CN107075457B - 培养具有腈水合酶活性的微生物的方法 - Google Patents
培养具有腈水合酶活性的微生物的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107075457B CN107075457B CN201580050795.XA CN201580050795A CN107075457B CN 107075457 B CN107075457 B CN 107075457B CN 201580050795 A CN201580050795 A CN 201580050795A CN 107075457 B CN107075457 B CN 107075457B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- nitrile hydratase
- acid
- microorganism
- organic acid
- composition
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 108010024026 Nitrile hydratase Proteins 0.000 title claims abstract description 91
- 238000012258 culturing Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 21
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title abstract description 71
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 62
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 55
- 241000187693 Rhodococcus rhodochrous Species 0.000 claims description 26
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 13
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 13
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 13
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 9
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 9
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 claims description 8
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 6
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 claims description 6
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 claims description 6
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 claims description 6
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 claims description 6
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 claims description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 4
- 235000015165 citric acid Nutrition 0.000 claims description 4
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical group C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 3
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 claims description 3
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 claims description 3
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 claims 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 abstract description 34
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 11
- 238000012136 culture method Methods 0.000 abstract description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 abstract description 2
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 32
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 21
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 21
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 21
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 18
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 18
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 15
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 15
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 14
- NLHHRLWOUZZQLW-UHFFFAOYSA-N Acrylonitrile Chemical compound C=CC#N NLHHRLWOUZZQLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 13
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 13
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical group [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 9
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 9
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 9
- 241000970829 Mesorhizobium Species 0.000 description 8
- 241001467578 Microbacterium Species 0.000 description 8
- 241000316848 Rhodococcus <scale insect> Species 0.000 description 7
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 7
- 241000589155 Agrobacterium tumefaciens Species 0.000 description 6
- 241000186146 Brevibacterium Species 0.000 description 6
- 241001337994 Cryptococcus <scale insect> Species 0.000 description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000223252 Rhodotorula Species 0.000 description 6
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 6
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 6
- -1 sulphate salts Chemical class 0.000 description 6
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 5
- 241000187654 Nocardia Species 0.000 description 5
- 241000205156 Pyrococcus furiosus Species 0.000 description 5
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 description 5
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 5
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 5
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 5
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 5
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 5
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 5
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 5
- 241001103808 Albifimbria verrucaria Species 0.000 description 4
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 4
- 241000222178 Candida tropicalis Species 0.000 description 4
- 241000186226 Corynebacterium glutamicum Species 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 241000588749 Klebsiella oxytoca Species 0.000 description 4
- 241000588747 Klebsiella pneumoniae Species 0.000 description 4
- 241001532588 Mesorhizobium ciceri Species 0.000 description 4
- 241000191938 Micrococcus luteus Species 0.000 description 4
- 241000588621 Moraxella Species 0.000 description 4
- 241000588912 Pantoea agglomerans Species 0.000 description 4
- 241001646398 Pseudomonas chlororaphis Species 0.000 description 4
- 241000589776 Pseudomonas putida Species 0.000 description 4
- 241000589180 Rhizobium Species 0.000 description 4
- 241000187561 Rhodococcus erythropolis Species 0.000 description 4
- 241001478124 Rhodococcus pyridinivorans Species 0.000 description 4
- 241000187563 Rhodococcus ruber Species 0.000 description 4
- 241000190950 Rhodopseudomonas palustris Species 0.000 description 4
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000223678 Aureobasidium pullulans Species 0.000 description 3
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000187653 Nocardia globerula Species 0.000 description 3
- 241000187602 Pseudonocardia thermophila Species 0.000 description 3
- 241000205160 Pyrococcus Species 0.000 description 3
- 241000158504 Rhodococcus hoagii Species 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000011942 biocatalyst Substances 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 3
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 3
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 3
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 description 3
- 235000011044 succinic acid Nutrition 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001600124 Acidovorax avenae Species 0.000 description 2
- 241000589519 Comamonas Species 0.000 description 2
- 241000589518 Comamonas testosteroni Species 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 2
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 2
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 2
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 2
- 241001014264 Klebsiella variicola Species 0.000 description 2
- 241000235048 Meyerozyma guilliermondii Species 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 241000520272 Pantoea Species 0.000 description 2
- 241001148023 Pyrococcus abyssi Species 0.000 description 2
- 241000223253 Rhodotorula glutinis Species 0.000 description 2
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 2
- 241000607720 Serratia Species 0.000 description 2
- 241000607717 Serratia liquefaciens Species 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 229960004106 citric acid Drugs 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- 229910019931 (NH4)2Fe(SO4)2 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000726118 Acidovorax facilis Species 0.000 description 1
- 241000589156 Agrobacterium rhizogenes Species 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- YASYEJJMZJALEJ-UHFFFAOYSA-N Citric acid monohydrate Chemical compound O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O YASYEJJMZJALEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000235649 Kluyveromyces Species 0.000 description 1
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005196 Mitochondrial DNA Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 229920001218 Pullulan Polymers 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 241001524101 Rhodococcus opacus Species 0.000 description 1
- 241000607764 Shigella dysenteriae Species 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005864 Sulphur Substances 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- PHKGGXPMPXXISP-DFWYDOINSA-N azanium;(4s)-4-amino-5-hydroxy-5-oxopentanoate Chemical compound [NH4+].[O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CCC([O-])=O PHKGGXPMPXXISP-DFWYDOINSA-N 0.000 description 1
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 229960002303 citric acid monohydrate Drugs 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000366 copper(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 238000011143 downstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000008394 flocculating agent Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 1
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N heavy water Substances [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L magnesium sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[O-]S([O-])(=O)=O WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000357 manganese(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 235000013917 monoammonium glutamate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- SZUDEHNEMMJTCQ-UHFFFAOYSA-N prop-2-enenitrile;hydrate Chemical compound O.C=CC#N SZUDEHNEMMJTCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 235000019423 pullulan Nutrition 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011686 zinc sulphate Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/38—Chemical stimulation of growth or activity by addition of chemical compounds which are not essential growth factors; Stimulation of growth by removal of a chemical compound
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/88—Lyases (4.)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y402/00—Carbon-oxygen lyases (4.2)
- C12Y402/01—Hydro-lyases (4.2.1)
- C12Y402/01084—Nitrile hydratase (4.2.1.84)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及用于生产腈水合酶的微生物的培养方法、用于培养生产腈水合酶的微生物的组合物、以及含有糖和有机酸的组合物用于培养生产腈水合酶的微生物的用途。在本发明中提供和使用的组合物特别适用于诱导相应微生物的生长和腈水合酶生产。
Description
技术领域
本发明涉及培养生产腈水合酶的微生物的方法、培养生产腈水合酶的微生物的组合物、以及含有糖类和有机酸的组合物用于培养生产腈水合酶的微生物的用途。在本发明的上下文中提供的并用于本发明的组合物特别适用于诱导相应微生物的生长和腈水合酶的生产。
背景技术
聚丙烯酰胺广泛用作絮凝剂、用作造纸工业中的增稠剂、用作三次采油中的添加剂、以及许多其它领域。聚丙烯酰胺的原料通常是其单体丙烯酰胺。原则上，存在两种不同的工业规模生产丙烯酰胺的方法：化学合成和生物合成，其中由于更温和的反应条件和固有的工艺安全性，生物合成方法呈日益上升趋势。由于更温和的反应条件、不存在铜催化剂和腈的定量转化，在生物合成中可以避免昂贵的下游加工步骤例如蒸馏或离子交换，因此导致更廉价的设备，显著降低的设备蓝图。
两种合成方法都使用丙烯腈作为起始物质。虽然化学合成方法使用铜催化剂(例如US4048226，US3597481)，但是生物合成方法使用生物催化剂水合丙烯腈以获得丙烯酰胺。一般地，这样的生物催化剂是微生物，其能够生产酶的腈水合酶(2014年9月30日的IUBMB命名法：EC 4.2.1.84；CAS-No.2391-37-5；也称为，例如NHase)。生产腈水合酶的微生物广泛地分布在环境中，并且包括，例如，作为代表的玫瑰色红球菌(Rhodococcusrhodochrous)、食吡啶红球菌(Rhodococcus pyridinovorans)、红城红球菌(Rhodococcuserythropolis)、马红球菌(Rhodococcus equi)、赤红球菌(Rhodococcus ruber)、浑浊红球菌(Rhodococcus opacus)、黑曲霉(Aspergillus niger)、燕麦食酸菌(Acidovoraxavenae)、速生食酸菌(Acidovorax facilis)、根癌土壤杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)、放射形土壤杆菌(Agrobacterium radiobacter)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、苍白芽孢杆菌(Bacillus pallidus)、史密斯芽孢杆菌(Bacillus smithii)、芽孢杆菌BR449(Bacillus sp BR449)、Bradyrhizobium oligotrophicum、Bradyrhizobiumdiazoefficiens、大豆慢生根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)、新洋葱伯克霍尔德氏菌(Burkholderia cenocepacia)、唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(Burkholderia gladioli)、产酸克雷伯菌(Klebsiella oxytoca)、肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumonia)、栖异地克雷伯菌(Klebsiella variicola)、鹰嘴豆中间根瘤菌(Mesorhizobium ciceri)、机会中间根瘤菌(Mesorhizobium opportunistum)、中间根瘤菌F28(Mesorhizobium sp F28)、莫拉菌属(Moraxella)、Pantoea endophytica、成团泛菌(Pantoea agglomerans)、绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis)、恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)、根瘤菌属(Rhizobium)、沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)、液化沙雷氏菌(Serratialiquefaciens)、粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)、拟无枝酸菌属(Amycolatopsis)、节杆菌属(Arthrobacter)、短杆菌属物种CH1(Brevibacterium sp CH1)、短杆菌属物种CH2(Brevibacterium sp CH2)、短杆菌属物种R312(Brevibacterium sp R312)、蛾短杆菌(Brevibacterium imperiale)、Corynebacterium nitrilophilus、假白喉棒杆菌(Corynebacterium pseudodiphteriticum)、谷氨酸棒状杆菌(Corynebacteriumglutamicum)、Corynebacterium hoffmanii、蛾微杆菌(Microbacterium imperiale)、耻垢微杆菌(Microbacterium smegmatis)、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)、小球诺卡氏菌(Nocardia globerula)、玫瑰色诺卡氏菌(Nocardia rhodochrous)、嗜热假诺卡氏菌(Pseudonocardia thermophila)、木霉属(Trichoderma)、疣孢漆斑菌(Myrotheciumverrucaria)、出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)、Candida famata、季也蒙假丝酵母(Candida guilliermondii)、热带假丝酵母(Candida tropicalis)、黄隐球酵母(Cryptococcus flavus)、隐球酵母UFMG-Y28(Cryptococcus sp UFMG-Y28)、汉逊德巴利酵母(Debaryomyces hanseii)、白地霉(Geotrichum candidum)、地霉属物种JR1(Geotrichumsp JR1)、有孢汉逊酵母属(Hanseniaspora)、耐热克鲁维酵母(Kluyveromycesthermotolerans)、克鲁弗毕赤酵母(Pichia kluyveri)、红酵母(Rhodotorula glutinis)、睾丸酮丛毛单胞菌(Comomonas testosteroni)、Pyrococcus abyssi、激烈热火球古菌(Pyrococcus furiosus)和美未氏热火球古菌(Pyrococcus horikoshi)。(参见，例如，Prasad，Biotechnology Advances(2010)，28(6)：725-741；FR2835531)。酶腈水合酶是铁或钴依赖性的(即其具有在其活性中心配位的铁或钴原子)，特别地其特征在于其催化丙烯腈转化以通过水合丙烯腈获得丙烯酰胺的能力(Kobayashi，Nature Biotechnology(1998)，16：733-736)。
微生物作为将丙烯腈转化为丙烯酰胺的生物催化剂的能力基本上取决于两个参数：微生物的充分生长及其腈水合酶的生产速率。用于培养生产腈水合酶的微生物的已知发酵方法面临几个不同的困难，例如，适合生长的高浓度的碳或氮源可能抑制酶生产，所谓的“分解代谢物抑制”(Leonova，Applied Biochem Biotechnol(2000)，88：231-241)或金属离子辅因子的抑制作用(EP-B11283256；Pei，Biotechnology letters(2013)，35：1419-1424)。这些困难导致在给定时间段内低的腈水合酶活性速率，这是由于低的酶生产速率(即微生物主要生长但仍显示低的酶生产速率)，或由于低的微生物生长速率(即微生物显示高生产速率，但仍然有太少的微生物)。
因此，需要一种培养生产腈水合酶的微生物的方法，其允许在短时间内获得高产率的腈水合酶活性。
这一技术问题已经通过权利要求中限定的并且如下文所描述和示例的本发明所克服。
发明内容
本发明的要点在于令人惊讶的发现，根据腈水合酶活性水平，糖类和有机酸的组合增加生长和腈水合酶的生产速率。不受理论的束缚，据信通过有机酸可以改善糖进入细胞中。
因此，本发明涉及用于培养生产腈水合酶(NHase)的微生物的方法，其包括以下步骤：
(a)使所述微生物与包含糖(i)和有机酸(ii)的水性组合物接触；
(b)在所述(a)的水性组合物中培养所述微生物。
本发明还涉及通过本文所述和提供的培养方法获得的或可获得的微生物。
本发明还涉及用于培养生产腈水合酶的微生物的组合物，所述组合物包含糖(i)和有机酸(ii)。
本发明还涉及包含糖(i)和有机酸(ii)的组合物用于培养生产腈水合酶的微生物的用途。
在下文中，当进一步限定和说明根据本发明所描述和提供的方法、组合物和组合物用途的各单个特征(如腈水合酶、微生物、组合物、糖、有机酸等)时，这些定义和说明应适用于如本文所述和提供的所有本发明方法、本发明组合物和本发明组合物用途。
与本发明的发现相一致，已经证实，一些糖类，相较于其他糖类，看上起与有机酸组合可以更有效地增加腈水合酶活性(例如，允许微生物的高生长和高酶产量)。因此，在一个实施方案中，由本发明上下文中提供和使用的组合物所包含的糖(i)是单糖。此外，在本发明的上下文中，糖(i)可以是其中碳原子数为至少5、优选至少6的糖。在一个实施方案中，糖(i)中的碳原子数是6。包含在本文提供的组合物中和用于本发明上下文中的糖的具体实例包括葡萄糖、果糖、核糖和甘露糖；优选葡萄糖、果糖或甘露糖。在一个实施方案中，糖(i)是葡萄糖。
包含在本文提供的用于本发明的组合物中的有机酸(ii)可以是，例如，包含不超过3个羧基、优选不超过2个羧基、并且最优选不超过1个羧基基团的有机酸。根据本发明已经发现，这样的有机酸对于增加腈水合酶活性特别有效，如在本文中和实施例中进一步描述和例示的。有机酸(ii)通常不受尺寸限制，但可包含例如不超过6个碳原子、优选不超过4个碳原子、最优选不超过3个碳原子。本发明上下文中，有机酸的具体实例包括乳酸、酒石酸、柠檬酸、苹果酸和琥珀酸。在本发明的一个实施方案中，有机酸(ii)选自乳酸、酒石酸、柠檬酸、苹果酸和琥珀酸；优选选自乳酸、酒石酸、苹果酸和琥珀酸；更优选选自乳酸、酒石酸和苹果酸；最优选乳酸。
在本发明的一个具体实施方案中，本文提供的和在本发明的上下文中使用的组合物中所含的糖(i)是葡萄糖，有机酸(ii)是乳酸。
在本文提供和描述的培养生产腈的微生物的方法中，可以首先根据步骤(a)使微生物与包含糖(i)(并且还不包含有机酸(ii))的组合物接触，然后根据步骤(b)开始培养微生物，并直到这时才在微生物培养期间向组合物中加入有机酸(ii)。另外，反之亦然，在本文提供和描述的培养生产腈的微生物的方法中，可以首先根据步骤(a)使微生物与包含有机酸(ii)(并且还不包含糖(i))的组合物接触，然后根据步骤(b)开始培养微生物，并直到这时才在微生物培养期间向组合物中加入糖(i)。换句话说，没有必要，从培养一开始就在与微生物接触的组合物中存在糖(i)和有机酸(ii)两组分。相反，也可以在开始培养生产腈水合酶的微生物后，将组分(i)和(ii)中的一种或两种添加到组合物中，只要最终微生物在包含两种组分的组合物中培养以实现增加腈水合酶活性的期望效果即可。
本文提供的和在本发明的上下文中使用的组合物中所含的糖(i)和有机酸(ii)的比例通常不受限制。本文提供的和在本发明的上下文中使用的组合物中所含的糖(i)和有机酸(ii)之间的比例(本文通常以重量/重量比表示)可以为，例如1:9至9:1；2:8至8:2；2.5:7.5至7.5:2.5；3:7至7:3；3.5:6.5至6.5:3.5；4:6至6:4；4.5:5.5至5.5:4.5；或1:1。在一个实施方案中，组合物中糖(i)和有机酸(ii)之间的比例在2:8和9:1之间、优选3:7和9:1之间、更优选3:7和8:2之间、更优选3:7和7.5:2.5之间、最优选3:7和7:3之间或1:1和7:3之间。在本发明的上下文中，这些比例是指，加入到本文提供的和在本发明的上下文中使用的用于培养生产腈水合酶的微生物的组合物中的糖(i)和有机酸(ii)的相应重量。例如，组合物中的比例可以在生产腈水合酶的微生物的培养期间变化，因为两种组分可以独立地被消耗或更快或更慢地转化，或者因为组分中的一种或两种在整个培养过程中以额外量添加。
在本发明的一个具体实施方案中，本文提供的和在本发明的上下文中使用的组合物中所含的糖(i)是葡萄糖，有机酸(ii)是乳酸，并且组合物中糖(i)和有机酸(ii)之间的比例在3:7和7:3之间。
根据本发明描述和提供和使用的，包含糖(i)和有机酸(ii)的组合物还可以包含本领域已知的对培养微生物的组合物有用的其它组分。最优选地，在本发明的上下文中，所述组合物是水性组合物。其它组分可以包括例如氮源(例如铵或硝酸盐，有机酸如谷氨酸，酵母提取物或蛋白质水解产物)、磷源(例如磷酸盐，其也可以提供缓冲能力)、硫源(例如硫酸盐)、钴和/或铁源(作为NHase的辅因子)、用于表达腈水合酶的诱导剂例如尿素、其它营养源如镁，钙，锌，锰，铜以及维生素。
本文所述的生产腈水合酶的微生物的培养，特别是在本文提供的方法的步骤(b)中，可以以本领域技术人员已知的常规方式进行。也就是说，本文提供的和在本文上下文中使用的组合物，除了本文所述的糖(i)和有机酸(ii)外，还应包含允许培养的微生物生长和维持所必需的其它组分。此外，应设定其它参数，例如温度、pH、溶解氧浓度、压力、通气和搅动，以允许在本发明中培养的微生物生长和维持。在本文上下文中，用于培养本文所述和例示的微生物的典型温度可以在30℃和40℃之间、优选在35℃和38℃之间、最优选在36.5℃和37.5℃之间、特别是37℃。然而，也可以根据在本发明中培养的微生物，设定其它温度。应通过在发酵培养基中提供缓冲液或通过反馈控制强酸和/或碱的加入，将pH保持在6和8之间、优选在6.5和7.5之间。典型的溶解氧浓度值可以在饱和浓度的5％至75％之间、优选20％至40％。
在本发明的上下文中，在根据本文描述和提供的培养方法培养生产腈水合酶的微生物之后，可以从培养组合物收集微生物并干燥或以其它方式积累。任选地，可以在干燥之前浓缩细胞悬浮液，例如，通过离心或交叉流过滤(以微量过滤或超滤模式)。在干燥之前，还可以用水或缓冲溶液洗涤细胞，以从发酵肉汤中除去残留物质。例如，在培养后，然后可以通过喷雾干燥、流化床干燥、喷雾造粒或冷冻干燥来干燥微生物，优选通过喷雾或冷冻干燥。例如，可以在温和条件下(例如使用入口温度为80至150℃、优选90至120℃，和出口温度为，例如35至65℃、优选40至50℃)，喷雾干燥细胞，至残留水含量为1至10％、优选4至8％重量。
在本发明的上下文中，用包含糖(i)和有机酸(ii)的组合物培养的生产腈水合酶的微生物可以是能够生产本文所述的酶腈水合酶的任何微生物。酶腈水合酶是铁或钴依赖性的(即其具有在其活性中心配位的铁或钴原子)，尤其是其特征在于其催化丙烯腈转化以通过水合丙烯腈获得丙烯酰胺的能力(Kobayashi，Nature Biotechnology(1998)，16：733-736)。在本发明的上下文中使用的这种微生物可以是能够天然生产腈水合酶的微生物，即天然含有编码腈水合酶的基因。这样的微生物也可以是能够天然生产腈水合酶并且进一步被遗传改造，例如以增加腈水合酶的生产或增加腈水合酶的稳定性和/或输出的微生物。这样的微生物也可以是天然不能生产腈水合酶并且进一步被遗传改造以稳定表达和生产腈水合酶的微生物。在该上下文中，能够天然生产腈水合酶的微生物在本领域中是公知的，并且包括，例如，作为代表的玫瑰色红球菌(Rhodococcus rhodochrous)、食吡啶红球菌(Rhodococcus pyridinovorans)、红城红球菌(Rhodococcus erythropolis)、马红球菌(Rhodococcus equi)、赤红球菌(Rhodococcus ruber)、浑浊红球菌(Rhodococcusopacus)、黑曲霉(Aspergillus niger)、燕麦食酸菌(Acidovorax avenae)、速生食酸菌(Acidovorax facilis)、根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)、放射形土壤杆菌(Agrobacterium radiobacter)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、苍白芽孢杆菌(Bacillus pallidus)、史密斯芽孢杆菌(Bacillus smithii)、芽孢杆菌BR449(Bacillussp BR449)、Bradyrhizobium oligotrophicum、Bradyrhizobium diazoefficiens、大豆慢生根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)、新洋葱伯克霍尔德氏菌(Burkholderiacenocepacia)、唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(Burkholderia gladioli)、产酸克雷伯菌(Klebsiella oxytoca)、肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumonia)、栖异地克雷伯菌(Klebsiella variicola)、鹰嘴豆中间根瘤菌(Mesorhizobium ciceri)、机会中间根瘤菌(Mesorhizobium opportunistum)、中间根瘤菌F28(Mesorhizobium sp F28)、莫拉菌属(Moraxella)、Pantoea endophytica、成团泛菌(Pantoea agglomerans)、绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis)、恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)、根瘤菌属(Rhizobium)、沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)、液化沙雷氏菌(Serratialiquefaciens)、粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)、拟无枝酸菌属(Amycolatopsis)、节杆菌属(Arthrobacter)、短杆菌属物种CH1(Brevibacterium sp CH1)、地芽孢杆菌RAPc8(Geobacillus sp RAPc8)、短杆菌属物种CH2(Brevibacterium sp CH2)、短杆菌属物种R312(Brevibacterium sp R312)、蛾短杆菌(Brevibacterium imperial)、Corynebacterium nitrilophilus、假白喉棒杆菌(Corynebacteriumpseudodiphteriticum)、谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)、Corynebacteriumhoffmanii、蛾微杆菌(Microbacterium imperiale)、耻垢微杆菌(Microbacteriumsmegmatis)、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)、小球诺卡氏菌(Nocardia globerula)、玫瑰色诺卡氏菌(Nocardia rhodochrous)、嗜热假诺卡氏菌(Pseudonocardiathermophila)、木霉属(Trichoderma)、疣孢漆斑菌(Myrothecium verrucaria)、出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)、Candida famata、季也蒙假丝酵母(Candidaguilliermondii)、热带假丝酵母(Candida tropicalis)、黄隐球酵母(Cryptococcusflavus)、隐球酵母UFMG-Y28(Cryptococcus sp UFMG-Y28)、汉逊德巴利酵母(Debaryomyces hanseii)、白地霉(Geotrichum candidum)、地霉属物种JR1(Geotrichumsp JR1)、有孢汉逊酵母属(Hanseniaspora)、耐热克鲁维酵母(Kluyveromycesthermotolerans)、克鲁弗毕赤酵母(Pichia kluyveri)、红酵母(Rhodotorula glutinis)、睾丸酮丛毛单胞菌(Comomonas testosteroni)、Pyrococcus abyssi、激烈热火球古菌(Pyrococcus furiosus)和美未氏热火球古菌(Pyrococcus horikoshi)。此外，天然不表达腈水合酶的微生物如埃希氏杆菌(如大肠杆菌)，一旦已经被遗传改造从而稳定表达和生产腈水合物，也可以使用。在本发明的一个实施方案中，生产腈水合酶的微生物的代表是红球菌属(Rhodococcus)，例如玫瑰色红球菌或食吡啶红球菌。在本上下文中，玫瑰色红球菌种的代表实例可以包括在“NCIMB 41164、FERM-BP 1478(J1)、M33或M8下保藏的菌株。此外，在本发明上下文中，生产腈水合酶的微生物可以是被遗传改造的微生物，这些微生物天然不含有编码腈水合酶的基因，但其已被处理，从而含有编码腈水合酶的多核苷酸(例如，通过转化、转导、转染、缀合或其他本领域已知的适于将多核苷酸转移或插入细胞的方法，如Sambrook和Russell 2001，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，CSH Press，ColdSpring Harbor，NY，USA)，从而使得微生物能够生产腈水合酶。为此目的，可能还需要插入额外的多核苷酸，其可以是分别允许腈水合酶基因或mRNA转录和翻译所必需的多核苷酸。此类额外的多核苷酸例如可以包括启动子序列、polyT-或polyU-尾，或复制起点或其它质粒-控制序列等。在本上下文中，这种天然地不含有编码腈水合酶的基因但已被操作以例如含有编码腈水合酶的多核苷酸的遗传改造的微生物，可以是原核或真核微生物。这种原核微生物的实例包括，例如，代表的大肠杆菌种。真核微生物的实例包括，例如，酵母(例如，酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。
在本发明的一个具体实施方案中，本文提供的和在本发明的上下文中使用的组合物中所含的糖(i)是葡萄糖，有机酸(ii)是乳酸，并且生产腈水合酶的微生物是玫瑰色红球菌，例如，NCIMB 41164或FERM-BP 1478。
在本发明的另一个具体实施方案中，生产腈水合酶的微生物是玫瑰色红球菌，并且组合物中糖(i)和有机酸(ii)之间的比率为3:7至7:3之间。
在本发明的另一个具体实施方案中，本文提供的和在本发明的上下文中使用的组合物中所含的糖(i)是葡萄糖，有机酸(ii)是乳酸，生产腈水合酶的微生物是玫瑰色红球菌，并且该组合物中糖(i)和有机酸(ii)的比率为3:7和7:3之间。
在本发明的上下文中，术语“腈水合酶”是指能够催化丙烯腈水合成丙烯酰胺的酶腈水合酶(在本文中也称为“NHase”)，即其具有腈水合酶活性。在本发明的上下文中，本发明意义上的腈水合酶的活性可如下测定：首先将100μl细胞悬浮液、细胞裂解物、溶解的酶粉末或含有推定的腈水合酶的任何其它制剂，与875μl的50mM磷酸钾缓冲液和25μl的丙烯腈在25℃下在eppendorf管摇床上以1,000rpm反应10分钟。在10分钟的反应时间后，抽取样品并通过加入相同体积的1.4％盐酸立即淬灭。混合样品后，通过在10,000rpm下离心1分钟除去细胞，通过HPLC分析澄清上清液，测定形成的丙烯酰胺的量。丙烯酰胺的浓度应在0.25和1.25mmol/l之间——如果必要，样品必须相应稀释，并且必须重复转化。用HPLC分析获得的丙烯酰胺浓度，除以反应时间(其为10分钟)、并将该值与HPLC样品和原始样品之间的稀释因子相乘，从丙烯酰胺的浓度推导出酶活性。活性>10U/ml，优选>100U/ml，更优选>1,000U/ml，表示存在功能性表达的腈水合酶，并被认为是腈水合酶活性，因此，是在本发明上下文中的腈水合酶。例如，本文所用的腈水合酶还包括根据IUBMB命名法(截至2014年9月30日)分类为EC 4.2.1.84或CAS-No.2391-37-5的酶，以及例如能够更快地将腈化合物(例如丙烯腈)转化为酰胺化合物(例如丙烯酰胺)的修饰或增强的酶，或可以以更高的产率/时间比生产的酶，或者更稳定的酶，只要它们能够催化腈化合物(例如丙烯腈)转化(即水合)成酰胺化合物(例如丙烯酰胺)。在本发明的上下文中，腈水合酶可以是由多核苷酸编码的多肽，所述多核苷酸包含与SEQ ID NO：1的核苷酸序列(玫瑰色红球菌腈水合酶的α-亚基)和/或SEQ ID NO：3的核苷酸序列(玫瑰色红球菌腈水合酶的β-亚基)至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、更优选至少85％、更优选至少90％、更优选至少95％、更优选至少96％、更优选至少97％、更优选至少98％、更优选至少99％、更优选至少99.5％、最优选100％相同的核苷酸序列，或由所述核苷酸序列组成，其中，
SEQ ID NO：1的核苷酸序列为：
GTGAGCGAGCACGTCAATAAGTACACGGAGTACGAGGCACGTACCAAGGCGATCGAAACCTTGCTGTACGAGCGAGGGCTCATCACGCCCGCCGCGGTCGACCGAGTCGTTTCGTACTACGAGAACGAGATCGGCCCGATGGGCGGTGCCAAGGTCGTGGCCAAGTCCTGGGTGGACCCTGAGTACCGCAAGTGGCTCGAAGAGGACGCGACGGCCGCGATGGCGTCATTGGGCTATGCCGGTGAGCAGGCACACCAAATTTCGGCGGTCTTCAACGACTCCCAAACGCATCACGTGGTGGTGTGCACTCTGTGTTCGTGCTATCCGTGGCCGGTGCTTGGTCTCCCGCCCGCCTGGTACAAGAGCATGGAGTACCGGTCCCGAGTGGTAGCGGACCCTCGTGGAGTGCTCAAGCGCGATTTCGGTTTCGACATCCCCGATGAGGTGGAGGTCAGGGTTTGGGACAGCAGCTCCGAAATCCGCTACATCGTCATCCCGGAACGGCCGGCCGGCACCGACGGTTGGTCCGAGGAGGAGCTGACGAAGCTGGTGAGCCGGGACTCGATGATCGGTGTCAGTAATGCGCTCACACCGCAGGAAGTGATCGTATGA
其中SEQ ID NO：3的核苷酸序列为：
ATGGATGGTATCCACGACACAGGCGGCATGACCGGATACGGACCGGTCCCCTATCAGAAGGACGAGCCCTTCTTCCACTACGAGTGGGAGGGTCGGACCCTGTCAATTCTGACTTGGATGCATCTCAAGGGCATATCGTGGTGGGACAAGTCGCGGTTCTTCCGGGAGTCGATGGGGAACGAAAACTACGTCAACGAGATTCGCAACTCGTACTACACCCACTGGCTGAGTGCGGCAGAACGTATCCTCGTCGCCGACAAGATCATCACCGAAGAAGAGCGAAAGCACCGTGTGCAAGAGATCCTTGAGGGTCGGTACACGGACAGGAAGCCGTCGCGGAAGTTCGATCCGGCCCAGATCGAGAAGGCGATCGAACGGCTTCACGAGCCCCACTCCCTAGCGCTTCCAGGAGCGGAGCCGAGTTTCTCTCTCGGTGACAAGATCAAAGTGAAGAGTATGAACCCGCTGGGACACACACGGTGCCCGAAATATGTGCGGAACAAGATCGGGGAAATCGTCGCCTACCACGGCTGCCAGATCTATCCCGAGAGCAGCTCCGCCGGCCTCGGCGACGATCCTCGCCCGCTCTACACGGTCGCGTTTTCCGCCCAGGAACTGTGGGGCGACGACGGAAACGGGAAAGACGTAGTGTGCGTCGATCTCTGGGAACCGTACCTGATCTCTGCGTGA
条件是，由所述多核苷酸编码的多肽能够催化丙烯腈水合成丙烯酰胺(即具有腈水合酶活性)，如本文所述和例举的。同样在本发明的上下文中，腈水合酶可以是包含与SEQID NO：2的氨基酸序列(玫瑰色红球菌腈水合酶的α-亚基)和/或SEQ ID NO：4的氨基酸序列(玫瑰色红球菌腈水合酶的β-亚基)至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、更优选至少85％、更优选至少90％、更优选至少95％、更优选至少96％、更优选至少97％、更优选至少98％、更优选至少99％、更优选至少99.5％、最优选100％相同的氨基酸序列，或由所述氨基酸序列组成的多肽，
其中SEQ ID NO：2的氨基酸序列为：
VSEHVNKYTE YEARTKAIET LLYERGLITP AAVDRVVSYY ENEIGPMGGA KVVAKSWVDPEYRKWLEEDA TAAMASLGYA GEQAHQISAV FNDSQTHHVV VCTLCSCYPW PVLGLPPAWY KSMEYRSRVVADPRGVLKRD FGFDIPDEVEVRVWDSSSEI RYIVIPERPA GTDGWSEEEL TKLVSRDSMI GVSNALTPQEVIV
其中SEQ ID NO：4的氨基酸序列为：
MDGIHDTGGM TGYGPVPYQK DEPFFHYEWE GRTLSILTWM HLKGISWWDK SRFFRESMGNENYVNEIRNSY YTHWLSAAE RILVADKIIT EEERKHRVQE ILEGRYTDRK PSRKFDPAQI EKAIERLHEPHSLALPGAEP SFSLGDKIKV KSMNPLGHTR CPKYVRNKIG EIVAYHGCQI YPESSSAGLG DDPRPLYTVAFSAQELWGDD GNGKDVVCVD LWEPYLISA
条件是所述多肽能够催化丙烯腈水合成丙烯酰胺，如本文所述和例举的。
两个或更多个序列(例如，核酸序列或氨基酸序列)之间的同一性水平可以通过本领域已知的方法例如通过BLAST分析容易地确定。通常，在本发明的上下文中，如果待(例如通过序列比较)进行比较的两个序列(例如，多核苷酸序列或氨基酸序列)在同一性上不同，则术语“同一性”可以指较短的序列和与所述较短序列匹配的较长序列的那部分。因此，当比较的序列不具有相同的长度时，同一性程度优选地可以指较短序列中与较长序列中的核苷酸残基相同的核苷酸残基的百分比，或者指在较长序列中与较短序列中的核苷酸序列相同的核苷酸的百分比。在本上下文中，技术人员容易确定与较短序列匹配的较长序列的部分。此外，如本文所使用的，核酸序列或氨基酸序列的同一性水平可以指相应序列的整个长度，并且优选成对评估，其中每个空位计为一个错配。序列比较的这些定义(例如，“同一性”值的建立)适用于本文描述和公开的所有序列。
此外，如本文所使用的术语“同一性”是指，在相应序列之间存在功能和/或结构等同。与本文所述的特定核酸/氨基酸序列具有给定同一性水平的核酸/氨基酸序列可以表示这些序列的衍生物/变体，其优选具有相同的生物学功能。它们可以是天然存在的变异，例如来自其他变种，物种等的序列，或可以是突变，并且所述突变可以是天然形成的或可以通过有意诱变产生。此外，变异可以是合成产生的序列。变体可以是天然存在的变体或合成产生的变体或通过重组DNA技术产生的变体。与上述核酸序列的偏差可以通过例如缺失、取代、添加、插入和/或重组产生。术语“添加”是指在给定序列的末端添加至少一个核酸残基/氨基酸，而“插入”是指在给定序列中插入至少一个核酸残基/氨基酸。术语“缺失”是指删除或去除给定序列中的至少一个核酸残基或氨基酸残基。术语“取代”是指替换给定序列中的至少一个核酸残基/氨基酸残基。同样，这里使用的这些定义经必要修改后适用于本文提供和描述的所有序列。
通常，如本文所用，术语“多核苷酸”和“核酸”或“核酸分子”应同义地解释。通常，核酸分子尤其可以包含DNA分子、RNA分子、寡核苷酸硫代磷酸酯、取代的核糖寡核苷酸或PNA分子。此外，术语“核酸分子”可以指本领域已知的DNA或RNA或其杂交物或其任何修饰(对于修饰的实例，参见例如US 5525711、US 471 1955、US 5792608或EP 302175)。多核苷酸序列可以是单链或双链、线性或环状、天然或合成的、并且没有任何大小限制。例如，多核苷酸序列可以是基因组DNA、cDNA、线粒体DNA、mRNA、反义RNA、核酶RNA或编码此类RNA的DNA或嵌合体(chimeroplast)(Gamper,Nucleic Acids Research,2000,28,4332-4339)。所述多核苷酸序列可以是载体、质粒或病毒DNA或RNA的形式。本文还描述了与上述核酸分子互补的核酸分子和能够与本文所述的核酸分子杂交的核酸分子。本文所述的核酸分子还可以是本发明上下文中的核酸分子的片段。特别地，这样的片段是功能片段。这样的功能片段的实例是可以用作引物的核酸分子。
一般来说，本发明涉及本文所述的所有实施例以及其所有排列和组合。本文描述的任何特定方面或实施方式不应被解释为将本发明的范围限制在这些方面或实施方案。
以下实施例举例说明本发明。然而，本发明不应被解释为受以下实施例的限制。
实施例
实施例1
红球菌的培养
在微发酵系统中，针对不同红球菌菌株(玫瑰色红球菌“CIBA”(NCIMB 41164)和玫瑰色红球菌“J1”(FERM BP-1478))，评估了不同糖/有机酸比率。
基础培养基含有酵母提取物(Biospringer)(1.25g/l)、KH2PO4(10g/l)、K2HPO4(10g/l)、(NH4)2SO4(1g/l)、MgSO4*7H2O(0.375g/l)、CaCl2*2H2O(25mg/l)、微量元素溶液(2.5g/l)(参见下文)、Co(NO3)2(31.2mg/l)、消泡剂P2000(BASF)(62.5mg/l)、尿素(7g/l)和谷氨酸铵(2.5g/l)，在H2O中。
微量元素溶液：柠檬酸一水合物(40g/l)、ZnSO4*7H2O(11g/l)、(NH4)2Fe(SO4)2*6H2O(8.5g/l)、MnSO4*H2O(3g/l)和CuSO4*5H2O(0.8g/l)，在H2O中。
然后向培养基中补充10g/l碳源(糖、有机酸或两者的混合物，如下表所示)。使用H3PO4或NaOH将pH调节至6.6。将培养基直接从冷储备物接种至OD 0.05(在600nm测量)。在BioLector微发酵系统(M2P Labs，Baesweiler，Germany)中使用具有1.5ml工作体积的48孔花板，在37℃下以1,100rpm进行培养64小时。培养后，抽取样品，用盐酸淬灭，如实施例2所述测定腈水合酶活性。
在下表中，提供了不同菌株和糖/酸比率的相对腈水合酶活性。将糖作为唯一碳源获得的腈水合酶活性设定为100％。
表1：玫瑰色红球菌“CIBA”
表2：玫瑰色红球菌“J1“
实施例2
腈水合酶活性的测定
从实施例1的培养基中取样，并用50mmol/l KH2PO4缓冲液(pH7.0)1:10(v/v)稀释。获得的溶液用50mmol/l KH2PO4缓冲液(pH 7.0)进一步稀释1:20(v/v)，以达到培养基的最终稀释因子1:200。
反应：
将875μl KH2PO4缓冲液(pH 7.0)吸移到2ml Eppendorf管中。加入100μl稀释的培养基，并将混合物在恒温混合器中在25℃下以500rpm预孵育5分钟。预孵育后，通过加入25μl丙烯腈开始反应。反应在25℃和1,000rpm下进行10分钟。
样品制备：
在10分钟的反应时间后，通过将300μl反应溶液转移到含有300μl的1.4％(m/v)盐酸的1.5ml Eppendorf管中来淬灭反应。将混合物短暂涡旋并在台式离心机中以10,000rpm离心1分钟以分离细胞。将100μl澄清的上清液与900μl水混合。然后通过HPLC分析混合物。
HPLC分析：
柱：Aqua 5μC18 125A，250×4.60mm(Phenomenex)
烘箱温度：45℃
注射体积：1μl
检测：UV 210nm
流速：1.0ml/min
溶剂A：25mmol/l KH2PO4pH2.5
溶剂B：乙腈
分离：10％B(等度)
保留时间：丙烯酰胺：
分钟，
HPLC值应在0.25和1.25mmol/l之间
通过HPLC测定的丙烯酰胺的浓度应该在0.25和1.25mmol/l之间。如果这没有直接达到，则需要相应地调节反应中使用的细胞浓度。
腈水合酶活性的测定：
c：产物物质的量[mM](HPLC-值)
t：孵育时间[min]，在该测试中10分钟
k：稀释因子-从初始样品到HPLC样品的总稀释度
计算活性，以kU/l计
一个活性单位[U]定义为在1分钟反应时间内生产1μmol丙烯酰胺。
Claims (4)
1.用于培养生产腈水合酶的玫瑰色红球菌的方法，其包括以下步骤：
(a)使所述生产腈水合酶的玫瑰色红球菌与包含碳源的水性组合物接触；和
(b)在所述水性组合物中培养所述玫瑰色红球菌，其中所述碳源包含单糖和有机酸，并且其中在水性组合物中培养的玫瑰色红球菌比仅含单糖作为碳源的组合物中培养的玫瑰色红球菌具有更高的腈水合酶活性，和比在仅包含有机酸作为碳源的组合物中培育的玫瑰色红球菌具有更高的腈水合酶活性，
其中所述单糖选自葡萄糖、核糖和甘露糖，
其中所述有机酸选自酒石酸、柠檬酸、苹果酸和琥珀酸，
其中以重量计，单糖与有机酸的比率为3:7和7:3之间。
2.包含单糖和有机酸的组合物用于培养生产腈水合酶的玫瑰色红球菌的用途，其中所述单糖选自葡萄糖、核糖和甘露糖，其中所述有机酸选自酒石酸、柠檬酸、苹果酸和琥珀酸，其中以重量计，单糖与有机酸的比率为3:7和7:3之间。
3.如权利要求1所述的方法、或如权利要求2所述的用途，其中所述腈水合酶由多核苷酸编码，所述多核苷酸为SEQ ID NO：1和/或SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列。
4.如权利要求1所述的方法、或如权利要求2所述的用途，其中所述腈水合酶的氨基酸序列为SEQ ID NO：2和/或SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP14187144 | 2014-09-30 | ||
| EP14187144.2 | 2014-09-30 | ||
| PCT/EP2015/072594 WO2016050861A1 (en) | 2014-09-30 | 2015-09-30 | Method of cultivating microorganisms having nitrile hydratase activity |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107075457A CN107075457A (zh) | 2017-08-18 |
| CN107075457B true CN107075457B (zh) | 2021-03-26 |
Family
ID=51730324
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201580050795.XA Active CN107075457B (zh) | 2014-09-30 | 2015-09-30 | 培养具有腈水合酶活性的微生物的方法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20170260519A1 (zh) |
| EP (1) | EP3201316B1 (zh) |
| JP (1) | JP6714584B2 (zh) |
| CN (1) | CN107075457B (zh) |
| ES (1) | ES2784277T3 (zh) |
| PL (1) | PL3201316T3 (zh) |
| WO (1) | WO2016050861A1 (zh) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK3274465T3 (da) | 2015-03-26 | 2022-10-24 | Basf Se | Biokatalytisk fremstilling af l-fucose |
| CA3076548A1 (en) | 2017-10-25 | 2019-05-02 | Basf Se | Process for producing aqueous polyacrylamide solutions |
| WO2019081330A1 (en) | 2017-10-25 | 2019-05-02 | Basf Se | PROCESS FOR PRODUCING AQUEOUS POLYACRYLAMIDE SOLUTIONS |
| WO2019081321A1 (en) | 2017-10-25 | 2019-05-02 | Basf Se | PROCESS FOR PRODUCING AQUEOUS POLYACRYLAMIDE SOLUTIONS |
| WO2019081004A1 (en) | 2017-10-25 | 2019-05-02 | Basf Se | PROCESS FOR PRODUCING AQUEOUS POLYACRYLAMIDE SOLUTIONS |
| WO2019081008A1 (en) | 2017-10-25 | 2019-05-02 | Basf Se | PROCESS FOR PRODUCING AQUEOUS ACRYLAMIDE SOLUTION |
| WO2019081003A1 (en) | 2017-10-25 | 2019-05-02 | Basf Se | PROCESS FOR PRODUCING AQUEOUS POLYACRYLAMIDE SOLUTIONS |
| AR113378A1 (es) | 2017-10-25 | 2020-04-22 | Basf Se | Proceso para producir soluciones acuosas de poliacrilamida |
| WO2019081318A1 (en) | 2017-10-25 | 2019-05-02 | Basf Se | PROCESS FOR PRODUCING AQUEOUS POLYACRYLAMIDE SOLUTIONS |
| WO2020079119A1 (en) | 2018-10-18 | 2020-04-23 | Basf Se | Method of providing aqueous polyacrylamide concentrates |
| MX2021004420A (es) | 2018-10-18 | 2021-07-06 | Basf Se | Proceso para producir un concentrado acuoso de poliacrilamida. |
| AR116738A1 (es) | 2018-10-18 | 2021-06-09 | Basf Se | Proceso de fracturamiento de formaciones subterráneas |
| WO2020079124A1 (en) | 2018-10-18 | 2020-04-23 | Basf Se | Process for producing aqueous polyacrylamide compositions |
| CN111334495B (zh) * | 2020-03-12 | 2022-04-29 | 宜昌东阳光生化制药有限公司 | 制备右旋酰胺酮洛芬的方法 |
| WO2023041515A2 (en) | 2021-09-15 | 2023-03-23 | Basf Se | Method for preparing an aqueous (meth) acrylamide solution |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1235978A (zh) * | 1998-03-16 | 1999-11-24 | 三井化学株式会社 | 参与活化腈水合酶的蛋白以及编码它的基因 |
| CN1571843A (zh) * | 2001-03-02 | 2005-01-26 | 大赛璐化学工业株式会社 | 腈水合酶和生产酰胺的方法 |
| WO2009009117A2 (en) * | 2007-07-11 | 2009-01-15 | Bioverdant, Inc. | Chemoenzymatic processes for preparation of levetiracetam |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6083581A (ja) * | 1983-10-13 | 1985-05-11 | Hideaki Yamada | シユ−ドモナス属細菌の培養法 |
| JPH01171478A (ja) * | 1987-12-26 | 1989-07-06 | Res Assoc Util Of Light Oil | ロドコッカス属細菌の培養方法 |
| JPH07303491A (ja) * | 1994-03-16 | 1995-11-21 | Asahi Chem Ind Co Ltd | 光学活性な酸アミドの製造法 |
| JP2004254690A (ja) * | 2003-02-03 | 2004-09-16 | Nippon Soda Co Ltd | Ｄｌ−メチオニンの製造法 |
| GB0307026D0 (en) * | 2003-03-27 | 2003-04-30 | Rowett Res Inst | Bacterial supplement |
| US20080286749A1 (en) * | 2007-04-12 | 2008-11-20 | Fox Brian G | Enhanced protein expression using auto-induction media |
| JP4665066B1 (ja) * | 2010-02-15 | 2011-04-06 | 住友商事株式会社 | ブタノールの新規な生産方法 |
| KR101698709B1 (ko) * | 2011-06-07 | 2017-01-20 | 미쯔비시 레이온 가부시끼가이샤 | 개량형 니트릴 히드라타제 |
| RU2520870C1 (ru) * | 2012-12-27 | 2014-06-27 | Кемира Оюй | Штамм бактерий rhodococcus aetherivorans bkm ac-2610d - продуцент нитрилгидратазы, способ его культивирования и способ получения акриламида |
-
2015
- 2015-09-30 CN CN201580050795.XA patent/CN107075457B/zh active Active
- 2015-09-30 PL PL15775162T patent/PL3201316T3/pl unknown
- 2015-09-30 US US15/512,792 patent/US20170260519A1/en not_active Abandoned
- 2015-09-30 JP JP2017516326A patent/JP6714584B2/ja active Active
- 2015-09-30 WO PCT/EP2015/072594 patent/WO2016050861A1/en active Application Filing
- 2015-09-30 ES ES15775162T patent/ES2784277T3/es active Active
- 2015-09-30 EP EP15775162.9A patent/EP3201316B1/en active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1235978A (zh) * | 1998-03-16 | 1999-11-24 | 三井化学株式会社 | 参与活化腈水合酶的蛋白以及编码它的基因 |
| CN1571843A (zh) * | 2001-03-02 | 2005-01-26 | 大赛璐化学工业株式会社 | 腈水合酶和生产酰胺的方法 |
| WO2009009117A2 (en) * | 2007-07-11 | 2009-01-15 | Bioverdant, Inc. | Chemoenzymatic processes for preparation of levetiracetam |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2016050861A1 (en) | 2016-04-07 |
| CN107075457A (zh) | 2017-08-18 |
| PL3201316T3 (pl) | 2020-06-29 |
| JP6714584B2 (ja) | 2020-06-24 |
| JP2017529849A (ja) | 2017-10-12 |
| US20170260519A1 (en) | 2017-09-14 |
| EP3201316A1 (en) | 2017-08-09 |
| EP3201316B1 (en) | 2020-02-19 |
| ES2784277T3 (es) | 2020-09-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107075457B (zh) | 培养具有腈水合酶活性的微生物的方法 | |
| EP3201348B2 (en) | Method for preparing an aqueous acrylamide solution having a low acrylic acid concentration | |
| CN107075494B (zh) | 制备具有较少丙烯酸的酰胺化合物的手段和方法 | |
| WO2016050819A1 (en) | Method for preparing an acrylamide solution having a low acrylic acid concentration | |
| JP2017535249A5 (zh) | ||
| WO2017055518A1 (en) | Means and methods for producing an amide compound | |
| WO2005010182A1 (ja) | コリネ型細菌形質転換体及びそれを用いるジカルボン酸の製造方法 | |
| EP3225694A1 (en) | Method for the production of acrylamide by defined addition of the biocatalyst | |
| US20220403426A1 (en) | Method of storing a biocatalyst | |
| EP3225693A1 (en) | Method for preparing aqueous acrylamide solutions | |
| WO2023183785A2 (en) | Variant nitrile hydratases, microbia which express same, and use in amide synthesis | |
| EP4310189A1 (en) | Corynebacterium glutamicum variant having improved l-citrulline production ability, and method for producing l-citrulline by using same |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |