CN107058149A - 一种泛菌属菌株及其应用 - Google Patents

一种泛菌属菌株及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN107058149A
CN107058149A CN201611008629.6A CN201611008629A CN107058149A CN 107058149 A CN107058149 A CN 107058149A CN 201611008629 A CN201611008629 A CN 201611008629A CN 107058149 A CN107058149 A CN 107058149A
Authority
CN
China
Prior art keywords
bacterial strain
general pseudomonas
phosphorus
pseudomonas bacterial
general
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201611008629.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN107058149B (zh
Inventor
阎爱华
王志刚
李慧恩
崔延
李�雨
沈腾为
肖坤
齐国辉
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hebei Agricultural University
Original Assignee
Hebei Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hebei Agricultural University filed Critical Hebei Agricultural University
Priority to CN201611008629.6A priority Critical patent/CN107058149B/zh
Publication of CN107058149A publication Critical patent/CN107058149A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107058149B publication Critical patent/CN107058149B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205Bacterial isolates
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01NPRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种泛菌属菌株,其分类命名为泛菌(Pantoea sp.),于2016年7月06日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.12737。本发明的菌株同时具有产氨气,产IAA,溶磷,增加作物及其根际土壤氮、磷、钾含量的能力,可应用于小麦、玉米、水稻等农作物生长过程。

Description

一种泛菌属菌株及其应用
技术领域
本发明涉及微生物技术领域,具体的说是涉及一种泛菌属菌株及其应用。
背景技术
植物根际的微生物多而活跃,构成了根际特有的微生物区。细菌是根际微生物区系的主体,基于对植物的作用不同,根际细菌(rhizobacteria)分为有益(2%~5%),有害(8%~15%)和中性(80%~90%)3类。其中能够促进植物生长、防治病害、增加作物产量的微生物被称为促生根际菌(plant growth-promoting rhizobacteria,简称PGPR)。长久以来,人们关于土传病害生物防治的研究表明,根际微生物是理想的生防因子,而PGPR不仅是生物控制土传病害的有效方式,还可以刺激植物生长,促进作物增产。
磷是植物进行必要生命活动所需的大量营养元素之一,我国有74%的耕地土壤缺磷。土壤中95%以上的磷为无效形式,植物很难直接吸收利用。施入的磷肥当季作物利用率为5%~25%,大部分磷与土壤中的Ca2+、Fe3+、Fe2+、Al3+结合,形成难溶性磷酸盐。研究发现,PGPR中具有溶磷作用的细菌可以促进植物的生长,分解土壤中的难溶磷矿物,将植物难以吸收利用的磷转化为可吸收利用的形态,供植物生长发育。
