CN107099455B - 一种可视化微生物生化鉴定试剂盒及其鉴定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种可视化微生物生化鉴定试剂盒及其鉴定方法。所述生化鉴定试剂盒，包括盒体，内部设置有反应槽及与反应槽连接的加样槽；反应槽为倾斜设置；反应槽和加样槽通过分隔板分隔成若干个反应支槽和加样支槽，每个反应支槽中通过真空干燥的方法固定有生化培养基，加样槽设有一用于引流样液至反应槽的斜面。本试剂盒实现了一次加样，利用水溶液的流动性完成样液分配，省去了每步加样的繁琐过程，减少了污染。反应槽为倾斜设置，试剂盒放在比色卡上更易于记录结果，避免错看，漏看等情况的发生。试剂盒中生化培养基是基于糖发酵反应原理，准确度高。真空干燥技术将培养基干燥固化在反应槽底部上，形成一层薄膜，试剂稳定，易于保存和运输。

Description

一种可视化微生物生化鉴定试剂盒及其鉴定方法
技术领域
本发明属于微生物检测领域，具体涉及一种可视化微生物生化鉴定试剂盒及其鉴定方法。
背景技术
食品安全已经成为我国面临的严峻问题，食品安全问题屡屡曝光，尤其是近年来食源性致病菌引起的中毒事件日渐增多，给人们的生命健康带来严重的威胁。提高对食品的污染微生物的监控能力，对维护我国社会稳定具有极大的意义。
在微生物检测方面，经常用到的技术是形态学观察，染色以及生化特征反应、分子生物学等方法。其中这些方法各有优缺点，比如分子生物学方法会出现一定的假阳性等，而生化鉴定的准确度是比较高的，生化鉴定方法配套的试剂盒目前通常为西林瓶或者安瓿瓶包装。
生化鉴定方法配套的试剂盒中，国内大部分企业对微生物的鉴定液是使用手工配制的试管或商品化微量即用型的培养基(液体的生化试剂)进行细菌的生化反应，来鉴定细菌的种属。
商品化即用型微量生化鉴定培养基与传统手工配制的试管培养基比较，虽然有了很大的改善，但目前国内市场上各种包装的商品化即用型微量生化鉴定培养基存在如下缺陷：
(1)在运输过程中存在破损泄露污染问题，并且由于是液体形式的培养基，因而存在不易保存，有效期不长，不便运输等缺点；
(2)加样时需要打开每个西林瓶或者安瓿瓶添加，添加量为每孔1ml，加样量较大，加样过程中吸头上残留的液体容易滴落，操作繁琐，费时费力；
(3)反应的基质(生化培养基)通常为微生物酶系统反应，准确度没有糖发酵等经典反应的准确度高。
现有技术中，也有极少数商品化即用型微量生化鉴定培养基采用固体形式，但是存在下述问题：
(1)通常来说，试剂盒的反应管是直立排列，读取结果容易出现交叉错误，一般微生物鉴定需要的反应通常可到达12-24之多，也就是说，需要记录12-24个生化反应的结果，这些生化反应的结果都是通过颜色反应进行判读的。目前市场上的生化反应鉴定条为不透明的，观察需要通过反应管的开口观察并记录结果，因此，附有比色卡的记录纸只能放在桌子上进行观察并记录，很容易将A孔的结果写到B的生化结果处。而且鉴定一种微生物时，通常需要几个指标同时符合条件的前提下，才能最终确认。比如鉴定沙门氏菌，利用微生物酶系统培养基，需要符合24个生化指标；如果是利用生化培养基，则需要符合12个指标。而鉴定大肠杆菌，利用利用微生物酶系统培养基，需要符合24个指标；如果是利用生化培养基，则需要符合4个指标。所以，如果比色卡距离反应管有一定距离的情况下，容易将A孔的结果写到B的生化结果处，特别是大量检测时，更容易出错，造成结果的错误。
(2)利用琼脂，或明胶、黄原胶等来辅助固定在反应管底部，干燥固定不牢，容易脱落，影响结果的判断。
(3)反应的基质(生化培养基)通常为微生物酶系统反应，准确度没有糖发酵等经典反应的准确度高。此外，微生物酶系统反应培养基需要在2-4℃保藏的条件，条件苛刻，如果在运输的途中温度有偏差时，对酶的活性有较大影响，或导致酶底物分子失效，影响产品的使用。
