CN107072198A - 用于螨虫的天然杀螨剂、用于螨虫的识别标记及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及对螨虫具有杀螨活性的天然杀螨剂及识别标记,更具体地,涉及即使在未利用合成物质的条件下,即在利用对天然成分的蜜蜂花(Melissa officinalis)精油或巴戟提取物进行分馏纯化的物质的情况下,也对尘螨及长角血蜱(谋杀螨)等的螨虫具有优秀的杀螨活性效果的天然杀螨剂、具有螨虫的识别效果的识别标记及其制备方法。

Description

用于螨虫的天然杀螨剂、用于螨虫的识别标记及其制备方法
技术领域
本申请主张2014年10月16日申请的韩国专利申请第10-2014-0 140038号及2015年09月23日申请的韩国专利申请第10-2015-01349 26号作为优先权,上述说明书均为本申请的参考文献。
本发明涉及利用对蜜蜂花(Melissa officinalis)精油或巴戟提取物进行分馏纯化处理的化合物及其衍生物的用于螨虫的天然杀螨剂和/或识别标记。
背景技术
卫生害虫分布在人类的生活周边,一直以来被视为最头痛的问题。尤其,在因感染性疾病的媒介害虫而引起的人类的疾病上,由于在人类与媒介害虫之间具有流行病学相关性,因此实际上难以完全去除这些害虫。因此,在卫生害虫领域中,有效控制这些感染性疾病的媒介害虫的方法的开发是被受注目的。
全球性蔓延的过敏性疾病是由生活方式引起的,尤其,在现代化的室内居住环境中,随着空气中被传播的过敏原的出现频度的增加,发病率也随着增加。以空气作为媒介的过敏原有螨虫、动物毛、花粉等,据了解这些抗原与过敏的发病具有密切的关系。据研究报告,若一旦接触到这些抗原,则鼻炎、哮喘及过敏性皮炎的发病率会增加。螨虫作为引发过敏性疾病的主要媒介抗原,已知的主导品种有粉尘螨(Dermatophagoides farinae)、屋尘螨(D.pteronyssinus)及腐食酪螨(Tyrophagus putrescentiae)。为了去除这些螨虫,实施了调节栖息地环境的物理方法,但由于存在很多在生活适用方面上的限制性的条件,因此难以期待完善的防治。出于这些原因,主要使用利用如苯甲酸苄酯(benzyl benzoate)或二乙基甲苯酰胺(diethyl-m-toluamide,DEET)等的化学物质的螨虫防治方法。由于这种化学防治在处理方面上药效持续时间短,因此需要进行定期处理,而且导致因反复的处理而产生的抵抗性个体的出现及环境中的残留等。并且,因被防治的螨虫尸体上残留有过敏性抗原因子,而实际上难以完全去除。
最近被受关注的谋杀螨作为硬蜱科的长角血蜱(Haemophysalis longicorni),主要发现在5~8月份的韩国国内的全区域。据了解,通常寄生在栖息在野外的动物中,且喜欢湿地。尤其,长角血蜱属于致死率达到10%左右的发热伴血小板减少综合征病毒(Severefever w ith thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)的媒介害虫,而且被发热伴血小板减少综合征病毒感染的长角血蜱的比率占0.5%。然而至今为止还未开发出针对发热伴血小板减少综合征的疫苗或抗病毒药物,因此最好的方法为控制这些媒介害虫本身,但长角血蜱的宿主(野生鼠、猫、鸟等)存在多样性,而且具有分布在韩国国内的全区域的特性,因此难以完全控制。因此,迫切需要有关能够管理长角血蜱的出现并控制接触的管理系统,但针对长角血蜱的杀螨作用研究还未完善。
近年来,正进行从已知的化合物中揭示新的活性的研究。这些化合物具有多样的生理活性,而且安全性已被验证,因此可以用作对于粉尘螨、屋尘螨、腐食酪螨及长角血蜱的用于综合性的螨虫的天然杀螨剂来所应用。因此很多研究人关注于已知的化合物上的新功能鉴定。
尤其,尘螨(粉尘螨/屋尘螨)、腐食酪螨及长角血蜱各自具有不同的防治机制,因此对尘螨具有杀螨功能的杀螨剂,并未对腐食酪螨或长角血蜱具有杀螨功能的论文已在多处发表过。因此,有必要开发对各类螨虫具有杀螨功能的天然杀螨剂。
发明内容
技术问题
本发明的目的在于,提供以过敏性及发热伴血小板减少综合征的抗原来起作用的、对尘螨、长角血蜱等的螨虫具有杀螨活性的生物材料及衍生化合物的用于螨虫的天然杀螨剂。并且,本发明的目的在于,提供通过引导上述螨虫的颜色变化来示出显示活性的螨虫识别标记。
解决问题的方案
本发明涉及用于螨虫的天然杀螨剂,为了解决上述技术问题,而提供包含由以下化学式1或化学式2表示的化合物作为有效成分的用于螨虫的天然杀螨剂。
化学式1:
在上述化学式1中,R1可以为C1~C3的直链烷基、C3~C5的支链烷基或氢,上述R2可以为C1~C3的直链烷基、C3~C5的支链烷基或氢,上述a、b及c可以分别为单键或双键。
化学式2:
在上述化学式2中,R1为C1~C3的直链烷基、C3~C5的支链烷基,上述R2为-OH,上述n及m满足0<n+m≤4,n为0~4的整数,m为0~3的整数。
作为本发明的优选一实施例,在上述化学式1中,R1可以为氢或C1~C2的直链烷基,在化学式1中,R2可以为氢或C1~C2的直链烷基,在化学式2中,R1可以为C1~C2的直链烷基,上述n可以为0~3的整数,m可以为0~2的整数。
作为本发明的优选一实施例,在上述化学式1中,R1可以为氢或甲基(CH3),在化学式1中,R2为氢或甲基(CH3)。
作为本发明的优选一实施例,本发明的用于螨虫的天然杀螨剂可以为选自由以下化学式3表示的3,7-二甲基-2,6-辛二烯醛、由化学式4表示的辛醛、由化学式5表示的2-辛醛、由化学式6表示的2,4-辛二烯醛及由化学式7表示的3,7-二甲基-6-辛醛组成的组中的一种。
化学式3:
化学式4:
化学式5:
化学式6:
化学式7:
作为本发明的优选一实施例,其特征在于,由上述化学式1及化学式3至7表示的化合物可以来源于蜜蜂花精油提取物的分馏纯化物,由化学式2表示的化合可以物来源于巴戟提取物的分馏纯化物。
作为本发明的优选一实施例,上述用于螨虫的天然杀螨剂可以对选自由粉尘螨、屋尘螨、腐食酪螨、粗脚粉螨(Tyroglyphus putrescen tiae)及长角血蜱组成的组中的一种以上的螨虫具有杀螨作用。并且,尤其其特征在于,可以对长角血蜱具有优秀的杀螨作用。
本发明提供包含选自由以下化学式3、化学式5、化学式6及化学式8表示的化合物中的一种以上作为有效成分,并具有杀螨效果的用于螨虫的识别标记。
化学式3:
化学式5:
化学式6:
化学式8:
在上述化学式2中,R1为C1~C5的直链烷基,C3~C5的支链烷基,n为2~3的整数。
作为本发明的优选一实施例,其特征在于,上述识别标记对选自由粉尘螨、屋尘螨、粗脚粉螨及腐食酪螨组成的组中的一种以上的螨虫具有识别效果。
本发明提供用于螨虫的天然杀螨剂的制备方法,其特征在于,利用硅胶层析及高效液相色谱对得到浓缩的蜜蜂花精油或巴戟提取物进行分馏纯化工序,来制备分馏纯化物,上述分馏纯化物包含由以下化学式1或化学式2表示的化合物。
并且,本发明提供包含蜜蜂花精油或巴戟提取物作为有效成分的用于杀螨及标记的组合物。
发明的效果
根据本发明的天然杀螨剂为与以往的化学防治剂不同,是具有天然成分的杀螨剂,并且以来源于蜜蜂花精油或巴戟提取物的成分作为有效成分的天然杀螨剂不仅对尘螨及长角血蜱等的螨虫具有优秀的杀螨活性,而且具有可通过引导螨虫的颜色变化,来容易进行识别的显示活性。因此,可通过去除除掉作为主要过敏性抗原的尘螨之后颜色变化的螨虫尸体,来预防由此引起的二次感染。
附图说明
图1为以往的用于螨虫的杀螨剂(DEET)和被蜜蜂花(蜜蜂花)精油杀掉的螨虫的光学显微镜图片。
图2为利用以往的尘螨的化学防治剂的二乙基甲苯酰胺(DEET)来去除螨虫(粉尘螨、屋尘螨)之后拍摄的光学显微镜图片。
图3为利用本发明的杀螨剂来去除螨虫(粉尘螨,屋尘螨)之后拍摄的光学显微镜图片。
具体实施方式
本发明中所使用的术语“C1”、“C2”等指碳原子数,例如,“C1~C3的烷基”指碳原子数为1~3的烷基。
表示的化学式中,当用“R1为独立的氢原子、甲基或乙基,a为1~3。”来表示取代基时,在a为3的情况下,指具有多个R1,即R1的取代基存在3个,这些多个R1各个相同,或相互不同,各个R1可以均为氢原子、甲基或乙基,或各个R1可以均为不同,即,R1中的一个可以为氢原子,另一个可以为甲基,又一个可以为乙基。并且,上述内容作为解释本发明中表示的取代基的一例,其他形式的类似取代基也应该用相同的方法来解释。
作为本发明中所使用的术语的用于螨虫的天然杀螨剂,指为了杀灭螨虫类而所使用的药剂。作为主要的用于螨虫的杀螨剂还有焦磷酸四乙酯、八甲磷、内吸磷及甲基内吸磷等的有机磷杀虫剂、DN药剂、乙醋杀螨醇、二氯苯三氯乙醇、氟代乙酰胺及硒酸钙等。
以下,对本发明进行更详细的说明。
本发明的用于螨虫的天然杀螨剂,其特征在于,可以包含由以下化学式1或化学式2表示的化合物。
化学式1:
在上述化学式1中,R1为C1~C3的直链烷基、C3~C5的支链烷基或氢,上述R2为C1~C3的直链烷基、C3~C5的支链烷基或氢,上述a、b及c分别为单键或双键。
作为本发明的用于螨虫的天然杀螨剂的成分,具体地,上述R1可以为氢或C1~C2的直链烷基,R2可以为氢或C1~C2的直链烷基,更优选地,R1可以为氢或甲基(CH3),R2可以为氢或甲基(CH3)。
更具体地,本发明的用于螨虫的天然杀螨剂的成分可以为选自由以下的化学式3表示的3,7-二甲基-2,6-辛二烯醛、由化学式4表示的辛醛、由化学式5表示的2-辛醛、由化学式6表示的2,4-辛二烯醛及由化学式7表示的3,7-二甲基-6-辛醛组成的组中的一种。
化学式3:3,7-二甲基-2,6-辛二烯醛(3,7-Dimethyl-2,6-oc tadienal)
化学式4:辛醛(Octanal)
化学式5:2-辛醛(2-Octenal)
化学式6:2,4-辛二烯醛(2,4-Octadienal)
醛(3,7-Dimethyl-6-octenal)
化学式2:
在上述化学式2中,R1为C1~C5的直链烷基或C3~C5的支链烷基,优选为C1~C2的直链烷基,更优选为甲基。并且,上述R2为-OH。并且,上述n及m满足0<n+m≤4,优选地,满足2≤n+m≤3,并且,此时,上述n为0~4的整数,优选为0~3的整数。并且,上述m为0~3的整数,优选为0~2的整数。
本发明的螨虫杀螨剂成分中的上述有效成分具体的,可以包含选自由上述化学式1表示的化合物 中的一种以上,优选地,可以包含选自由中的一种以上,更优选地,可以包含选自由 中的一种以上。
本发明的由上述化学式1、5及6表示的化合物可以来源于蜜蜂花精油提取物的分馏纯化物,由化学式8表示的化合物可以来源于巴戟提取物的分馏纯化物。
本发明中所提供的用于螨虫的天然杀螨剂,其特征在于,可以使用于所有的螨虫类,但优选地,对选自由粉尘螨、屋尘螨、腐食酪螨、粗脚粉螨及长角血蜱组成的组中的一种以上的螨虫具有杀螨作用,其中,尤其对长角血蜱具有优秀的杀螨作用。
在本发明的一实施例中,利用熏蒸法测定了蜜蜂花精油的杀螨作用,结果确认出:多种螨虫类中屋尘螨和长角血蜱的杀螨作用最显著(参照表2),在利用接触法的蜜蜂花精油的杀螨作用中确认出:对长角血蜱的杀螨作用最显著(参照表3)。
可将本发明的用于螨虫的天然杀螨剂作为选自水剂、乳剂、涂布剂、烟熏剂、熏剂、颗粒剂及固体剂中的一种剂型来使用,优选地,可作为选自水剂、涂布剂及熏剂中的一种剂型来使用。
并且,本发明不仅可以用作上述描述的用于螨虫的天然杀螨剂来使用,而且可以用作螨虫的识别标记来使用,在识别标记的情况下,可以包含由以下化学式3、化学式5、化学式6及化学式8表示的化合物作为有效成分。
化学式3:
化学式5:
化学式6:
化学式8:
在上述化学式2中,R1为C1~C5的直链烷基或C3~C5的支链烷基,优选为C1~C2的直链烷基,更优选为甲基。并且,上述n为2~3的整数,优选为2的整数。
更具体地,本发明的识别标记的成分可以为选自由以下化学式3中表示的3,7-二甲基-2,6-辛二烯醛、化学式5中表示的2-辛醛及化学式6中表示的2,4-辛二烯醛组成的组中的一种。并且,在化学式8中,上述化学式8可以为
在本发明的用于螨虫的识别标记中,与上述识别标记相接触的螨虫被去除的同时,出现颜色变化现象,变为黑色,深灰色或黄色。在用化合物来处理螨虫时的颜色变化效果示出在本发明的表5及图1至3中。
本发明的由上述化学式3、化学式5及化学式6表示的化合物可以来源于蜜蜂花精油提取物的分馏纯化物,由上述化学式8表示的化合物可以为对巴戟提取物进行分馏纯化的纯化物。
本发明的识别标记对螨虫类均具有识别效果,优选地,对选自由粉尘螨、屋尘螨、粗脚粉螨及腐食酪螨组成的组中的一种的螨虫具有识别效果。
另一方面,在长角血蜱的情况下,与其他螨虫相比尺寸显著大,颜色为黑色,因此不经过标记也易于被发现,而且可容易地识别。
并且,本发明提供包含蜜蜂花精油或巴戟提取物作为有效成分的用于杀螨及标记的组合物。
在本发明的一实施例中,对对照组的DEET进行处理的组中螨虫不显色,但,对实验组的蜜蜂花精油进行处理时,螨虫呈黄色,由此确认出:本发明的化合物能够起到更易于识别螨虫的标记的作用(参照图1至图3)。
在制备这些本发明的用于螨虫的天然杀螨剂和/或识别标记的方法中,对蜜蜂花精油或巴戟提取物进行分馏纯化可以制备出由杀螨成分的上述化学式1和/或化学式2表示的化合物。更具体地,其特征在于,通过如下的步骤来制备用于螨虫的天然杀螨剂,上述步骤包括:第一步骤,利用作为提取溶剂的己烷来从蜜蜂花精油或巴戟粉末以及水的混合物中制备蜜蜂花精油提取物或巴戟提取物;第二步骤,对上述提取物进行干燥及过滤,并分离出提取溶剂和精油物质,之后通过减压浓缩来制备得到浓缩的提取物;第三步骤,通过利用硅胶层析来对得到浓缩的提取物进行分馏纯化处理,来获得8个分馏层;第四步骤,通过利用硅胶层析来对上述8个分馏层中对螨虫具有杀螨活性的分馏层成分进行分馏纯化处理,来再度获得5个分馏层;第五步骤,利用高效液相色谱从再度获得的上述5个分馏层中对螨虫具有杀螨活性的分馏层成分中再度获得3个分馏层;以及第六步骤,通过对再度获得的上述3个分馏层中对螨虫具有杀螨活性的分馏层成分进行测定,来获得蜜蜂花精油提取物或巴戟提取物的分馏纯化物。
上述第一步骤的巴戟粉可以通过利用蒸馏水充分清洗巴戟之后,经过干燥并研磨来制备。并且,在上述第一步骤中,可以通过利用水蒸气蒸馏法在75℃~85℃温度下,进行5~7小时的提取工序,优选地,在78℃~83℃温度下,进行5小时30分钟~6小时30分钟的提取工序,来制备出巴戟提取物。
并且,上述第一步骤中的蜜蜂花精油可以通过利用蒸馏来提取蜜蜂花的整株草,并利用其次的提取条件连续提取来制备(提取温度为75℃、提取时间为5小时、提取溶剂为己烷(hexane)、提取容量为200ml)。
上述第二步骤的减压浓缩可以在30℃~40℃温度下,优选地,在32℃~38℃温度下进行,此时,若因减压浓缩温度小于30℃而处于太低的状态,则可以产生无法进行减压浓缩过程的问题,若超过40℃,则可以产生引起提取物内的有效成分的退化的问题。
并且,可以通过利用己烷及乙酸乙酯混合有机溶剂来进行基于上述第三步骤及第四步骤的硅胶层析的分馏纯化处理。
并且,可以利用有机溶剂的甲醇来进行基于上述第五步骤的高效液相色谱的分馏纯化处理。
以下,对本发明进行详细说明。
为了提高本发明的理解度,而揭示具体的实施例。但以下实施例仅作为更容易地理解本发明而所提供,本发明的范围并不局限于此。
实施例1
1-1.蜜蜂花精油提取
本发明中所使用的蜜蜂花整株草是利用蒸馏水来清洗并干燥之后,经过研磨过程之后的产物。将被研磨的蜜蜂花整株草(100g)和1200ml的蒸馏水,注入于3000ml的圆底烧瓶之后,利用水蒸气蒸馏法(steam distillation extraction,SDE)连续进行了提取。本发明中所使用的提取条件如下(提取温度为75℃、提取时间为5小时、提取溶剂为己烷(hexane)、提取容量为200ml)。上述的蜜蜂花提取物是利用无水硫酸镁、滤纸及减压浓缩机来去除蜜蜂花精油和杂质之后,经过减压浓缩保存在冰箱。
1-2.巴戟提取物的准备
将巴戟(Morinda officinalis)用1000ml的蒸馏水清洗3次之后,在阴凉且通风的条件下,干燥48小时以上并研磨。在被研磨的150g的试料中,注入1500ml的蒸馏水之后,利用水蒸气蒸馏法在80℃温度下提取了6小时,此时,作为提取溶剂使用了300ml的己烷。上述的提取物是利用无水硫酸镁进行干燥之后,利用滤纸分离提取溶剂和精油物质之后,在35℃温度下,经过减压浓缩之后,密封并保管在冰箱。
实施例2
2-1.蜜蜂花精油的GC-MS分析
为了确认包含在上述实施例1中所提取的蜜蜂花精油中的挥发性组合物,而将10mg的蜜蜂花精油溶解在1ml的己烷中,并离心分离之后,过滤上清液之后利用GC/MS进行了分析。GC/MS的分析条件如下。在柱为VF-5ms(30mm×0.25mm×0.25mm)、载气(carrie rgas)为氦(1ml/min)、注入(injection)温度为250℃、烘箱温度为50~250℃、上升温度为3℃、注入容量为1μl、注入模式为20:1的分馏比(split ratio)的条件下进行了成分分析,利用质量选择检测器(Mass Selective Detector,MSD),在质量范围(mass range)为28-550、扫描(scan)条件下进行了成分分析,其结果在表1中示出。
表1
蜜蜂花精油的GC-MS分析结果
从表1中,确认了包含在蜜蜂花精油的各种化合物,其中3,7-二甲基-2,6-辛二烯醛的含量最高,达到43.37%。由此,对包含蜜蜂花精油和在蜜蜂花精油中含量最高的3,7-二甲基-2,6-辛二烯醛在内的、与其具有类似的结构的化合物(辛醛、2-辛醛、2,4-辛二烯醛、3,7-二甲基-6-辛醛)的杀螨活性进行了评价。
2-2.巴戟提取物的分馏纯化及结构鉴定
对包含在从上述实施例1中提取的巴戟提取物的杀螨活性化合物进行了分馏纯化。
(1)利用色谱法的分馏纯化
为了对螨虫的巴戟的有效成分进行分馏纯化,而实施了硅胶层析和高效液相色谱。首先,在硅胶层析中,作为洗脱溶剂阶段性的比率来使用了己烷和乙酸乙酯的混合有机溶剂,每分钟分离提取5ml,获得了8个分馏层(MO1~MO8)。对这些8个分馏层,测定出对各个尘螨和长角血蜱的杀螨活性的结果,在MO3分馏层中示出了优秀的杀螨活性,从MO3分馏层中,利用将己烷和乙酸乙酯以8:2的比率来混合的洗脱溶剂来实施了硅胶层析,其结果获得5个分馏层(MO31~MO35),之后通过生物测定,从MO32分馏层确认出:对螨虫具有优秀的杀螨活性。
其次,为了从利用上述硅胶层析得到分离的MO32分馏层中纯化单一物质的杀螨性组合物,而实施了高效液相色谱。每分钟流出3.5ml的甲醇有机溶剂,在264nm的波长下,利用紫外线(UV)检测机检测出3个分馏层(MO321~MO323)。在各个分馏层中,实施了对于尘螨及长角血蜱的杀螨活性测定,其结果确认出对MO322分馏层具有优秀的杀螨力。
(2)巴戟有效成分的结构鉴定
为了了解从上述巴戟提取物中被分馏纯化的MO322分馏层的化学结构,而利用质谱仪测定了分子量,并根据1H-NMR(600MHz)和13C-NMR(150MHz)实施了频谱分析。由此确认出:从巴戟提取物中被分馏纯化的有效成分为由以下化学式2-1表示的化合物。
EI-MS(70eV)m/z:M+120;
1H-NMR(CDCl3,600MHz):δ2.48(s,3H),7.26-7.44(d,J=7.2Hz,1H),7.45-7.59(t,J=5.6Hz,1H),7.61-7.75(t,J=5.6Hz,1H),7.77-7.90(d,J=5.2Hz,1H),and 10.36(s,1H);
13C-NMR(CDCl3,150MHz):δ18.6(CH3),191.0(CH),126.2(CH),131.9(CH),13.1.9(CH)134.4(C),134.4(CH),139.6(C)。
化学式2-1:
实施例3
对螨虫的蜜蜂花精油提取物的杀螨活性评价
(1)实验螨虫
对粉尘螨、屋尘螨、腐食酪螨及长角血蜱进行了有关杀螨作用的测定,粉尘螨、屋尘螨及腐食酪螨是从2004年2月4日韩国首尔大学校农生命大学农生物学科安勇俊教授研究室中购买的,在过去10年中,在没有受到任何杀螨剂的条件下,在26℃的温度、70%的相对湿度、没有受到外部环境的条件下,进行了饲养。长角血蜱是在位于在韩国全罗北道完州郡的水库周边上采取的,之后进行了有关杀螨作用的测定。
(2)对实验螨虫的杀螨作用测定
在本发明的杀螨作用测定中,利用熏蒸法和接触法来对粉尘螨、屋尘螨、腐食酪螨及长角血蜱的杀螨作用进行了测定。以初步实验为基准设定了初始剂量,并稀释初始剂量(104μg/cm2)的试料,并用滤纸处理50μl之后,在室温条件下,干燥了20分钟之后开始使用。作为阴性对照区仅处理了50μl的丙酮。熏蒸法是在陪替氏培养皿的盖上附着经过处理的滤纸,接触法是在陪替氏培养皿的底部附着经过处理的滤纸,之后分别接种25只螨虫,并在26℃温度、70%的相对温度、黑暗条件下的恒温箱中放置24小时之后,利用光学显微镜观察了螨虫。当螨虫受到刺激时没有动静的,则被认定已死亡,各个测定反复实施了5次。以下,在表2、表3及表4中用LD50(半数致死剂量)值来对杀螨活性进行了比较。
表2
利用熏蒸法的蜜蜂花精油、3,7-二甲基-2,6-辛二烯醇及其衍生物的杀螨作用的测定
上述表2示出利用熏蒸法测定对实施例1的蜜蜂花精油、3,7-二甲基-2,6-辛二烯醛及其衍生物的粉尘螨、屋尘螨、腐食酪螨及长角血蜱的杀螨作用的结果。其结果,除了辛醛之外的蜜蜂花精油(2.06μg/cm2、1.42μg/cm2、3.25μg/cm2及1.97μg/cm2)、3,7-二甲基-2,6-辛二烯醛及其衍生物对粉尘螨、屋尘螨、腐食酪螨及长角血蜱具有优秀的杀螨作用,比对照区的DEET(27.23μg/cm2、25.47μg/cm2、31.47μg/cm2及49.72μg/cm2)的杀螨作用优秀。相反,辛醛对腐食酪螨没有杀螨作用。
表3
利用接触法的蜜蜂花精油、3,7-二甲基-2,6-辛二烯醇及其衍生物的杀螨作用的测定
上述表3示出利用接触法测定实施例1的蜜蜂花精油及3,7-二甲基-2,6-辛二烯醛及其衍生物的粉尘螨、屋尘螨、腐食酪螨及长角血蜱的杀螨作用的结果。其结果,除了辛醛之外的蜜蜂花精油(4.02μg/cm2、3.34μg/cm2、7.34μg/cm2及0.33μg/cm2)及3,7-二甲基-2,6-辛二烯醛及其衍生物对粉尘螨、屋尘螨、腐食酪螨及长角血蜱具有优秀的杀螨作用,比对照区的DEET(20.63μg/cm2、15.13μg/cm2、17.26μg/cm2及43.46μg/cm2)的杀螨作用优秀2.35~132.09倍。相反,辛醛对腐食酪螨没有杀螨作用。
表4
利用熏蒸法及接触法的、来源于蜜蜂花精油的化合物的长角血蜱杀螨作用的测定
上述表4示出利用熏蒸法及接触法来测定包含在实施例2的蜜蜂花精油的3,7-二甲基-2,6-辛二烯醛及其衍生物(辛醛,2-辛醛,2,4-辛二烯醛及3,7-二甲基-6-辛醛)的长角血蜱的杀螨作用的结果。在熏蒸法中,2-辛醛(0.25μg/cm2)的杀螨作用最优秀,其次,按照3,7-二甲基-6-辛醛(0.49μg/cm2)、2,4-辛二烯醛(0.86μg/cm2)、3,7-二甲基-2,6-辛二烯醛(0.99μg/cm2)、辛醛(6.58μg/cm2)的顺序示出了杀螨作用。并且,在接触法中,2-辛醛(0.12μg/cm2)的杀螨作用也最高,其次,按照3,7-二甲基-6-辛醛(0.25μg/cm2)、3,7-二甲基-2,6-辛二烯醛(0.33μg/cm2)、2,4-辛二烯醛(0.53μg/cm2)、辛醛(1.97μg/cm2)的顺序示出了杀螨作用。
实施例4
对于尘螨的蜜蜂花精油提取物的标记活性评价
基于实施例3的接触法来测定出基于上述实施例1的方法来准备的蜜蜂花精油的杀螨活性之后,利用光学显微镜(×500)观察了粉尘螨、屋尘螨及腐食酪螨的变化。
表5
化合物螨虫的标记活性评价
上述表5示出用蜜蜂花精油经过处理之后,观察了粉尘螨、尘螨及腐食酪螨的颜色变化的结果。作为对照区的DEET没有对螨虫产生颜色变化(图1),但蜜蜂花精油通过引导粉尘螨、屋尘螨及腐食酪螨的颜色变化来使之变为黄色(图1)。并且,3,7-二甲基-2,6-辛二烯醛、2-辛醛及2,4-辛二烯醛将螨虫的颜色引导至棕色或淡棕色。因此,上述蜜蜂花精油、3,7-二甲基-2,6-辛二烯醛、2-辛醛2,4-辛二烯醛可以用作螨虫标记来使用。
通过上述实施例及实验例,可确认出:经过分馏纯化的本发明的蜜蜂花精油提取物的特定成分作为天然杀螨剂的有效成分,可以对螨虫具有优秀的杀螨效果。
实施例5~实施例17
对于螨虫的巴戟提取物的杀螨活性评价
从西格玛(sigma)公司或默克(merck)公司购入以下表6中示出的化合物作为用于螨虫的杀螨剂。
表6
实验例1:对于尘螨及长角血蜱的杀螨活性评价
(1)杀螨活性测定中所使用的螨虫
相对于尘螨和长角血蜱实施了杀螨活性测定,并在25±2℃温度、75±10%的相对湿度、被与饲养室的任何杀螨剂隔离的状态下,饲养了尘螨。而且在韩国全州北道全州市所在川边采集了长角血蜱,在未饲养的条件下采集之后,实施了杀螨活性测定。
(2)对于尘螨及长角血蜱的杀螨活性评价
在本发明中,利用熏蒸法和直接接触法对尘螨及长角血蜱实施了杀螨活性测定。在本发明中,在初步实验的基础上,将初始剂量设定为104μg/cm2。稀释初始剂量的试料并利用滤纸(filter paper)处理50μl之后,在室温(25℃)条件下干燥20分钟之后开始使用。并且,在阴性对照区中仅处理了10μl的丙酮。
熏蒸法是在陪替氏培养皿(petri dish)的盖上附着经过处理的滤纸,直接接触法是在陪替氏培养皿底部附着经过处理的滤纸,之后分别接种30只螨虫,并在25±2℃温度、70±10%的相对温度、黑暗条件下的恒温箱中放置24小时之后,利用光学显微镜确认了杀螨与否。
并且,当用细毛笔刺激螨虫的躯体时没有动静的,则被认定已死亡,各个测定反复实施了5次。在表7(熏蒸法)及表8(直接接触法)中,用LD50(半数致死剂量)值来对杀螨活性进行了比较。
表7
从利用上述表7中的熏蒸法,测定巴戟提取物(比较例1)和实施例5~实施例18的化合物的尘螨及长角血蜱的杀螨活性的结果来看,实施例17(0.21μg/cm2、0.19μg/cm2、0.68μg/cm2)中的杀螨活性最高,接着按照实施例11(0.46μg/cm2、0.44μg/cm2、0.79μg/cm2)、实施例13(0.65μg/cm2、0.68μg/cm2、0.88μg/cm2)、实施例12(0.66μg/cm2、0.59μg/cm2、0.95μg/cm2),实施例5(0.95μg/cm2、0.87μg/cm2、1.28μg/cm2)、实施例6(0.99μg/cm2、0.93μg/cm2、1.38μg/cm2)、实施例7(1.17μg/cm2、1.15μg/cm2、3.67μg/cm2)、实施例8(1.32μg/cm2、1.27μg/cm2)、巴戟提取物(7.05μg/cm2、6.99μg/cm2、19.70μg/cm2)及实施例14(7.53μg/cm2、6.69μg/cm2)的顺序示出了优秀的杀螨活性。由此可确认出:在对照区的DEET的情况下,杀螨活性(36.50μg/cm2、34.23μg/cm2、52.03μg/cm2)的LD50值最低。
表8
从利用上述表8中的直接接触法,测定巴戟提取物和实施例5~实施例18的化合物的尘螨及长角血蜱的杀螨活性的结果来看,实施例18(0.12μg/cm2、0.19μg/cm2、0.46μg/cm2)的杀螨活性最高,接着按照实施例11(0.25μg/cm2、0.24μg/cm2、0.56μg/cm2)、实施例12(0.32μg/cm2、0.32μg/cm2、0.62μg/cm2)、实施例13(0.35μg/cm2、0.36μg/cm2、0.74μg/cm2)、实施例5(0.51μg/cm2、0.47μg/cm2、0.94μg/cm2)、实施例6(0.53μg/cm2、0.50μg/cm2、1.02μg/cm2)、实施例7(0.63μg/cm2、0.61μg/cm2、1.84μg/cm2)、实施例8(0.69μg/cm2、0.71μg/cm2)、实施例14(3.79μg/cm2、3.45μg/cm2)及巴戟提取物(5.57μg/cm2、5.00μg/cm2、15.48μg/cm2)的顺序示出了优秀的杀螨活性。
并且,在对照区的DEET的情况下,杀螨活性(19.64μg/cm2、14.12μg/cm2、47.77μg/cm2)的LD50值最低。
通过上述表7及表8的实验结果,可确认出:本发明的用于螨虫的杀螨剂不仅可以通过直接接触法来显示杀螨效果,而且可以通过熏蒸法来显示杀螨效果,每个实施例5~9的化合物对螨虫种类显示杀螨效果上的有无和杀螨程度上的差异,但优选地,在整体上对粉尘螨、屋尘螨及长角血蜱具有优秀的杀螨活性。
实验例2:对于尘螨的标记活性评价
利用上述实验例1的方法测定来源于上述巴戟提取物和巴戟提取物的分馏纯化的实施例5~实施例18的化合物的、杀螨活性之后,利用光学显微镜用500倍数来观察了作为代表性的尘螨的粉尘螨及屋尘螨的颜色变化,其结果示出在以下表9中。并且,图2中示出了利用以往的化学防治剂的DEET来进行杀螨的螨虫的光学显微镜图片,图3中示出了利用实施例11的化合物来进行杀螨的螨虫的光学显微镜图片。
表9
从观察上述表9的粉尘螨及屋尘螨的颜色变化的实验结果来看,对照区的DEET没有起到变化螨虫颜色的作用(图2),但可以诱导实施例11中的粉尘螨及屋尘螨的颜色变化,来使之变成黑色(图3)。并且,在实施例5~实施例10及实施例12~实施例18中未存在螨虫的颜色变化。
通过上述实施例及实验例,可以确认出:本发明的巴戟提取物中的经过分馏纯化的特定成分为天然杀螨剂的有效成分,具有优秀的杀螨效果,并且,可以确认出:上述天然杀螨剂的有效成分中的可以用作能够在视觉上识别螨虫的标记来使用。
产业上的可利用性
来源于本发明的蜜蜂花精油或巴戟提取物的化合物不是以往的化学防治剂而是天然成分的杀螨剂,不仅对粉尘螨、屋尘螨、腐食酪螨、长角血蜱等的螨虫具有优秀的杀螨活性,而且通过诱导螨虫的颜色变化,来可以具有在视觉上能够易于进行识别的标记活性。因此,若利用蜜蜂花精油或5种化合物来对作为主要的室内过敏原的螨虫进行处理,则因被杀灭的螨虫的尸体得到颜色变化,而在视觉上能够易于识别,由此可以去除引发二次感染的螨虫尸体,从而产业上的可利用性高。

Claims (14)

1.一种用于螨虫的天然杀螨剂,其特征在于,
包含由以下化学式1或化学式2表示的化合物作为有效成分:
化学式1:
在上述化学式1中,R1为C1~C3的直链烷基、C3~C5的支链烷基或氢,
上述R2为C1~C3的直链烷基、C3~C5的支链烷基或氢,
上述a、b及c分别为单键或双键,
化学式2:
在上述化学式2中,R1为C1~C3的直链烷基、C3~C5的支链烷基,上述R2为-OH,上述n及m满足0<n+m≤4,n为0~4的整数,m为0~3的整数。
2.根据权利要求1所述的用于螨虫的天然杀螨剂,其特征在于,在上述化学式1中,R1为氢或C1~C2的直链烷基,在化学式1中,R2为氢或C1~C2的直链烷基,在化学式2中,R1为C1~C2的直链烷基,上述n为0~3的整数,m为0~2的整数。
3.根据权利要求1所述的用于螨虫的天然杀螨剂,其特征在于,在上述化学式1中,R1为氢或甲基,在化学式1中,R2为氢或甲基。
4.根据权利要求1所述的用于螨虫的天然杀螨剂,其特征在于,
上述化学式1为选自由以下化学式3表示的3,7-二甲基-2,6-辛二烯醛、由化学式4表示的辛醛、由化学式5表示的2-辛醛、由化学式6表示的2,4-辛二烯醛及由化学式7表示的3,7-二甲基-6-辛醛组成的组中的一种:
化学式3:
化学式4:
化学式5:
化学式6:
化学式7:
5.根据权利要求4所述的用于螨虫的天然杀螨剂,其特征在于,由上述化学式1及化学式3至6表示的化合物来源于蜜蜂花精油提取物的分馏纯化物,由化学式2表示的化合物来源于巴戟提取物的分馏纯化物。
6.根据权利要求1所述的用于螨虫的天然杀螨剂,其特征在于,上述用于螨虫的天然杀螨剂对选自由粉尘螨、屋尘螨、腐食酪螨、粗脚粉螨及长角血蜱组成的组中的一种以上的螨虫具有杀螨作用。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的用于螨虫的天然杀螨剂,其特征在于,将上述杀螨剂作为选自由水剂、乳剂、涂布剂、烟熏剂、熏剂、颗粒剂及固体剂组成的组中的一种剂型来使用。
8.一种用于螨虫的识别标记,其特征在于,包含选自由以下化学式3、化学式5、化学式6及化学式8表示的化合物中的一种以上作为有效成分,并具有杀螨效果:
化学式3:
化学式5:
化学式6:
化学式8:
在上述化学式2中,R1为C1~C3的直链烷基、C3~C5的支链烷基,n为2~3的整数。
9.根据权利要求8所述的用于螨虫的识别标记,其特征在于,由上述化学式3、化学式5及化学式6表示的化合物来源于蜜蜂花精油提取物的分馏纯化物,由上述化学式8表示的化合物来源于巴戟提取物的分馏纯化物。
10.根据权利要求8所述的用于螨虫的识别标记,其特征在于,在上述化学式7中,R1为C1~C2的直链烷基,n为2的整数。
11.根据权利要求8所述的用于螨虫的识别标记,其特征在于,上述识别标记对选自由粉尘螨、屋尘螨、粗脚粉螨及腐食酪螨组成的组中的一种以上的螨虫具有识别效果。
12.一种用于螨虫的天然杀螨剂的制备方法,其特征在于,利用硅胶层析及高效液相色谱对得到浓缩的蜜蜂花精油或巴戟提取物进行分馏纯化工序,来制备分馏纯化物,
上述分馏纯化物包含由以下化学式1或化学式2表示的化合物:
化学式1:
在上述化学式1中,R1为C1~C3的直链烷基、C3~C5的支链烷基或氢,上述R2为C1~C3的直链烷基、C3~C5的支链烷基或氢,上述a、b及c分别为单键或双键:
化学式2:
在上述化学式1中,R1为C1~C3的直链烷基、C3~C5的支链烷基,上述R2为-OH,上述n及m满足0<n+m≤4,n为0~4的整数,m为0~3的整数。
13.根据权利要求12所述的用于螨虫的天然杀螨剂的制备方法,其特征在于,
包括:
第一步骤,利用作为提取溶剂的己烷来从蜜蜂花精油或巴戟粉末以及水的混合物中制备蜜蜂花精油提取物或巴戟提取物;
第二步骤,对上述提取物进行干燥及过滤,并分离出提取溶剂和精油物质,之后通过减压浓缩来制备得到浓缩的提取物;
第三步骤,通过利用硅胶层析来对得到浓缩的提取物进行分馏纯化处理,来获得8个分馏层;
第四步骤,通过利用硅胶层析来对上述8个分馏层中对螨虫具有杀螨活性的分馏层成分进行分馏纯化处理,来再度获得5个分馏层;
第五步骤,利用高效液相色谱从再度获得的上述5个分馏层中对螨虫具有杀螨活性的分馏层成分中再度获得3个分馏层;以及
第六步骤,通过对再度获得的上述3个分馏层中对螨虫具有杀螨活性的分馏层成分进行测定,来获得蜜蜂花精油提取物或巴戟提取物的分馏纯化物,
上述分馏纯化物包含由上述化学式1或化学式2表示的化合物。
14.一种用于杀螨和标记的组合物,其特征在于,包含蜜蜂花精油或巴戟提取物作为有效成分。
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