自然界大气中的氨气主要是由有机物分解而产生,由于其浓度低,对人畜和农作物不仅不会发生危害,而且还有利于大多数植物的生长发育。PGPR中的固氮菌是关于生物固氮作用长期研究和开发的重点。氮素是农业生产中不可缺少的一种化肥,在农业生产中,氮被视为衡量土壤养分状况乃至土壤肥力的一个重要指标,然而水稻、小麦、玉米等农作物自身并无固氮能力,为提高农作物的产量,需要额外补充氮素,向土壤施用大量氮肥,这不仅造成了农业成本的上升,还会污染土壤、水体及农产品,破坏生态环境。基于此,利用固氮微生物和联合固氮微生物等生物固氮来提高土壤无机氮含量则成为了土壤氮肥补充的有效途径,是保证农业绿色可持续发展,生态环境改善的关键。
钾能调节植物细胞原生质的胶体状态和提高光合作用的强度,促进作物的氮素代谢;能调节叶面气孔数和大小,加快作物导管和筛管的运输速率,因此,具有增加根际土壤钾含量的PGPR可以促进农作物的生长。
生长素(Indole-3-acetic acid,IAA)在植物的形态建成,器官发生和多种生理过程中都发挥着很重要的作用,尤其对植物的生长发育有着至关重要的作用。部分PGPR若产生适量的IAA可以直接促进植物生长,筛选具有产IAA能力的微生物可以为促生生物肥料的研发等提供出发菌株。
目前,在PGPR领域尚未有同时具备产氨气,产IAA,溶磷,增加作物及其根际土壤氮、磷、钾含量能力的微生物菌株报道,而筛选出一种多能性PGPR无疑对农业生产有巨大的帮助。
发明内容
本发明的目的在于提供一种泛菌属菌株,该菌株同时具有产氨气,产IAA,溶磷,增加作物及其根际土壤氮、磷、钾含量的能力,可应用于小麦、玉米、水稻等农作物生长过程。
为达上述目的,本发明采用如下技术方案:
一种泛菌属菌株,其分类命名为泛菌(Pantoea sp.),于2016年7月06日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.12737。
其中所述菌株菌落性状不规则,表面湿润光滑,易挑起,半透明,无机磷和有机磷平板中具有明显的溶解圈,固氮平板呈球状突起。
本发明所述泛菌属菌株分离自河北省邢台市玉米根际土壤中,命名为3C。参照《常见细菌系统鉴定手册》(东秀珠,蔡妙英等)对该泛菌属菌株进行形态和生理生化鉴定,结果显示,泛菌属菌株菌落性状不规则,表面湿润光滑,易挑起,半透明,无机磷和有机磷平板中具有明显的溶解圈,固氮平板呈球状突起(见图1)。
PCR扩增该泛菌属菌株的16S rDNA,最后在上海生物工程有限公司进行测序工作,并在(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)上进行序列比对,构建系统发育树,如图1。由图1可以看到,本发明所述菌株与Pantoea ananatis(CVNF01000066.1)位于同一族群,亲缘关系最近,结合泛菌属菌株的形态特征和生理生化特性,参照《Bergey's Manual ofSystematic Bacteriology》和《常见细菌系统鉴定手册》将泛菌属菌株鉴定为泛菌Pantoeasp.。
所述类芽孢杆菌的生理生化特性如表1:
表1
本发明测定了菌株3C产生长素、氨气及溶磷能力。结果表明,3C具有产IAA的能力,3C的IAA分泌量为9.795mg/L,同时具产氨气能力和溶磷能力,3C的溶磷量为1.416mg/L。
此外,本发明通过盆栽试验检测菌株3C对苗期玉米及其根际土壤主要矿质元素-氮、磷、钾含量的影响。结果表明,3C菌株处理显著增加了玉米植株及其根际土壤的氮、磷、钾含量。
基于上述技术效果,本发明提出了所述泛菌属菌株在促进农作物生长和制备农作物促生长剂中的应用,以及在制备溶磷、增加农作物及其根际土壤氮磷钾含量、固氮、产氨气和/或产IAA生物制剂中的应用。其中,所述农作物可以是小麦、水稻或玉米。
所述农作物主要为为小麦、水稻或玉米。
本发明的有益技术效果:其具备溶磷、固氮作用,可以产氨气和IAA,增加农作物及其根际土壤氮、磷、钾含量,进而能够促进农作物的生长,可以用于相关的生物制剂制备中。
生物材料保藏信息说明:
分类命名:泛菌,Pantoea sp.,于2016年7月06日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,地址为中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所,保藏编号为CGMCC No.12737。
附图说明
下面结合附图说明对本发明作进一步说明。
图1所示为菌株的系统发育树;
图2所示为菌株的无机磷、有机磷、固氮平板菌落形态图;其中,2-A为无机磷平板、2-B为有机磷平板、2-C为固氮平板。
具体实施方式
