CN107041384B - 一种含解淀粉芽孢杆菌和嘧菌酯的杀菌组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种含有解淀粉芽孢杆菌和嘧菌酯的杀菌组合物及其应用，该组合物以解淀粉芽孢杆菌和嘧菌酯为活性成分，其质量比为5:1~1:5。本发明还公开了所述杀菌组合物的农用剂型可湿性粉剂和悬浮剂的制备方法及其在防治稻瘟病方面的应用。本发明的杀菌组合物与单剂相比对稻瘟病的防治具有明显的增效作用，可显著提高防治效果；降低了水稻稻瘟病菌对嘧菌酯和芽孢杆菌的潜在抗药性风险；减少了化学农药使用量，有效降低了环境污染和农产品的残留，对人畜、有益生物、环境安全，从而可以广泛的用于水稻稻瘟病的防治。

Description

一种含解淀粉芽孢杆菌和嘧菌酯的杀菌组合物及其应用

技术领域

本发明属于农药领域，具体涉及一种含从水稻根际土壤分离的解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）和嘧菌酯的组合物及其在防治水稻稻瘟病方面的应用。

背景技术

稻瘟病是我国水稻的重要病害，是影响水稻高产最严重的威胁之一，可引起大幅度减产，严重时减产40~50%，甚至颗粒无收。目前稻瘟病防治主要通过栽培抗病品种和喷洒化学农药，但因抗病品种的单一化、化学农药的危害以及病原菌抗药性的产生，使水稻稻瘟病的防治受到一定的限制。因此生物防治越来越受到人们的关注。

解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）属革兰阳性芽孢杆菌，是一种与枯草芽孢杆菌亲缘性很高的细菌，在自然界中分布广泛。解淀粉芽孢杆菌生长过程中可以产生一系列具有广泛地抑制真菌和细菌的活性的代谢产物，在生物防治方面具有广阔的应用前景，已逐步成为具有生物农药开发潜力的微生物。目前已有报道利用解淀粉芽胞杆菌防治水稻纹枯

病、水稻稻瘟病、水稻细菌性条斑病、水稻恶苗病的研究，但目前解淀粉芽孢杆菌在农业生产应用过程中，还存在一些问题，筛选出的高生物活性菌株较少，农药品种制剂单一，用药量大，防治效果不高，见效慢，有效期内活性物质如活菌数降低、芽孢活性减弱、菌株效能不稳定等。因此，筛选高生物活性的生防菌、进一步开发高效、稳定生物农药品种并在生产中推广应用，前景广阔，意义深远。

解淀粉芽孢杆菌WH1G，从水稻根际土壤分离得到，抑菌谱较广，对多种病原真菌和病原细菌均有很强的抑制作用，尤其是对水稻稻瘟病菌抑制作用较强；该菌株生长速度快，适应环境能力强，易于在植物表面定殖，并形成优势种群；诱导寄主产生抗病性；分泌多种抗菌物质；对水稻稻瘟病的防治效果较好。该菌株对嘧菌脂有天然抗性，在嘧菌脂含量为10000ppm的NA培养基中能正常生长，该菌株与2015年04月15日保藏于在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为 CGMCC No.10722。该菌株命名为WHIG，分类命名：解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。

嘧菌酯（Azoxystrobin）,中文别名(E)-[2-[6-(2-氰基苯氧基)嘧啶-4-基氧]苯基]-3-甲氧基丙烯酸甲酯;阿米西达;(E)-2-{2-[6(2-氰基苯氧基)嘧啶-4-基氧]苯基}-3-甲氧基丙烯酸甲酯，是一种甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂，高效、广谱，具有保护、铲除、渗透、内吸活性，对14-脱甲基化酶抑制剂、苯甲酰胺类、二羧酰胺类和苯并咪唑类产生抗性的菌株有效。嘧菌脂可用于茎叶喷雾、种子处理,也可进行士壤处理。它对几乎所有真菌纲(子囊菌纲、担子菌纲、卵菌纲和半知菌类)病害,如白粉病、锈病、颖枯瘸、网斑病、霜霉病、稻瘟病等均有良好的活性,且与目前已有杀菌剂无交互抗性。用于谷物、水稻、葡萄、马铃薯、蔬菜、果树及其它作物,对这些作物安全。

发明内容

本发明的目的在于：针对目前生产上大量使用化学农药防治水稻稻瘟病，造成环境污染严重、农药残留超标、稻米品质下降、抗药性增强，导致防效下降，甚至防治失败的一系列问题，提供一种可提高药效、延长药剂使用时间、降低成本、协同增效作用显著，对水稻稻瘟病有较好防治作用的、且环境友好，安全的复配杀菌组合物。该组合物以解淀粉芽孢杆菌和嘧菌酯为主要活性物质，不仅极大的减少了化学杀菌剂的使用量，降低了现有病原菌对嘧菌酯的潜在抗药性的风险，还能发挥解淀粉芽孢杆菌WHIG有效控制稻瘟病菌的作用，弥补了解淀粉芽孢杆菌抑菌效果慢的缺点，综合了生防菌和化学杀菌剂的优点。本研究结果表明解淀粉芽孢杆菌WHIG与嘧菌脂的组合具有明显的增效作用。

本发明所述的杀菌组合物可以用已知的方法加工成适合农业使用的剂型，包括可湿性粉剂、悬浮剂等，本发明提供了所述杀菌剂的可湿性粉剂及水悬浮剂的制备方法。

本发明所述组合物中的助剂包括湿润剂、分散剂、渗透剂、防冻剂、增稠剂、增效剂、消泡剂等各类助剂中的一种或几种，具体成分和用量根据配方要求通过简单试验确定。

本发明的目的可以通过以下措施达到:

一种含解淀粉芽孢杆菌WHIG与嘧菌脂的组合物，该组合物以解淀粉芽孢杆菌WHIG和嘧菌脂为活性成分，其质量比为1000:1~1：1000；解淀粉芽孢杆菌WHIG和嘧菌脂的质量比优选为500:1~1：500，进一步优化为100：1~1:100，更优选为50:1~1:50，最优选为5:1~1：5。本发明所采用的解淀粉芽孢杆菌活孢子数为0.1亿/克~1000亿/克，优选为0.5亿/克~500亿/克，进一步优选为1亿/克~250亿/克，最优选为10亿/克~100亿/克。

本发明所述杀菌组合物中的解淀粉芽孢杆菌要先制成母粉，方法如下：首先将WH1G接入NA培养基中振荡培养(180 r/min, 28℃) 48 h，80℃水浴处理 15 min，8000 r/min 离心 15 min，去上清液获得细菌沉淀，加入10 mL过滤除菌的MgSO₄溶液(0.l mol/L)和1mL无菌甘油，振荡混勻后再加入l mL浓度为1.5%(w/v)海藻酸钠溶液，然后将上述混合液与50g滑石粉及4g Ca-lignosulphate充分混合，无菌条件下室温保存。

所述组合物中解淀粉芽胞杆菌母粉的生存能力测定 每隔30d,分别测定可湿性粉剂中生防菌的生存能力，方法是每次测定时，分别称取0.5克可湿性粉剂，置于10mL无菌水中，制备悬浮液，经倍比稀释后，分别涂布于NA平板上，28℃培养24h，计数生长菌落，计算出单位重量可湿性粉剂中细菌的菌落形成单位。结果表明，生防菌剂中细菌的生存能力较强，室温条件下保存120d细菌的存活数量仍能达到10¹⁰cfu/g，150d能达到10⁸cfu/g，随着时间延长，细菌数量不断下降，至180d仅能达到10⁷cfu/g。

所述的杀菌组合物向活性成分解淀粉芽孢杆菌和嘧菌脂中加入农药助剂和填料后即可配得可湿性粉剂和悬浮剂，其中有效成分占杀菌组合物总重量的20%~60%，助剂占杀菌组合物总重量的10%~30%,其余为填料。嘧菌酯可以采用原药，解淀粉芽孢杆菌采用原粉，助剂可以选用湿润剂、分散剂、渗透剂、防冻剂、增稠剂、增效剂等各类助剂中的一种或几种。

当所述杀菌组合物的剂型为可湿性粉剂时，由下述质量百分含量的组分组成

解淀粉芽胞杆菌母粉（100亿活孢子/克） 10%~50%,

嘧菌酯 10%~40% ,

载体 30%~65%，

分散剂 3%~8%,

润湿剂 2%~5%，

渗透剂 3%~5%

其特征是所述载体优选为白炭黑、高岭土，所述分散剂优选为木质素磺酸钠，所述润湿剂优选为十二烷基苯磺酸，所述渗透剂优选为JFC。

当所述杀菌组合物的剂型为水悬浮剂时，由下述质量百分含量的组分组成：

解淀粉芽胞杆菌母粉（100亿活孢子/克）5%~50%,

嘧菌酯 5%~45% ,

分散剂 2%~8%，

润湿剂 2%~4%，

增稠剂 0.2%~2%

增效剂 2%~5%

防冻剂 2%~4%

消泡剂 1%~3%

余量加水至100%，

其特征是所述分散剂优选为木质素磺酸钙，润湿剂优选为十二烷基硫酸钠，增稠剂优选为黄原胶，所选防冻剂优选为乙二醇；消泡剂优选为有机硅消泡剂，水优选为自来水或蒸馏水的一种。

本发明的杀菌组合物用于防治水稻稻瘟病，在水稻破口期和齐穗期，以喷雾法施药为宜。

本发明的组合物降低了水稻稻瘟病菌对嘧菌酯和解淀粉芽孢杆菌的潜在抗药性风险，将解淀粉芽孢杆菌与嘧菌酯组合后，二者之间具有明显的增效作用，可以显著提高对稻瘟病的防治效果，同时减少了化学农药使用量，从而使该组合物可以有效的应用于水稻稻瘟病的防治。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步阐释本发明，但本发明的实质并不限于下述实施例。

实施例1：30%可湿性粉剂的制备（各组分为质量份）

解淀粉芽孢杆菌WH1G（100亿活孢子/克） 15

嘧菌脂 15

十二烷基硫酸钠 2

木质素磺酸钠 4

渗透剂JFC 4

白炭黑 补足至100（调pH值5~7）

实施例2：40%可湿性粉剂制备（各组分为质量份）

解淀粉芽孢杆菌WH1G（100亿活孢子/克） 30

嘧菌脂 10

十二烷基硫酸钠 2

木质素磺酸钠 4.5

渗透剂JFC 4.5

白炭黑 30

高岭土 补足至100（调pH值5~7）

实施例3：50%可湿性粉剂制备（各组分为质量份）

解淀粉芽孢杆菌WH1G（100亿活孢子/克） 10

嘧菌脂 40

十二烷基硫酸钠 3

木质素磺酸钠 5

渗透剂JFC 5

白炭黑 20

高岭土 补足至100（调pH值5~7）

实施例4：60%可湿性粉剂制备（各组分为质量份）

解淀粉芽孢杆菌WH1G（100亿活孢子/克） 50

嘧菌脂 10

十二烷基硫酸钠 3

木质素磺酸钠 5

渗透剂JFC 5

白炭黑 20

高岭土 补足至100（调pH值5~7）

按照实施例1、2、3、4的配方，将有效成分、助剂、填料加在一起，经气流粉碎后，在锥形混合机内搅拌30分钟，即可制得解淀粉芽孢杆菌与嘧菌酯的杀菌可湿性粉剂。

实施例5: 20% 悬浮剂的制备（各组分为质量份）

解淀粉芽孢杆菌WH1G（100亿活孢子/克） 5

嘧菌脂 15

木质素磺酸钙 5

十二烷基硫酸钠 2

有机硅 2

黄原胶 0.3

乙二醇 2

自来水 补足至100

实施例6: 42% 悬浮剂的制备（各组分为质量份）

解淀粉芽孢杆菌WH1G（100亿活孢子/克） 7

嘧菌脂 35

木质素磺酸钙 6

十二烷基硫酸钠 3

有机硅 2

黄原胶 0.3

乙二醇 3

自来水 补足至100

实施例7: 50% 悬浮剂的制备（各组分为质量份）

解淀粉芽孢杆菌WH1G（100亿活孢子/克） 40

嘧菌脂 10

木质素磺酸钙 7

十二烷基硫酸钠 4

有机硅 2

黄原胶 0.2

乙二醇 3.5

自来水 补足至100

按照实施例5、6、7的配方，将有效成分、分散剂、润湿剂等各组分装入带高剪切搅拌的反应釜中，粉碎混合，直到混合体均匀后将搅拌粉碎的物料通入砂磨机中，通冷却循环水进行砂磨超微粉碎，终点粒径小于3微米。即可制得解淀粉芽孢杆菌与嘧菌酯的杀菌水悬浮剂。

实施例8 用实施例1-实施例7所配置的解淀粉芽孢杆菌与嘧菌酯的杀菌组合物防治水稻稻瘟病的田间效果。

本发明试验作物为水稻，品种为：皖稻153；共设置实施例1-实施例7所配置的解淀粉芽孢杆菌与嘧菌酯的杀菌组合物、100亿CFU/g解淀粉芽孢杆菌母粉、25%嘧菌酯悬浮剂和空白对照共10个处理，每个处理3次重复，小区面积100㎡，于水稻破口期和齐穗期各喷药一次，每亩兑水50公斤均匀喷雾，第二次药后15天调查各处理稻瘟病病情指数，并以对照区的病情指数计算相对防治效果，调查结果如表1。

表1 解淀粉芽孢杆菌﹒嘧菌酯对水稻稻瘟病田间小区试验的防效（%）

^注：a: 理论防效%=（实施例中芽孢杆菌单剂防效×所占比例＋嘧菌酯防效×所占比例）×100

b: 增效效果%=（实施例防治效果—理论防效）/理论防效×100

从表1可以看出在破口期和齐穗期两个关键时期喷药后，本发明组合物的7个制剂实施例对水稻稻瘟病的防效均在90%左右，明显高于对照药剂，特别是实施例3-实施例7，防效均在90%以上，实施例6防效高达93.46%，防效显著；本发明组合物和单剂相比，增效效果均在20%以上，特别是实施例4和实施例7增效效果分别高达29.30%和30.60%，增效作用明显，可显著提高防治效果；本发明组合物对水稻生长安全，田间未发现任何不良反应，所以该组合物可以广泛的用于水稻稻瘟病的防治。

Claims (5)

1.一种含解淀粉芽孢杆菌和嘧菌酯的杀菌组合物，其特征在于该组合物以解淀粉芽孢杆菌和嘧菌酯为活性成分，其质量比为5:1~1:5; 所述的解淀粉芽孢杆菌名称为WH1G，是从水稻根际土壤中分离的拮抗细菌，保存号为CGMCC NO. 10722；所述的解淀粉芽孢杆菌中活孢子数为10亿/克~100亿/克。

2.根据权利要求1所述的杀菌组合物，其特征在于向活性成分解淀粉芽孢杆菌和嘧菌酯中加入助剂和填料后，配得可湿性粉剂和水悬浮剂。

3.根据权利要求2所述的杀菌组合物，其特征在于采用的助剂可以选用湿润剂、分散剂、渗透剂、防冻剂、增稠剂、增效剂、消泡剂中的一种或几种;采用的填料为轻质碳酸钙、白炭黑、高岭土、凹凸棒土、有机膨润土中的一种或几种。

4.根据权利要求2所述的杀菌组合物，其特征在于有效成分占杀菌组合物总重量的20%~60%，助剂占杀菌组合物总重量的10%~30%，其余为填料。

5.权利要求1-4任一项所述的含解淀粉芽孢杆菌和嘧菌酯的杀菌组合物用于防治水稻稻瘟病的应用，其特征在于在水稻破口期和齐穗期喷洒杀菌组合物。