现国内有条件的实验室已引进国外半自动或全自动微生物数值分类鉴定系统，但费用高，而且售后还需要依赖国外产品技术的支持。
发明内容
本发明的目的在于克服上述技术的不足，提供一种微生物的生化鉴定试剂盒及其鉴定方法。
本发明所采取的技术方案是：
一种微生物的生化鉴定试剂盒，包括盒体，所述盒体内部设置有反应槽及与反应槽连接的加样槽；反应槽为倾斜设置，反应槽底部向远离加样槽的方向倾斜，倾斜角度为50°～70°；反应槽和加样槽通过分隔板分隔成若干个反应支槽和加样支槽，每个反应支槽中通过真空干燥的方法固定有生化培养基，加样槽设有一用于引流样液至反应槽的斜面。
优选的，加样槽的剖切面为直角三角形。
优选的，所述反应支槽和相对应的加样支槽通过斜面组成一个反应组件，分隔板的高度不超过3mm，每个反应支槽容纳的待测样液为100μl-105μl。
优选的，盒体上铰接有可打开的盒盖。使用时，打开盒盖，一次性加注待测样液即可，然后盖上盒盖，以避免污染的发生。
优选的，所述生化培养基是基于糖发酵反应原理的生化培养基，可根据国家标准配置。
优选的，每个反应支槽中添加0.1-0.3ml的基于糖发酵反应原理的液体生化培养基。
优选的，所述真空干燥的方法包括下列步骤：在每个反应支槽中添加基于糖发酵反应原理的液体生化培养基，于38-48℃、真空度100-133Pa进行干燥25-60min，将生化培养基固定于反应支槽底部。
优选的，所述真空干燥的方法包括下列步骤：在每个反应支槽中添加基于糖发酵反应原理的液体生化培养基，于40-48℃、真空度100-133Pa进行干燥30-40min，将生化培养基固定于反应支槽底部。
一种微生物的生化鉴定方法，是利用上述任一项所述的生化鉴定试剂盒来进行微生物的生化鉴定。
优选的，所述的生化鉴定方法包括下列步骤：
(1)打开盒盖，取适量的待测样液一起加注到加样槽；将盒体的一端抬高，使得待测样液从一端流向另外一端，被分隔板均匀分隔到每个加样支槽中，利用水溶液的流动性完成样液分配；
(2)盖上盒盖，将盒体的加样槽侧缓缓抬高，使得加样槽的样液沿着引流用斜面流入反应槽(每个加样支槽的待测样液流入对应的反应支槽)，进行反应；
(3)在反应板条下放置比色卡，通过对比读取结果。
优选的，当检测厌氧菌时，步骤(2)当加样支槽的待测样液流入对应的反应支槽后，打开盒盖，滴加石蜡油覆盖反应支槽的培养基和样液，制造厌氧条件，以方便厌氧菌和相关生化培养试剂进行反应。
本发明的有益效果是：
本发明克服现有技术的不足，提供了一种易于保存、使用方便的可视化微生物生化鉴定试剂盒。所述试剂盒中反应槽和加样槽通过分隔板分隔成若干个反应支槽和加样支槽，因此，打开盒盖后，取适量的待测样液一起加注到加样槽；将盒体的一端抬高，待测样液便可以从一端流向另外一端，被分隔板均匀分隔到每个加样支槽中，利用水溶液的流动性完成样液分配。而无需向每个反应支槽中添加待测样液，简化了操作，而且不容易造成污染。
本发明的试剂盒每个反应支槽之间的分隔板的高度不超过3mm，控制每个反应支槽容纳的待测样液为100μl-105μl。一般来说，微生物鉴定需要的生化反应通常为4-10个，也即需要400μl-1ml的待测样液，所以只需要用移液枪加注1次即可。与现有技术相比，本发明的试剂盒中，微生物接种量从传统的1ml减少到平均每孔100μl，避免接种过程中出现带菌液体滴落，引起污染。因此，本试剂盒实现了一次加样，利用水溶液的流动性完成样液分配，省去了每步加样的繁琐过程，并最大减少了污染的可能性。
本发明试剂盒的反应槽为倾斜设置，反应槽底部向远离加样槽的方向倾斜，试剂盒放在比色卡上更易于记录结果，避免错看，漏看等情况的发生。
本发明的试剂盒可以解决现有技术的不足，真空干燥技术将基于糖发酵反应原理的液体生化培养基干燥固化在反应槽底部上，形成一层薄膜。生化培养基试剂稳定，易于保存和运输。培养基的颜色仅为其本身的颜色，而没有琼脂、明胶或黄原胶的固定用组分的颜色混合在其中。加入待测样液后，培养基的颜色变化更易观察。本技术的产品保质期2年，保存温度为4-8℃。相较于微生物酶系统反应培养基需要在2-4℃保藏的条件，本产品的保藏条件宽松很多，此外，即便是在运输过程中出现温度稍有偏差时，也不会造成产品失活，影响结果。本发明试剂盒中生化培养基是基于糖发酵反应原理，为经典的生化培养基，准确度高。
附图说明
图1为本发明的微生物的生化鉴定试剂盒的截面图；
图2为本发明的微生物的生化鉴定试剂盒使用时的操作示意图，将加样槽侧缓缓抬高向反应槽倾斜，大约50°，加样槽的样液沿着引流用斜面流入反应槽。
具体实施方式
一种微生物的生化鉴定试剂盒，包括盒体，所述盒体内部设置有反应槽及与反应槽连接的加样槽；反应槽为倾斜设置，反应槽底部向远离加样槽的方向倾斜，倾斜角度为50°～70°；反应槽和加样槽通过分隔板分隔成若干个反应支槽和加样支槽，每个反应支槽中通过真空干燥的方法固定有生化培养基，加样槽设有一用于引流样液至反应槽的斜面。
所述微生物生化鉴定试剂盒的截面图见图1。
优选的，所述反应支槽和相对应的加样支槽通过斜面组成一个反应组件，分隔板的高度不超过3mm，每个反应支槽容纳的待测样液为100μl-105μl。
优选的，盒体上铰接有可打开的盒盖。使用时，打开盒盖，一次性加注待测样液即可，然后盖上盒盖，以避免污染的发生。
优选的，所述生化培养基是基于糖发酵反应原理的生化培养基，可根据国家标准配置。
优选的，每个反应支槽中添加0.1-0.3ml的基于糖发酵反应原理的液体生化培养基。
优选的，所述真空干燥的方法包括下列步骤：在每个反应支槽中添加基于糖发酵反应原理的液体生化培养基，于38-48℃、真空度9-15mbar进行干燥25-60min，将生化培养基固定于反应支槽底部。
优选的，所述真空干燥的方法包括下列步骤：在每个反应支槽中添加基于糖发酵反应原理的液体生化培养基，于40-48℃、真空度100-133Pa进行干燥30-40min，将生化培养基固定于反应支槽底部。
下述实施例中所涉及到的生化鉴定试剂盒结构如上所述。
一种微生物的生化鉴定方法，是利用上述任一项所述的生化鉴定试剂盒来进行微生物的生化鉴定。
所述的生化鉴定方法具体包括下列步骤：
(1)打开盒盖，取适量的待测样液一起加注到加样槽；将盒体的一端抬高，使得待测样液从一端流向另外一端，被分隔板均匀分隔到每个加样支槽中，利用水溶液的流动性完成样液分配；
(2)盖上盒盖，将盒体的加样槽侧缓缓抬高，使得加样槽的样液沿着引流用斜面流入反应槽(每个加样支槽的待测样液流入对应的反应支槽)，进行反应，见图2；
(3)在反应板条下放置比色卡，通过对比读取结果。
优选的，当检测厌氧菌时，步骤(2)当加样支槽的待测样液流入对应的反应支槽后，打开盒盖，滴加石蜡油覆盖反应支槽的培养基和样液，制造厌氧条件，以方便厌氧菌和相关生化培养试剂进行反应。
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。
实施例1志贺氏菌属的生化鉴定试剂盒以及鉴定方法
生化鉴定试剂盒结构如上所述。
鉴定志贺氏菌属的糖发酵反应生化培养基，按照GB 4789.5-2012-食品安全国家标准食品-微生物学检验-志贺氏菌检验中相应的生化培养基配方进行配置。
鉴定志贺氏菌属的生化鉴定试剂盒，至少包括13个反应组件，每个反应支槽中固定的生化培养基均不同，分别为葡萄糖铵、西蒙氏柠檬酸盐赖、鸟氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶、尿素、ONPG、水杨苷、七叶苷、蛋白胨水、甘露醇、棉子糖、甘油、粘液酸测试肉汤。每个反应支槽中分别添加0.3ml的液体生化培养基，于50℃、真空度133Pa进行干燥50min，生化培养基形成一层薄膜，贴在反应槽的底部。
