氮研磨成的粉末，转入到20ml的顶空瓶，加入5ml CaCl₂溶液和5mlEDTA-2Na溶液，再加入2-辛醇(0.07μg·μl^-1)作为内标，密封涡旋混匀后用配备CTC-PAL2自动进样系统的GC-MS(Agilent，7890-5975)进行样品挥发性物质测定。分离柱为DB-Wax毛细管色谱柱(0.25mm，30m，0.25μm，J&W Scientific)。柱箱升温程序为：40℃保持2min，3℃升温到100℃后，再以5℃·min^-1升温至230℃，载气为氦气，流速为1.0ml·min^-1。4.实验结果

桃叶片组织α-Farnesene含量和PpTPS2的表达都显著高于果肉组织(附图1)。采用UV-B和MeJA处理都可以显著诱导PpTPS2表达以及α-Farnesene积累(附图2，附图3)。在叶片和果实组织中，PpTPS2的表达和α-Farnesene的积累呈正相关关系，他们受到环境胁迫相关的UV-B和MeJA调控，表明PpTPS2和α-Farnesene在植物与逆境的互作中承担重要作用。

实施例3：亚细胞定位

(一)实验方法

1.载体构建

结合引物对SEQ:NO.6和SEQ:NO.7，利用PCR技术扩增获得PpTPS2，PCR体系及反应程序同实施例1。PCR产物和目标载体pCAMBIA super 1300-RGFP用限制性内切酶BamHI和SalI酶切后分别连接。转化大肠杆菌，挑菌送测验证后，将经测序确认的质粒用电击法转化到农杆菌株系GV3101::pSoup。

2.烟草叶片侵染

将转化后的农杆菌涂板，在28℃培养2天后挑选单克隆并转入到5ml LB培养液，加入卡那霉素(50mg/L)与庆大霉素(25mg/L)，培养至OD₆₀₀为0.8-1.0后离心(4000g,5min)。沉菌用等体积的渗透液(10mM MES,10mM MgCI₂,150mM乙酰丁香酮，PH 5.6)重悬浮，并静止诱导2h，然后用无菌注射器选取生长4周的本氏烟草的第5-6片叶片进行注射。注射48h后，选取叶片注射部位做成载玻片，进行共聚焦激光显微镜观察，拍照。空载体同时进行转化，侵染烟草表达蛋白，用作阴性对照。

(二)实验结果

烟草瞬时表达结果证明重组载体PpTPS2-pCAMBIA super 1300-RGFP在侵染烟草叶片后，目标蛋白定位在细胞质(附图4)。

实施例4：大肠杆菌异源表达

(一)实验方法

1.重组载体的构建和大肠杆菌转化

结合引物对SEQ:NO.4和SEQ:NO.5，利用PCR技术扩增获得PpTPS2，PCR体系及反应程序同实施例1。PCR产物和目标载体(pET6xHN-N，Clonetch，Takara)用限制性内切酶SalI和HindIII进行酶切连接，进行测序验证，质粒用热激法转化大肠杆菌感受态BL21(DE3)pLysS(Promega)，挑取阳性菌落PCR检测验证。

2.诱导表达

挑选单菌落，加入20ml LB及对应的氨苄抗生素，37℃过夜培养。过夜培养后的菌液按照1:50的比例加入500ml LB，加入氨苄抗生素，培养至OD₆₀₀＝0.5-0.8。将温度降至18℃，加入1mM的IPTG诱导20h左右，0D₆₀₀在1.8-2.0。菌液离心(4000g，15min)后用30ml左右PBS溶液重新悬浮，然后菌液放置到-80℃超低温冰箱大于24h后转到30℃水浴解冻破碎。

3.蛋白纯化

用冻融法解冻后的菌液离心(10000rpm,30min)，上清液过HV的除菌膜(0.45μm,diameter 33mm,Millipore USA)。除菌后的上清液按照说明书过HisTALON^TM(Clontech,Takara)的重力柱纯化得到粗蛋白。粗蛋白液用脱盐柱PD-10((GE HealthcareUK)进行脱盐，并将蛋白置换到Tris-HCI缓冲液(100mM Tris,2mM DTT,PH 7.5)，加入10％甘油储存在超低温冰箱。

4.蛋白体外活性测定

GPP与FPP两种反应底物分别对应缓冲液A(50mM HEPES,7.5mM MgCI₂,100mM KCI,5mM dithiothreitol and 10％[v/v]glycerol,PH 7.0)，与缓冲液B(50mM MOPS,5mMMgCI₂,20μM MnCI₂,5mM dithiothreitol and 10％[v/v]glycerol,PH 7.0)。反应在4ml的密封玻璃瓶进行，1ml的反应体系中分别加入200μl纯化蛋白，10μg反应底物，800μl对应的反应缓冲液，加入适量内标后，在42℃反应15min，用SPME方法进行挥发性物质的收集测定。GC-MS的条件与实施例2的叙述相同。

(二)实验结果

在大肠杆菌中诱导PpTPS2-pET6xHN-N重组载体表达，可以FPP为底物，催化产生大量α-Farnesene，证明PpTPS2编码的萜烯类合成酶能够催化具有抗性作用的挥发性物质合成(附图5)。

实施例5：桃果实中表达PpTPS2

(一)实验方法

1.载体的构建

载体以及载体的构建，转化，菌液培养，渗透液配置同实施例4相同。构建载体的引物为SEQ:NO.13和SEQ:NO.14

2.实时定量PCR(qPCR)分析基因表达

以桃PpTEF2(SEQ:NO.8)为内参基因，引物为SEQ:NO.9和SEQ:NO.10，PpTPS2引物为SEQ:NO.11和SEQ:NO.12。qPCR反应体系包括10μl Ssofast EvaGreen Supermix(Bio-Rad)，上下游引物(10μM)各1μl,2μl cDNA,6μl H2O。反应程序为95℃反应3min；95℃反应10s,60℃反应30s,45个循环。所用仪器为Bio-Rad CFX96实时荧光定量PCR仪，每次检测都包括H₂O作反应模板的阴性对照。

1.桃果实的侵染

选取转色期的果实，消毒后去除表皮，选取中部果肉，切成厚度为1cm，长宽各为2cm的方形切片。每个果实选取非缝合线位置的赤道面及其对位的面，切取2片，切好的切片放在MS固体培养基上预培养24-30h。500ml渗透液经过2h诱导后，倒入提前消毒过的真空渗透装置中，将培养基上的切片放入渗透液进行抽真空渗透。真空压力为-70Kpa，当切片表面不再出现去气泡后，开始放气恢复压力，过程大约需要15-20min。渗透后的果实切片用无菌水消毒后放置到新配的MS培养基上，培养2天。每个果实切取的2片一半用来渗透含有重组载体PpTPS2-PGreen0029 62-SK的菌液，一半用来渗透只含空载的菌液，互为对照。样品收集后用液氮冷冻存于-80℃冰箱。挥发性物质的测定同实施例1中的果实的挥发性测定方法。

(二)实验结果

通过基因工程过量表达PpTPS2，证明该基因能够在桃果实体内催化具有抗性作用的挥发性物质α-Farnesene生物合成(附图6)。

对本领域的普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，而所有的这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。

<110> 浙江大学

<120> 一个参与桃α-Farnesene生物合成的基因及其应用

<160> 14

<210> 1

<211> 1728

<212> DNA

<213> 桃 (Prunus persica)

<221> CDS

<222> (1)…(1728)

<400>

ATGGATTTTAGAACACACTTGCAAGCTGGTGAGCAGCAAATTCTTGAATGCCAGATGCAATCCCAAGCCTCTTACGACTTGACACAATACGAAAGACGATCTGCCAATTACAAGCCAAATATTTGGAAATATAGTTTCTTTGAATCCCTTGACAGCAAATACCATGAAGATGATTATAAAAGGCAATCTGAGAAGCTCATAGAAGATGTTAAGAATATGATATTTGTCGAAACTGAAAATTCAATAGCTCAGTTAGAGCTAGTTGACATCATCGCAAAACTAGGCCTCACAAACCACTTTGAAAAGGAAATCAAGGAAACCCTAGACACAATAGCATCTGTTGAAAATAACAGCCCCTGCATAAGCATAACAGATGACCTCTATACCACTGCCTTGTACTTTAAGATCCTTAGGCAGCAGGGCTACAAAGTATCACACGATTTATTTGGTGGCTTCATGGATGAGGAGGGTACATTAAAGAAAAGCCATCTTTCGGATGTCAAAGGAATGCTTGAACTTTTTGAGGCCTCGAACCTGGCTTTAGAAGGTGAAGATATCTTAGATGAGATAAAAGCTTCATCTAAGGTAGCTCTCAGAGATTCCAATATCTGTAATCTGGACAATAACCTTGCCAAGCATGTGGTCCATGCTTTGGAGCTTTcATCACACAGAAGAGTGCGGTGGTTCAATGTTAAAGGGCACATAGACGCCTATGAGAAAGACAATCACGTCAACACCATTTTACTTGAATTGGCTAAACTTAACTTTAACATGGTTCAAGCAAAACTGCAAAAAGATCTAAGGGAGGCATCCAAGTGGTGGAACAATCTGGGCCTCACACAGCACTTGAACTTTGCAAGAGATAGATTGGTCGAGTGTTTCATGTGTGCTGTGGGGTTAAATTTCCAGCCTGACTACACATCTTTTAGAATATGGCTTACTAAAGTCGTCAACCTGATTCTGATAATAGACGACGTTTACGACATTTATGGCTCATTGGAAGAGCTAAAGTGCTTCACCGACGCCGTTGACCGGTGGGATGTTGGGGAAACTGAGGCGCTTCCAGAGTGTATGAAGATCTGCTTCCAAGTGCTCTACAACACTACTTGTGAAATTGCTCATGAAATTGAGGAGGAAAATGGTTGGAATCAAGTGTTACCTCAGTTGAGGAAAGTGTGGGCAGATTTTTGTAAAGCATTATTAGTGGAGGCAGAATGGTACAGTAGGGCCTATACACCATCCCTGGAAGAGTACCTCAGTATTGGATGCATTTCATCATCAGTTTCAGTGCTTTTGGTCCATTCATTTTTCTCCACAACTCATCATCAGGGAATCCAAGAGATTGCTGATTTTCTGCACAAGAATGAAGATCTTGTGTATAATTTATCTCTGATAGTTCGGCTCAGCAATGATTTGGGAACTTCTGCAGCAGAACAAGAGCGAGGGGATGCTCCCTCAGCAATCCTATGTTACATGAGAGAGGTGAATGTTTGTGAAGATGTAGCTAAGAAGAACATCAAGGACATGATAGAGAATGCATGGAAGAAAATAAATGCAAAATGCTTGAGAACCCCACAAGTGCCTTCTCTGTCACCATTCATCAACATTACCACAAATATTGCTCGAGTGGCGCACAGCCTTTACCAAGATGGAGATGCGTTTGGTGATCAAGAGAAAGGAACTCGCATCCTGATTCAGTCTCTACTAGTTCAGCCTTTACTACTTTGA

<210> 2

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<222> (1)…(24)

<400> TCATGGATTTTAGAACACACTTGC

<210> 3

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<222> (1)…(24)

<400> TCAAAGTAGTAAAGGCTGAACTAG

<210> 4

<211> 34

<212> DNA

<213> 人工序列

<222> (1)…(34)

<400> GCCTCTGTCGACATGGATTTTAGAACACACTTGC

<210> 5

<211> 35

<212> DNA

<213> 人工序列

<222> (1)…(35)

<400> TTCGCAAGCTT TCAAAGTAGTAAAGGCTGAACTAG

<210> 6

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列

<222> (1)…(40)

<400>GGTACCCGGGGATCCATGGATTTTAGAACACACTTGCAAG

<210> 7

<211> 37

<212> DNA

<213> 人工序列

<222> (1)…(37)

<400> GCTCACCATGTCGACAAGTAGTAAAGGCTGAACTAGT

<210> 8

<211> 2532

<212> DNA

<213> 桃 (Prunus persica)

<221> CDS

<222> (1)…(2532)

<400>

ATGGTGAAGTTCACAGCTGAGGAGCTCCGTAGGATTATGGACTACAAACACAACATTCGTAACATGTCTGTTATTGCGCATGTTGATCACGGGAAGTCAACCCTTACCGACTCCCTTGTTGCTGCTGCTGGTATCATTGCACAAGAAGTTGCTGGTGATGTCCGCATGACAGATACCCGTGCAGATGAGGCAGAGCGTGGTATCACAATCAAATCTACTGGTATCTCTCTCTACTATGAGATGACTGATGAAGCTTTGAAGAGCTACAAGGGGGAGAGAAACGGAAATGAGTACCTCATCAATCTCATTGATTCCCCTGGGCACGTTGACTTTTCATCTGAAGTCACAGCTGCCCTTCGCATTACTGATGGTGCACTTGTGGTGGTTGATTGCATTGAGGGTGTTTGTGTCCAAACAGAGACTGTGCTTCGTCAAGCCTTGGGAGAAAGGATCAGGCCTGTTTTGACTGTTAACAAGATGGACAGGTGCTTCCTTGAGCTCCAGGTCGATGGAGAGGAGGCTTACCAAACATTCCAGAGGGTTATTGAGAATGCTAATGTTATTATGGCTACATACGAAGACCCTCTTCTTGGTGATGTCCAGGTCTATCCAGAGAAAGGAACAGTTGCCTTTTCTGCTGGTTTGCACGGATGGGCTTTTACTCTGACCAACTTTGCCAAGATGTATGCATCCAAGTTTGGAGTTGATGAGTCAAAGATGATGGAAAGGCTCTGGGGTGAGAACTACTTTGACCCAGCTACCAAGAAATGGACCAGCAAGAACACTGGTTCTGCTACCTGCAAGCGTGGTTTCGTTCAGTTCTGTTATGAACCCATCAAGCAGATTATCAACACCTGCATGAATGATCAGAAGGAGAAGTTGTGGCCCATGTTGACAAAGCTTGGTGTGACGATGAAGAGTGATGAAAAGGAGCTGATGGGGAAGGGGTTGATGAAGCGTGTCATGCAGACCTGGCTACCAGCCAGCAGTGCCCTATTGGAAATGATGATCTTTCACCTTCCCTCTCCTTCAACTGCCCAGAGATACCGTGTTGAGAACTTGTACGAGGGTCCCCTTGATGATCAATATGCAAATGCTATCAGGAACTGCGATCCTGAAGGGCCTCTTATGCTCTATGTATCTAAGATGATTCCCGCATCTGACAAGGGTCGATTCTTTGCCTTTGGTCGTGTCTTTGCTGGTAAAGTCCAGACAGGTTTGAAGGTTAGAATCATGGGTCCAAATTATGTTCCTGGAGAGAAGAAGGATTTGTATGTTAAGAACGTGCAGAGGACTGTTATTTGGATGGGAAAGAAACAAGAAACTGTTGAGGATGTTCCTTGTGGTAACACTGTTGCCTTGGTCGGTCTTGATCAGTTTATCACCAAGAATGCTACGTTGACAAATGAGAAGGAAGCGGATGCTCACCCCATTCGTGCTATGAAGTTCTCTGTTTCACCTGTTGTGCGTGTTGCTGTTCAATGCAAGGTGGCTTCTGACCTTCCCAAACTGGTTGAAGGTCTCAAACGTCTGGCCAAGTCTGATCCTATGGTTGTCTGTTCCATTGAGGAATCCGGTGAGCACATTATTGCTGGTGCTGGTGAACTTCATCTTGAGATTTGTTTGAAGGATCTACAAGATGATTTCATGGGTGGAGCTGAGATTATAAAATCTGACCCCGTTGTGTCTTTCCGTGAGACTGTCCTGGAGAAGTCTAGTCGTACTGTGATGAGCAAGTCACCCAACAAGCATAACCGTCTGTATATGGAAGCTCGACCCTTGGAGGAAGGTCTTCCTGAGGCCATTGATGATGGCCGTATTGGCCCAAGAGATGATCCCAAAATTCGTTCCAAGATATTGGCTGAAGAGTTTGGTTGGGACAAGGATCTTGCTAAGAAAATCTGGTGTTTTGGCCCTGAGACCACCGGTCCTAACATGGTGGTGGATATGTGTAAGGGAGTTCAGTACCTGAATGAAATTAAGGACTCTGTTGTTGCTGGTTTCCAGTGGGCTTCAAAGGAAGGTGCATTGGCAGAAGAAAACATGAGGGGTATTTGCTTTGAAGTCTGTGATGTGGTTCTTCATGCTGATGCCATCCACAGAGGAGGTGGTCAGGTCATTCCCACTGCTAGGAGGGTCATCTATGCTTCCCAGCTCACTGCCAAGCCAAGGCTCCTTGAACCTGTATATCTTGTTGAAATCCAAGCTCCAGAGCAGGCTCTTGGTGGTATCTACAGTGTTCTTAATCAGAAACGTGGGCACGTGTTTGAGGAAATGCAGAGGCCTGGTACACCACTCTACAATATCAAGGCATACCTCCCCGTCATTGAATCTTTTGGGTTCTCTGGTCAACTGAGGGCTTCGACTTCAGGGCAGGCCTTCCCACAATGTGTCTTTGATCATTGGGAGATGATGTCGTCTGATCCATTGGAAGCTGGATCCCAGGCTTCACAGCTTGTTACAGATATCCGTAAGAGGAAGGGTTTGAAGGAGCAAATGACCCCACTATCCGAGTTTGAGGACAAACTCTGA

<210> 9

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<222> (1)…(22)

<400> GGTGTGACGATGAAGAGTGATG

<210> 10

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<222> (1)…(22)

<400> TGAAGGAGAGGGAAGGTGAAAG

<210> 11

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<222> (1)…(25)

<400>GCTCAGCAATGATTTGGGAACTTCT

<210> 12

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<222> (1)…(25)

<400>TGTGGTAATGTTGATGAATGGTGA

<210> 13

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列

<222> (1)…(40)

<400>AGAACTAGTGGATCCATGGATTTTAGAACACACTTGCAAG

<210> 14

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列

<222> (1)…(40)

<400>CCCCTCGAGGTCGACTCAAAGTAGTAAAGGCTGAACTAGT

Claims

1.一个参与α-Farnesene生物合成的基因PpTPS2，其特征在于，具有SEQ:NO.1所示的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的基因PpTPS2在基因工程中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，具有SEQ:NO.1所示的核苷酸序列的基因PpTPS2作为桃果实开展基因工程与改良育种的重要候选基因，改善桃果实品质和提高抗性能力。