CN107074950A

CN107074950A - 使用抗nkg2a抗体的治疗方案

Info

Publication number: CN107074950A
Application number: CN201580050103.1A
Authority: CN
Inventors: 帕斯卡莱·安德烈; 马蒂厄·布莱里; 卡里纳·帕蒂雷尔; 卡洛琳·苏拉; 尼古拉·沃特曼
Original assignee: Innate Pharma SA
Current assignee: Innate Pharma SA
Priority date: 2014-09-16
Filing date: 2015-09-15
Publication date: 2017-08-18
Also published as: IL250672A0; DK3193929T3; AU2015316993A1; US20210238285A1; PL3193929T3; WO2016041947A1; EP3193929B1; HUE044704T2; IL250672B; KR20240141862A; US20200299383A1; AU2015316993B2; SG10202007781TA; AU2021203744A1; JP2017538660A; KR20170068458A; JP2021008487A; ES2742456T3; EP3193929A1; US10676523B2

Abstract

本发明涉及使用特异性结合和抑制人NKG2A的抗体治疗疾病，尤其是癌症的方法。包括提供抗NKG2A抗体的改善的功效的治疗方案。

Description

使用抗NKG2A抗体的治疗方案

相关申请的引证

本申请要求于2014年9月16日提交的美国临时申请号62/050,948，于2014年10月23日提交的62/067,642；于2014年11月25日提交的62/083,929；于2014年12月17日提交的62/093,141；以及于2014年12月17日提交的62/093,124的权益；其全部以其整体通过引用结合在此；包括任何附图。

序列表的引用

本申请是连同电子格式的序列表提交的。序列表被提供为定名为“NKG2A-T_ST25”的文件，创建于2015年9月15日，它是26KB大小。将在电子格式的序列表中的信息通过引用以其全文结合在此。

技术领域

本发明涉及抗NKG2A抗体用于治疗，尤其用于治疗癌症的用途。

背景技术

NK细胞的活性是通过一种既包括活化又包括抑制信号的复杂机制进行调节。已经鉴定了多种不同的NK特异性受体，这些受体在NK细胞介导的缺乏HLA I类的靶细胞的识别和杀灭中起着重要的作用。自然细胞毒性受体(NCR)是指一类活化受体蛋白和表达它们的基因，这些基因在NK细胞中特异性表达。NCR的实例包括NKp30、NKp44、和NKp46(参见，例如，拉尼尔(2001)自然免疫学(Nat Immunol)2:23-27；彭德(Pende)等人(1999)实验医学杂志(J Exp Med)190:1505-1516；坎托尼(Cantoni)等人(1999)实验医学杂志(J Exp Med)189:787-796；西沃里(Sivori)等人(1997)实验医学杂志(J Exp Med)186:1129-1136；Pessino等人(1998)实验医学杂志(J Exp Med)188(5):953-60；Mandelboim等人(2001)自然(Nature)409:1055-1060，将其全部披露内容通过引用结合在此)。这些受体是Ig超家族的成员，并且它们通过特异性mAb诱导的交联导致强的NK细胞活化以及针对许多类型的靶细胞的NK细胞毒性的活化，该强的NK细胞活化导致细胞内Ca⁺⁺水平增加，触发细胞毒性和淋巴因子释放。

CD94/NKG2A是在自然杀伤细胞(NK细胞)、自然杀伤T细胞(NKT细胞)和T细胞(α/β和γ/δ)的亚群中发现的抑制性受体。CD94/NKG2A限制前述淋巴细胞对表达CD94/NKG2A-配体HLA-E的细胞的细胞因子释放和细胞毒性反应(参见例如WO 99/28748)。还已经发现HLA-E通过某些肿瘤细胞(德尔(Derre)等人，免疫学杂志(J Immunol)2006；177:3100-7)和活化的内皮细胞以可溶的形式分泌(库佩尔(Coupel)等人，血液(Blood)2007；109:2806-14)。抑制CD94/NKG2A信号传导的抗体可以增加淋巴细胞对HLA-E阳性靶细胞的细胞因子释放和细胞溶解活性，例如CD94/NKG2A阳性NK细胞对病毒感染细胞的应答。因此，抑制CD94/NKG2A但不引起杀死表达CD94/NKG2A的细胞的治疗性抗体(即非消耗性抗体)可以诱导对在癌症患者中的肿瘤生长的控制。另外，也已经建议抗NKG2A抗体用于治疗自身免疫性或炎性疾病(参见例如US 20030095965、WO 2006070286)。

本领域中已经描述了针对NKG2A的各种抗体。WO 2006070286和US 8,206,709(也参见WO 2008/009545)描述了抗NKG2A抗体Z270，而WO 2009/092805描述了人源化抗NKG2A抗体Z199。万斯(Vance)等人(实验医学杂志(J Exp Med)1999；190:1801-12)提到大鼠抗鼠NKG2抗体20D5(现在可经由美国BD生物科学Pharmingen公司(BD BiosciencesPharmingen)，目录号550518商购获得)；并且美国专利申请公开20030095965描述了鼠抗体3S9。抗体Z270结合并中和抑制性受体NKG2A，而不中和活化受体NKG2C和NKG2E。除了NKG2A之外，抗体Z199、20D5和3S9全部都结合活化的NKG2家族成员NKG2C和NKG2E。抗体Z270阻断HLA-E与NKG2A的结合，而抗体Z199中和NKG2A而不干扰NKG2A与HLA-E的结合。

发明内容

本发明人已经发现，在体内表达HLA-E的靶细胞存在下，完全占据淋巴细胞上的NKG2A受体的抗NKG2A抗体的剂量和浓度不会产生NKG2A受体的最大中和。特别地，在表达HLA-E的靶细胞存在下，在NK细胞上完全中和NKG2A受体所需的抗NKG2A抗体的浓度比在使用NKG2A+淋巴细胞的结合测定中观察到完全占据NKG2A受体的浓度高100倍。平行地，据观察抗NKG2A的抗肿瘤效应作为HLA-E在肿瘤细胞上的更高表达的函数而增加。

如本文所示，NKG2A+NK和CD8+ T淋巴细胞不仅存在于循环中而且存在于肿瘤环境内，并且与肿瘤引流淋巴结节点和脾中的CD8+ T细胞相比，NKG2A+CD8 T细胞可以进一步在肿瘤浸润亚群中以显著增加的频率存在。因此，本发明的治疗方案另外提供了通过使用抗NKG2A抗体调节肿瘤环境内的淋巴细胞来治疗实体瘤的有利方法。

在一个实施例中，提供了用于治疗或预防个体中的疾病(例如癌症、实体瘤、血液肿瘤)的方法，该方法包括向患有疾病(例如癌症、实体瘤)的个体给予中和人NKG2A多肽的抑制活性的抗体，其中该抗NKG2A抗体以有效实现对应于NKG2A+NK细胞应答的至少EC₅₀、任选地EC₁₀₀的抗NKG2A抗体的血液(血清)浓度的量给予。在一个实施例中，该量有效实现对应于NKG2A+NK细胞应答的至少EC₅₀、任选地EC₁₀₀的抗NKG2A抗体的血管外组织(例如肿瘤组织)中的浓度。在一个实施例中，使用表达NKG2A的NK细胞针对表达HLA-E的靶细胞的细胞毒性活性的测定来评估NKG2A+NK细胞应答。

在一个实施例中，提供了用于治疗或预防个体中的疾病(例如癌症、实体瘤、血液肿瘤)的方法，该方法包括向患有疾病(例如癌症、实体瘤)的个体给予中和人NKG2A多肽的抑制活性的抗体，其中该抗NKG2A抗体以有效实现(和/或维持指定的时间段或在两次连续给予之间)至少10μg/ml(或任选地至少20、30、40、50、80或100μg/mL)的抗NKG2A抗体的血液(血清)浓度的量给予。

因此，在一个实施例中，提供了用于治疗或预防个体中的疾病(例如癌症、实体瘤、血液肿瘤)的方法，该方法包括向个体给予结合NKG2A并且中和人NKG2A多肽的抑制性活性持续至少一个给予周期的抗体，该给予周期包含该抗NKG2A抗体的至少第一次和第二次(以及任选地第三次、第四次、第五次、第六次、第七次和/或第八次或另外的)给予，其中该抗NKG2A抗体以有效实现抗NKG2A抗体的血液浓度和/或维持抗NKG2A抗体在两次连续(例如所述第一次和第二次，以及任选地另外的)给予之间的抗NKG2A抗体的血液浓度的量给予，该浓度为实质上完全(例如，90％、95％)占据(饱和)NKG2A+细胞表面上的NKG2A受体所需的最小浓度(例如，如通过在PBMC中在表达NKG2A的细胞上滴定抗NKG2A抗体来评估)的至少10倍(例如，10-20倍、10-50倍、10-100倍、20-50倍、20-100倍、30-100倍、50-100倍)、任选地至少50、60、80或100倍。在一个实施例中，抗NKG2A抗体与HLA-E竞争结合人NKG2A。

在一个实施例中，提供了用于治疗或预防个体中的疾病(例如癌症、实体瘤、血液肿瘤)的方法，该方法包括向患有疾病(例如癌症、实体瘤)的个体给予中和人NKG2A多肽的抑制性活性持续至少一个给予周期的抗体，该给予周期包含抗NKG2A抗体的至少第一次和第二次(以及任选地第三次、第四次、第五次、第六次、第七次和/或第八次或另外的)给予，其中该抗NKG2A抗体以有效实现或维持两次连续给予之间至少10μg/ml(或任选地至少20、30、40或50μg/mL)的抗NKG2A抗体的血液(血清)浓度的量给予。在一个实施例中，维持指定的连续血液浓度，其中血液浓度在指定时间段(例如在抗体的两次给予之间、周数)期间不会实质上降低到指定血液浓度以下，即尽管血液浓度可在指定时间段期间变化，但是保持的指定血液浓度代表最小或“谷(trough)”浓度。在一个实施例中，抗NKG2A抗体的治疗活性量是这样的抗体的量：在给予抗体之后，在血液和/或组织中能够提供用于NKG2A+NK细胞应答持续至少约1周、约2周或约1个月的时间的(至少)EC₅₀浓度、任选地实质上EC₁₀₀浓度的量。在一个实施例中，抗NKG2A抗体以有效实现至少10μg/ml(或任选地至少20、30、40或50μg/mL)的抗NKG2A抗体的血液(血清)浓度持续至少约1周、至少约2周的时间、并且允许在两次连续给予之间显著的“去饱和”(连续给予可以例如分隔一个月、两个月或更长时间)的量给予。在一个实施例中，抗NKG2A抗体的治疗活性量是这样的抗体的量：在给予抗体之后，在组织中能够提供用于NKG2A+NK细胞应答持续至少1周或至少约2周的时间的(至少)EC₅₀浓度、任选地实质上EC₁₀₀浓度，并且允许其后两次连续给予之间的显著“去饱和”的抗体的量；任选地其中抗体以约每月一次或约每两个月一次的给药频率给予。在去饱和期间抗NKG2A抗体的血液浓度低于在初始期间(例如1周、2周等)实现的指定浓度；例如，抗NKG2A抗体在去饱和期间的血液和/或组织浓度可以被规定为低于NKG2A+NK细胞应答的EC₁₀₀、任选地低于EC₅₀。

在一个实施例中，特别是在旨在调节血管外组织中的NKG2A+T或NK细胞(例如用于治疗实体瘤)的情况下，抗NKG2A抗体以有效实现峰值浓度或在给予后(例如在给予的1或2天内)维持约或至少约40、50、60、70或80μg/ml、任选地至少约100μg/ml的血液浓度的量给予。在一个实施例中，NKG2A抗体以在给予抗NKG2A抗体后有效维持指定的血液浓度至少一周、任选地至少两周的量给予。在一个实施例中，特别是在旨在调节血管外组织中的NKG2A+T或NK细胞(例如用于治疗实体瘤)的情况下，抗NKG2A抗体以有效实现或维持连续在第一次和第二次(以及任选地另外的)给予之间，约或至少约50、60、70或80μg/ml、任选地至少约100μg/ml的持续的抗NKG2A抗体的(最小)血液浓度的量给予。在一个实施例中，连续的给予(例如所述第一次和第二次给予)在时间上分隔至少一周、任选地约两周。抗NKG2A抗体可以任选地以有效量和根据达到或维持如在给予周期的整个持续时间中指定的血液浓度的频率给予。

在一个实施例中，提供了用于治疗或预防个体中的实体瘤的方法，该方法包括向患有实体瘤的个体给予中和人NKG2A多肽的抑制活性的抗体持续至少一个给予周期，该给予周期包括抗NKG2A抗体的至少两次给予，其中该抗NKG2A抗体以在两次连续给予之间有效实现或维持至少4μg/ml、任选地至少10μg/ml的血管外组织(例如在肿瘤环境中)的(最小)浓度的量给予。任选地，抗NKG2A抗体以对于给予周期的整个持续时间有效实现或维持至少4μg/ml、任选地至少10μg/ml的血管外组织(例如在肿瘤环境中)的(最小)浓度的量给予。在一个实施例中，抗NKG2A抗体以在两次连续给予之间或对于给予周期的持续时间有效维持至少40μg/ml、任选地至少100μg/ml的抗NKG2A抗体的连续血液浓度的量给予。在一个实施例中，抗NKG2A抗体以在给予后(例如给予后至少一周、至少两周)，接着在允许在两次连续给予之间的循环中表达NKG2A的细胞的显著“去饱和”的期间内，有效实现至少40μg/ml、任选地至少100μg/ml的抗NKG2A抗体的血液浓度的量给予(其中在去饱和期间抗NKG2A抗体的血液浓度低于所述最小40μg/ml或至少100μg/ml)。

在一个实施例中，提供了用于治疗或预防个体中血液肿瘤的方法，该方法包括向患有血液肿瘤的个体给予中和人NKG2A多肽的抑制活性的抗体持续至少一个给予周期，该给予周期包含抗NKG2A抗体的至少两次给予，其中该抗NKG2A抗体以在两次连续给予之间有效实现或保持至少10μg/ml的抗NKG2A抗体的连续(最小)血液浓度的量给予。任选地，抗NKG2A抗体以对于给予周期的整个持续时间有效实现或保持至少10μg/ml的抗NKG2A抗体的连续(最小)血液浓度的量给予。

在一个实施例中，给予该抗体以在给予后(例如给予的当天、在给予的24或48小时内)达到至少约40μg/ml、任选地约或至少约100μg/ml的峰值血液浓度。

在一个实施例中，40μg/ml的血液浓度能够提供在血管外组织中对于NKG2A+NK细胞应答的EC₅₀浓度。在一个实施例中，100μg/ml的血液浓度能够提供在组织中(脉管系统外部，例如在肿瘤环境中)对于NKG2A+NK细胞应答的EC₁₀₀浓度。

在一个实施例中，治疗的方法包括给予一个治疗周期，该治疗周期具有(a)诱导(或加载)期，其中在抗NKG2A抗体的第一次给予和随后给予之间给予第一剂量的抗NKG2A抗体以实现或保持至少约40μg/ml、任选地至少约100μg/ml的连续(最小)血液浓度，(b)维持期，其中抗NKG2A抗体的第二次、更低剂量是足以实现或保持至少约40μg/ml、任选地至少约100μg/ml的抗NKG2A抗体的连续(最小)血液浓度直到抗NKG2A抗体的下一次给予(例如，持续整个治疗周期)的量。维持期接着诱导期。在一个实施例中，维持期包括抗NKG2A抗体的至少两次给予。在一个实施例中，维持期包括以在两次给予之间提供至少约40μg/ml、任选地至少约100μg/ml的抗NKG2A抗体的连续血液浓度的剂量和频率的至少两次给予。

在任何实施例中，血液浓度可以被规定为血液血清浓度。

在一个实施例中，在循环中或血管外组织中的NKG2A阳性淋巴细胞上，抗NKG2A抗体实质上完全中和人类患者(体内)中人CD94/NKG2A的抑制活性，持续约一周或持续约两周。

在一个实施例中，提供了治疗患有癌症(例如实体瘤)的个体的方法，该方法包括向个体给予结合并且中和NKG2A的抑制活性的抗体持续至少一个给予周期，其中抗NKG2A抗体以4-10mg/kg之间、任选地4-6mg/kg、任选地4-8mg/kg、任选地约4mg/kg、任选地约6mg/kg、任选地约8mg/kg、或任选地约10mg/kg体重的剂量静脉内每月两次地给予。

在一个实施例中，提供了治疗患有癌症(例如实体瘤)的个体的方法，该方法包括向个体给予结合并且中和NKG2A的抑制活性持续至少一个给予周期的抗体，其中该方法包含：

a.一个负荷期，其中抗体以8-10mg/kg之间，任选地约10mg/kg的初始剂量静脉内给予至少一次。

b.一个维持期，其中抗体以2-6mg/kg之间、任选地2-5mg/kg之间、任选地2-4mg/kg之间、任选地约2mg/kg、任选地约3mg/kg、任选地约4mg/kg、或任选地约6mg/kg体重的剂量每两周静脉内给予至少两次，任选地其中在维持期内的第一次给予发生在初始剂量后不超过两周内。

在一个实施例中，本文所述的治疗方案向患有癌症的个体在个体接受手术以除去癌细胞之前给予，即抗NKG2A抗体方案被用作术前治疗。

在一个实施例中，向患有癌症的个体在手术以除去癌细胞之前给予设计来实现对应于在血管外肿瘤环境中对于NKG2A+NK细胞应答的至少EC₅₀、任选地EC₁₀₀的抗NKG2A抗体浓度的治疗方案或疗程，即作为术前治疗。

在一个实施例中，向患有在其表面表达HLA-E的癌细胞的个体给予抗NKG2A抗体。任选地，在用抗NKG2A抗体治疗之前可以评估癌症的HLA-E状态。在一个实施例中，提供了组合HLA-E检测步骤以鉴定患有HLA-E+肿瘤的患者的方法；这些患者此后可以根据本文所述的治疗方法用抗NKG2A抗体治疗。

在本文的任何治疗用途或癌症治疗或预防方法的一个实施例中，个体中癌症的治疗或预防包括：

a)确定患有癌症的个体内恶性细胞的HLA-E多肽状态，并且

b)在确定患者具有在恶性细胞表面上显著表达的HLA-E多肽时，向个体给予结合并且中和NKG2A抑制活性的抗NKG2A抗体，例如，根据本文所述的任何治疗方法。任选地，抗体干扰NKG2A与HLA-E的结合。

a)确定在患有癌症的个体中恶性细胞的HLA-E核酸或多肽的表达水平，并且

b)在确定恶性细胞以任选地与参考水平相比增加的水平(例如高的值、强的表面染色等)表达HLA-E核酸或多肽时，向个体给予结合并且中和NKG2A的抑制活性的抗NKG2A抗体，例如，根据本文所述的任何治疗方法。任选地，抗体干扰NKG2A与HLA-E的结合。

在任何方法的一个实施例中，在步骤(a)中确定HLA-E多肽状态或确定表达的水平包括确定在生物样品中恶性细胞的HLA-E核酸或多肽的表达水平，以及将该水平与参考水平(例如一个值、弱的细胞表面染色等)进行比较。参考水平可以例如对应于健康个体、对应于从用抗NKG2A抗体的治疗没有得到/得到低的临床益处的个体、或对应于从用抗NKG2A抗体的治疗得到实质性临床益处的个体。生物样品以增加的水平(例如，高的值、强的表面染色、对应于个体从用抗NKG2A抗体的治疗得到实质性临床益处的水平、比对应于个体从用抗NKG2A抗体的治疗没有得到/得到低的临床益处的水平更高的水平，等等)表达HLA-E核酸或多肽的确定表明该个体患有可用抗NKG2A抗体治疗(例如根据本文所述的治疗方法)的癌症。

在一个实施例中，抗NKG2A抗体作为单一药剂治疗给予。在一个实施例中，抗NKG2A抗体在与一种或多种其他抗癌剂的组合治疗中给予。

在本文的任何治疗用途或治疗或预防方法的一个实施例中，该方法进一步包括向个体给予治疗活性量的第二种抗癌剂。在一个实施例中，该癌症是实体瘤。在一个实施例中，该第二抗癌剂是能够介导ADCC(例如，经由其Fc结构域结合人Fcγ受体，例如CD16)的抗体。在一个实施例中，介导ADCC的抗体以引起针对人类患者(体内)中的人肿瘤细胞的抗体依赖性细胞毒性的有效量给予，该人肿瘤细胞表达该第二抗癌剂所针对的多肽。

在一个实施例中，该第二抗癌剂是抗EGFR抗体。在一个实施例中，根据本发明的治疗方案用抗NKG2A抗体与抗EGFR抗体组合治疗的患者对用抗EGFR抗体的先前治疗没有足够的应答(例如，是无应答者或具有进展性疾病)，或对于用抗EGFR抗体治疗的应答具有不利的预后(在用抗NKG2A的治疗不存在的情况下)。

在一个方面，该组合根据特定的临床剂量方案，尤其是以特定的剂量的量和根据特定的给药方案(例如剂量的量和/或根据本文所提供的具体给药方案)给予(或用于给予))。

中和NKG2A多肽的抑制活性的抗体(抗NKG2A药剂)是增加表达NKG2A的NK和/或T细胞引起表达HLA-E的细胞死亡的能力的抗体。

在一个实施例中，抗NKG2A药剂通过阻断其配体HLA-E的结合降低NKG2A的抑制活性，即抗NKG2A药剂干扰NKG2A与HLA-E的结合。分别具有SEQ ID NO:2至6中任一个的重链和SEQ ID NO:7的轻链的抗体是这样的抗体的实例。

在一个实施例中，抗NKG2A抗体是以比对一种或多种活化的NKG2受体显著更高的亲和力结合NKG2A的抗体。例如，在一个实施例中，抗体以比NKG2C显著更高的亲和力结合NKG2A。在另外的或可替代的实施例中，抗体以比NKG2E显著更高的亲和力结合NKG2A。在另外的或可替代的实施例中，抗体以比NKG2H显著更高的亲和力结合NKG2A。具有SEQ ID NO:2-6中任一个的重链和SEQ ID NO:7的轻链的抗体结合NKG2A而实质上不结合NKG2C、NKG2E或NKG2H。

在另外的或可替代的实施例中，抗NKG2A抗体结合NKG2A上的相同表位和/或与具有SEQ ID NO:2-6中任一个的重链和SEQ ID NO:7的轻链的抗体竞争结合CD94/NKG2A。抗体可以是例如人或人源化抗NKG2A抗体。

在一个实施例中，抗NKG2A抗体是具有SEQ ID NO:2-6的重链序列中任一个的重链CDR和SEQ ID NO:7的轻链序列的轻链CDR的人源化抗体。提供了这样的人源化抗体的框架区(FR)中的氨基酸取代的示例性互补决定区(CDR)残基或序列和/或位点，该人源化抗体具有改进的性质例如像更低的免疫原性、改善的抗原结合或其他功能特性、和/或改善的物理化学性质例如更好的稳定性。

在其他实施例中，提供了药物组合物和试剂盒，以及使用它们的方法。

将这些方面更详细地披露于在此提供的本发明的说明书中，并且另外的方面、特征和优点将从该说明书中显而易见。

附图说明

图1显示了在x轴上列出的不同浓度(ng/ml)下的抗NKG2A抗体(humZ270也称为IPH2201)在人血液中的受体占有，并且在y轴上显示了用于受体结合的MESF信号。该抗体对NKG2A+细胞具有约4ng/mL的结合亲和力(EC₅₀)(K_D约4ng/mL)。该K_D与在其他测定中观察到的K_D值一致，尤其在Biacore测定中对与PBMC的结合亲和力和对重组NKG2A的亲和力。对于完全受体占有(EC₁₀₀)的K_D为约100ng/ml。

图2显示在92位患者I期试验中基于用单剂量的HumZ270治疗的人类患者的抗NKG2A抗体的预测受体占有。NKG2A+细胞的实质上完全(至少90％)受体饱和可以通过每两周给予0.03mg/kg来实现。受体饱和度随着剂量增加而更大，图中具有最低受体饱和度的曲线对应于最低剂量(0.01mg/kg)；每个递增的更高剂量水平对应于具有下一个更高受体饱和度的绘制线，对应于最高剂量(10mg/kg)的线具有最高的受体饱和度。可以每四周给予0.1mg/kg的剂量以维持NKG2A的实质上完全饱和。

图3A显示来自自体细胞测定的结果，显示功效所需的抗NKG2A的浓度(在表达其HLA-E配体的细胞存在下的NKG2A阻断)比提供完全受体饱和的浓度高100倍。确定在CD107动员测定中的EC₅₀浓度(提供最大值的50％的量)为约400ng/ml，并且EC₁₀₀为约10,000ng/ml(10μg/ml)。

图3B显示基于初步PK数据和来自IPH2201 I期临床试验的NCA分析，在两周一次静脉内注射后预测的IPH2201(抗NKG2A)血液浓度。用通过静脉内每两周一次给予的不同剂量达到不同的血液浓度。IPH2201浓度随着剂量增加而更大，图中具有最低血液浓度的绘制线对应于最低剂量(0.01mg/kg)；每个递增的更高剂量水平对应于提供下一个更高的血液浓度的绘制线，对应于最高剂量(10mg/kg)的线提供最高的血液浓度。4mg/kg的剂量提供约100μg/ml的初始(峰值)血液浓度，即在组织中的功效的约EC₁₀₀，以及高于30μg/ml的连续(最小)血液浓度直到两周时间点，或者，作为第四剂量，大约100μg/ml的连续(最小)血液浓度。10mg/kg的剂量提供了大约100μg/ml的连续(最小)血液浓度。

图3C显示用10mg/kg体重的负荷剂量接着用4mg/kg体重的维持剂量(显示为上线)两周一次静脉内注射后预测的IPH2201血液浓度，提供大约100μg/ml的初始和持续的血液浓度。出于比较的目的，显示了4mg/kg的恒定剂量(图中下线)，其在两周提供至少30μg/ml的连续(或最小)血液浓度。

图4A和4B显示抗NKG2A增强NK细胞对HNSCC细胞系的识别的能力。在指示的靶HNSCC细胞系存在下和在10μg/mL浓度的抗NKG2A的存在或不存在下，指示NKG2A-NK(左)或NKG2A+NK细胞(右)上的CD107(上)和CD137(下)FACS读数。细胞系根据HLA-E表面表达水平从左到右排序。每个点代表来自健康志愿者的PBMC。图4A显示具有低或高水平的表面HLA-E的对照和K562靶标，并且图4B显示抗NKG2A可以恢复具有内源性HLA-E表达的HNSCC的裂解。该作用仅在NKG2A阳性NK细胞上观察到，并且依赖于HLA-E的表达水平。

图5显示抗NKG2A的最佳剂量增强了由次优剂量的抗EGFR西妥昔单抗(ctx)诱导的NK细胞对HNSCC FaDu细胞的ADCC。

图6A和6B显示增加剂量的抗NKG2A和增加剂量的抗EGFR(西妥昔单抗)的效果。图3A显示在没有靶标和具有K562-HLA-E转染子的对照上的CD107读数。每个健康志愿者由不同的符号表示：正方形或圆形。交叉打开的符号对应于其中抗NKG2A被与0.1μg/ml西妥昔单抗共孵育的10μg/ml hIgG4同种型对照取代的条件。图6B显示了在HNSCC细胞系上的CD107读数。对于西妥昔单抗的每个浓度，对于抗NKG2A的每个浓度的符号(正方形或圆形)从左到右对应于0μg/ml、0.1μg/ml、1μg/ml、和10μg/ml。

具体实施方式

定义

如在说明书中使用的，“一种/一个(a/an)”可以意指一种/一个或多于一种/一个。如在权利要求中使用的，当与词“包括(comprising)”结合使用时，这些词“一种/一个(a/an)”可以意指一种/一个或多于一种/一个。如在此所使用的，“另一个”可以意指至少第二个或更多个。

当使用“包括”时，这可以任选地被“基本上由......组成”或通过“由......组成”代替。

NKG2A(OMIM 161555，其全部披露内容通过引用在此结合)是转录物的NKG2组的成员(Houchins等人(1991)实验医学杂志(J.Exp.Med.)173：1017-1020)。NKG2A由跨越25kb的7个外显子编码，显示一些差异剪接。与CD94一起，NKG2A形成在NK细胞、α/β T细胞、γ/δ T细胞和NKT细胞的亚群的表面上发现的异二聚体抑制受体CD94/NKG2A。与抑制性KIR受体类似，它在其细胞质结构域中具有ITIM。如本文所使用的，“NKG2A”是指NKG2A基因或编码蛋白的任何变体、衍生物或同种型。还涵盖的是与野生型、全长NKG2A共享一种或多种生物学性质或功能并且共享至少70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的核苷酸或氨基酸一致性的任何核酸或蛋白质序列。人NKG2A在以下序列的3个结构域中包含233个氨基酸，其中胞质结构域包含残基1-70、跨膜区域包含残基71-93、并且胞外区域包含残基94-233：

MDNQGVIYSDLNLPPNPKRQQRKPKGNKSSILATEQEITYAELNLQKASQDFQGND-KTYHCKDLPSAPEKLIVGILGIICLILMASVVTIVVIPSTLIQRHNNSSLNTRTQKARHCGH-CPEEWITYSNSCYYIGKERRTWEESLLACTSKNSSLLSIDNEEEMKFLSIISPSS-WIGVFRNSSHHPWVTMNGLAFKHEIKDSDNAELNCAVLQVNRLKSAQCGSSIIYHCKHKL(SEQ ID NO：1).

NKG2C(OMIM 602891，其全部披露内容通过引用在此结合)和NKG2E(OMIM 602892，其全部披露内容通过引用在此结合)是转录物的NKG2组的两个其他成员(Gilenke等人(1998)免疫遗传学(Immunogenetics)48:163-173)。CD94/NKG2C和CD94/NKG2E受体是在淋巴细胞例如NK细胞和T细胞亚群表面上发现的活化受体。

HLA-E(OMIM 143010，其全部披露内容通过引用在此结合)是在细胞表面上表达并且受肽结合调节的非经典MHC分子，例如，从其他MHCI类分子的信号序列衍生的片段。也已经鉴定了HLA-E的可溶性版本。除了其T细胞受体结合性质，HLA-E通过特异性结合CD94/NKG2A、CD94/NKG2B、和CD94/NKG2C而结合自然杀伤(NK)细胞、自然杀伤T细胞(NKT)和T细胞(α/β和γ/δ)的亚组(参见例如布罗(Braud)等人(1998)自然(Nature)391:795-799，其全部披露内容通过引用在此结合)。HLA-E的表面表达保护靶细胞免受CD94/NKG2A+NK、T、或NKT细胞克隆的裂解。如本文所使用的，“HLA-E”是指HLA-E基因或编码蛋白的任何变体、衍生物或同种型。还涵盖的是与野生型、全长HLA-E共享一种或多种生物学性质或功能并且共享至少70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的核苷酸或氨基酸一致性的任何核酸或蛋白质序列。

在本发明的上下文中，“CD94/NKG2A阳性淋巴细胞”是指在细胞表面上表达CD94/NKG2A的淋巴谱系的细胞(例如NK、NKT和T细胞)，其可以通过例如使用特异性识别在CD94和NKG2A上的组合表位或单独在NKG2A上的表位的抗体的流式细胞术来检测。“CD94/NKG2A阳性淋巴细胞”还包括淋巴来源的永生细胞系(例如NKL、NK-92)。

在本发明的上下文中，“降低NKG2A的抑制活性”、“中和NKG2A”或“中和NKG2A的抑制活性”是指其中CD94/NKG2A在其对细胞内过程产生负面影响的能力上受到抑制而导致淋巴细胞反应如细胞因子释放和细胞毒性反应的过程。这可以例如在基于NK或T细胞的细胞毒性测定中测量，其中治疗化合物刺激CD94/NKG2A阳性淋巴细胞杀死HLA-E阳性细胞的能力被测量。在一个实施例中，抗体制剂导致CD94/NKG2A限制性淋巴细胞的细胞毒性增加至少10％、优选地淋巴细胞细胞毒性增加至少40％或50％、或更优选地NK细胞毒性增加至少70％，并且参考所述的细胞毒性测定。如果抗NKG2A抗体减少或阻断CD94/NKG2A与HLA-E的相互作用，那么其可以增加CD94/NKG2A限制性淋巴细胞的细胞毒性。这可以例如在标准的4小时体外细胞毒性测定中使用例如表达CD94/NKG2A的NK细胞和表达HLA-E的靶细胞进行评价。此类NK细胞不能有效地杀死表达HLA-E的靶标，因为CD94/NKG2A识别HLA-E，导致阻止淋巴细胞介导的细胞溶解的抑制性信号传导的启动和传播。这样的体外细胞毒性测定可以通过本领域中熟知的标准方法进行，如例如在Coligan等人，编辑，免疫学现代方法(CurrentProtocols in Immunology)，格林出版协会(Greene Publishing Assoc.)和威利国际科学公司(Wiley Interscience)，纽约州(1992，1993)中所描述的。评估抗体刺激淋巴细胞杀死靶细胞(例如P815、K562细胞或合适的肿瘤细胞)的能力的铬释放和/或其他参数也被披露于西沃里(Sivori)等人，实验医学杂志(J.Exp.Med.)1997；186:1129-1136中；瓦伊塔尔(Vitale)等人，实验医学杂志(J.Exp.Med.)1998；187:2065-2072；Pessino等人，实验医学杂志(J.Exp.Med.)1998；188:953-960；内里(Neri)等人，临床及诊断实验室免疫学(Clin.Diag.Lab.Immun.)2001；8:1131-1135；彭德(Pende)等人，实验医学杂志(J.Exp.Med.)1999；190:1505-1516，其每一个的全部披露内容通过引用结合在此)。在添加NK细胞之前，用⁵¹Cr标记靶细胞，然后作为杀死的结果，估计杀死与⁵¹Cr从细胞到培养基的释放成比例。添加阻止CD94/NKG2A与HLA-E结合的抗体导致经由CD94/NKG2A的抑制信号传导的启动和传播的阻止。因此，添加这些药剂导致靶细胞的淋巴细胞介导的杀死的增加。该步骤由此鉴定通过例如阻断配体结合来阻止CD94/NKG2A诱导的负的信号传导的药剂。在具体的⁵¹Cr释放细胞毒性测定中，表达CD94/NKG2A的NK效应细胞可以杀死HLA-E阴性LCL721.221靶细胞，但是更不太能够杀死表达HLA-E的LCL 721.221-Cw3对照细胞。相比之下，缺乏CD94/NKG2A的YTS效应细胞有效地杀死两种细胞系。因此，由于HLA-E诱导的经由CD94/NKG2A的抑制性信号传导，NK效应细胞更低效地杀死HLA-E⁺LCL 721.221-Cw3细胞。当在这样的⁵¹Cr释放细胞毒性测定中，NK细胞与根据本发明的封闭性抗CD94/NKG2A抗体预孵育时，以抗体浓度依赖性方式，更有效地杀死表达HLA-E的LCL 721.221-Cw3细胞。抗NKG2A抗体的抑制活性(即细胞毒性增强潜能)也能以许多其他方式中的任一种(例如通过其对细胞内游离钙的影响)来评估，如例如在西沃里(Sivori)等人，实验医学杂志(J.Exp.Med.)1997；186:1129-1136(将其披露内容通过引用在此结合)中描述的。NK细胞细胞毒性的活化可以例如通过测量细胞因子产生(例如IFN-γ产生)或细胞毒性标记物(例如CD107或CD137动员)的增加来评价。在一个示例性方案中，通过细胞表面和胞质内染色以及在培养4天后通过流式细胞术的分析来评估来自PBMC的IFN-γ产生。简言之，在培养的最后4小时以5μg/ml的终浓度添加布雷菲德菌素A(西格玛-奥德里奇公司(Sigma Aldrich))。然后在透化(IntraPrep^TM；贝克曼库尔特公司(Beckman Coulter))和用PE-抗IFN-γ或PE-IgG1(Pharmingen公司)染色之前，将细胞与抗CD3和抗CD56mAb一起孵育。使用ELISA(GM-CSF：DuoSet Elisa，研发系统公司(R&D Systems)明尼阿波利斯，明尼苏达州(Minneapolis，MN)，IFN-γ：OptEIA set，Pharmingen公司)在上清液中测量来自多克隆活化的NK细胞的GM-CSF和IFN-γ产生。

关于抗NKG2A结合剂(例如抗体)，每当在这整个说明书内提到“治疗癌症”或类似物，这意指：(a)治疗癌症的方法，所述方法包括以下步骤：以允许治疗癌症的剂量(治疗有效量)、优选地以如在此指定的剂量(量)，向需要此类治疗的个体、动物(尤其是人)给予(针对至少一种治疗)一种抗NKG2A结合剂(优选地在一种药学上可接受的载体材料中)；(b)使用抗NKG2A结合剂用于治疗癌症，或使用抗NKG2A结合剂用于所述治疗(尤其在人中)；(c)使用抗NKG2A结合剂用于制造用于治疗癌症的药物制剂，使用抗NKG2A结合剂用于制造用于治疗癌症的药物制剂(包括混合抗NKG2A结合剂与药学上可接受的载体)或包含有效剂量的适用于治疗癌症的抗NKG2A结合剂的药物制剂的方法；或(d)a)、b)、以及c)的任何组合，这是根据本主题，本主题允许在提交本申请的国家取得专利权

如在此所使用的术语“活检样品”被定义为去除组织用于检查例如以建立诊断的目的。活检样品类型的实例包括通过施加抽吸，例如通过一个附加至注射器的针头；通过仪器去除组织的一个片段；通过用适当的仪器通过一个内窥镜去除；通过手术切除例如整个病损；等等。

如在此所使用，术语“抗体”是指多克隆和单克隆抗体。取决于重链中恒定区的类型，抗体可以指定为以下五个大类中的一种：IgA、IgD、IgE、IgG、和IgM。这些中有几个被进一步分成亚类或同种型，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4及类似物。一种示例性免疫球蛋白(抗体)结构单元包括四聚体。每个四聚体由两对相同的多肽链构成，每对包括一条“轻”链(约25kDa)和一条“重”链(约50-70kDa)。每个链的N端定义了具有约100至110个或更多个氨基酸的可变区，主要负责抗原识别。术语可变轻链(V_L)和可变重链(V_H)分别指这些轻链和重链。对应于不同类别的免疫球蛋白的重链恒定结构域分别被命名为“α”、“δ”、“ε”、“γ”和“μ”。不同类别的免疫球蛋白的亚单元结构和三维构型是熟知的。IgG是在此采用的示例性抗体类别，因为它们是生理状况下最常见的抗体且在实验室条件下最容易制备。任选地，该抗体是单克隆抗体。抗体的具体实例是人源化的、嵌合的、人的或其他适合人的抗体。“抗体”还包括在此描述的任一抗体的任一片段或衍生物。

术语“特异地结合到”意指优选地在竞争性结合测定中抗体可以结合到结合配偶体(例如NKG2A)上，正如使用重组体形式的蛋白、其中的表位、或存在于分离的靶细胞的表面上的天然蛋白所评估。用于确定特异性结合的竞争性结合测定以及其他方法在本领域内是熟知的。例如，可以经由放射性标记、物理方法如质谱法、或使用例如细胞荧光分析(例如FACScan)检测的直接或间接荧光标记来检测结合。结合高于用对照看到的量，非特异性药剂预示该药剂结合靶标。特异性结合NKG2A的药剂可以结合单独的NKG2A或作为与CD94的二聚体的NKG2A。

当抗体被称为与一种具体的单克隆抗体竞争时，它意指在使用重组体分子(例如NKG2A)或表面表达的分子(例如NKG2A)的结合测定中，该抗体与该单克隆抗体竞争。例如，如果在结合测定中测试抗体减少具有SEQ ID NO:2-6中任一个的重链和SEQ ID NO:7的轻链的抗体与NKG2A多肽或表达NKG2A的细胞结合，那么该抗体被称为分别与这样的抗体“竞争”。

如本文使用的，术语“亲和力”意指抗体与表位结合的强度。抗体的亲和力通过解离常数Kd(定义为[Ab]x[Ag]/[Ab-Ag])给出，其中[Ab-Ag]是抗体-抗原复合体的摩尔浓度，[Ab]是未结合的抗体的摩尔浓度，并且[Ag]是未结合的抗原的摩尔浓度。亲和常数Ka被定义为1/Kd。用于确定mAb的亲和力的方法可以发现于哈洛(Harlow)等人，《抗体：实验室手册》(Antibodies:A Laboratory Manual)，冷泉港实验室出版社(Cold Spring HarborLaboratory Press)，冷泉港实验室(Cold Spring Harbor)，纽约(N.Y.)，1988)，科尔根(Coligan)等人编著，《当代免疫学实验手册》(Current Protocols in Immunology)，格林出版联盟和威力跨学科(Greene Publishing Assoc.and Wiley Interscience)，纽约，(1992,1993)，以及马勒(Muller)，《酶学方法》(Meth.Enzymol.)92:589-601(1983)，将这些文献通过引用完全结合在此。本领域中熟知的用于确定mAb亲和力的一种标准的方法是使用表面等离子体共振(SPR)筛选(例如通过用BIAcore^TMSPR分析装置分析)。

在本文的上下文中，“决定簇”指明多肽上相互作用或结合的位点。

术语“表位”是指抗原决定簇，并且是在抗原上与抗体结合的面积或区域。一个蛋白表位可以包括直接涉及结合的氨基酸残基以及被特异性抗原结合抗体或肽有效地阻断的氨基酸残基(即抗体“足迹”内的氨基酸残基)。它是可以与例如一种抗体或一种受体组合的复杂抗原分子上的最简单形式或最小结构区域。表位可以是直链的或构象性的/结构性的。术语“直链的表位”被定义为由多个氨基酸残基组成的一个表位，这些氨基酸残基在氨基酸的线性序列上(一级结构)是连续的。术语“构象性表位或结构性表位”被定义为由多个氨基酸残基构成的表位，这些氨基酸残基不全是连续性的，并且因此表示了通过分子折叠(二级、三级和/或四级结构)而彼此邻近的氨基酸线性序列的分离的部分。构象性表位取决于三维结构。因此，术语“构象性”通常与“结构性”可互换地使用。

术语“药剂”在本文中用于表示化合物、化学化合物的混合物、生物大分子、或由生物学材料制成的提取物。术语“治疗剂”是指一种具有生物活性的试剂。

出于本文的目的，“人源化”或“人”抗体是指一个或多个人类免疫球蛋白的恒定和可变框架区与动物免疫球蛋白的结合区(例如CDR)相融合的抗体。这类抗体被设计成保持衍生出这些结合区的非人类抗体的结合特异性，但是却要避免对抗非人类抗体的免疫反应。此类抗体可获自转基因小鼠或其他动物，所述动物已经被“工程化”以产生响应于抗原激发的特异性人抗体(参见，例如，格林(Green)等人(1994)自然遗传学(Nature Genet)(7:13；朗伯格(Lonberg)等人(1994)《自然》(Nature)368:85；泰勒(Taylor)等人(1994)《国际免疫学》(Int Immun)6:579，将其全部传授内容通过引用结合在此)。完全的人抗体还可通过基因或染色体转染法连同噬菌体展示技术来构建，这些技术在本领域中已知(参见，例如麦卡弗蒂(McCafferty)等人.(1990)《自然》(Nature)348:552-553)。也可以通过体外活化的B细胞产生人抗体(参见例如美国专利号5,567,610和5,229,275，其通过引用以其全文并入)。

“嵌合抗体”是一种抗体分子，其中(a)恒定区或其一部份被改变、替换或交换，这样使得抗原结合位点(可变区)被连接至不同的或改变的类别、效应子功能和/或种类的恒定区，或连接至赋予该嵌合抗体新特性的完全不同的分子，例如酶、毒素、激素、生长因子、药物等；或者(b)可变区或其一部份被具有不同的或改变的抗原特异性的可变区改变、替换或交换。

术语“Fc结构域”、“Fc部分”以及“Fc区域”是指抗体重链的C端片段，例如人类γ(伽马)重链的从氨基酸约(aa)230至约aa 450或它在其他类型的抗体重链(例如针对人类抗体的α、δ、ε和μ)中的对应序列，或其天然发生的同种异型。除非另外说明，否则贯穿本披露使用了针对免疫球蛋白通常所接受的卡巴特氨基酸编号(参见卡巴特(Kabat)等人，1991，免疫学目的蛋白质序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)，第5版，美国国立卫生研究院，公共卫生署(United States Public Health Service,National Institute of Health)，马里兰州贝塞斯达(Bethesda,MD))。

术语“分离的”、“纯化的”或“生物学纯的”是指实质上或基本上不含在其天然状态下发现的通常伴随其的组分的物质。典型地使用分析化学技术例如聚丙烯酰胺凝胶电泳法或高效液相色谱法来确定纯度和均匀性。制剂中存在的主要种类的蛋白实质上是纯化的。

术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在此可互换地使用，是指氨基酸残基的聚合物。这些术语适用于氨基酸聚合物，其中一个或多个氨基酸残基是相应天然存在的氨基酸的人造化学模拟剂，并且适用于天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚合物。

当提及例如细胞或核酸、蛋白或载体时使用术语“重组”是指该细胞、核酸、蛋白或载体已经通过引入异源性核酸或蛋白或通过改变天然核酸或蛋白而被修饰，或者表示该细胞来源于如此修饰的细胞。因此，例如，这些重组细胞表达在细胞的天然形式(非重组体)中未发现的基因或表达以其他方式异常表达的、低表达的或根本不表达的天然基因。

在本文的上下文中，“结合”多肽或表位的术语抗体指定一种结合所述具有特异性和/或亲和性的决定簇的抗体。

术语“一致性”或“一致的”当用于两种或更多种多肽的序列之间的关系时，是指多肽之间的序列关联程度，如通过两个或更多个氨基酸残基的链之间匹配的数目来确定的。“一致性”用通过特定的数学模型或计算机程序(即“算法”)来解决的间隙比对(如果存在话)测量了两个或更多个序列中较小者之间一致性匹配的百分比。相关多肽的一致性可以通过已知方法容易地计算出。这样的方法包括但不限于在以下文献中描述的那些：计算分子生物学(Computational Molecular Biology)，莱斯克(Lesk,A.M.)，编辑，纽约牛津大学出版社(Oxford University Press,New York)，1988；生物计算：信息学和基因组项目(Biocomputing:Informatics and Genome Projects)，史密斯(Smith,D.W.)，编辑，纽约学术出版社(Academic Press,New York)，1993；序列数据的计算机分析(Computer Analysisof Sequence Data)，第1部分，格里芬(Griffin,A.M.)和格里芬(Griffin,H.G.)，编辑，新泽西州胡玛纳出版社(Humana Press,New Jersey)，1994；分子生物学的序列分析(Sequence Analysis in Molecular Biology)，von Heinje,G.，学术出版社(AcademicPress)，1987；序列分析引物(Sequence Analysis Primer)，格里布斯考夫(Gribskov,M.)，德弗罗(Devereux,J.)，编辑，纽约M.Stockton出版社，1991；以及卡里洛(Carillo)等人，SIAM，应用数学杂志(Applied Math.)48,1073(1988)。

用于确定一致性的方法被设计为在测试的序列之间给出最大的匹配。确定一致性的方法描述于可公开获得的计算机程序中。用于确定两个序列之间一致性的计算机程序方法包括GCG程序包，包括GAP(德弗罗(Devereux)等人，核酸研究(Nucl.Acid.Res.)12,387(1984)；威斯康星州麦迪逊市，威斯康星大学，遗传学计算机组)、BLASTP、BLASTN和FASTA(阿尔丘尔(Altschul)等人，分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)215,403-410(1990))。BLASTX程序可以公开地获自美国国家生物技术信息中心(NCBI)以及其他来源(BLAST手册，阿尔丘尔(Altschul)等人，马里兰州贝塞斯达市NCB/NLM/NIH，20894；阿尔丘尔(Altschul)等人，同上)。熟知的史密斯-沃特曼算法(Smith Waterman algorithm)也可以用来确定一致性。

抗体的产生

抗NKG2A药剂结合人类CD94/NKG2A受体的细胞外部分并且减少在CD94/NKG2A阳性的淋巴细胞表面表达的人CD94/NKG2A受体的抑制活性。在一个实施例中，药剂与HLA-E竞争结合CD94/NKG2A，即药剂干扰并降低CD94/NKG2A与其配体HLA-E之间的相互作用。抗体可以结合在CD94和NKG2A上的组合表位或单独的NKG2A上的表位。在一个实施例中，该抗体结合在NKG2A上的表位，该表位至少部分地与HLA-E结合位点重叠。

在一个方面，抗NKG2A药剂是选自全人抗体、人源化抗体和嵌合抗体的抗体。在一个方面，该药剂包含源自于人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体的恒定结构域。在一个方面，该药剂是一种抗体的片段，该抗体选自IgA、IgD、IgG、IgE和IgM抗体。在一个方面，该药剂是一种抗体片段，该抗体片段选自Fab片段、Fab'片段、Fab'-SH片段、F(ab)2片段、F(ab')2片段、Fv片段、重链Ig(美洲驼或骆驼Ig)、V_HH片段、单结构域FV和单链抗体片段。在一个方面，该药剂是源自于合成的或半合成的抗体的分子，该分子选自scFV、dsFV、微型抗体、双抗体、三抗体、κ体、IgNAR；和多特异性抗体。

优选地，抗NKG2A抗体不显示与Fcγ受体(例如CD16)的实质特异性结合。这样的抗体可以包含已知不结合Fc受体的各种重链的恒定区。一个这样的实例是人IgG4恒定区。在一个实施例中，IgG4抗体包含修饰以阻止体内半抗体的形成(fab臂交换)，例如，该抗体包含在残基241(对应于根据EU索引的位置228)中包含丝氨酸至脯氨酸突变的IgG4重链(卡巴特等人，“免疫学目的蛋白质序列”，第5版，NIH，马里兰州贝塞斯达，1991)。这样的修饰的IgG4抗体将在体内保持完整并且保持与NKG2A的二价(高亲和力)结合，与天然的IgG4相反，该天然的IgG4将在体内经历fab臂交换，这样使得它们以可以改变结合亲和力的单价方式结合NKG2A。可替代地，不包含一个或多个恒定区例如Fab或F(ab')2片段的抗体片段可以用于避免Fc受体结合。可以根据本领域已知的方法评估Fc受体结合，包括例如在BIACORE测定中测试抗体与Fc受体蛋白的结合。而且，可以使用任何人抗体类型(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)，其中Fc部分被修饰以最小化或消除与Fc受体的结合(参见例如WO03101485，其披露内容通过引用结合在此)。用于评估Fc受体结合的测定例如基于细胞的测定是本领域内熟知的，并且描述于例如WO 03101485中。

抗NKG2A抗体可以有利地以比结合NKG2C的KD低至少100倍的KD结合NKG2A的细胞外部分。在一个方面，该抗体以比结合NKG2C的KD低至少150、200、300、400或10,000倍的KD结合NKG2A的细胞外部分。在另一个方面，该抗体以比结合NKG2C、NKG2E和/或NKG2H分子的KD低至少100倍的KD结合NKG2A的细胞外部分。在另外的方面，该抗体以比结合NKG2C、NKG2E和/或NKG2H分子的KD低至少150、200、300、400或10,000倍的KD结合NKG2A的细胞外部分。这可以例如在BiaCore实验中测量，其中测量了药剂结合固定化的CD94/NKG2A(例如从表达CD94/NKG2的细胞中纯化的或在生物系统中产生的)的细胞外部分的能力，并且将其与在相同测定中药剂与类似产生的CD94/NKG2C和/或其他CD94/NKG2变体的结合进行比较。可替代地，可以测量抗体与天然表达或过量表达(例如在瞬时或稳定转染后)CD94/NKG2A的细胞的结合，并且将其与表达CD94/NKG2C和/或其他CD94/NKG2变体的细胞的结合进行比较。抗NKG2A抗体可以任选地结合NKG2B，该NKG2B是与CD94一起形成抑制性受体的NKG2A剪接变体。在一个实施例中，可以使用在美国专利号8,206,709中披露的方法测量亲和力，例如通过如在美国专利号8,206,709的实例8中所示的Biacore评估与共价固定的NKG2A-CD94-Fc融合蛋白的结合，其披露内容通过引用结合在此。

抗体可以例如具有在0.5-10ng/ml之间、任选地1-5ng/ml、任选地1-10ng/ml、任选地1-20ng/ml、例如约4ng/ml的对表达NKG2A的细胞的结合(高亲和力)的EC₅₀。表达NKG2A的细胞可以是例如在人PBMC中表达NKG2A的细胞。在一个实施例中，表达NKG2A的细胞是用来表达CD94/NKG2A的细胞，例如稳定地过量表达CD94/NKG2A的Ba/F3细胞，如在美国专利号8,206,709的实例13中所示，其披露内容通过引用并入。在一个实施例中，抗体具有小于10^-9M、任选地小于10^-10M、或任选地小于10^-11M、任选地在10^-10M和10^-12M之间、任选地在10^-10M和10^-11M之间的对于人NKG2A多肽的结合亲和力(K_D)，任选地其中结合亲和力是二价的。可以评估例如对于结合单链NKG2A-CD94-mFc构建体的亲和力，如在美国专利号7,932,055中所述，其披露内容通过引用并入)。

抗NKG2A抗体可以是人或人源化抗体，例如包含来自选自例如VH1_18、VH5_a、VH5_51、VH1_f、和VH1_46、和JH6J区段的人受体序列的VH人受体构架，或本领域中已知的其他人种系VH构架序列。VL区人受体序列可以是例如VKI_02/JK4。

在一个实施例中，抗体是基于抗体Z270的人源化抗体。不同的人源化Z270VH链示于SEQ ID NO:2-6(可变区结构域氨基酸已加下划线)中。人源化Z270VH轻链示于SEQ IDNO:7中。HumZ270抗体也被披露于美国专利号8,206,709(其披露内容通过引用结合在此)中。HumZ270VH6(SEQ ID NO:2)是基于VH5_51；HumZ270VH1(SEQ ID NO:3)是基于VH1_18；humZ270VH5(SEQ ID NO:4)是基于VH5_a；humZ270VH7(SEQ ID NO:5)是基于VH1_f；并且humZ270VH8(SEQ ID NO:6)是基于VH1_46；全部具有JH6J区段。这些抗体中的每一个保持与NKG2A的高亲和力结合，具有低的对该抗体的宿主免疫应答的可能性，因为每一个人源化构建体的卡巴特CDR-H2的6个C-末端氨基酸残基与人受体构架相同。使用比对程序VectorNTI，获得humZ270VH1以及humZ270VH5、-6、-7、和-8之间的以下序列一致性：78.2％(VH1对VH5)、79.0％(VH1对VH6)、88.7％(VH1对VH7)和96.0％(VH1对VH8)。

在一个方面，该药剂包含(i)SEQ ID NO:2-6中任一个、或与其具有至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％或99％一致的氨基酸序列的重链可变区，和(ii)SEQ IDNO:7、或与其具有至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％或99％一致的氨基酸序列的轻链可变区。在一个方面，该药剂包含(i)含有SEQ ID NO:2-6中任一个的氨基酸序列、或与其具有至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％或99％一致的氨基酸序列的重链，和(ii)含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列、或与其具有至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％或99％一致的氨基酸序列的轻链。具有包含SEQ ID NO:2-6中任一个的序列的重链和包含SEQ ID NO:7的序列的轻链的抗体中和NKG2A的抑制活性，但是实质上不结合活化受体NKG2C、NKG2E或NKG2H。此外，该抗体与HLA-E竞争结合细胞表面上的NKG2A。在一个方面，该药剂包含HCDR1、HCDR2和/或HCDR3序列，这些序列源自于具有SEQ ID NO:2-6中任一个的氨基酸序列的重链。在一个方面，该药剂包含LCDR1、LCDR2和/或LCDR3序列，这些序列源自于具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链。

重链(可变区已加下划线)

VH6：

EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWMNWVRQMPGKGLEWMGRIDPYD- SETHYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARGGYDFDVGTLYWFFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGG-PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYR

VVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK

(SEQ ID NO：2)

VH1：

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMNWVRQAPGQGLEWMGRIDPYDSETHYA- QKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARGGYDFDVGTLYWFFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG LYS-LSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(SEQ ID NO：3)

VH5：

EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYSFTSYVVMNWVRQMPGKGLEWMGRIDPYD- SETHYSPSFQGHVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARGGYDFDVGTLY- WFFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(SEQ ID NO：4)

VH7：

EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCKVSGYTFTSYWMNWVQQAPGKGLEWMGRIDPYDSETHYAEKFQGRVTITADTSTD TAYMELSSLRSEDTAVYYCATGGYDFDVGTLYWFFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(SEQ IDNO：5)

VH8：

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMNWVRQAPGQGLEWMGRIDPYDSETHYAQKFQGRVTMTRDTSTS TVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYDFDVGTLYWFFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVL DSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(SEQ IDNO：6)

轻链

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASENIYSYLAWYQQKPGKAPKLLIYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYGTPRTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO：7)

在一个方面，抗NKG2A抗体是包含CDR-H1、CDR-H2、和CDR-H3的抗体，该CDR-H1对应于SEQ ID NO：2-6中任一个的残基31-35(氨基酸序列SYWMN(SEQ ID NO：8))，该CDR-H2对应于SEQ ID NO：2-6中任一个的残基50-60(氨基酸序列RIDPYDSETHY(SEQ ID NO：9))(任选地当包括人起源的6个末端氨基酸时为50-66，即对于VH6重链为序列RIDPYDSETHYSPSFQG(SEQID NO：10))、对于VH1重链为序列RIDPYDSETHYAQKLQG(SEQ ID NO：11)等)，并且该CDR-H3对应于SEQ ID NO：2-6中任一个的残基99-114(根据卡巴特为95-102)(GGYDFDVGTLYWFFDV(SEQ ID NO：12))。在一个实施例中，CDR-H2对应于SEQ ID NO：2-6中任一个的残基50-66。任选地，CDR可以包含一个、两个、三个、四个或更多个氨基酸取代。

在一个方面，抗NKG2A抗体是包含CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的抗体，该CDR-L1对应于SEQ ID NO：7的残基24-34(氨基酸序列RASENIYSYLA(SEQ ID NO：13))，CDR-L2对应于SEQID NO：7的残基50-56(氨基酸序列NAKTLAE(SEQ ID NO：14))，并且CDR-L3对应于SEQ IDNO：7的残基89-97(氨基酸序列QHHYGTPRT(SEQ ID NO：15))。任选地，CDR可以包含一个、两个、三个、四个或更多个氨基酸取代。

在一个方面，抗NKG2A抗体是包含CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的抗体，该CDR-H1对应于SEQ ID NO：2-6中任一个的残基31-35，该CDR-H2对应于SEQ IDNO:2-6中任一个的残基50-60(任选地50-66)，并且该CDR-H3对应于SEQ ID NO:2-6中任一个的残基99-114(根据卡巴特的95-102)，该CDR-L1对应于SEQ ID NO:7的残基24-34，该CDR-L2对应于SEQ ID NO:7的残基50-56，并且该CDR-L3对应于SEQ ID NO:7的残基89-97。

在一个方面，该药剂是针对任何前述抗体结合的CD94/NKG2A表位产生的全人抗体。

应当领会的是，虽然可以使用前述抗体，但是可以制备其他抗体。例如，NKG2A的任何片段、优选地但不唯一地是人类NKG2A的任何片段、或NKG2A片段的任何组合，可以用作免疫原以产生抗体，并且这些抗体可以识别在NKG2A多肽内的任何位置处的表位，只要它们能在如本文描述的表达NKG2A的NK细胞上这样做。最优选地，该表位是由具有SEQ ID NO:2-6中任一个的重链和SEQ ID NO:7的轻链的抗体特异性识别的表位。

在一个方面，该药剂与美国专利号8,206,709(其披露内容通过引用结合在此)中披露的在humZ270抗体竞争结合人CD94/NKG2A受体的细胞外部分。竞争性结合可以例如在BiaCore实验中测量，其中测量了药剂结合humZ270饱和的固定化的CD94/NKG2A受体的细胞外部分(例如从表达CD94/NKG2的细胞中纯化、或在生物系统中产生)的能力。可替代地，测量药剂与细胞的结合，该细胞天然地表达或过量表达(例如在瞬时或稳定转染后)CD94/NKG2A受体并且已经用饱和剂量的Z270预孵育。在一个实施例中，可以使用在美国专利号8,206,709中披露的方法，例如通过如美国专利号8,206,709的实例15中所示的流式细胞术评估与Ba/F3-CD94-NKG2A细胞的结合来测量竞争性结合，这些专利的披露内容通过引用结合在此。

抗NKG2A抗体可以掺入包含浓度从1mg/ml至500mg/ml的药物配制品中，其中所述配制品具有从2.0至10.0的pH。该配制品可以进一步包含缓冲体系、一种或多种防腐剂、一种或多种张力剂、一种或多种螯合剂、稳定剂和表面活性剂。在一个实施例中，药物配制品是水性配制品，即包含水的配制品。此类配制品典型地常是溶液或悬浮液。在进一步的实施例中，药物配制品是水性溶液。术语“水性配制品”定义为包含至少50％w/w水的配制品。同样，术语“水性溶液”定义为包含至少50％w/w水的溶液，术语“水性悬浮液”定义为包含至少50％w/w水的悬浮液。

在另一个实施例中，药物配制品是冷冻干燥的配制品，在使用前医生或患者向其中添加溶剂和/或稀释剂。

在另一个实施例中，药物配制品是干燥的配制品(例如冷冻干燥或喷雾干燥的)，可立即使用而需无任何预先溶解。

在进一步方面，药物配制品包含此类抗体的水性溶液和缓冲液，其中抗体以1mg/ml或以上的浓度存在，且其中所述配制品具有从约2.0至约10.0的pH。

在另一个实施例中，配制品的pH在选自从约2.0至约10.0、约3.0至约9.0、约4.0至约8.5、约5.0至约8.0和约5.5至约7.5组成的列表的范围内。

在进一步实施例中，缓冲液选自下组，该组由以下各项组成：乙酸钠、碳酸钠、柠檬酸盐、甘氨酰甘氨酸、组氨酸、甘氨酸、赖氨酸、精氨酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸钠、和三(羟甲基)-氨基甲烷、N-二甘氨酸、两性离子缓冲剂(tricine)、苹果酸、琥珀酸盐、马来酸、富马酸、酒石酸、天冬氨酸或其混合物。这些特定缓冲液中的每一种构成本发明的可替代的实施例。

在进一步实施例中，该配制品进一步包括药学上可接受的防腐剂。在进一步实施例中，该配制品进一步包括等渗剂。在进一步实施例中，该配制品还包含螯合剂。在本发明的进一步实施例中，该配制品进一步包括稳定剂。在进一步实施例中，该配制品进一步包括表面活性剂。为了方便起见，参考雷明顿(Remington)：药学科学与实践(The Science andPractice of Pharmacy)，第19版，1995。

可能的是其他成分可以存在于本发明的药物配制品中。此类另外的成分可以包括润湿剂、乳化剂、抗氧化剂、填充剂、张力调节剂、螯合剂、金属离子、油质载体、蛋白质(例如人血清白蛋白、明胶或蛋白质)和两性离子(例如氨基酸如甜菜碱、牛磺酸、精氨酸、甘氨酸、赖氨酸和组氨酸)。当然，此类另外的成分不应不利地影响本发明的药物配制品的总体稳定性。

含有抗体的药物组合物可以在的几个部位，例如在局部部位，例如皮肤和粘膜部位、在旁路吸收的部位，例如在动脉中、在静脉中、在心脏中和在涉及吸收的部位，例如在皮肤中、皮肤下、在肌肉中或腹部中向对此类治疗有需要的患者给予。药物组合物的给予可以通过以下给予途径向对此类治疗有需要的患者给予：例如皮下、肌肉内、腹膜内、静脉内、舌、舌下、颊、口腔内、口服、胃和肠内、鼻、肺(例如通过细支气管和绒毛膜或其组合)、表皮、真皮、透皮、阴道、直肠、眼睛(例如通过结膜)、输尿管和胃肠外。

恶性肿瘤的诊断和治疗

描述了在个体中用于诊断、预后、监测、治疗和预防癌症的方法。尽管本文所述的方法对于治疗实体瘤特别有用，但是本文所述的治疗方案也可用于多种血液癌症、连同感染性疾病、以及炎症和自身免疫性疾病。本发明的方法和组合物用于例如治疗多种癌症和其他增生性疾病，包括但不限于癌，包括膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、胃癌、子宫颈癌、甲状腺癌和皮肤癌，包括鳞状细胞癌；淋巴系造血肿瘤，包括白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、急性成淋巴细胞白血病、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、毛状细胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤、以及多发性骨髓瘤；髓系造血肿瘤，包括急性和慢性骨髓性白血病、早幼粒细胞性白血病和骨髓增生异常综合征；间充质起源肿瘤，包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；其他肿瘤，包括黑色素瘤、精原细胞瘤、畸胎癌、成神经细胞瘤和神经胶质瘤；中枢和周围神经系统肿瘤，包括星形细胞瘤、成神经细胞瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；间充质起源肿瘤，包括纤维肉瘤、横纹肌肉瘤和骨肉瘤；以及其他肿瘤，包括黑色素瘤、着色性干皮病、角化棘皮瘤，精原细胞瘤、甲状腺滤泡性癌和畸胎癌。

淋巴系的造血肿瘤的实例包括例如T细胞和B细胞肿瘤，包括但不限于T细胞失调，例如T-幼淋巴细胞白血病(T-PLL)，包括小细胞和脑样细胞类型；大颗粒淋巴细胞白血病(LGL)，优选T细胞类型；塞扎里综合征(SS)；成人T细胞白血病(ATLL)；T-NHL肝脾淋巴瘤；外周/后胸腺T细胞淋巴瘤(多形性和免疫母细胞亚型)；血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤；血管中心(鼻)T细胞淋巴瘤；间变性(Ki 1+)大细胞淋巴瘤；肠T细胞淋巴瘤；T淋巴母细菌；淋巴细胞/白血病(T-Lbly/T-ALL)、多发性骨髓瘤。

在一个实施例中，癌症是头颈鳞状细胞癌(HNSCC)。在一个实施例中，HNSCC是口咽肿瘤、喉肿瘤、口腔肿瘤、或喉咽肿瘤。在一个实施例中，HNSCC是口腔SCC(OCSCC)。OCSCC包括唇、舌的前2/3、口底、颊黏膜、齿龈、硬腭和磨牙后三角的鳞状细胞癌。在一个实施例中，该HNSCC是转移癌。

当治疗患有实体瘤的个体时，可以有利地根据本文所述的治疗方案，向没有接受手术以除去癌细胞或在当前期间没有接受这样的手术的患有癌症的个体给予中和人类NKG2A多肽的抑制活性的化合物(例如抗体)。然而，应当领会的是，还可以向已经接受或正在进行手术以除去癌细胞的患者给予该化合物。在向还未接受外科手术以除去癌细胞(例如以除去HNSCC细胞)的个体给予抗NKG2A化合物的情况下，NKG2A结合化合物可以例如在手术前大约1至8周给予。在一个实施例中，在手术前给予用抗NKG2A化合物治疗的至少一个(例如一个、两个、三个或更多个)完全给予周期。在一个实施例中，给予周期是在2周和8周之间。

在一个实施例中，用本文披露的方法治疗的癌症是表达HLA-E的癌症。

在有或没有预先检测步骤评估HLA-E在肿瘤细胞表面上的表达的情况下，患有癌症的患者可以用抗NKG2A药剂治疗。有利地，治疗方法可以包括在来自个体的肿瘤的生物样品中(例如在肿瘤细胞上)检测HLA-E核酸或多肽的步骤。生物样品的实例包括任何合适的生物流体(例如血清、淋巴液、血液)、细胞样品或组织样品。例如，组织样品可以是肿瘤组织或肿瘤相邻组织的样品。任选地，在恶性细胞的表面上检测HLA-E多肽。生物样品表达HLA-E(例如，与参考相比，显著表达；以高水平表达HLA-E，用抗HLA-E抗体进行高强度染色)的确定表明个体患有可能从用抑制NKG2A的药剂的治疗中强烈受益的癌症。在一个实施例中，该方法包括在生物样品中确定HLA-E核酸或多肽的表达水平并且将该水平与对应于健康个体的参考水平(例如一个值、弱的细胞表面染色等)进行比较。生物样品以与参考水平相比增加的水平表达HLA-E核酸或多肽的确定表明个体患有可以用抑制NKG2A的药剂治疗的癌症。

在一个实施例中，生物样品(例如，包含肿瘤细胞、肿瘤组织和/或肿瘤相邻组织的样品)显著表达HLA-E核酸或多肽的确定表明个体患有可用抑制NKG2A的药剂治疗的癌症。当提及HLA-E多肽时，“显著地表达”意指HLA-E多肽在从给定个体中获取的大量的肿瘤细胞中表达。然而术语“显著地表达”的定义不限于精确的百分率值，在一些实例中，称为“显著地表达”的受体将存在于至少30％、40％、50％、60％、70％、80％或更多的取自患者的肿瘤细胞上。

确定个体是否具有表达HLA-E多肽的癌症细胞可以例如包括从包含癌症细胞的个体获得生物样品(例如通过进行活组织检查)，使所述细胞与结合HLA-E多肽的抗体接触，并且检测这些细胞是否在其表面上表达HLA-E。任选地，确定个体是否具有表达HLA-E的细胞包括进行免疫组织化学测定。任选地，确定个体是否具有表达HLA-E的细胞包括进行流式细胞术测定。

在一个示例性方面，提供了在具有可检测水平的癌症细胞的哺乳动物宿主(例如，人类患者)中降低癌症进展的方法，该方法包括根据本披露以足以可检测地降低宿主中癌症的进展的剂量和频率给予抗NKG2A抗体。

在一个实施例中，提供了用于治疗或预防个体中的疾病(例如血液肿瘤、炎症性或自身免疫性疾病、感染)的方法，该方法包括向患有疾病的个体给予中和人NKG2A多肽的抑制活性的抗体，其给予的量达到比实质上完全(例如90％、95％)受体饱和所需的浓度高至少10、20、30或50倍的循环中的浓度(例如，通过例如在PBMC中在表达NKG2A的细胞上滴定抗NKG2A抗体所评估的)。抗体可以例如具有在0.5-10ng/ml、任选地1-10ng/ml、任选地1-20ng/ml之间、例如约4ng/ml的结合在人PBMC中表达NKG2A的细胞的EC₅₀。

在一个实施例中，提供了用于治疗或预防个体中的疾病(例如实体瘤、炎症性或自身免疫性疾病、感染)的方法，该方法包括向患有疾病的个体给予中和人NKG2A多肽的抑制活性的抗体，其给予的量达到比实质上完全(例如90％、95％)受体饱和所需的浓度高至少10、20、30或50倍的在感兴趣的血管外组织(例如肿瘤或肿瘤环境)中的浓度(例如，通过例如在PBMC中在表达NKG2A的细胞上滴定抗NKG2A抗体所评估的)。

阻断性抗NKG2A抗体HumZ270的NKG2A+NK细胞应答的EC₅₀为约4μg/ml，因此给予该抗NKG2A抗体的量以实现和/或维持至少4μg/ml的血液浓度。有利地，向个体给予一定量的抗NKG2A抗体以实现和/或维持个体中至少10μg/ml的血液浓度(NKG2A+NK细胞应答的EC₁₀₀)。例如，要实现和/或维持的血液浓度可以在10-12μg/ml、10-15μg/ml、10-20μg/ml、10-30μg/ml、10-40μg/ml、10-50μg/ml、10-70μg/ml、10-100μg/ml、10-150μg/ml或10-200μg/ml之间。在一个实施例中，向个体给予一定量的抗NKG2A抗体以实现和/或维持个体中至少约4μg/ml(NKG2A+NK细胞应答的EC₅₀)或任选地至少约10μg/ml(NKG2A+NK细胞应答的EC₁₀₀)的组织浓度。当脉管系统外部的组织被靶向(例如在实体瘤的治疗中)时，给予一定量的抗NKG2A抗体以实现和/或维持至少10μg/ml的组织浓度；例如，给予一定量的抗NKG2A抗体以实现至少100μg/ml的血液浓度，预期将实现至少10μg/ml的血管外组织(例如肿瘤组织)浓度。例如，为了在组织中实现/维持10μg/ml而实现和/或维持的血液浓度可以在100-110μg/ml、100-120μg/ml、100-130μg/ml、100-140μg/ml、100-150μg/ml、100-200μg/ml、100-250μg/ml或100-300μg/ml之间。

在一些实施例中，给予一定量的抗NKG2A抗体，以获得对应于NKG2A+NK细胞应答的至少EC₅₀、任选地在约或至少约EC₁₀₀的血液(血清)中的浓度。可以使用表达NKG2A的NK细胞对表达HLA-E的靶细胞的细胞毒性活性的合适测定来评估NKG2A+NK细胞应答。实例包括基于NK细胞活化的标记物的测定，例如如在本文实例中所示的CD107或CD137表达。关于NKG2A+NK细胞应答的“EC₅₀”是指抗NKG2A抗体产生关于这种NKG2A+NK细胞应答的最大反应或效应的50％的有效浓度。关于NKG2A+NK细胞应答的“EC₁₀₀”是指抗NKG2A抗体产生关于这种NKG2A+NK细胞应答的实质上最大反应或效应的有效浓度。在一些实施例中，特别是对于实体瘤的治疗，设计达到的浓度以对应于NKG2A+NK细胞应答的至少EC₅₀、任选地为约或至少约EC₁₀₀的在组织中(脉管系统外部，例如在肿瘤或肿瘤环境中)的浓度。

用于治疗人的合适的治疗方案包括例如向患者给予有效量的抗NKG2A抗体，其中该方法包括至少一个给予周期，其中至少一个剂量的抗NKG2A抗体是以2-10mg/kg、任选地4-10mg/kg、任选地6-10mg/kg、任选地8-10mg/kg、任选地2-4mg/kg、任选地4-6mg/kg、任选地4-8mg/kg、任选地6-8mg/kg体重的剂量给予。任选地，给予至少2、3、4、5、6、7或8个剂量的抗NKG2A抗体。在一个实施例中，给予周期是在2周和8周之间。在一个实施例中，给予周期是8周。在一个实施例中，给予周期是8周，并且包括每两周给予一个剂量的抗NKG2A抗体(即总共四个剂量)。

在本文任何实施例的一个方面，抗NKG2A抗体约每两周给予一次。

用于治疗人的合适的治疗方案包括例如向患者给予有效量的抗NKG2A抗体，其中每月给予抗体2次，并且有效维持在抗NKG2A抗体的至少两次连续给予之间的至少10μg/ml的抗NKG2A抗体的连续血液浓度的量是在2-10mg/kg之间、任选地2-6mg/kg、任选地2-8mg/kg、任选地2-4mg/kg、任选地2-3mg/kg、或任选地约2、3或4mg/kg体重。可以任选地选择这些剂量，以便在整个治疗周期中提供至少10μg/ml的抗NKG2A抗体的持续的血液浓度。实现10μg/ml的抗NKG2A抗体的血液浓度对应于抗体例如人源化Z270的EC₁₀₀。

用于治疗人的进一步合适的治疗方案包括例如向患者给予有效量的抗NKG2A抗体，其中每月给予该抗体两次，并且有效维持在抗NKG2A抗体的至少两次连续给予之间的至少40μg/ml的抗NKG2A抗体的连续血液浓度的量是在2-10mg/kg之间、任选地2-8mg/kg、任选地2-6mg/kg、任选地2-4mg/kg、任选地2-3mg/kg、或任选地约2、3或4mg/kg体重。可以任选地给予这些剂量，以便在整个治疗周期中提供至少40μg/ml的抗NKG2A抗体的持续的血液浓度。预期实现40μg/ml的抗NKG2A抗体的血液浓度提供约4μg/ml的组织(例如，血管外组织、实体瘤的肿瘤环境)浓度，进而对应于NKG2A+NK细胞对抗体如人源化Z270的应答的EC₅₀。

用于治疗人的进一步有利的合适的治疗方案包括例如向患者给予有效量的抗NKG2A抗体，其中每月给予抗体2次，并且有效维持在抗NKG2A抗体的至少两次连续给予之间的至少100μg/ml的抗NKG2A抗体的连续血液浓度的量是在4-10mg/kg之间、任选地4-6mg/kg、任选地4-8mg/kg、任选地4mg/kg、任选地约6mg/kg、任选地约8mg/kg、或任选地10mg/kg体重。可以任选地给予这些剂量，以便在整个治疗周期中提供至少100μg/ml的抗NKG2A抗体的持续的血液浓度。预期实现100μg/ml的抗NKG2A抗体的血液浓度提供约10μg/ml的组织(例如，血管外、肿瘤环境)浓度，进而对应于对抗体如人源化Z270的EC₁₀₀。

用于治疗患有癌症的人的进一步有利的合适的治疗方案包括采用具有更高剂量的负荷期，接着是维持期的方案。例如，负荷期可以包括向患者给予有效量的抗NKG2A抗体，其中该抗体以有效维持至少100μg/ml的抗NKG2A抗体的连续血液浓度的量给予一次或多次，直到在维持方案中第一次给予抗NKG2A抗体。例如，当给予一次时，可以给予10mg/kg的抗NKG2A抗体的负荷剂量，其中在维持方案中第一次给予抗NKG2A抗体发生在负荷剂量后约两周(或更少)。然后维持方案可以采用更低剂量和/或更低频率的给予，以在维持方案中的连续给予之间维持至少100μg/ml的抗NKG2A抗体的连续血液浓度。例如，维持方案可以包括每2周一次给予抗NKG2A抗体，剂量为在2-10mg/kg之间、任选地4-10mg/kg、任选地2-4mg/kg、任选地4-6mg/kg、任选地4-8mg/kg、任选地约4mg/kg、任选地约6mg/kg、任选地约8mg/kg体重。

在一个方面，抗NKG2A抗体以一定量给药，以获得对应于NKG2A+NK细胞应答的至少EC₅₀、任选地在约或至少约EC₁₀₀的血液(血清)和/或组织(例如肿瘤组织)中的浓度，持续至少约1周、至少约2周的时期，而在抗NKG2A抗体的至少两次连续给予之间在循环中的细胞上没有NKG2A的显著“去饱和”。在另一个方面，抗体以一定量给药以获得对应于NKG2A+NK细胞应答的至少EC₅₀、任选地在约或至少约EC₁₀₀的血液(血清)和/或组织(例如肿瘤组织)中的浓度，持续至少约1周、至少约2周的时期，并且在抗NKG2A抗体的两次(或每次)连续给予之间在循环中的细胞上允许NKG2A的显著“去饱和”。例如，抗NKG2A抗体能以一定的量和频率施用，该量和频率可以导致治疗期期间(例如在抗NKG2A抗体的两次连续给予之间)循环中细胞上的NKG2A的至少50％去饱和。在一个实例中，允许NKG2A在循环中的细胞上显著“去饱和”的量是提供小于NKG2A+NK细胞应答的EC₅₀、任选地小于NKG2A+NK细胞应答的EC₂₀的血液浓度的量。

用于治疗人的有利的合适治疗方案包括例如向患者给予有效量的抗NKG2A抗体，其中该抗体以有效实现至少10μg/ml、40μg/ml或100μg/ml的抗NKG2A抗体的血液浓度，持续至少约1周或至少约2周的时期，并且允许(例如，接着是)在抗NKG2A抗体的两次(或每次)连续给予之间在循环中的细胞上显著的“去饱和”。

例如，其中该抗体每月给予不超过一次(或约每两个月不超过一次)，并且有效实现至少10μg/ml、40μg/ml或100μg/ml的抗NKG2A抗体的血液浓度持续至少约1周、或至少约2周的时期的量是在2-10mg/kg之间，任选地2-8mg/kg、任选地2-6mg/kg、任选地2-4mg/kg、任选地2-3mg/kg、或任选地约2、3或4mg/kg体重。

在循环中的细胞上的NKG2A的饱和(和去饱和)可以通过获得外周血样品并且使用用于评估受体占有的标准方法来评估。

在另一个方面中，提供了降低癌症进展的风险、在已经经历起始反应的细胞群体中降低进一步癌症进展的风险、和/或在人类患者中提供用于降低癌症进展的治疗方案的方法，该方法包括以足以实现反应(部分或完全反应)的量和方案向患者给予一种或多种第一治疗(例如，诱导疗法，如化学治疗剂)，并且然后以根据本披露的剂量和频率向该患者给予一定量的抗NKG2A抗体。

在另外的方面，提供了在个体(例如人类患者)中促进癌症的缓解的方法，该方法包括以根据本披露的剂量和频率向该个体给予包含抗NKG2A抗体的组合物，以促进在个体中的癌症缓解。在另外的方面，提供了预防在先前的抗癌治疗后其癌症处于缓解中的个体(例如人类患者)中癌症复发的方法，该方法包括以根据本披露的剂量和频率向个体给予包含抗NKG2A抗体的组合物，以促进个体中的癌症缓解。

在甚至另外的方面，提供了用于降低发展癌症的风险、减少癌性病症发作的时间、和/或降低在早期阶段诊断的癌症的严重性的方法，该方法包括以根据本披露的剂量和频率向个体给予预防有效量的抗NKG2A抗体，以实现希望的一种或多种生理效果。

在另外的方面，提供了在诊断患有癌症的人类患者中增加存活超过一个相关时期的可能性的方法。在另一个方面，提供了用于改善癌症患者的生活质量的方法，该方法包括向该患者给予有效改善其生活质量的量的组合物。在另外的方面，可以应用本文描述的方法以显著减少脊椎动物宿主中癌症细胞的数目，使得例如癌症细胞的总数降低。在一种相关的意义上，提供了用于杀灭脊椎动物(如人类癌症患者)中的癌症细胞(例如，直接或间接地引起其死亡)的方法。

抗NKG2A抗体可以作为单一疗法或用第二治疗剂(例如抗EGFR抗体)的辅助或组合给予(共同给予)的方式来给予。辅助或组合给予包括处于相同或不同剂量形式的化合物的同时给予，或化合物的单独给予(例如，顺序给予)。因此，抗NKG2A和第二治疗剂可以在单一配制品中同时给予。可替代地，可以将抗NKG2A和第二治疗剂配制用于单独给予并且将其同时或顺序地给予。第二治疗剂将通常以该药剂在用于正治疗的具体疾病或病症的单一疗法中典型使用的量和治疗方案来给予。

实例

实例1-人源化Z270的Biacore分析

人源化Z270(humZ270)被描述于美国专利号8,206,709(诺和诺德公司(NovoNordisk))中，其披露内容通过引用结合在此。如在美国专利号8,206,709中所述，产生HumZ270 VKI_02/JK4轻链和各种重链受体构架作为人IgG4抗体。重链框架包括基于VH1J8/JH6的“VH1”；基于VH5_a的“VH5”；基于VH5_51的“VH6”；基于VH1_f的“VH7”；以及基于VH1_46的“VH8”，全部具有JH6 J区段。在Biacore T100(Biacore AB公司，乌普萨拉，瑞典)上分析抗原结合性质。抗原是处于单链NKG2A-CD94-mFc构建体的形式，该抗原使用1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)经由氨基基团共价地固定在传感器CM5芯片(Biacore AB公司，乌普萨拉，瑞典)上。将固定水平定为300RU。将Z270抗体变体在运行缓冲液HBS-EP(10mM HEPES pH 7.4、150mM NaCl、3mM EDTA、0.005％(v/v)吐温(Tween)-20)中稀释至浓度系列(0.157、0.313、0.625、1.25、2.5nM)。然后将所有样品以40ul/min的流速注射在固定的抗原上持续2min。随后，以40ul/min注射运行缓冲液持续3min，用于抗体解离分析。每次运行后，注射(30秒，10ul/min)再生缓冲液(10mM NaOH、500mM NaCl)以完全脱去抗原上剩余的抗体。用Biacore T100评价软件评价数据。

人源化Z270 VH1的亲和力确定为67pM。VH5、VH6、VH7和VH8的亲和力相当。

表

实例2-humZ270是竞争性CD94/NKG2A拮抗剂

如美国专利号8,206,709中所述，为了测试humZ270是否阻止配体(即HLA-E)结合CD94/NKG2A，测试了humZ270的阻止HLA-E四聚体结合过量表达CD94/NKG2A的Ba/F3细胞(Ba/F3-CD94/NKG2A)的能力。在本实例中使用了具有SEQ ID NO:3和7的各自的重链和轻链的humZ270VL1/VH1，并且除非有相反的说明，该抗体也用作humZ270以用于下面所有其他的实例。为此，将Ba/F3-CD94/NKG2A与1)各种浓度的humZ270一起孵育，或2)首先用饱和浓度的HLA-E四聚体(4.7μg/ml)一起孵育，然后与各种浓度的humZ270一起孵育。所有孵育都在冰上的含有2％FCS的组织培养基中进行。随后，将细胞与对小鼠Ab特异的APC-轭合的第二抗体一起孵育，并且使用BD生物科学公司FACS测定(BD Biosciences FACSarray)通过流式细胞术进行分析。

humZ270以浓度依赖性方式(菱形)有效地结合Ba/F3-CD94/NKG2A细胞。然而，当细胞与HLA-E四聚体一起预孵育时，阻止humZ270与Ba/F3-CD94/NKG2A细胞结合。因此，HumZ270和HLA-E结合在CD94/NKG2A上的重叠表位。因此，在NK-细胞毒性测定中humZ270的CD94/NKG2A抑制作用可能是经由CD94/NKG2A阻止HLA-E诱导阴性信号至细胞毒性淋巴细胞的能力的结果。因此，humZ270可以被认为是竞争性CD94/NKG2A拮抗剂。

实例3-基于NKG2A表达的具有rma-rae1肿瘤的C57/bl6小鼠中NK和T细胞亚群的分布

为了进一步研究NKG2A在肿瘤环境中的表达，研究了NKG2A在小鼠中NK和T细胞亚群上的分布。从脾、从肿瘤引流淋巴结以及从实体瘤内取得淋巴细胞。

用RMA-Rae克隆6(200万个细胞)移植(皮下(sc))C57/BL6小鼠。这些肿瘤细胞表达CD94/NKG2A配体，Qa-1。在第12天处死小鼠，其中平均肿瘤体积：723mm³，SD：161mm³，n＝4。在从脾、LN和肿瘤中制备细胞悬浮液后，如下对细胞进行染色：CD3e PerCP Cy5.5、NKP46亚莉克莎(Alexa)647、NKG2A/C/E FITC、CD8太平洋蓝(Pacific Blue)。

在表1-3中所示的结果揭示，在肿瘤环境中发现显著百分比的表达NKG2A的NK和CD8+ T淋巴细胞，其中NKG2A+CD8+ T细胞以高百分比存在于肿瘤环境中，但不存在于脾或肿瘤引流淋巴结中。在NK细胞亚群中，引流淋巴结和脾两者中的细胞为约一半NKG2A阳性和一半NKG2A阴性。在T细胞亚群中，大多数细胞是NKG2A阴性(淋巴结中仅1.1％、脾中4.7％是NKG2A⁺)。在CD8 T细胞亚群中，大多数细胞再次为NKG2A阴性(淋巴结中仅1.6％、脾中3.9％为NKG2A⁺)。然而，尽管肿瘤外部几乎没有CD8 T细胞具有NKG2A表达，但是肿瘤浸润CD8 T细胞亚群具有平均26.3％NKG2A+阳性细胞。在CD8^- T细胞亚群中，在TIL和脾或淋巴结细胞之间观察到的NKG2A表达几乎没有差异，因为肿瘤中仅有5.1％的CD8^- T细胞表达NKG2A。

表1：脾

表2：肿瘤引流淋巴结

表3：肿瘤浸润淋巴细胞

实例4-体外受体饱和：人源化抗NKG2A抗体IPH2201与全血中NKG2A+NK细胞的结合

在人血液中体外评估抗NKG2A的受体占有，提供抗NKG2A在人类患者中的药代动力学的预测。该研究旨在离体评估HumZ270的全血中的细胞亲和力以及人类中每μl全血和每个细胞的可用NKG2A受体的绝对数目。受体的亲和力和总数可能影响人类中mAb的药代动力学(PK)和药效动力学(PD)两者。这些数据将被用作用于设计第一人剂量试验的PK/PD模型的输入。从每个供体收集人全血，并且立即处理。在来自8名志愿者的全血中进行humZ270的滴定(mAb在室温(RT)下孵育30分钟)。测试15个mAb浓度以覆盖从90μg/ml至0.000019μg/ml(1/3系列稀释，15个点和0)的最大结合的从0至100％之间的全部结合范围。处理样品以除去红血细胞并固定细胞，并且在细胞计数器上获得。使用校准珠粒将MFI结果转化为MESF(等效可溶性荧光染料的分子)。在表达NKG2A的CD45+淋巴细胞上进行门控。

三个管子用于使用添加到血液中的流计数珠粒对淋巴细胞亚群的绝对计数。首先，使用humZ270进行滴定，其中使用PE偶联的抗hIgG4第二抗体检测结合的humZ270。还使用PE偶联的humZ270进行滴定，并且与使用结合的humZ270的滴定进行比较，以便检查与PE偶联对humZ270的药理学性质的影响以及用于评价饱和浓度的humZ270的受体总数。

分析集中于NKG2A+细胞亚群，即NK细胞和T细胞。这些淋巴细胞亚群不都表达NKG2A，因此研究每个感兴趣的群体的NKG2A-亚群并且与NKG2A+亚群进行比较。细胞群体定义如下：

-淋巴细胞：根据其粒度和尺寸以及CD45表达在CD45/SSC绘图上定义。

-人NK淋巴细胞：淋巴细胞中的CD3-CD56+细胞

-CD8 T细胞：淋巴细胞中的CD3+CD8+细胞

-NKG2A+淋巴细胞：淋巴细胞中的NKG2A+细胞

记录每个群体的总平均荧光强度(MFI)。校准珠粒用于将在PE通道中的荧光表达为MESF。本研究中感兴趣的主要群体是主要包括NK细胞的NKG2A+淋巴细胞。

结果显示人抗NKG2A mAb(humZ270)结合外周血淋巴细胞的两个亚群：NK和CD8+ T细胞。

结果总结在图1中。HumZ270(也称为IPH2201)显示为在x轴上列出的不同浓度(ng/ml)，并且受体结合的MESF信号显示在y轴上。该抗体对NKG2A+细胞具有约4ng/mL的结合亲和力(EC₅₀)(K_D约4ng/mL)。这种K_D与在其他测定中观察到的K_D值一致，尤其是在Biacore测定中对PBMC结合的亲和力和对重组NKG2A的亲和力。对于完全受体占有(EC₁₀₀)的K_D为约100ng/ml。

实例5-在类风湿性关节炎的人I期临床试验中IPH2201的受体饱和

为了维持体内高亲和性二价结合，产生具有在重链的残基241(对应于根据EU索引的位置228)中具有丝氨酸至脯氨酸突变(S241P突变)的重链的HumZ270(人IgG4抗体)。在92位具有稳定和可控制的类风湿性关节炎患者的双盲、安慰剂对照的剂量递增I期试验中探索了humZ270(IPH2201)的安全性特征。在该三臂I期试验中，Z270或安慰剂作为单一剂量静脉内给予高达10mg/kg，或单剂量皮下或多剂量皮下给予(以2周间隔给予四次给药)高达4mg/kg。作为单一剂量通过静脉内进行测试的剂量为：0.0002mg/kg、0.001mg/kg、0.005mg/kg、0.025mg/kg、0.1mg/kg、0.4mg/kg、1.1mg/kg、3.5mg/kg和10mg/kg。所有患者均接受至少12周的随访。安全性特征是非常有利的。未达到MTD。无SUSAR、无药物相关严重不良事件、无输液相关反应、并且无免疫相关不良事件。鼻咽炎和头痛是报告的最常见的两种不良事件。

使用常规的夹心ELISA形式评估受体饱和，其中小鼠Fc人NKG2A融合蛋白用于捕获humZ270抗体。在与含有humZ270抗体的血清样品一起孵育之后，使用生物素化的小鼠抗人IgG4检测结合的抗体(本研究中的分析物)。添加HRP标记的抗生物素蛋白以标记固相结合的生物素化的抗人IgG4，并且将比色HRP底物(TMB)用于终点检测。使用PK/PD模型预测将用于临床试验中、将提供实质上完全受体饱和的抗NKG2A(IPH2201)剂量水平的最佳剂量和给药频率，该PK/PD模型是基于RA患者中的IPH2201 I期临床数据、使用药代动力学软件包(WinNonLin6.3.0.395，Pharsight公司)开发而来。在临床治疗中使用IPH2201的给药频率取决于饱和所需的稳态血浆浓度以及IPH2201的清除率和分布体积。

静脉内注射的IPH2201 I期临床试验的初步PK数据和NCA分析使我们能够估计PK模型的PK参数。使用标准时间。使用1阶消除和通过Michaelis Menten动力学模拟的非线性靶标介导的药物部署，选择标准的2室模型。剂量依赖性清除在NCA分析中观察到并应用于该模型，其中清除率在0.4mg/kg下随剂量增加而降低，然后对于较高剂量保持恒定。该初步PK模型与IgG的已知PK特征一致，其中剂量依赖性反映靶受体(在低剂量下)和FcRn受体(高剂量)饱和(Brambell)。

基于从正在进行的I期临床试验获得的初步NKG2A占有数据进行群体PD建模。

S型Emax模型用于拟合血浆浓度-效应关系。该模型的特征在于EC₅₀，其定义为达到50％的E_max的血清药物浓度，即这里的NKG2A占有的50％。

然而，当PD数据针对PK数据作图时，观察到随着给药后的时间增加，对于最高IPH2201浓度获得的最大NKG2A占有(E_max)以时间依赖性线性方式下降，没有剂量的影响。类似地，EC₅₀似乎随时间线性增加。为了在NKG2A占有特征曲线中模拟这种观察，包括E_max随时间的减少和EC₅₀随时间的增加以描述NKG2A占有数据。

％NKG2A占有＝(E_max-(E_max降x TSLD))x C^γ/((EC₅₀+EC₅₀inc x TSLD)^γ+C^γ)

其中TSLD＝自最后剂量以来的时间；E_max＝100％；E_max降＝E_max随时间减少的速率；EC₅₀inc＝EC₅₀增加的速率

模拟结果示于图2中，通过每两周给予0.03mg/kg可以实现NKG2A+细胞的本质上完全(至少90％)受体饱和。可以每四周给予0.1mg/kg的剂量以维持NKG2A的实质上完全饱和。如果希望血管外组织(例如实体瘤)中的饱和，则认为需要大约10倍更高的剂量，转化为每两周约0.4mg/kg，每四周1mg/kg的剂量。

来自该人临床试验的NKG2A受体的饱和结果与在体外确定的完全受体占有(EC₁₀₀)所需的抗NKG2A的浓度一致(参见实例4)。

实例6-CD107对使用IPH2201的NKG2A阻断的应答

使用效应细胞和靶细胞进行自体体外实验，以便评估在12个人类个体中由细胞因子活化的纯化的NK细胞(效应细胞)介导的杀伤。对于三个供体，平行进行CD107动员和占有的评估。靶细胞是自体SEB母细胞。这种杀死被认为是由NK细胞介导的，并且可以通过抗NKG2A抗体特异性增加，因为预期抵消来自HLA-E的抑制信号。在4小时细胞毒性测定中进行具有抗体humZ270的浓度范围应答。选择使用纯化的NK细胞和基于产生的实验结果的CD107动员测定。首先，基于FACS的CD107测定使得能够特异性研究表达NKG2A的NK细胞的细胞毒性应答，并将其与不表达NKG2A的NK细胞进行比较。可替代的方案例如铬释放测定不会允许区分取决于NKG2A表达的作用，NKG2A表达是具有低百分比的NKG2A+细胞的供体中的问题。

通过在完全培养基(RPMI、10％FCS、青霉素/链霉素)中将冷冻的PBMC与200lU/ml重组的人IL-2(阿地白介素(Proleukin))和100ng/ml SEB(葡萄球菌肠毒素B，西格玛公司(Sigma)一起孵育4天来产生自体SEB母细胞。然后，通过使用“Stemsep阴性选择人CD4 T细胞富集试剂盒”(产品编号#14052A)来阴性选择CD4 T细胞。通过FACS评估纯度，并且用PE-轭合的抗HLA-E克隆3D12(E-生物科学公司)测量HLA-E表达。T CD4 SEB母细胞被认为是产生模拟自身反应性T CD4+细胞的自体细胞的良好模型。

纯化的NK细胞用StemSep系统由冷冻的PBMC：人NK纯化制备，并且在补充有10lU/ml重组IL-2的完全培养基中培养过夜(O/N)。从收集的血液中制备PBMC。血液是输血合格的，因此捐赠者是匿名的并且推测是健康的。将PBMC制备、等分并且在研究前储存在氮气罐中。

在图板棱柱(GraphPad Prism)软件中使用具有四个参数的非线性回归拟合进行受体饱和的Kd和CD107动员的EC₅₀的计算。为了从抗NKG2A(IPH2201)与纯化的NK细胞的结合的滴定曲线估计亲和常数Kd，排除了30和90μg/ml的值，因为在这些浓度下观察到一些伪值。

结果总结在图3A中。令人惊讶的是，功效(阻断)所需的抗NKG2A的浓度比提供完全受体饱和的浓度高100倍。确定在CD107动员测定中的EC₅₀浓度(提供最大值的50％的量)为约400ng/ml，并且EC₁₀₀为约10,000ng/ml(10μg/ml)。相反，如在实例4中所示，受体饱和的EC₅₀浓度为约4ng/ml，EC₁₀₀为约100ng/ml，浓度也由来自I期临床试验的数据证实(参见实例5)。

对于具有CD107动员和占有的平行评估的三个供体，CD107的个体EC₅₀值比受体饱和的个体Kd高大约100倍。当评估所有数据(受体饱和的中值Kd为0.005μg/ml，n＝5，CD107动员的中值EC₅₀为0.40μg/ml，n＝9)时，观察到相同的比例。这表明供体通常具有与IPH2201相当的受体亲和力，并且受体饱和与生物活性之间的关系是相似的。

实例7-HLA-E表达水平对CD107对于NKG2A阻断的应答的影响

受体饱和获得的Kd和CD107动员的EC之间的100倍差异可能潜在地由CD107测定中靶细胞上的膜结合的HLA-E解释，该膜结合的HLA-E以高亲合力接合NK细胞上的NKG2A，与其中不涉及HLA-E的受体饱和实验相比需要更多的IPH2201以达到受体的功能饱和。

为了研究这种可能性，将对于实例6的自体SEB母细胞中观察到的生物效应的EC与具有不同HLA-E表达水平的细胞进行比较。选择用HLA-E转染的人类K562细胞作为高HLA-E表达的细胞。如实例6中所述，使用纯化的NK细胞进行基于FACS的CD107测定。

在每个实验中，使用偶联到PE的抗HLA-E mAb、3D12测试自体CD4+SEB母细胞和选择的K562-HLA-E克隆的HLA-E表达。在K562HLA-E转染子上的HLA-E表达比在自体SEB母细胞上观察到的组成型HLA-E表达高至少20倍。SEB母细胞的纯度为96％±0.818(SD，n＝12，范围为94.6％-97.1％)。HLA-E在T CD4 SEB母细胞和K562-HLA-E上的表达在所有供体之间是相似的。

证实了对于受体饱和所获得的Kd与CD107动员的EC之间的100倍差异的观察结果，与K562-HLA-E转染子的EC₅₀(中值4.1μg/ml)相比，对SEB母细胞的生物效应观察到的更低的EC(中值0.40μg/ml)可以由在细胞表面的HLA-E表达的至少20倍的差异来解释。在这种情况下，因为HLA-E在K562-HLA-E转染子上以更高的密度表达，当与自体SEB母细胞相比时，需要更高量的IPH2201与HLA-E竞争。

实例8-重复注射IPH2201的药代动力学模型预测

基于在实例7中观察到的自体(SEB)细胞的CD107动员的EC，并且结合来自实例5中描述的I期试验的血液浓度结果，进行建模以确定抗NKG2A(IPH2201)剂量水平的最佳给药频率以在提供功效的临床试验中使用。

使用PK/PD模型预测将用于临床试验中的抗NKG2A(IPH2201)剂量水平的最佳剂量和给药频率，该PK/PD模型是基于RA患者中的IPH2201 I期临床数据、使用药代动力学软件包(WinNonLin 6.3.0.395，Pharsight公司)开发而来。在临床治疗中使用IPH2201的给药频率取决于所需的稳态血浆浓度以及IPH2201的清除率和分布体积。

基于来自临床I期试验的初步PK和PD数据，以下PK和PD参数最匹配观察的数据：

图3B显示用通过静脉内每两周一次给予的不同剂量达到的不同血液浓度。剂量水平为0.01、0.02、0.03、0.04、0.2、0.4mg/kg、2mg/kg、4mg/kg和10mg/kg体重。图3B中的线从底部到顶部对应于增加剂量的IPH2201，其中最低剂量对应于图表底部的最低线到图表顶部的最高剂量。0.01mg/kg的剂量提供约0.2μg/ml的初始(峰值)血液浓度。0.04mg/kg的剂量提供约1μg/ml的初始(峰值)血液浓度，即高于400ng/ml的功效的EC₅₀，但在两周后低于EC₅₀。0.4mg/kg的剂量提供约10μg/ml的初始(峰值)血液浓度，即在循环中的功效的约EC₁₀₀，以及高于3μg/ml的持续的血液浓度直到两周时间点。4mg/kg的剂量提供约100μg/ml的初始(峰值)血液浓度，即在组织中的功效的约EC₁₀₀，以及高于30μg/ml的持续的血液浓度直到两周时间点。然而，当以重复给药的方式给予4mg/kg的剂量时，第四剂量提供大约100μg/ml的持续的血液浓度。10mg/kg的剂量提供了大约100μg/ml的持续的血液浓度。

图3C显示了当使用负荷剂量和维持剂量时，用通过静脉内每两周一次给予的不同剂量达到的不同血液浓度。在两周给药频率中，10mg/kg体重的负荷剂量，接着是4mg/kg体重的维持剂量(图3C中的上线)提供了大约100μg/ml的初始和持续的血液浓度。出于比较的目的，4mg/kg的恒定剂量显示为图3C中的下线，其提供在两周的初始和后续注射之间的至少30μg/ml的持续(或最小)血液浓度，在第二次注射后两周至少50μg/ml的持续(或最小或剩余)血液浓度，在第三次注射后两周至少60-70μg/ml的连续(或最小或剩余)血液浓度。

实例9-抗NKG2A的剂量反应对NK细胞活化的影响

HNSCC的免疫治疗方法特别复杂的是由HNSCC诱导的深度免疫抑制，其潜在地降低免疫刺激作用的有效性(参见例如迪雷(Duray)等人(2010)临床与发育免疫学(Clin.Dev.Immunol.)2010:1-15)。该实验的目的是探索靶向NKG2A的抗NKG2A抗体是否能够清除HNSCC细胞。

通过分析CD107和CD137表达来确定抗NKG2A对NK细胞活化的剂量-反应的影响。在4小时的CD107动员是由NK细胞释放溶解颗粒的标志(奥尔特(Alter)等人，(2004)免疫学方法杂志(J Immunol Methods)294(1-2):15-22)。在24小时的CD137表达的增加与几种淋巴细胞(包括NK细胞的)活化相关(Kohrt等人(2011)血液学(Blood)117(8):2423-2432)。针对表达或不表达NKG2A(分别为NKG2A+NK细胞或NKG2A-NK细胞)的NK细胞进行CD107和CD137表达的分析。由于抗体靶向NKG2A，预期其效果仅在NKG2A+NK细胞上可见，因此在实验中NKG2A-NK细胞可以被认为是内部对照。

使用的效应细胞是来自健康志愿者的新鲜分离的PBMC，并且靶细胞是HNSCC细胞系或用HLA-E转染的K562细胞系的克隆。将细胞计数并且在完全培养基中每两天传代。测量存活力并且必须超过90％。将它们保持在培养物中多达12代。在实验的前一天，将细胞计数并且调节至100,000个细胞/孔。测量存活力并且必须超过90％。

K562细胞系是K562克隆E6(HLA-E阳性，CD32低)和K562克隆F7(HLA-E阴性/低，CD32低)。通过流式细胞术筛选用于HLA-E表达的人头颈癌细胞系(参见下表C)。选择三种细胞系用于功能测试：FaDu(ATCC#HTB-43)、H-N(DSMZ#ACC 417)和CAL-27(DSMZ#ACC 446)。

表C

使用的效应细胞是来自健康志愿者的新鲜分离的PBMC。靶细胞是HNSCC细胞系(FaDu、H-N和CAL-27)，和用HLA-E(克隆E6＝HLA-E⁺，克隆F7＝HLA-E^-)转染的K562细胞系的克隆，E:T比为2.5/1。读数在4小时是CD107、在24小时是CD137。测试了7个供体(FaDu和H-N)和2个供体(CAL-27)。以10μg/mL的终浓度使用抗NKG2A抗体humZ270VH1，其重链氨基酸序列显示于SEQ ID NO:3中并且其轻链氨基酸序列显示于SEQ ID NO:7中。

图4A和4B显示在对照或指示的靶细胞系存在下和在10μg/mL浓度的抗NKG2A的存在或不存在下，在NKG2A-NK(左)或NKG2A+NK细胞(右)上的CD107(上)和CD137(下)FACS读数。细胞系根据HLA-E表面表达水平从左到右排序。每个点代表来自健康志愿者的PBMC。图4B显示HNSCC细胞系，并且证明抗NKG2A可以恢复具有内源性HLA-E表达的HNSCC的裂解或者用HLA-E转染的K562的裂解。该作用仅在NKG2A阳性NK细胞上观察到，并且依赖于HLA-E的表达水平。实际上，在具有中至高HLA-E表达水平的细胞系上观察到抗NKG2A效应。

抗NKG2A可以通过阻断抑制性受体NKG2A与HLA-E的相互作用来诱导NK介导的表达HLA-E的细胞系的裂解。这种效应在用HLA-E转染的K562细胞系上观察到，但是更重要的是在具有内源性HLA-E表达的HNSCC细胞系例如FaDu和CAL-27细胞系上观察到。抗NKG2A效应的程度取决于靶细胞的细胞表面上HLA-E表达的水平。

实例10-抗NKG2A的最佳剂量与西妥昔单抗的次佳剂量的的联合作用

表皮生长因子受体(EGFR)(也是ErbB-1；人中的HER1)是受体酪氨酸激酶的ErbB/HER家族中的普遍表达的跨膜糖蛋白。EGFR的高表达发生在大多数上皮恶性肿瘤包括HNSCC中，并且与不良预后相关。其通过天然配体的活化导致细胞内信号传导途径的启动，该细胞内信号传导途径调节细胞增殖、侵入、血管生成和转移的活化，从而驱动肿瘤生长。

抗EGFR单克隆抗体西妥昔单抗被认为通过阻断EGF受体途径的致癌信号传导并通过诱导Fcγ受体介导的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)而起作用。然而，在HNSCC中，ADCC可能受诱导的深度免疫抑制的影响。同时，阻断EGF受体途径的致癌信号传导导致由在NK细胞和T细胞亚群上的活化受体NKG2D识别的MICA/B和ULBP蛋白家族的主要组织相容性复合体(MHC)I类相关抗原的肿瘤细胞中的转录后调节。具体地，通过临床EGFR抑制剂降低了作为NKG2D的天然配体的这些应激相关抗原的肿瘤细胞的表达，因此潜在地降低了肿瘤细胞对NK和T细胞的可见性(Vantourout等人，科学转化医学(Sci.Transl.Med.)6：231ra49(2014))。

设计本实验以探索EGFR抑制性抗体对抗NKG2A抗体活化HNSCC中的NK细胞的能力的影响。使用从健康志愿者中新鲜分离的PBMC作为效应细胞和HNSCC细胞系(FaDu和H-N)作为靶细胞(E:T比为2.5/1)，通过CD107和CD137表达的分析确定西妥昔单抗对NK细胞活化的剂量反应的影响。使用3个供体(CD107在4h内读数)和4个供体(CD137在24h内读数)，读数在4小时为CD107、在24小时为CD137。西妥昔单抗以剂量反应、以10μg/mL开始的1/10系列稀释进行测试。对于一个健康志愿者，NK细胞被细分为NKG2A+和NKG2A-亚群。选择西妥昔单抗的次佳剂量用于进一步测试以探索EGFR抑制性抗体对抗NKG2A抗体活化HNSCC中的NK细胞的能力的影响。0.001μg/mL(1ng/mL)剂量是用CD107和CD137读数两者观察到的西妥昔单抗效应的起点。0.01μg/mL(10ng/mL)剂量是在西妥昔单抗效应的大约EC₅₀。

使用从健康志愿者新鲜分离PBMC作为效应细胞和HNSCC细胞系(FaDu、H-N和CAL-27)、用HLA-E转染的K562细胞系的克隆(克隆E6＝HLA-E⁺，克隆F7＝HLA-E^-)作为靶细胞(E/T比为2.5/1)，通过CD107和CD137表达的分析来评估抗NKG2A和次佳剂量的EGFR抑制剂的组合效应。使用7个供体(FaDu和H-N)和2个供体(CAL-27)，读数在4小时为CD107、在24小时为CD137。

以对应于完全功能活性的10μg/mL的终浓度使用抗NKG2A抗体humZ270VH1，其重链氨基酸序列显示于SEQ ID NO:3中并且其轻链氨基酸序列显示于SEQ ID NO:7中，并且以0.001μg/mL或0.01μg/mL的次佳剂量使用EGFR抑制剂西妥昔单抗。

抗NKG2A的完全活性浓度增强了由次佳剂量的西妥昔单抗诱导的对于HNSCC细胞系的ADCC。在K562转染的细胞系上没有观察到西妥昔单抗依赖性ADCC，因为它们不表达EGFR。抗NKG2A作用仅在NKG2A阳性NK细胞上观察到，并且依赖于HLA-E的表达水平。实际上，在具有中等至高等HLA-E表达水平的细胞系(FaDu、CAL-27和K562-HLA-E克隆E6)上观察到抗NKG2A效应。图5是对于FaDu细胞显示的代表性实例。在图5中可以看出，抗NKG2A的全活性剂量增强了由次佳剂量的西妥昔单抗(ctx)诱导的对于HNSCC细胞系的ADCC。

实例11：增加剂量的抗NKG2A与增加剂量的西妥昔单抗的组合效应

评估增加剂量的EGFR抑制性抗体与增加剂量的抗NKG2A抗体的组合对于活化针对HNSCC靶细胞的NK细胞的能力的影响。实验试图评估当以饱和剂量使用西妥昔单抗时抗NKG2A治疗是否仍可以增强ADCC，以及抗NKG2A效应是否是剂量依赖性的。

简言之，使用的效应细胞是来自健康志愿者的新鲜分离的PBMC，并且靶细胞是HNSCC细胞系(FaDu、H-N和CAL-27)、和用HLA-E转染的K562细胞系的克隆(克隆E6＝HLA-E⁺，克隆F7＝HLA-E^-)，并且E:T比为2.5/1。使用2个供体，读数在4小时是CD107、在24小时是CD137。以0.1和1μg/mL的两个次佳剂量和以10μg/mL的饱和剂量使用抗NKG2A抗体，其重链氨基酸序列显示于SEQ ID NO:3中并且其轻链氨基酸序列显示于SEQ ID NO:7中。在这些实验环境中，西妥昔单抗以0.001μg/mL和0.01μg/mL(-EC₅₀)的两个次佳剂量和以0.1μg/mL的饱和剂量使用。

结果显示于图6A和6B中。图6A显示在没有靶标和具有K562-HLA-E转染子的对照上的CD107读数。每个健康志愿者由不同的符号表示：正方形或圆形。交叉打开的符号对应于其中抗NKG2A被与0.1μg/mL西妥昔单抗共孵育的10μg/mL hIgG4同种型对照取代的条件。可以看出，抗NKG2A抗体的效应是剂量依赖性的，取决于HLA-E表达水平，并且在以高水平表达HLA-E的克隆E6中以0.1μg/mL的饱和剂量的西妥昔单抗仍被观察到。在克隆F7(低HLA-E表达水平)中，抗NKG2A的效应有限，并且高剂量(例如全活性剂量)的抗NKG2A没有进一步增强该效应。

图6B显示了在HNSCC细胞系上的CD107读数。每个健康志愿者由不同的符号表示：正方形或圆形。交叉打开的符号对应于其中抗NKG2A被与0.1μg/mL西妥昔单抗共孵育的10μg/mL hIgG4同种型对照取代的条件。可以看出，抗NKG2A抗体的效应是剂量依赖性的，取决于HLA-E表达水平，并且在以更高水平表达HLA-E/对HLA-E强烈染色的FaDu或CAL-27中的0.1μg/mL的西妥昔单抗的饱和剂量下仍然被观察到。

抗NKG2A抗体的效应是剂量依赖性的，取决于HLA-E表达水平，并且在0.1μg/mL的西妥昔单抗的饱和剂量下仍然被观察到。

实例12-用重复注射人源化Z270作为单一药剂治疗癌症的人临床试验

该试验的主要目的是评估术前IPH2201(包含S241P突变的人源化Z270)在患有可操作的口腔鳞状细胞癌的患者中的抗肿瘤活性。次要目的是评估IPH2201的安全性、药代动力学、免疫原性和包括肿瘤内生物标志物的药效学

试验设计：

试验是单中心的、开放标签单臂Ib-II期研究，包括进入部分。具有可测量的临床中或高风险、III期或IV期口腔鳞状细胞癌的先前未治疗的患者将用单一药剂IPH2201通过静脉内(i.v.)经过1小时每2周(q2w)进行治疗，持续4次给予。前6位患者将以4mg/kg q2w x4的剂量接受IPH2201。在向以4mg/kg治疗的前3位患者第一次给予IPH2201之间将观察到一周的最小间隔。随后的患者将以10mg/kg q2w x 4的剂量治疗，在以4mg/kg治疗的最后一位患者中第一次给予之后，随访最少4周后安全委员会允许该剂量增加。在IPH2201的最后一次给予后，根据组织病理学危险因素将启动标准的局部区域性手术治疗，接着是辅助治疗(放射治疗(RT)或放射化学治疗(RCT))。在肿瘤进展的情况下，将立即启动局部-区域治疗。

在IPH2201的第三次给予之前，和在IPH2201的最后一次给予之后2周，在手术前，在临床上和在放射学上评价抗肿瘤活性。根据RECIST 1.1标准，将在靶标病灶上获得肿瘤测量。相同的成像技术将用于在基线和术前期间的功效评估，该功效评估是对于主要终点和/或手术后的评估，用于监测潜在复发。通过适当的成像技术，基于研究者的判断(计算机断层摄影(CT)扫描和/或磁共振成像(MRI))，以及可及的肿瘤病灶的照片，将在所有患者中进行评估。

在基线时通过活组织检查获得新鲜肿瘤样品，并且在手术时收集切除的标本。将在手术前后进行药理学(PK/PD)和生物标志物研究。

患者将在第一个给予周期后随访直到一年。在研究访问结束后，在另外2年期间根据当地实践进行研究后，将记录复发和存活。

本文所引用的所有参考文献(包括出版物、专利申请、和专利)均通过引用以其全文特此结合，并且引用的程度如同每个参考文献被个别地并且明确地指示通过引用结合并且以其全文在本文中阐述(至法律允许的最大程度)，而不考虑本文其他地方做出的具体文件的任何单独提供的结合。

除非在此另外指示或与上下文明显矛盾，否则在描述本发明的上下文中，术语“一个/种”和“该”以及类似指称对象的使用应解释为包括单数和复数二者。

除非另有说明，所有在此提供的精确值均代表相应的近似值(例如，所有精确的示例值是相对于具体因子提供的，或者测量可以视为还包括提供相应的近似测量，在适当时由“大约”修饰)。其中“约”与数字结合使用，这可以被指定为包括对应于指定数字的+/-10％的值。

除非另外陈述或与上下文明显矛盾，否则本文对于使用了涉及一种或多种要素的术语如“包含”、“具有”、“包括”或“含有”的本发明的任何方面或实施例的描述，旨在提供对“由那一种或多种特定要素组成”、“基本上由那一种或多种特定要素组成”或“基本上包含那一种或多种特定要素”的本发明的类似方面或实施例的支持(例如，除非另外陈述或与上下文明显矛盾，否则本文所述的包含特定要素的组合物应理解为也描述由那个要素组成的组合物)。

本文提供的任何和所有实例或示例性语言(例如“例如”)的应用仅旨在更好地说明本发明，而不对另外要求保护的本发明范围做出限制。说明书中的语言不应当被解释为指示任何未要求保护的要素为实践本发明所必需的。

序列表

<110> 依奈特制药公司

<120> 使用抗NKG2A 抗体的治疗方案

<130> NKG2A-T

<150> US 62/050,948

<151> 2014-09-16

<150> US 62/067,642

<151> 2014-10-23

<150> US 62/083,929

<151> 2014-11-25

<150> US 62/093,141

<151> 2014-12-17

<150> US 62/093,124

<151> 2014-12-17

<160> 15

<170> PatentIn版本3.5

<210> 1

<211> 233

<212> PRT

<213> 智人

<400> 1

Met Asp Asn Gln Gly Val Ile Tyr Ser Asp Leu Asn Leu Pro Pro Asn

1 5 10 15

Pro Lys Arg Gln Gln Arg Lys Pro Lys Gly Asn Lys Ser Ser Ile Leu

20 25 30

Ala Thr Glu Gln Glu Ile Thr Tyr Ala Glu Leu Asn Leu Gln Lys Ala

35 40 45

Ser Gln Asp Phe Gln Gly Asn Asp Lys Thr Tyr His Cys Lys Asp Leu

50 55 60

Pro Ser Ala Pro Glu Lys Leu Ile Val Gly Ile Leu Gly Ile Ile Cys

65 70 75 80

Leu Ile Leu Met Ala Ser Val Val Thr Ile Val Val Ile Pro Ser Thr

85 90 95

Leu Ile Gln Arg His Asn Asn Ser Ser Leu Asn Thr Arg Thr Gln Lys

100 105 110

Ala Arg His Cys Gly His Cys Pro Glu Glu Trp Ile Thr Tyr Ser Asn

115 120 125

Ser Cys Tyr Tyr Ile Gly Lys Glu Arg Arg Thr Trp Glu Glu Ser Leu

130 135 140

Leu Ala Cys Thr Ser Lys Asn Ser Ser Leu Leu Ser Ile Asp Asn Glu

145 150 155 160

Glu Glu Met Lys Phe Leu Ser Ile Ile Ser Pro Ser Ser Trp Ile Gly

165 170 175

Val Phe Arg Asn Ser Ser His His Pro Trp Val Thr Met Asn Gly Leu

180 185 190

Ala Phe Lys His Glu Ile Lys Asp Ser Asp Asn Ala Glu Leu Asn Cys

195 200 205

Ala Val Leu Gln Val Asn Arg Leu Lys Ser Ala Gln Cys Gly Ser Ser

210 215 220

Ile Ile Tyr His Cys Lys His Lys Leu

225 230

<210> 2

<211> 452

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 嵌合小鼠-人

<400> 2

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Ser Pro Ser Phe

50 55 60

Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Phe Asp Val Gly Thr Leu Tyr Trp Phe Phe

100 105 110

Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr

115 120 125

Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser

130 135 140

Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu

145 150 155 160

Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His

165 170 175

Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser

180 185 190

Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys

195 200 205

Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu

210 215 220

Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu

225 230 235 240

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

245 250 255

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

260 265 270

Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

275 280 285

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr

290 295 300

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

305 310 315 320

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser

325 330 335

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

340 345 350

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

355 360 365

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

370 375 380

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

385 390 395 400

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr

405 410 415

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

420 425 430

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Gly Lys

450

<210> 3

<211> 452

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 嵌合小鼠-人

<400> 3

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Ala Gln Lys Leu

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Phe Asp Val Gly Thr Leu Tyr Trp Phe Phe

100 105 110

Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr

115 120 125

Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser

130 135 140

Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu

145 150 155 160

Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His

165 170 175

Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser

180 185 190

Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys

195 200 205

Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu

210 215 220

Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu

225 230 235 240

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

245 250 255

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

260 265 270

Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

275 280 285

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr

290 295 300

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

305 310 315 320

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser

325 330 335

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

340 345 350

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

355 360 365

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

370 375 380

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

385 390 395 400

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr

405 410 415

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

420 425 430

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Gly Lys

450

<210> 4

<211> 452

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 嵌合小鼠-人

<400> 4

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Ser Pro Ser Phe

50 55 60

Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Phe Asp Val Gly Thr Leu Tyr Trp Phe Phe

100 105 110

Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr

115 120 125

Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser

130 135 140

Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu

145 150 155 160

Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His

165 170 175

Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser

180 185 190

Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys

195 200 205

Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu

210 215 220

Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu

225 230 235 240

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

245 250 255

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

260 265 270

Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

275 280 285

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr

290 295 300

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

305 310 315 320

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser

325 330 335

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

340 345 350

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

355 360 365

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

370 375 380

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

385 390 395 400

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr

405 410 415

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

420 425 430

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Gly Lys

450

<210> 5

<211> 452

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 嵌合小鼠-人

<400> 5

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Ala Glu Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Gly Gly Tyr Asp Phe Asp Val Gly Thr Leu Tyr Trp Phe Phe

100 105 110

Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr

115 120 125

Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser

130 135 140

Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu

145 150 155 160

Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His

165 170 175

Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser

180 185 190

Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys

195 200 205

Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu

210 215 220

Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu

225 230 235 240

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

245 250 255

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

260 265 270

Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

275 280 285

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr

290 295 300

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

305 310 315 320

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser

325 330 335

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

340 345 350

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

355 360 365

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

370 375 380

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

385 390 395 400

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr

405 410 415

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

420 425 430

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Gly Lys

450

<210> 6

<211> 452

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 嵌合小鼠-人

<400> 6

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Phe Asp Val Gly Thr Leu Tyr Trp Phe Phe

100 105 110

Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr

115 120 125

Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser

130 135 140

Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu

145 150 155 160

Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His

165 170 175

Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser

180 185 190

Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys

195 200 205

Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu

210 215 220

Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu

225 230 235 240

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

245 250 255

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

260 265 270

Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

275 280 285

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr

290 295 300

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

305 310 315 320

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser

325 330 335

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

340 345 350

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

355 360 365

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

370 375 380

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

385 390 395 400

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr

405 410 415

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

420 425 430

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Gly Lys

450

<210> 7

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 嵌合小鼠-人

<400> 7

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 8

<211> 5

<212> PRT

<213> 小家鼠

<400> 8

Ser Tyr Trp Met Asn

1 5

<210> 9

<211> 11

<212> PRT

<213> 小家鼠

<400> 9

Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr

1 5 10

<210> 10

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 嵌合小鼠-人

<400> 10

Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Ser Pro Ser Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 11

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 嵌合小鼠-人

<400> 11

Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Ala Gln Lys Leu Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 12

<211> 16

<212> PRT

<213> 小家鼠

<400> 12

Gly Gly Tyr Asp Phe Asp Val Gly Thr Leu Tyr Trp Phe Phe Asp Val

1 5 10 15

<210> 13

<211> 11

<212> PRT

<213> 小家鼠

<400> 13

Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 14

<211> 7

<212> PRT

<213> 小家鼠

<400> 14

Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu

1 5

<210> 15

<211> 9

<212> PRT

<213> 小家鼠

<400> 15

Gln His His Tyr Gly Thr Pro Arg Thr

1 5

Claims

1.一种结合并且中和NKG2A的抑制活性的抗体，用于治疗个体中的疾病，该治疗包括向该个体给予该抗体持续至少一个给予周期，在该给予周期中，抗NKG2A抗体给予至少两次，并且以有效实现和/或维持抗NKG2A抗体的两次连续给予之间至少10μg/ml的抗NKG2A抗体的血液浓度的量给予。

2.如权利要求1所述的抗体，其中该抗NKG2A抗体给予至少两次，并且以在整个给予周期内有效维持至少10μg/ml的抗NKG2A抗体的持续的血液浓度的量给予。

3.如权利要求1或2中任一项所述的抗体，其中给予该抗体以在整个给予周期内维持至少10μg/ml、任选地在10-100、10-80或10-50μg/ml之间的抗NKG2A抗体的持续的血液浓度。

4.如权利要求1-3中任一项所述的抗体，其中给予该抗体以在给予后达到至少40μg/ml、50μg/ml或100μg/ml的抗NKG2A抗体的峰值血液浓度。

5.如权利要求1-4中任一项所述的抗体，其中该抗体以在抗NKG2A抗体的给予后有效提供至少约40μg/ml、50μg/ml或100μg/ml的抗NKG2A抗体的持续(最小)血液浓度持续至少一周、任选地两周的量给予。

6.如权利要求1-5中任一项所述的抗体，其中给予该抗体以在抗NKG2A抗体的两次连续给予之间维持至少约100μg/ml的抗NKG2A抗体的持续(最小)血液浓度。

7.如权利要求1-6中任一项所述的抗体，其中给予该抗体以在抗NKG2A抗体的连续两次给予之间、任选地在整个给予周期内维持至少100μg/ml、任选地在100-200μg/ml之间的抗NKG2A抗体的持续的血液浓度。

8.如上述权利要求中任一项所述的抗体，其中该抗体以在抗NKG2A抗体的两次连续给予之间有效维持至少40μg/ml的抗NKG2A抗体的持续的血液浓度的量给予。

9.如上述权利要求中任一项所述的抗体，其中该抗体每月2次地给予。

10.如上述权利要求中任一项所述的抗体，其中该抗体静脉内每月两次地给予，并且在给予的抗NKG2A抗体的至少两次连续给予之间至少10μg/ml的抗NKG2A抗体的量在2-10mg/kg之间、任选地2-6mg/kg、任选地2-8mg/kg或任选地2-4mg/kg体重。

11.如上述权利要求中任一项所述的抗体，其中该抗体静脉内每月两次地给予，并且在给予的抗NKG2A抗体的至少两次连续给予之间至少100μg/ml的抗NKG2A抗体的量在4-10mg/kg之间、任选地4-6mg/kg、任选地4-8mg/kg、任选地约4mg/kg、任选地约6mg/kg、任选地约8mg/kg、或任选地约10mg/kg体重。

12.如上述权利要求中任一项所述的抗体，其中该治疗包括负荷期，接着是维持期，在该负荷期中该抗体以有效维持至少100μg/ml的血液浓度的初始剂量给予至少一次直到抗NKG2A抗体的下一次连续给予，在该维持期中该抗体以第二剂量给予至少两次，并且以在抗NKG2A抗体的连续给予之间有效维持至少100μg/ml的抗NKG2A抗体的持续的血液浓度的频率给予。

13.如权利要求12所述的抗体，其中该抗体静脉内给予，并且其中该负荷期包括以在8-10mg/kg之间、任选地约10mg/kg的剂量给予该抗体一次，并且该维持期包括以约2周的间隔、以在2-6mg/kg之间、任选地在2-5mg/kg之间、任选地在2-4mg/kg之间、任选地约2mg/kg、任选地约3mg/kg、任选地约4mg/kg或任选地约6mg/kg体重的剂量给予该抗体至少两次。

14.一种结合并且中和NKG2A的抑制活性的抗体，用于治疗个体，该治疗包括向该个体给予该抗体持续至少一个给予周期，在该给予周期中抗NKG2A抗体以4-10mg/kg之间、任选地4-6mg/kg、任选地4-8mg/kg、任选地约4mg/kg、任选地约6mg/kg、任选地约8mg/kg、或任选地约10mg/kg体重的剂量给予。

15.一种结合并且中和NKG2A的抑制活性的抗体，用于治疗个体，该治疗包括向该个体给予该抗体持续至少一个给予周期，其中方法包括：

a.一个负荷期，其中该抗体以在8-10mg/kg之间、任选地约10mg/kg的初始剂量静脉内给予至少一次，以及，

b.一个维持期，其中该抗体以在2-6mg/kg之间、任选地在2-5mg/kg之间、任选地在2-4mg/kg之间、任选地约2mg/kg、任选地约3mg/kg、任选地约4mg/kg、或任选地约6mg/kg体重的剂量静脉内每两周给予至少两次，任选地其中在维持期内的第一次给予发生在初始剂量后不超过两周内。

16.如权利要求15所述的抗体，其中该抗体以在整个给予周期内有效维持至少10μg/ml、任选地至少40μg/ml、50μg/ml或100μg/ml的抗NKG2A抗体的持续的血液浓度的频率和量给予。

17.如上述权利要求中任一项所述的抗体，其中该给予周期为8周或至少8周。

18.如上述权利要求中任一项所述的抗体，其中该给予周期包括抗NKG2A抗体的至少4次给予。

19.如上述权利要求中任一项所述的抗体，其中该个体患有癌症。

20.如权利要求19所述的抗体，其中该个体患有血液肿瘤。

21.如权利要求1-2或4-19中任一项所述的抗体，其中该个体患有实体瘤。

22.如权利要求21所述的抗体，其中该个体患有HNSCC。

23.如上述权利要求中任一项所述的抗体，其中该个体患有实体瘤并且在手术除去肿瘤之前用抗NKG2A抗体进行治疗。

24.如权利要求23所述的抗体，其中该个体在手术除去肿瘤之前用抗NKG2A抗体的完全给予周期进行治疗。

25.如上述权利要求中任一项所述的抗体，其中抗体与HLA-E竞争结合NKG2A。

26.如上述权利要求中任一项所述的抗体，其中抗体具有在1-10ng/ml之间的结合表达NKG2A的细胞的EC₅₀。

27.如上述权利要求中任一项所述的抗体，其中抗体具有在10^-10M和10^-12M之间的用于结合重组可溶性NKG2A多肽的K_D。

28.如上述权利要求中任一项所述的抗体，其中该抗体包含人IgG4恒定区。

29.如上述权利要求中任一项所述的抗体，其中该抗体包含Fc工程化的恒定区，该恒定区包含降低与人Fcγ受体结合的氨基酸修饰。

30.如上述权利要求中任一项所述的抗体，其中该抗体是抗体片段。

31.如权利要求30所述的抗体，其中该抗体片段缺少Fc结构域。

32.如权利要求30或31所述的抗体，其中该抗体片段来自下组，该组由以下各项组成：Fab片段、Fab'片段、Fab'-SH片段、F(ab)²片段、F(ab')²片段、Fv片段、重链Ig(美洲驼或骆驼Ig)、V_HH片段、单结构域FV和单链抗体片段。

33.如上述权利要求中任一项所述的抗体，其中该抗体与具有包含SEQ ID NO:2-6中任一个的氨基酸序列的重链和SEQ ID NO:7的轻链序列的抗体竞争结合人NKG2A。

34.如上述权利要求中任一项所述的抗体，其中该抗体包括具有在SEQ ID NO:2中所示序列的重链的CDR1、CDR2和CDR3结构域，以及具有在SEQ ID NO:3中所示序列的轻链的CDR1、CDR2和CDR3结构域。

35.如上述权利要求中任一项所述的抗体，其中该抗体包括分别含有SEQ ID NO:2-6中任一个的氨基酸序列的重链的VH CDR，以及分别含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链的VL CDR。

36.如上述权利要求中任一项所述的抗体，其中抗NKG2A抗体是作为一种药学上可接受的组合物给予的，该组合物包括治疗有效量的该抗NKG2A抗体。

37.如权利要求36所述的抗体，其中该组合物不含任何其他药学活性剂。

38.一种结合并且中和NKG2A的抑制活性的抗体，用于治疗或预防个体中的癌症，包括：

a)确定患有癌症的个体内恶性细胞的HLA-E多肽状态，并且

b)在确定患者具有在恶性细胞表面上显著表达的HLA-E多肽后，以有效实现对应于NKG2A+NK细胞应答的至少EC₅₀、任选地EC₁₀₀的抗NKG2A抗体的血液(血清)浓度的量向该个体给予该抗体。

39.如权利要求38所述的方法，其中在步骤(a)中确定该HLA-E多肽状态包括确定在生物样品中恶性细胞的HLA-E核酸或多肽的表达水平，并且将该水平与参考水平进行比较。

40.如权利要求38-39所述的方法，其中该抗体以有效实现对应于NKG2A+NK细胞应答的至少EC₅₀、任选地EC₁₀₀的抗NKG2A抗体的血管外组织浓度的量给予。

41.如权利要求38-40所述的方法，其中对于NKG2A+NK细胞应答的该EC₅₀为约4μg/ml。

42.如权利要求38-40所述的方法，其中对于NKG2A+NK细胞应答的该EC₁₀₀为约10μg/ml。

43.如权利要求38-42所述的方法，其中抗体与HLA-E竞争结合NKG2A。

44.一种结合并且中和NKG2A的抑制活性的抗体，用于治疗个体中的疾病，该治疗包括以有效实现对应于NKG2A+NK细胞应答的至少EC₅₀、任选地EC₁₀₀的血液浓度的量向该个体给予该抗体。

45.如权利要求44所述的方法，其中对于NKG2A+NK细胞应答的该EC₅₀为约4μg/ml。

46.如权利要求44所述的方法，其中对于NKG2A+NK细胞应答的该EC₁₀₀为约10μg/ml。

47.如权利要求44-46所述的方法，其中抗体与HLA-E竞争结合NKG2A。

48.如上述权利要求中任一项所述的方法，其中NKG2A+NK细胞应答是对表达HLA-E的靶细胞的NKG2A+NK细胞应答。