鉴定方法包括下列步骤：
(1)打开盒盖，取1.3mL的样液一起加注到加样槽，将盒体放在水平平面上，将盒体的一端轻轻抬高，液体会从一端流向另外一端，样液被分隔板均匀分隔到每个加样支槽中；一共有13个组件，每个组件所在的加样支槽平均分配到100μl的待测样液；
(2)盖上盒盖，将盒体放平，将加样槽侧缓缓抬高向反应槽倾斜，大概50°，加样槽的样液会沿着引流用斜面流入反应槽(每个加样支槽的待测样液流入对应的反应支槽)，进行反应；
(3)读取结果：
试剂盒下放置比色卡，由于反应槽向外倾斜，观察反应孔的颜色不会遮挡视线。结果记录在比色卡。生化反应阴阳性结果见表1；志贺氏菌属生化反应特征见表2。
表1生化反应阴阳性结果
表2志贺氏菌的生化特征
当13个生化反应结果均符合阳性结果时，判定待测样液中含有志贺氏菌属微生物。
如果不符合，则为非志贺氏菌属微生物。
实施例2沙门菌属的生化鉴定试剂盒以及鉴定方法
生化鉴定试剂盒结构如上所述。
鉴定沙门菌属的糖发酵反应生化培养基，按照GB 4789.4-2016-食品安全国家标准食品-微生物学检验-沙门氏菌检验中相应的生化培养基配方进行配置。
鉴定沙门菌属微生物的生化鉴定试剂盒，至少包括10个组件，每个组件中的反应支槽中固定的生化培养基均不同，分别为赖氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶对照(不含赖氨酸)、靛基质、尿素、ONPG、丙二酸盐、甘露醇、山梨醇、卫茅醇、水杨苷。每个反应支槽中分别添加0.2ml的液体生化培养基，于48℃、真空度133Pa进行干燥40min，生化培养基形成一层薄膜，贴在反应支槽的底部。
鉴定方法包括下列步骤：
(1)打开盒盖，取1mL的待测样液加注到加样槽，将盒体放置于水平平面上，将盒体的一端轻轻抬高，液体从一端流向另外一端，样液被分隔板均匀分隔到每个加样支槽中，利用水溶液的流动性完成样液的自动分配；一共有10个组件，每个组件所在的加样支槽平均分配到100μl的待测样液；
(2)盖上盒盖，将盒体放平，将加样槽侧缓缓抬高，大概50°，加样槽的样液会沿着引流用斜面流入反应槽(每个加样支槽的待测样液流入对应的反应支槽)，进行反应；
(3)读取结果：试剂盒下放置比色卡，由于反应槽向外倾斜，观察反应孔的颜色不会遮挡视线。反应结果见下表3。
表3生化反应阴阳性结果
当10个生化反应结果均符合阳性结果时，判定待测样液中含有沙门菌属微生物。如果不符合，则判定为不含沙门菌属微生物。
实施例3李斯特氏菌属的生化鉴定试剂盒以及鉴定方法
生化鉴定试剂盒结构如上所述。
鉴定李斯特氏菌属的糖发酵反应生化培养基，按照GB 4789.30-2016-食品安全国家标准食品-微生物学检验-单核细胞增生李斯特氏菌检验中相应的生化培养基配方进行配置。
鉴定李斯特氏菌属微生物的生化鉴定试剂盒，至少包括8个组件，每个组件中所在的反应支槽中固定的生化培养基均不同，分别为溶血素(溶血反应)、葡萄糖、麦芽糖、MR-VP、甘露醇、鼠李糖、木糖、七叶苷。每个反应支槽中分别添加0.2ml的液体生化培养基，于50℃、真空度133Pa进行干燥60min，生化培养基形成一层薄膜，贴在反应槽的底部。
鉴定方法包括下列步骤：
(1)打开盒盖，取0.8mL的待测样液加注到加样槽，将盒体放在水平平面上，将盒体的一端轻轻抬高，液体从一端流向另外一端，样液被分隔板均匀分隔到每个加样支槽中，利用水溶液的流动性完成样液的自动分配；一共有8个组件，每个组件所在的加样支槽平均分配到100μl的待测样液；
(2)将盒体放平，将加样槽侧缓缓抬高，大概50°，加样槽的样液会沿着引流用斜面流入反应槽；
(3)读取结果：试剂盒下放置比色卡，由于板条向外倾斜，观察反应孔的颜色不会遮挡视线。反应结果见下表4。
表4生化反应阴阳性结果
