CN107080766A - 含有三叶青总黄酮的抗肝癌药物组合物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及三叶青总黄酮的用途，公开了含有三叶青总黄酮的抗肝癌药物组合物；还公开了含有三叶青总黄酮的抗肝癌药物组合物的制备方法，首先先制备三叶青总黄酮，制备步骤包括称取三叶青粉末，置于提取灌中，添加乙醇溶液，水浴沸腾提取，趁热抽滤得滤渣，滤渣按上述操作重复提取一次，合并两次提取的提取液，用乙醇溶液定容；回收乙醇并浓缩，浓缩液采用大孔树脂分离，依次用水及乙醇洗脱，收集相应的洗脱液，回收乙醇，浓缩成稠膏，真空干燥，粉碎，即得三叶青总黄酮提取物；再由有效量的三叶青总黄酮，加上药学上可接受的辅料制备而成的药物口服制剂或注射制剂。本发明药物具有安全性高、毒副作用小的特点，可以显著预防和治疗肝癌。

Description

含有三叶青总黄酮的抗肝癌药物组合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及三叶青总黄酮的用途，尤其涉及了含有三叶青总黄酮的抗肝癌药物组合物，还涉及了含有三叶青总黄酮的抗肝癌药物组合物的制备方法。
背景技术
肝癌(Hetatocellular carcinoma，HCC)是一种恶性程度高、浸润和转移性强，先天性耐药的常见恶性肿瘤。肝癌流行病学研究表明，在全世界每年新发现的恶性肿瘤患者中肝癌约有100万例左右，年致死数超过60万。随着社会经济的发展和人类寿命的延长，生活方式和膳食结构不断改变，加之人口老龄化趋势影响，我国HCC的发病率明显上升，HCC不仅使患者健康受到损害，生活质量下降，而且给家庭、社会和政府造成了极大的负担，严重影响社会和经济发展，已经成为一个严重的社会和医疗卫生问题。
目前，针对HCC还没有特异性的治疗措施。手术切除被认为是治疗早期原发性肝癌最有效的方法，但临床发现的肝癌大多为中晚期，且多合并有肝硬化，因此手术切除率低，能手术根治的仅占15％。而且手术治疗的远期疗效不甚满意，术后复发转移也是影响其疗效的重要原因之一。近年来随着分子生物学和免疫学理论及技术的不断发展和对肿瘤发病机制的不断认识，免疫基因治疗被认为是很有希望的预防和治疗原发性肝癌的候选方案之一，但临床疗效并不象人们期待的那样。大量研究证明介入治疗可以延长肝癌病人的生存时间，并可使部分病人重新获得手术切除的机会。因此经导管肝动脉化疗、经导管化疗栓塞以及超声引导下瘤内注射成为中晚期及手术后复发的肝癌患者的首选。但是，介入治疗中应用的传统化疗药物毒副作用较大，而且会进一步损伤肝功能，严重时甚至引起肝功能衰竭，在临床上极大地限制了它的应用，而且西医治疗过程中使用的化学合成抗肿瘤的药物普遍存在价格昂贵、毒副作用大的缺点。因此，积极开发有特效的、毒副作用小的HCC治疗药物成为当今我国乃至世界面临的紧迫任务之一。
发明内容
本发明针对现有技术中价格昂贵、毒副作用大的缺点，提供了一种特效的、毒副作用小的含有三叶青总黄酮的抗肝癌药物组合物，还提供了含有三叶青总黄酮的抗肝癌药物组合物的制备方法。
为了解决上述技术问题，本发明通过下述技术方案得以解决：
含有三叶青总黄酮的抗肝癌药物组合物，其为口服制剂，包括三叶青总黄酮、稀释剂、黏合剂、润滑剂及崩解剂。
作为优选，稀释剂为淀粉或甘露醇或乳糖；黏合剂为糖浆或微晶纤维素或羟丙甲纤维素；崩解剂为羧甲淀粉钠或交联羧甲纤维素钠；润滑剂为硬脂酸镁或滑石粉或十二烷基硫酸钠。
含有三叶青总黄酮的抗肝癌药物组合物，其为注射制剂，包括三叶青总黄酮、增溶剂、抗氧剂、止痛剂、渗透压调节剂、灭菌蒸馏水、pH调节剂及注射用水。
作为优选，增溶剂为聚山梨酯类；渗透压调节剂为氯化钠或硼酸盐或硼酸；抗氧剂为亚硫酸氢钠或硫代硫酸钠或枸橼酸钠；pH调节剂为磷酸盐缓冲液或硼酸盐缓冲液或碳酸氢钠；止痛剂为盐酸普鲁卡因或三氯叔丁醇。
含有三叶青总黄酮的抗肝癌药物组合物的制备方法，将三叶青总黄酮、稀释剂、黏合剂、崩解剂混合均匀，干法制粒、整粒，加入润滑剂，混合均匀，压片即得；
三叶青总黄酮的制备工艺：称取三叶青粉末，置于提取灌中，添加浓度为 50～60％的乙醇溶液，液固比为5～8:l，水浴沸腾提取，每次1～2h，趁热抽滤得滤渣，滤渣按上述操作重复提取1～2次；合并两次提取的提取液，用浓度为 50～60％的乙醇溶液定容；回收乙醇至无醇味并浓缩，浓缩液采用大孔树脂分离，依次用水及乙醇洗脱，收集相应的洗脱液，回收乙醇，浓缩成稠膏，真空干燥，粉碎，即得三叶青总黄酮提取物。
作为优选，稀释剂为淀粉或甘露醇或乳糖；黏合剂为糖浆或微晶纤维素或羟丙甲纤维素；崩解剂为羧甲淀粉钠或交联羧甲纤维素钠；润滑剂为硬脂酸镁或滑石粉或十二烷基硫酸钠。
含有三叶青总黄酮的抗肝癌药物组合物的制备方法，在无菌条件下，将三叶青总黄酮、增溶剂、抗氧剂、止痛剂混合，加入渗透压调节剂，加入灭菌蒸馏水后搅拌使其完全溶解，然后加入pH调节剂调节溶液的pH值，加入注射用水，搅拌均匀，并过滤至澄清，澄清滤液分装于无菌的安剖瓶中；
三叶青总黄酮的制备工艺：称取三叶青粉末，置于提取灌中，添加浓度为 50～60％的乙醇溶液，液固比为5～8:l，水浴沸腾提取，每次1～2h，趁热抽滤得滤渣，滤渣按上述操作重复提取1～2次；合并两次提取的提取液，用浓度为 50～60％的乙醇溶液定容；回收乙醇至无醇味并浓缩，浓缩液采用大孔树脂分离，依次用水及乙醇洗脱，收集相应的洗脱液，回收乙醇，浓缩成稠膏，真空干燥，粉碎，即得三叶青总黄酮提取物。
作为优选，增溶剂为聚山梨酯类；渗透压调节剂为氯化钠或硼酸盐或硼酸；抗氧剂为亚硫酸氢钠或硫代硫酸钠或枸橼酸钠；pH调节剂为磷酸盐缓冲液或硼酸盐缓冲液或碳酸氢钠；止痛剂为盐酸普鲁卡因或三氯叔丁醇。
作为优选，称取三叶青粉末，置于提取灌中，添加浓度为60％的乙醇溶液，液固比为6:l，水浴沸腾提取，每次1.5h，趁热抽滤得滤渣，滤渣按上述操作重复提取一次；合并两次提取的提取液，用浓度为60％的乙醇溶液定容；回收乙醇至无醇味并浓缩，浓缩液采用大孔树脂分离，依次用水及乙醇洗脱，收集相应的洗脱液，回收乙醇，浓缩成稠膏，真空干燥，粉碎，即得三叶青总黄酮提取物。
作为优选，三叶青粉末为将新鲜三叶青块根洗净、去除杂质后在-20～-10℃下冷冻干燥后粉碎所得。
口服制剂包括胶囊剂、丸剂、片剂、颗粒剂、散剂等，注射剂包括肌肉注射剂、静脉注射剂、静脉输液、玻璃体腔内注射剂等。
本发明由于采用了以上技术方案，具有显著的技术效果：本发明的三叶青总黄酮的口服制剂、注射制剂均有一定的抗肝瘤活性，三叶青总黄酮的高、中、低剂量均具有良好的抗HepG-2裸鼠异种移植瘤活性。本发明为三叶青总黄酮开拓了一个新的应用领域，提供了一种可以预防和治疗肝癌的疗效显著、安全性高、毒副作用小的药物。
具体实施方式
下面实施例是对本发明进一步详细描述，但不是限制本发明的范围。
实施例1
三叶青总黄酮的制备
将新鲜三叶青块根洗净、去除杂质后在-20～-10℃下冷冻干燥后粉碎，三叶青选自浙江丽水野生三叶青；称取三叶青粉末5kg，置于提取灌中，添加浓度为60％的乙醇溶液，液固比为6:l，水浴沸腾提取，每次1.5h，趁热抽滤得滤渣，滤渣按上述操作重复提取一次。合并两次提取的提取液，用浓度为60％的乙醇溶液定容；回收乙醇至无醇味并浓缩，浓缩液采用大孔树脂分离，先用4倍柱体积的水洗脱，再用4倍柱体积的浓度为60％的乙醇溶液洗脱，收集相应的洗脱液，回收乙醇，浓缩成稠膏，真空干燥，粉碎，即得三叶青总黄酮提取物。
实施例2
含有60％三叶青总黄酮的抗肝癌药物组合物片剂的制备
按重量份数，将60份实施例1所得的三叶青总黄酮、28份甘露醇、5份羟丙甲纤维素及5份交联羧甲纤维素钠混合均匀，干法制粒、整粒，加入2份滑石粉混合均匀，压片即得。
实施例3
含有70％三叶青总黄酮的抗肝癌药物组合物片剂的制备
按重量份数，将70份实施例1所得的三叶青总黄酮、20份淀粉、3份微晶纤维素及3份羧甲淀粉钠混合均匀，干法制粒、整粒，加入4份十二烷基硫酸钠混合均匀，压片即得。
实施例4
含有60％三叶青总黄酮的抗肝癌药物组合物片剂的制备
按重量份数，将60份实施例1所得的三叶青总黄酮、25份乳糖、4份糖浆及6份交联羧甲纤维素钠混合均匀，干法制粒、整粒，加入5份硬脂酸镁混合均匀，压片即得。
实施例5
含有三叶青总黄酮的抗肝癌药物组合物注射液的制备
在无菌条件下，按重量份数，将10份三叶青总黄酮、5份聚山梨酯-80、2 份硫代硫酸钠、4份三氯叔丁醇混合，加入6份氯化钠，加入灭菌蒸馏水后搅拌使其完全溶解；
用1M碳酸氢钠调节溶液的pH值至6.0～6.5，加入注射用水至1000毫升，搅拌均匀，并过滤至澄清，澄清滤液分装于无菌的安剖瓶中。
实施例6
含有三叶青总黄酮的抗肝癌药物组合物注射液的制备
在无菌条件下，按重量份数，将12份三叶青总黄酮、3份聚山梨酯-80、1 份枸橼酸钠、3份盐酸普鲁卡因混合，加入5份四硼酸钠，加入灭菌蒸馏水后搅拌使其完全溶解；
用1M磷酸盐缓冲液调节溶液的pH值至6.0～6.5，加入注射用水至1000毫升，搅拌均匀，并过滤至澄清，澄清滤液分装于无菌的安剖瓶中。
实施例7
含有三叶青总黄酮的抗肝癌药物组合物注射液的制备
在无菌条件下，按重量份数，将13份三叶青总黄酮、4份聚山梨酯-80、3 份亚硫酸氢钠、2份盐酸普鲁卡因混合，加入4份硼酸，加入灭菌蒸馏水后搅拌使其完全溶解；
用1M硼酸盐缓冲液调节溶液的pH值至6.0～6.5，加入注射用水至1000毫升，搅拌均匀，并过滤至澄清，澄清滤液分装于无菌的安剖瓶中。
以下通过具体药效学试验证明本发明的有益成果。
试验1含有三叶青总黄酮的抗肝癌药物组合物口服制剂对大鼠肝癌病变的作用
1、试验材料
BALB/c裸鼠，由常州卡文斯生物科技发展有限公司提供，实验动物使用许可证：SYXK(苏)2011-0036；日龄：4-5w；体重：18-22g；性别：雌性；动物数：共30只。环磷酰胺：由江苏恒瑞医药股份有限公司生产，批号H32020857。
2、试验方法及内容
2.1动物分组及造模
肿瘤模型：人肝癌细胞系HepG2使用含有体积分数为10％的小牛血清的 RPMI-164培养液，肿瘤细胞株在37℃和5％CO2实验条件下常规培养，细胞呈单层贴壁生长，细胞平铺于培养瓶底面积超过瓶底80％时，把原有培养基吸掉；加适当的胰蛋白酶(0.25％)，消化1～2分钟；细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化；用移液枪吹打细胞，把细胞都悬浮起来，然后将细胞吸到15ml的离心管中，1000转离心5分钟；倒掉上清液，加1～2ml培养基，将细胞重新悬浮转移至培养瓶中继续培养；按5×106细胞加入冻存液lmL的密度冻存。复苏时，液氮罐中取出细胞，于37℃快速解冻，离心去除冻存液，加入培养液培养，细胞接种次日贴壁良好。接种后2～3日生长旺盛；收集培养的人肝癌细胞HepG-2悬液，浓度为1X107个/ml，以每只0.1ml接种于裸小鼠右侧腋窝皮下。
模型组(NS)：生理盐水灌胃，0.1ml/10g，1次/天；
环磷酰胺组(CTX)：灌胃给药，20mg/kg，0.1ml/10g，隔天一次；
三叶青总黄酮高剂量组(TF-H)：灌胃给药，15g/kg，0.1ml/10g，1次/天，药为实施例2所得的含有三叶青总黄酮片剂；
三叶青总黄酮中剂量组(TF-M)：灌胃给药，7.5g/kg，0.1ml/10g，1次/天，药为实施例4所得的含有三叶青总黄酮片剂；
三叶青总黄酮低剂量组(TF-L)：灌胃给药，3.75g/kg，0.1ml/10g，1次/天，药为实施例3所得的含有三叶青总黄酮片剂；
裸鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至75～100mm3时将动物随机分组，每组6只。同时，各组裸鼠开始给药，使用测量瘤径的方法，动态观察受试样品的抗肿瘤效应。给药前各组鼠称重(第一次)，并在给药1周、2 周、3周后分别称重，记为第二、三、四次，给药结束后，裸鼠处死，手术剥取瘤块称重。
2.2、观察指标
肿瘤体积(tumorvolume，TV)的计算公式为：
TV＝1/2×a×b2其中a、b分别表示长宽。
根据测量的结果计算出相对肿瘤体积(relative tumorvolume，RTV)，计算公式为：RTV＝Vt/V0；其中V0为分笼给药时(即d0)测量所得肿瘤体积，Vt为每一次测量时的肿瘤体积。
抗肿瘤活性的评价指标：相对肿瘤增殖率T/C(％)，计算公式如下：
TRTV：治疗组RTV；CRTV：模型组RTV
抗肿瘤活性的评价指标：肿瘤生长抑制率(％)，计算公式如下：
2.3、统计学分析
实验结果采用均值±标准差方式表示，组间分析用t检验进行统计学处理，应用SPSS(Staffstical Package forthe Social Science)17.0对结果进行统计分析。
3、实验结果及分析
3.1、三叶青总黄酮对人肝癌细胞HEPG-2裸鼠异种移植瘤裸鼠体重的影响
由表3-1可见，实验开始时，各组裸鼠体重大致相当，无显著差异。从给药 1周后(第二次)开始，模型组的小鼠体重逐渐增加；与模型组比较，CTX组和各剂量TF组的小鼠体重也随着时间的延长逐渐增加，但增长速度比较缓慢，远不及模型组；与CTX组比较，各TF小鼠体重在不同的时间点比CTX组轻，但差异不显著；同样，各剂量TF组之间的体重变化也无显著性差异。
表3-1三叶青总黄酮对人肝癌细胞HEPG-2裸鼠异种移植瘤裸鼠体重的影响(X±SD，n＝6，g)
与NS组比较，*p<0.05；与NS组比较，**p<0.01
3.2、三叶青总黄酮对人肝癌细胞HEPG-2裸鼠异种移植瘤生长体积变化的影响
由表3-2可见，实验开始时，各组裸鼠瘤体积大致相当，无显著差异。从给药1周后(第二次)开始，各组小鼠肿瘤体积逐渐增加，但与模型组比较，CTX 组和各剂量TF组的小鼠肿瘤体积的增长速度比较缓慢，瘤体积均小于模型组，均有显著差异(p<0.01)；与CTX组比较，TF中、低剂量(7.5g/kg，3.75g/kg)的小鼠瘤体积的增长速度比较快，各时间点的瘤体积和T/C都比CTX高，但TF高剂量(15g/kg)小鼠的瘤体积和T/C与CTX无差异，结果提示高剂量的TF和CTX 的抗肿瘤活性相当，但中、低浓度的TF的抗肿瘤活性不及CTX。
表3-2三叶青总黄酮对人肝癌细胞HEPG-2裸鼠异种移植
瘤生长体积变化的影响(X±SD，n＝6，cm3)
与NS组比较，*p<0.05；与NS组比较，**p<0.01
3.3、三叶青总黄酮对人肝癌细胞HEPG-2裸鼠异种移植瘤生长的抑制作用
给药结束后，称重、并将裸鼠处死，手术剥取瘤块称重，计算肿瘤生长抑制率。由表3-3可见，CTX的抑瘤率为56.79％。，三叶青总黄酮的高、中、低剂量(15g/kg、7.5g/kg，3.75g/kg)的抑瘤率分别为64.07％、53.64％、46.69％，三叶青总黄酮高剂量对肝癌小鼠肿瘤生长的抑制作用优于CTX，而三叶青总黄酮中、低剂量对肝癌小鼠肿瘤生长的抑制作用弱于CTX。结果和上述相对肿瘤增殖率的情况一致。
表3-3三叶青总黄酮对人肝癌细胞HEPG-2裸鼠异种移植瘤生长的抑制作用(X±SD，n＝6)
与NS组比较，*p<0.05；与NS组比较，**p<0.01
试验2含有三叶青总黄酮的抗肝癌药物组合物注射液对大鼠肝癌病变的作用
1、试验材料
BALB/c裸鼠，由常州卡文斯生物科技发展有限公司提供，实验动物使用许可证：SYXK(苏)2011-0036；日龄：4-5w；体重：18-22g；性别：雌性；动物数：共30只。环磷酰胺：由江苏恒瑞医药股份有限公司生产，批号H32020857。
2、试验方法及内容
2.1动物分组及造模
肿瘤模型：人肝癌细胞系HepG2使用含有体积分数为10％的小牛血清的 RPMI-164培养液，肿瘤细胞株在37℃和5％CO2实验条件下常规培养，细胞呈单层贴壁生长，细胞平铺于培养瓶底面积超过瓶底80％时，把原有培养基吸掉；加适当的胰蛋白酶(0.25％)，消化1～2分钟；细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化；用移液枪吹打细胞，把细胞都悬浮起来，然后将细胞吸到15ml的离心管中，1000转离心5分钟；倒掉上清液，加1～2ml培养基，将细胞重新悬浮转移至培养瓶中继续培养；按5×106细胞加入冻存液lmL的密度冻存。复苏时，液氮罐中取出细胞，于37℃快速解冻，离心去除冻存液，加入培养液培养，细胞接种次日贴壁良好。接种后2～3日生长旺盛；收集培养的人肝癌细胞HepG-2悬液，浓度为1X107个/ml，以每只0.1ml接种于裸小鼠右侧腋窝皮下。
模型组(NS)：腹腔注射，0.1ml/10g，1次/天；
环磷酰胺组(CTX)：腹腔注射，20mg/kg，0.1ml/10g，隔天一次；
三叶青总黄酮高剂量组(TF-H)：腹腔注射，10g/kg，0.1ml/10g，1次/天，药为实施例7所得的含有三叶青总黄酮的注射液；
三叶青总黄酮中剂量组(TF-M)：腹腔注射，5.0g/kg，0.1ml/10g，1次/天，药为实施例6所得的含有三叶青总黄酮的注射液；
三叶青总黄酮低剂量组(TF-L)：腹腔注射，2.5g/kg，0.1ml/10g，1次/天，药为实施例5所得的含有三叶青总黄酮的注射液；
裸鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至75～100mm3时将动物随机分组，每组6只。同时，各组裸鼠开始给药，使用测量瘤径的方法，动态观察受试样品的抗肿瘤效应。给药前各组鼠称重(第一次)，并在给药1周、2 周、3周后分别称重，记为第二、三、四次，给药结束后，裸鼠处死，手术剥取瘤块称重。
2.2、观察指标
肿瘤体积(tumorvolume，TV)的计算公式为：
TV＝1/2×a×b2其中a、b分别表示长宽。
根据测量的结果计算出相对肿瘤体积(relative tumorvolume，RTV)，计算公式为：RTV＝Vt/V0；其中V0为分笼给药时(即d0)测量所得肿瘤体积，Vt为每一次测量时的肿瘤体积。
抗肿瘤活性的评价指标：相对肿瘤增殖率T/C(％)，计算公式如下：
TRTV：治疗组RTV；CRTV：模型组RTV
抗肿瘤活性的评价指标：肿瘤生长抑制率(％)，计算公式如下：
2.3、统计学分析
实验结果采用均值±标准差方式表示，组间分析用t检验进行统计学处理，应用SPSS(Staffstical Package forthe Social Science)17.0对结果进行统计分析。
3、实验结果及分析
3.1、三叶青总黄酮对人肝癌细胞HEPG-2裸鼠异种移植瘤裸鼠体重的影响
由表3-1可见，实验开始时，各组裸鼠体重大致相当，无显著差异。从给药 1周后(第二次)开始，模型组的小鼠体重逐渐增加；与模型组比较，CTX组和各剂量TF组的小鼠体重也随着时间的延长逐渐增加，但增长速度比较缓慢，远不及模型组；与CTX组比较，各TF小鼠体重在不同的时间点比CTX组轻，但差异不显著；同样，各剂量TF组之间的体重变化也无显著性差异。
表3-1三叶青总黄酮对人肝癌细胞HEPG-2裸鼠异种移植瘤裸鼠体重的影响(X±SD，n＝6，g)
与NS组比较，*p<0.05；与NS组比较，**p<0.01
3.2、三叶青总黄酮对人肝癌细胞HEPG-2裸鼠异种移植瘤生长体积变化的影响
由表3-2可见，实验开始时，各组裸鼠瘤体积大致相当，无显著差异。从给药1周后(第二次)开始，各组小鼠肿瘤体积逐渐增加，但与模型组比较，CTX 组和各剂量TF组的小鼠肿瘤体积的增长速度比较缓慢，瘤体积均小于模型组，均有显著差异(p<0.01)；与CTX组比较，TF中、低剂量(5.0g/kg，2.5g/kg)的小鼠瘤体积的增长速度比较快，各时间点的瘤体积和T/C都比CTX高，但TF高剂量(10g/kg)小鼠的瘤体积和T/C与CTX无差异，结果提示高剂量的TF和CTX 的抗肿瘤活性相当，但中、低浓度的TF的抗肿瘤活性不及CTX。
表3-2三叶青总黄酮对人肝癌细胞HEPG-2裸鼠异种移植生长体积变化的影响(X±SD，n＝6，cm3)
与NS组比较，*p<0.05；与NS组比较，**p<0.01
3.3、三叶青总黄酮对人肝癌细胞HEPG-2裸鼠异种移植瘤生长的抑制作用
给药结束后，称重、并将裸鼠处死，手术剥取瘤块称重，计算肿瘤生长抑制率。由表3-3可见，CTX的抑瘤率为56.79％。，三叶青总黄酮的高、中、低剂量(10g/kg、5.0g/kg，2.5g/kg)的抑瘤率分别为64.07％、53.64％、46.69％，三叶青总黄酮高剂量对肝癌小鼠肿瘤生长的抑制作用优于CTX，而三叶青总黄酮中、低剂量对肝癌小鼠肿瘤生长的抑制作用弱于CTX。结果和上述相对肿瘤增殖率的情况一致。
表3-3三叶青总黄酮对人肝癌细胞HEPG-2裸鼠异种移植瘤生长的抑制作用(X±SD，n＝6)
与NS组比较，*p<0.05；与NS组比较，**p<0.01
体重变化是衡量小鼠生长状态的重要指标之一，在本实验开始时，各组小鼠的体重，基本没有差异，到给药过程中，模型对照组的体重增长最快，处死前模型组的CTX和各TF组的体重差异非常显著，但将处死前体重减去处死后剥取的肿瘤重量后，各组体重差异无显著意义，说明小鼠体重增长主要是源于肿瘤快速长大，肿瘤的生长速度快于小鼠正常组织。
通过动物抑制瘤实验，计算三叶青总黄酮的肿瘤生长抑制率，得出三叶青总黄酮口服剂的高、中、低剂量(15g/kg、7.5g/kg，3.75g/kg)的抑瘤率分别为 64.07％、53.64％、46.69％；三叶青总黄酮注射液的高、中、低剂量(10g/kg、5.0g/kg， 2.5g/kg)的抑瘤率分别为64.03％、53.60％、46.60％；
根据《国家新药(西药)临床前研究指导原则汇编》规定，当抑制率>30％，经统计学处理有显著性差异，则评定该受试药物有一定的抗肝瘤活性，可见，三叶青总黄酮的高、中、低剂量均具有良好的抗HepG-2裸鼠异种移植瘤活性。总之，以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所作的均等变化与修饰，皆应属本发明专利的涵盖范围。

Claims (10)

1.含有三叶青总黄酮的抗肝癌药物组合物，其特征在于，其为口服制剂，包括三叶青总黄酮、稀释剂、黏合剂、润滑剂及崩解剂。
2.根据权利要求1所述的含有三叶青总黄酮的抗肝癌药物组合物，其特征在于，稀释剂为淀粉或甘露醇或乳糖；黏合剂为糖浆或微晶纤维素或羟丙甲纤维素；崩解剂为羧甲淀粉钠或交联羧甲纤维素钠；润滑剂为硬脂酸镁或滑石粉或十二烷基硫酸钠。
3.含有三叶青总黄酮的抗肝癌药物组合物，其特征在于，其为注射制剂，包括三叶青总黄酮、增溶剂、抗氧剂、止痛剂、渗透压调节剂、灭菌蒸馏水、pH调节剂及注射用水。
4.根据权利要求3所述的含有三叶青总黄酮的抗肝癌药物组合物，其特征在于，增溶剂为聚山梨酯类；渗透压调节剂为氯化钠或硼酸盐或硼酸；抗氧剂为亚硫酸氢钠或硫代硫酸钠或枸橼酸钠；pH调节剂为磷酸盐缓冲液或硼酸盐缓冲液或碳酸氢钠；止痛剂为盐酸普鲁卡因或三氯叔丁醇。
5.一种三叶青总黄酮的制备工艺，其特征在于：称取三叶青粉末，置于提取灌中，添加浓度为50～60％的乙醇溶液，液固比为5～8:l，水浴沸腾提取，每次1～2h，趁热抽滤得滤渣，滤渣按上述操作重复提取1～2次；合并两次提取的提取液，用浓度为50～60％的乙醇溶液定容；回收乙醇至无醇味并浓缩，浓缩液采用大孔树脂分离，依次用水及乙醇洗脱，收集相应的洗脱液，回收乙醇，浓缩成稠膏，真空干燥，粉碎，即得三叶青总黄酮提取物。
6.根据权利要求5所述的三叶青总黄酮的制备工艺，其特征在于：称取三叶青粉末，置于提取灌中，添加浓度为60％的乙醇溶液，液固比为6:l，水浴沸腾提取，每次1.5h，趁热抽滤得滤渣，滤渣按上述操作重复提取一次；合并两次提取的提取液，用浓度为60％的乙醇溶液定容；回收乙醇至无醇味并浓缩，浓缩液采用大孔树脂分离，依次用水及乙醇洗脱，收集相应的洗脱液，回收乙醇，浓缩成稠膏，真空干燥，粉碎，即得三叶青总黄酮提取物。
7.根据权利要求1所述的含有三叶青总黄酮的抗肝癌药物组合物的制备方法，其特征在于，将三叶青总黄酮、稀释剂、黏合剂、崩解剂混合均匀，干法制粒、整粒，加入润滑剂，混合均匀，压片即得；三叶青总黄酮的制备工艺为权利要求5所述的制备工艺。
8.根据权利要求7所述的含有三叶青总黄酮的抗肝癌药物组合物的制备方法，其特征在于，稀释剂为淀粉或甘露醇或乳糖；黏合剂为糖浆或微晶纤维素或羟丙甲纤维素；崩解剂为羧甲淀粉钠或交联羧甲纤维素钠；润滑剂为硬脂酸镁或滑石粉或十二烷基硫酸钠。
9.根据权利要求3所述的含有三叶青总黄酮的抗肝癌药物组合物的制备方法，其特征在于，在无菌条件下，将三叶青总黄酮、增溶剂、抗氧剂、止痛剂混合，加入渗透压调节剂，加入灭菌蒸馏水后搅拌使其完全溶解，然后加入pH调节剂调节溶液的pH值，加入注射用水，搅拌均匀，并过滤至澄清，澄清滤液分装于无菌的安剖瓶中；三叶青总黄酮的制备工艺为权利要求5所述的制备工艺。
10.根据权利要求9所述的含有三叶青总黄酮的抗肝癌药物组合物的制备方法，其特征在于，增溶剂为聚山梨酯类；渗透压调节剂为氯化钠或硼酸盐或硼酸；抗氧剂为亚硫酸氢钠或硫代硫酸钠或枸橼酸钠；pH调节剂为磷酸盐缓冲液或硼酸盐缓冲液或碳酸氢钠；止痛剂为盐酸普鲁卡因或三氯叔丁醇。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108837041A (zh) * 2018-08-02 2018-11-20 福建中医药大学 一种三叶青片剂及其制备方法
CN109170592A (zh) * 2018-10-22 2019-01-11 中南民族大学 一种三叶青多糖保肝膨化食品及其制备方法
CN111110763A (zh) * 2020-02-24 2020-05-08 浙江省农业科学院 一种抗肿瘤组合物及其制备方法和应用
CN115737728A (zh) * 2022-11-17 2023-03-07 浙江理工大学 一种三叶青提取物的应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1723953A (zh) * 2005-07-08 2006-01-25 胡馨尹 用于预防和治疗肿瘤的中药三叶青
CN104138403A (zh) * 2014-08-25 2014-11-12 济南康众医药科技开发有限公司 一种三叶青的干燥方法
CN105816430A (zh) * 2016-03-16 2016-08-03 浙江中医药大学 一种具有抗肿瘤作用三叶青多糖颗粒的制备方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1723953A (zh) * 2005-07-08 2006-01-25 胡馨尹 用于预防和治疗肿瘤的中药三叶青
CN104138403A (zh) * 2014-08-25 2014-11-12 济南康众医药科技开发有限公司 一种三叶青的干燥方法
CN105816430A (zh) * 2016-03-16 2016-08-03 浙江中医药大学 一种具有抗肿瘤作用三叶青多糖颗粒的制备方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
刘江波: "大孔树脂分离纯化三叶青总黄酮的工艺研究", 《中国药学杂志》 *
孟胜男: "《药剂学》", 31 January 2016, 中国医药科技出版社 *
张立明: "三叶青黄酮诱导SMMC-7721肝癌细胞凋亡的实验研究", 《时珍国医国药》 *
湖南省机关事业单位工人技术级岗位考核办公室: "《湖南省机关事业单位工人技术等级岗位考核培训教材《中药培管工》、《中药加工员》、《中药药剂员》、《西药制检员》、《西药药剂员》》", 31 August 1997 *
雷娇: "挤出滚圆法制备三叶青总黄酮微丸及其性质研究", 《时珍国医国药》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108837041A (zh) * 2018-08-02 2018-11-20 福建中医药大学 一种三叶青片剂及其制备方法
CN108837041B (zh) * 2018-08-02 2023-12-29 福建中医药大学 一种三叶青片剂及其制备方法
CN109170592A (zh) * 2018-10-22 2019-01-11 中南民族大学 一种三叶青多糖保肝膨化食品及其制备方法
CN111110763A (zh) * 2020-02-24 2020-05-08 浙江省农业科学院 一种抗肿瘤组合物及其制备方法和应用
CN115737728A (zh) * 2022-11-17 2023-03-07 浙江理工大学 一种三叶青提取物的应用

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