本发明实施例公开了一种泛菌属菌株及其应用,本领域技术人员可以借鉴本文内容,适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是,所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的,它们都被视为包括在本发明内。本发明所述菌株和应用已通过较佳实施例进行了描述,相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的产品、方法和应用进行改动或适当变更与组合,来实现和应用本发明技术。
以下就本发明所提供的一种泛菌属菌株及其应用做进一步说明。
一、菌株的16S rDNA序列测定
通过16SrDNA的通用引物,27f和1492r对3C菌株的16S rDNA序列扩增。
采用上海生物工程有限公司的即用PCR扩增试剂盒,建立PCR扩增反应体系,进行PCR扩增,95℃预变性5min,然后95℃变性30s、55℃退火lmin、72℃延伸2min共30个循环,最后72℃再延伸10min,4℃保存。
将PCR扩增产物用琼脂糖凝胶电泳检测,在凝胶成像系统下观察并拍照,最后在上海生物工程有限公司进行测序工作,并在(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)上进行序列比对,构建系统发育树,如图1。
由图1可以看到,本发明所述3C菌株与Pantoea ananatis(CVNF01000066.1)位于同一族群,亲缘关系最仅,结合菌株3C的形态特征和生理生化特性,参照《Bergey's Manualof Systematic Bacteriology》和《常见细菌系统鉴定手册》将菌株3C鉴定为泛菌Pantoeasp.。
二、产生长素、氨气及溶磷能力试验
1、试验菌株
本发明所述泛菌属菌株3C;与3C在相同时间、环境以及土壤中分离得到的经鉴定同样是泛菌属的2C菌株(如Pantoea ananatis);
2、产IAA能力测定
(1)定性测定
取50mL的三角瓶装入R2A液体培养基(酵母粉0.5g;胰蛋白胨0.5g;酪蛋白氨基酸0.5g;葡萄糖0.5g;可溶性淀粉0.5g;磷酸氢二钾0.3g;水合硫酸镁0.05g;丙酮酸钠0.3g;蒸馏水1000mL;调pH 7.2),将3C和2C菌株分别接种于该三角瓶中,每个菌株5个重复,将三角瓶置于28℃摇床,转速为180r/min,培养6d,取50μL菌悬液滴置于用来比色的白色陶瓷板上,同时要加入50μL的Salkowski比色液。只在比色液中加入50μL的50mg/L的植物生长激素(IAA)作为对照。在室温下将白色陶瓷板避光静置处理30min后观察其颜色变化。若为阳性颜色会变粉红,表示能够分泌IAA,颜色越深代表其产IAA的能力越强,反之,则表示其不具有产IAA的能力。
(2)定量测定
培养条件同上,用分光光度计法测定菌悬液的OD530值。将菌悬液10000r/min离心10min,取上清液加入等体积Sallkowski比色液,避光静置30min,测定其OD530值。标准曲线的绘制采用分析纯的IAA梯度稀释制备。
(3)结果
产IAA能力定性及定量测定结果见表2和表3。
表2产IAA能力定性测定结果
菌种 现象 结果
3C 深粉色 +
2C -
对照 粉红色 +
表3产IAA能力定性测定结果
菌种 1 2 3 4 5 平均值 浓度(mg/L)
3C 0.103 0.114 0.107 0.108 0.116 0.110 9.795
结合表2和表3的结果可知,3C菌悬液经此反应后均呈现粉红色,所以3C具有产IAA的能力,浓度为9.795mg/L,而2C菌悬液经此反应后无变色,不具备产IAA能力。
3、产氨气能力测定
方法一:将Nessler’s试纸分别封在装有菌液的三角瓶口,然后放在摇床培养,最后观察试纸颜色,若变黄色则表示该菌具有产氨气的能力,反之则无。
方法二:分别将3C,2C菌株各转接到2支含10mL蛋白胨水(10g/L)试管中,28℃培养72h。只加10mL蛋白胨水的试管作为对照品,即共5个试管。5支试管分别加入0.5mLNessler’s试剂。若颜色转为褐色并产生沉淀表明有NH3产生。
检测结果见表4。
表4产氨气能力检测结果
由表4可知,用滤纸检测和用试剂检测的实验结果是一致的,3C均出现了阳性实验结果,证明3C可产生氨气,产生大量褐色沉淀表明3C产氨气的量较多,而2C产生氨气的能力明显弱于3C,对照是阴性结果。
4、溶磷能力测定
(1)50mL PKO无机磷液体培养基(蔗糖10g;硫酸铵0.5g;氯化钠0.1g;水合硫酸镁0.1g;氯化钾0.2g;硫酸锰0.03g;水合硫酸铁0.03g;酵母膏0.5g;蒸馏水1000mL;调pH 7.0~7.2),加入500μL各待测菌株菌悬液。每个菌株分别设置3个重复,不接种菌株的基础培养基为对照品,将上述三角瓶全部置于温度28℃、转速160r/min的摇床培养,培养7d后,将培养液在4℃条件下10000r/min、离心15min,保留上清液进行测定,测定溶磷量(mg/L)时采用钼锑抗比色法。