溶血反应 葡萄糖 麦芽糖 MR-VP 甘露醇 鼠李糖 木糖 七叶苷
阳性 褐色 黄色 黄色 红色 黄色 黄色 黄色 棕黑色
阴性 红色沉淀 紫色 紫色 不变色 紫色 紫色 紫色 红褐色
其中李斯特氏菌属还具体包括单核细胞增生李斯特氏菌、格氏利斯特氏菌、斯氏利斯特氏菌、威氏李斯特氏菌、伊氏李斯特氏菌、英诺克李斯特氏菌。具体分析见表5。
表5李斯特氏菌属的生化特征
菌种 溶血反应 葡萄糖 麦芽糖 MR-VP 甘露醇 鼠李糖 木糖 七叶苷
单核细胞增生李斯特氏菌 + + + + - + - +
格氏利斯特氏菌 - + + + + - - +
斯氏利斯特氏菌 + + + + - - + +
威氏李斯特氏菌 - + + + - V + +
伊氏李斯特氏菌 + + + + - - + +
英诺克李斯特氏菌 - + + + - v - +
根据上述指标进行结果判定，得到最终结果。
实施例4克罗诺杆菌属的生化鉴定试剂盒以及鉴定方法
生化鉴定试剂盒结构如上所述。
鉴定克罗诺杆菌属的糖发酵反应生化培养基，按照GB 4789.40-2016-食品安全国家标准食品-微生物学检验-克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检验检验中相应的生化培养基配方进行配置。
鉴定克罗诺杆菌属微生物的生化鉴定试剂盒，至少包括9个组件，每个组件所在的反应支槽中固定的生化培养基均不同，分别为苦杏仁甙、L-鼠李糖、D-蔗糖、D-蜜二糖、柠檬酸水解、D-山梨醇、L-赖氨酸脱羧酶、L-鸟氨酸脱羧酶、L-精氨酸双水解酶。每个反应支槽中分别添加0.2ml的液体生化培养基，于48℃、真空度133Pa进行干燥60min，生化培养基形成一层薄膜，贴在反应槽的底部。
鉴定方法包括下列步骤：
(1)打开盒盖，取0.9mL的待测样液加注到加样槽，将盒体放在水平平面上，将盒体的一端轻轻抬高，液体从一端流向另外一端，样液被分隔板均匀分隔到每个加样支槽中，利用水溶液的流动性完成样液的自动分配；平均每个组件所在的加样支槽分配到100μl的待测样液；
(2)盖上盒盖，将盒体放平，将加样槽侧缓缓抬高，大概50°，加样槽的样液会沿着引流用斜面流入反应槽；
(3)读取结果：试剂盒下放置比色卡，由于反应槽向外倾斜，观察反应孔的颜色不会遮挡视线。反应结果见下表6和表7。
表6生化反应阴阳性结果
表7克罗诺杆菌属的生化特征
苦杏仁甙 +
L-鼠李糖 +
D-蔗糖 +
D-蜜二糖 +
D-山梨醇 -
L-赖氨酸脱羧酶 —
L-鸟氨酸脱羧酶 +
L-精氨酸双水解酶 +
柠檬酸水解 +
当9个生化反应结果均符合阳性结果时，判定待测样液中含有克罗诺杆菌属微生物。如果不符合，则判定为非克罗诺杆菌属微生物。
实施例5大肠杆菌的生化鉴定试剂盒以及鉴定方法
生化鉴定试剂盒结构如上所述。
鉴定大肠杆菌的糖发酵反应生化培养基，按照GB 4789.3-2016-食品安全国家标准食品-微生物学检验-大肠杆菌的快速检测中相应的生化培养基配方进行配置。
鉴定大肠杆菌的生化鉴定试剂盒，至少包括4个组件，每个组件所在的反应支槽中固定的生化培养基均不同，分别为葡萄糖磷酸盐胨水-VP、葡萄糖磷酸盐胨水-甲基红试验、蛋白胨水--吲哚实验、西蒙氏柠檬酸盐。每个反应支槽中分别添加0.2ml的液体生化培养基，于48℃、真空度1133Pa进行干燥60min，生化培养基形成一层薄膜，贴在反应槽的底部。
鉴定方法包括下列步骤：
(1)打开盒盖，取0.4mL的待测样液加注到加样槽，将盒体放在水平平面上，将盒体的一端轻轻抬高，液体从一端流向另外一端，样液被分隔板均匀分隔到每个反应支槽中，利用水溶液的流动性完成样液的自动分配；每个组件所在的加样支槽平均分配到100μl的待测样液；
(2)盖上盒盖，将盒体放平，将加样槽侧缓缓抬高，大概50°，加样槽的样液会沿着引流用斜面流入反应槽；
(3)读取结果：试剂盒下放置比色卡，由于反应槽向外倾斜，观察反应孔的颜色不会遮挡视线。反应结果见下表8和表9。
表8生化反应阴阳性结果
表9大肠杆菌的生化特征
蛋白胨水 +
葡萄糖磷酸盐胨水-甲基红试验 +
葡萄糖磷酸盐胨水-VP -
西蒙氏柠檬酸盐 -
当4个生化反应结果均符合阳性结果时，判定待测样液中含有大肠杆菌。如果不符合，则判定为非大肠杆菌。
对比例1
其他同实施例1，不同之处在于：
反应槽设计为垂直的，不向外倾斜，此外，生化反应鉴定条利用琼脂来辅助固定在反应管底部。
一般微生物鉴定需要的反应通常可到达12-24之多，也就是说，需要记录12-24个生化反应的结果，这些生化反应的结果都是通过颜色反应进行判读的。此外，因为琼脂本身带有一定不透明的白色，因为所得生化反应鉴定条为不透明的，观察时需要通过反应管的开口观察并记录结果，因此，附有比色卡的记录纸只能放在桌子上进行观察并记录，很容易将A孔的结果写到B的生化结果处，特别是大量检测时，更容易出错，造成结果的错误。
对比例2
其他同实施例1，不同之处在于：
反应的基质(生化培养基)选用微生物酶系统反应，由于酶的活性很容易受到温度变化的影响，干燥的参数为超低温-55度干燥，时间为24-48h。其保存条件较为严格，在2-4℃保藏。
国内的一些保存和运输条件不够严格，在运输过程中如果出现温度高于4℃的意外情况时，对酶的活性有较大影响，或者导致酶底物分子失效。此外，酶系反应生化培养基和国内鉴定标准不符合，价格昂贵，不适合国内中小企业使用。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种微生物的生化鉴定试剂盒，其特征在于：包括盒体，所述盒体内部设置有反应槽及与反应槽连接的加样槽；反应槽为倾斜设置，反应槽底部向远离加样槽的方向倾斜，倾斜角度为50°～70°；反应槽和加样槽通过分隔板分隔成若干个反应支槽和加样支槽，每个反应支槽中通过真空干燥的方法固定有生化培养基，加样槽设有一用于引流样液至反应槽的斜面，所述反应支槽和相对应的加样支槽通过斜面组成一个反应组件。
2.根据权利要求1所述的生化鉴定试剂盒，其特征在于：所述分隔板的高度不超过3mm，每个反应支槽容纳的待测样液为100μl～105μl。
3.根据权利要求1所述的生化鉴定试剂盒，其特征在于：盒体上铰接有可打开的盒盖。
4.根据权利要求1所述的生化鉴定试剂盒，其特征在于：所述生化培养基是基于糖发酵反应原理的生化培养基。
5.根据权利要求1所述的生化鉴定试剂盒，其特征在于：每个反应支槽中添加0.1～0.3ml的基于糖发酵反应原理的液体生化培养基。
6.根据权利要求1或5所述的生化鉴定试剂盒，其特征在于，所述真空干燥的方法包括下列步骤：在每个反应支槽中添加基于糖发酵反应原理的液体生化培养基，于38～48℃、真空度100～133Pa进行干燥25～60min，将生化培养基固定于反应支槽底部。
7.根据权利要求1或5所述的生化鉴定试剂盒，其特征在于，所述真空干燥的方法包括下列步骤：在每个反应支槽中添加基于糖发酵反应原理的液体生化培养基，40～48℃、真空度100～133Pa进行干燥30～40min，将生化培养基固定于反应支槽底部。
8.一种微生物的生化鉴定方法，其特征在于，利用权利要求1～7任一项所述的生化鉴定试剂盒来进行微生物的生化鉴定。
9.根据权利要求8所述的生化鉴定方法，其特征在于，包括下列步骤：
1)打开盒盖，取适量的待测样液一起加注到加样槽；将盒体的一端抬高，使得待测样液从一端流向另外一端，被分隔板均匀分隔到每个加样支槽中；
2)盖上盒盖，将盒体的加样槽侧缓缓抬高，使得各个加样支槽中的样液沿着引流用斜面流入对应的各个反应支槽中，进行反应；
3)在反应板条下放置比色卡，通过对比读取结果。
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