(2)超声波处理
测定吸光度之前先考查超声波处理对试验结果的影响[21],本试验考查的是超声波处理20min对测定结果的影响。取5mL上清液于50mL容量瓶中定容,静置,在之后的测定之前,均采用超声波处理。
将分别装有3C、2C液体培养基的三角瓶置于摇床28℃培养3d,转速为150r/min,对照品的三角瓶中装等量的1%无菌水。培养3d后,将培养物转入无菌的50mL离心管中,SB-3200DTDN超声波清洗器进行超声波细胞破碎20min,使细胞内的有效磷释放出来。然后再以转速为4000r/min离心20min,离心完毕后备测。
(3)钼锑抗比色法
钼锑抗比色法测上清液中的有效磷含量。
绘制标准曲线,在50ml容量瓶中分别加入0、2、4、6、8、10ml的5mg/L标准磷溶液,加2滴2,6-二硝基酚做指示剂,用50ml/L硫酸溶液和10%氢氧化钠调节pH为3,使溶液刚呈微黄色。准确加钼锑抗显色剂5mL,摇匀,定容至刻度。从而配制成标准磷浓度分别为0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/L梯度浓度的磷标准溶液。摇匀后,在室温下放置30min使之进行反应。30min后,利用紫外-可见分光光度计测量该系列磷标准液的吸光度,每一梯度测量三个平行,取平均值,计数后,绘制标准曲线。其次,分别对上述已经超声波处理后的两种备测菌液进行同样处理,测量吸光度后,带入标准曲线方程进行定量计算。
(4)溶磷能力结果
在测定吸光度之前,进行了超声波处理考查,经处理过的反应液吸光值为1.159,未经超声波处理的吸光值为0.505,超声波处理对测定结果影响较大。所以,在定量测定时,提前进行超声波处理。溶磷能力测定结果见表5。
表5溶磷能力测定结果
由上表数据得出,3C的OD720为0.703,溶磷量为1.416mg/L,而对照的2C菌株溶磷效果几乎不存在。
三、盆栽苗期玉米及其根际土壤氮、磷、钾含量的检测
1、试验材料
试验土壤为河北省保定市涞源县。
试验所用种子:玉米品种为金秋963,种子均匀的铺在覆有洁净滤纸的培养皿中,用蒸馏水在28℃下浸泡2天,选择出芽良好整齐的种子播种。
2、试验方法
以花盆(上口直径5cm、下底直径3cm、高5cm)为培养容器,接种母液浓度为9.6×108CFU/mL,处理设置为:无菌液(A)、稀释两倍的3C菌液(B)、稀释两倍的2C菌液(C)。播种前,分别用上述菌液浸泡经催芽的玉米种子。每盆放入土壤距离上沿1cm,将浸泡后的种子播种到盆里,再覆盖一层浮土,玉米每盆播种一粒种子,小麦每盆播种三粒种子,每种处理种植25盆。播种后试将花盆置于人工气候箱中(白天30℃,夜晚25℃。光照时间为16小时)。所有处理在相同条件下随机排列,在同一时间进行浸盆浇水。
3、样品收获
植株在种植三周后进行收获,土表上植株作为地上部分,将根系和地上部分用去离子水洗净,将洗净的植物样品放于烘箱中,在105℃下杀青30min,然后在70℃下烘干24小时至恒重,将相同处理的样品放入同一封口袋带中备用。同时取每种处理的土样50g备用。
4、植物N含量的测定
称取样品0.1g于消煮管中,倒入8mL硫酸-高氯酸混合溶液。混合溶液按硫酸:高氯酸(V:V)=10:1配置。先将消煮温度设置为110℃,当温度达到110℃后,每隔5min升温20℃,待温度达到150℃后,等待5min,直接升温至280℃。保持20min,待消煮液颜色变为透明后即可以取出消煮管,在室温下冷却降温。如溶液不透明,则需滴入少许双氧水直至溶液透明。待溶液冷却后,用超纯水定容至100mL,然后过滤于小白瓶中,储存待测。同时,对空白做相同处理,作为对照试验。
用凯氏定氮仪进行测定,操作步骤:取10mL消煮液用凯氏定氮仪进行蒸馏,后用标准酸滴定,记录消耗标准酸体积,计算土壤全N量。
氮素含量按以下公式计算:
氮素含量(g/mg)=(V1-V0)×C×0.014/M×N×103
公式中字母代表:
V1:滴定待测液时所用酸标定的体积(mL);
V0:滴定空白时所用酸标定的体积(mL);
C:硫酸的当量浓度;
0.014:每毫克当量氮的重量%;
M:烘干土样的质量(g);
N:分取倍数;
5、植物P含量的测定
采用钼锑抗比色法。量取消煮液10mL,注入50mL容量瓶中,用水稀释至约20mL,加入二硝基酚指示剂一滴,滴加4N NaOH直至溶液变为黄色,再加入1NH2SO4一滴,使溶液颜色刚刚退去,此时PH=3。然后加钼锑抗指示剂5mL,再加超纯水定容至50mL,摇匀,30min后用880nm波长在分光光度计上比色,以空白试验的显色液的透光度为100,读出吸光度。
钼锑抗试剂的配制:称取酒石酸氧锑钾0.5g溶解100mL水中,制成0.5%的溶液。另称取钼酸铵10g溶于450mL水中,徐徐加入153mL浓硫酸,边加边搅动。再将0.5%的酒石酸氧锑钾溶液100mL加入到钼酸铵溶液中,最后加水至1L充分摇匀,贮于棕色瓶中,此为钼锑混合液。
称取1.5g左旋抗坏血酸(即维生素C,化学纯),溶于100mL钼锑混合液中,混匀,此即为钼锑抗试剂。试剂现用先配。
制作P标准曲线。准确吸取5μg/mL P标准溶液0、1、2、4、6、8mL,分别放入50mL容量瓶中,加水至约30mL,加空白消煮液5mL,调节PH值到3,加钼锑抗试剂5mL,最后用超纯水定容至50mL。30min之后在波长880nm下进行比色。各瓶比色液磷浓度分别为0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8μg/mL P。
磷含量按下面公式进行计算:
磷含量(%)=(ρ×V/M)×(V2/V1)×10-4
公式中字母表示含义:
ρ:通过吸光度和磷标曲线计算出的待测液磷质量浓度(μg/mL);
M:待测样品消煮时称取的重量(g);
V:消煮液定容时体积(mL);
V1:测定时吸取的消煮液体积(mL);
V2:配置测定溶液时定容体积(mL);
6、植物K含量的测定
称取样品1g于消煮管中,并在消煮管中倒入15mL硝酸-高氯酸混合溶液。混合溶液按硝酸:高氯酸(V:V)=5:1配置。消煮过程中,先将消煮温度设置为100℃,当温度达到100℃后,每隔15min升温20℃,待温度达到200℃后,等待20min,直接升温至280℃。保持20min,当消煮液颜色变为透明后即可以取出消煮管,在室温下冷却降温。如溶液不透明,则需滴入少许双氧水直至溶液透明。待溶液冷却后,用超纯水定容至50mL,然后过滤于小白瓶中,储存待测。同时,对空白做相同处理,作为对照试验。
用火焰光度法。测定步骤按火焰光度计的说明书上的使用方法调整好仪器,然后先用最浓的标准溶液喷雾燃烧,调节光栅,使检流计的标尺上有最大读数,然后依次测定各级标准溶液,记下检流计的读数。在方格纸上以标准溶液的ppm数为横坐标,以检流计读数为纵坐标,绘出标准曲线。
吸取土壤待测液5mL于50mL容量瓶中,用去离子水稀释至刻度,摇匀,在火焰光度计上测定,记下检流计上的读数,然后从标准曲线上查得待测液的浓度。
钾含量按下面公式进行计算:
钾含量(mg/g)=(ρ×V/W)×N×10-3
公式中字母表示含义:
ρ:通过吸光度和钾标曲线计算出的待测液钾质量浓度(μg/mL);
V:待测液定容体积(mL);
W:待测样品消煮时称取的重量(g);
N:分取倍数;
7、土样全N、P、K含量的测定
称取烘干土样0.5g,将土样送入干燥的消煮管中加少量蒸馏水湿润土样后,再加入2g加速剂(NaSO4:CuSO4=9:1)和5mL浓硫酸摇匀。在管口放上一小漏斗。在远红外消煮炉中加热,待测液和土样全部变为黄绿色,再继续消煮1h,冷却后加蒸馏水50mL,再放入消煮炉中,利用余温加热,冷却后用超纯水定容至100mL。
利用消煮液测定全N、P、K含量,与测定植物N、P、K含量的方法相同。
8、土样碱解N含量的测定
碱解N测定采用扩散法。称取烘干样品2.00g并均匀铺在扩散皿外室,水平地轻轻旋转扩散皿,使样品铺平。在扩散皿的内室中加入2%硼酸指示剂溶液2mL,然后在皿的外室边缘涂上凡士林,盖上毛玻璃,并旋转数次,以使毛玻璃与皿边完全粘合,再慢慢转开毛玻璃的一边,使扩散皿露出一条狭缝,迅速在扩散皿的外室加入10mL1N氢氧化钠溶液,立即用毛玻璃盖严。水平地轻轻旋转扩散皿,使溶液与土壤充分混匀,用橡皮筋固定。然后小心地将扩散皿放入40℃的恒温箱中24h后取出,以0.01N硫酸标准溶液滴定扩散皿内室硼酸溶液吸收的氨量,终点由蓝绿色转变成紫红色,记下所用去的标准酸量。
2%硼酸-定氮指示剂的配制:称取硼酸20g,溶解于1L蒸馏水中,每升加混合指示剂10mL并用稀氢氧化钠或稀盐酸调至从蓝色转为紫红色(PH4.5)。
结果计算:
碱解氮(mg/100g)=N×V×14/W×100
公式中字母表示含义:
W—烘干土壤重;
N—标准酸当量浓度;
V:消耗酸量;
9、土样速效P含量的测定
速效P测定钼锑抗比色法。称取烘干土样5.00g于200mL三角瓶中,加100mL0.5moL碳酸氢钠溶液,再加一小勺无磷活性炭,塞紧瓶塞,在20~25℃下振荡30min,立即用无磷滤纸过滤。滤液接于100mL于三角瓶中。
吸取滤液10mL于50mL容量瓶中,加硫酸钼锑抗混合显色剂5mL,充分摇匀,排出二氧化碳后加水定容至刻度,再充分摇匀。30min后在波长880nm分光光度计上比色,读透光率,比色时须同时做空白测定。
结果计算:
磷含量(mg/kg)=ρ×V/W
公式中字母表示含义:
ρ:通过吸光度和磷标曲线计算出的待测液磷质量浓度(μg/mL);
V:显色定容体积;
W:土壤质量;
10、土样速效K含量的测定。
速效K测定火焰光度计。测定步骤按火焰光度计的说明书上的使用方法调整好仪器,然后先用最浓的标准溶液喷雾燃烧,调节光栅,使检流计的标尺上有最大读数,然后依次测定各级标准溶液,记下检流计的读数。在方格纸上以标准溶液的ppm数为横坐标,以检流计读数为纵坐标,绘出标准曲线。
称取烘干土样5g于200mL锥形瓶中,加50mL1mol/L的中性乙酸铵溶液,在20-25℃下振荡30分钟,过滤,将滤液直接在火焰光度计上测定钾,同时进行空白试验。
结果计算:
钾含量(mg/Kg)=ρ×V/M
公式中字母表示含义:
ρ:钾标曲线计算出的待测液钾质量浓度(μg/mL);
V:加入浸提剂mL数;
M:烘干土壤质量(g);
11、数据处理
利用Microsoft Excel 2010软件进行数据整理、作图,用SPSS 17.0软件按照单因素方差分析法进行差异显著性分析。
12、对玉米根部氮磷钾含量的检测结果
表6对玉米根部氮磷钾含量的检测结果
注:同列数据后不同字母表示同一品种不同处理间差异达5%显著水平。
由表6可知,本发明所提供的3C菌株可显著增加玉米根部氮磷钾的含量,相比对照和同属其他菌株效果较好且具有显著差异。
13、对玉米叶片氮磷钾含量的检测结果
表7对玉米叶片氮磷钾含量的检测结果
注:同列数据后不同字母表示同一品种不同处理间差异达5%显著水平。
由表7可知,本发明所提供的3C菌株可显著增加玉米叶片氮磷钾的含量,相比对照和同属其他菌株效果较好且具有显著差异。
14、对玉米根际土壤氮磷钾含量的检测结果
表8对玉米根际土壤氮磷钾含量的检测结果
注:同列数据后不同字母表示同一品种不同处理间差异达5%显著水平。
由表8可知,本发明所提供的3C菌株可显著增加玉米根际土壤氮磷钾的含量,相比对照和同属其他菌株效果较好且具有显著差异。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述,并非对本发明的范围进行限定,在不脱离本发明设计精神的前提下,本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进,均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
SEQUENCE LISTING
<110>河北农业大学
<120>一种泛菌属菌株
<130>2016
<160>1
<170>PatentIn version 3.3
<210>1
<211>1102
<212>DNA
<213>Pantoea
<400>1
accattattc aaaagttggt agcgccctcc cgaaggttaa gctacctact tcttttgcaa 60
cccactccca tggtgtgacg ggcggtgtgt acaaggcccg ggaacgtatt caccgtggca 120
ttctgatcca cgattactag cgattccgac ttcacggagt cgagttgcag actccgatcc 180
ggactacgac gcactttatg aggtccgctt gctctcgcga ggtcgcttct ctttgtatgc 240
gccattgtag cacgtgtgta gccctactcg taagggccat gatgacttga cgtcatcccc 300
accttcctcc ggtttatcac cggcagtctc ctttgagttc ccgaccgaat cgctggcaac 360
aaaggataag ggttgcgctc gttgcgggac ttaacccaac atttcacaac acgagctgac 420
gacagccatg cagcacctgt ctcagagttc ccgaaggcac caagccatct ctggcaagtt 480
ctctggatgt caagagtagg taaggttctt cgcgttgcat cgaattaaac cacatgctcc 540
accgcttgtg cgggcccccg tcaattcatt tgagttttaa ccttgcggcc gtactcccca 600
ggcggtcgac ttaacgcgtt agctccggaa gccactcctc aggggaacag cctccaagtc 660
gacatcgttt acggcgtgga ctaccagggt atctaatcct gtttgctccc cacgctttcg 720
cacctgagcg tcagtctttg tccagggggc cgccttcgcc accggtattc ctccagatct 780
ctacgcattt caccgctaca cctggaattc tacccccctc tacaagactc tagcctgcca 840
gtttcgaatg cagttcccag gttaagcccg gggatttcac atccgacttg acagaccgcc 900
tgcgtgcgct ttacgcccag taattccgat taacgcttgc accctccgta ttaccgcggc 960
tgctggcacg gagttagccg gtgcttcttc tgcgggtaac gtcaatcgac ccggttatta 1020
accgcgtcgc tttcctcccc gctgaaagta ctttacaacc cgaaggcctt cttcatacac 1080
ggcggcatgg ctgcatcagg ct 1102

Claims (6)

1.一种泛菌属菌株,其特征在于:其分类命名为泛菌(Pantoea sp.),于2016年7月06日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.12737。
2.根据权利要求1所述的泛菌属菌株,其特征在于,所述菌株菌落性状不规则,表面湿润光滑,易挑起,半透明,无机磷和有机磷平板中具有明显的溶解圈,固氮平板呈球状突起。
3.根据权利要求1-2任意一项所述的泛菌属菌株在制备溶磷、增加农作物及其根际土壤氮磷钾含量、固氮、产氨气和/或产IAA生物制剂中的应用。
4.根据权利要求1-2任意一项所述的泛菌属菌株在促进农作物生长和制备农作物促生长剂中的应用。
5.根据权利要求3所述的泛菌属菌株,其特征在于:所述农作物为小麦、水稻或玉米。
6.根据权利要求4所述的泛菌属菌株,其特征在于:所述农作物为小麦、水稻或玉米。
CN201611008629.6A 2016-11-16 2016-11-16 一种泛菌属菌株及其应用 Active CN107058149B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201611008629.6A CN107058149B (zh) 2016-11-16 2016-11-16 一种泛菌属菌株及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201611008629.6A CN107058149B (zh) 2016-11-16 2016-11-16 一种泛菌属菌株及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107058149A true CN107058149A (zh) 2017-08-18
CN107058149B CN107058149B (zh) 2019-07-23

Family

ID=59618606

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201611008629.6A Active CN107058149B (zh) 2016-11-16 2016-11-16 一种泛菌属菌株及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107058149B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108660087A (zh) * 2017-09-28 2018-10-16 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所 一种用于降低鸡粪堆肥氨气释放的复合微生物菌剂及其制备方法和应用
CN109136147A (zh) * 2018-09-21 2019-01-04 南京农业大学 一种多重重金属耐性产吲哚乙酸的菌株及其应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104962500A (zh) * 2015-07-19 2015-10-07 中国热带农业科学院橡胶研究所 解磷细菌及其分离和培养方法和应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104962500A (zh) * 2015-07-19 2015-10-07 中国热带农业科学院橡胶研究所 解磷细菌及其分离和培养方法和应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KAMAL A.M. ABO-ELYOUSR等: "Integrated control of cotton root rot disease by mixing fungal biocontrol", 《CROP PROTECTION 》 *
杨慧: "溶磷高效菌株筛选鉴定及其溶磷作用研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 农业科技辑》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108660087A (zh) * 2017-09-28 2018-10-16 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所 一种用于降低鸡粪堆肥氨气释放的复合微生物菌剂及其制备方法和应用
CN108660087B (zh) * 2017-09-28 2021-08-10 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所 一种用于降低鸡粪堆肥氨气释放的复合微生物菌剂及其制备方法和应用
CN109136147A (zh) * 2018-09-21 2019-01-04 南京农业大学 一种多重重金属耐性产吲哚乙酸的菌株及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN107058149B (zh) 2019-07-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109897806B (zh) 一株促进作物耐盐碱生长的巨大芽孢杆菌及盐碱地专用微生物肥料和应用
Omara et al. Collaborative impact of compost and beneficial rhizobacteria on soil properties, physiological attributes, and productivity of wheat subjected to deficit irrigation in salt affected soil
Nehela et al. The integrated amendment of sodic-saline soils using biochar and plant growth-promoting rhizobacteria enhances maize (Zea mays L.) resilience to water salinity
CN103275895B (zh) 一株耐盐碱产吲哚乙酸的枯草芽孢杆菌及其应用
CN110616179B (zh) 一株铜绿假单胞菌dgnk-jl2及其应用
CN104911127B (zh) 一种根瘤菌及其菌剂和制备方法与应用
CN109370939A (zh) 一株贝莱斯芽孢杆菌及其分离方法与应用
CN108265017A (zh) 一种促进超积累植物生长及强化萃取土壤重金属的生物修复试剂及修复方法
CN106399148B (zh) 一种泌铵固氮菌及其应用
CN107338199A (zh) 一种促进磷矿粉溶解的菠萝泛菌及其应用
CN104630087A (zh) 一种玉米根际促生菌ym4及其应用
CN107058149B (zh) 一种泛菌属菌株及其应用
CN113801817B (zh) 解磷菌3-1及在溶解磷酸盐上的应用
Hemati et al. Effect of different enriched vermicomposts, humic acid extract and indole-3-acetic acid amendments on the growth of Brassica napus
CN104630094A (zh) 一种花生根际促生菌hs10及其应用
CN104560789A (zh) 一种花生根际促生菌hs2及其应用
CN110257282A (zh) 一种寡氧单胞固氮菌株系si-njau-1及其应用
CN104593301B (zh) 一株壁芽孢杆菌g1及其制备方法和应用
CN105132332B (zh) 一株葡糖醋杆菌及其作为植物促生菌的应用
CN104560788A (zh) 一种花生根际促生菌hs9及其应用
CN104845898B (zh) 一株高效降解邻苯二甲酸二丁酯的普罗威登斯菌(Providencia sp.)2D
CN107557313A (zh) 一种钝化农田镉污染及促水稻增产的复合调理剂
CN114958683B (zh) 一株芽孢杆菌及其应用
CN102816721B (zh) 一种产acc脱氨酶的根癌农杆菌ljl-6及其应用
CN115838639A (zh) 白茅种子内生真菌df101及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant