CN107028932A - 冈田酸在治疗假体周围骨溶解中的药物用途 - Google Patents

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郭晓斌
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Abstract

本发明公开了冈田酸在制备用于治疗假体周围骨溶解的药物组合物中的用途，冈田酸为式（Ⅰ）的结构：（Ⅰ）。本发明通过研究冈田酸对于假体周围骨溶解的治疗作用，为防治假体周围骨溶解提供了一种新途径。

Description

冈田酸在治疗假体周围骨溶解中的药物用途
技术领域
本发明涉及化学药物新用途技术领域，具体涉及冈田酸在治疗假体周围骨溶解中的药物用途。
背景技术
假体周围骨溶解（Peri-prosthetic osteolysis, PPO）是关节置换术（totaljoint arthroplasty, TJA）后出现的重要并发症，往往是导致置换术后失败及翻修的主要原因。据报道，在美国每年有大约40000个关节置换术后的病人需要做翻修手术，并且在未来的25年内，髋关节的翻修量将会增长1.37倍，膝关节翻修量将会增加6倍，这也给病人带来巨大病痛和沉重的经济损失，而PPO作为导致置换术后失败及翻修的主要原因，其治疗显得尤为重要。目前认为假体长期磨损产生无菌性细小颗粒引起的生物学反应导致骨吸收增加及新骨生成的减少是引起PPO的主要原因，但我们对于PPO发生的具体机制仍不明确，也没有特别有效的保守治疗方法，因此研究如何有效地防治PPO具有重要意义。
冈田酸（Okadaic Acid），其分子式为C44H68O13，分子量为805.01，CAS No. 是78111-17-8，结构如式（Ⅰ）所示：
（Ⅰ）。
冈田酸（OA）是一种脂溶性化合物，首次从冈田软海绵中分离出而得名，无色晶体，不溶于水，但可溶于甲醇、乙醇、氯仿和乙醚等有机溶剂，不吸收紫外线，熔点为134℃。OA有很强的稳定性，对一般加工处理，如冷冻、取内脏、臭氧化及热处理无明显影响。OA是一种强有力的磷酸酯酶抑制剂，且特异性地抑制PP1（蛋白磷酸酶1）和PP2A（蛋白磷酸酶2A）。OA对PP2A的抑制作用比对PP1强10-100倍，因此在科学研究中得以广泛运用。目前尚无研究OA与关节置换术后假体周围骨溶解的关系，本发明也由此而来。
发明内容
要解决的技术问题：本发明的目的在于研究OA对于假体周围骨溶解的治疗作用，为防治假体周围骨溶解提供了一种新途径。
技术方案：冈田酸在制备用于治疗假体周围骨溶解的药物组合物中的用途，冈田酸为式（Ⅰ）的结构：
（Ⅰ）。
优选的，所述的假体周围骨溶解为人工关节置换术后发生的假体周围骨溶解。
优选的，所述的药物组合物包含药学上有效剂量的冈田酸和药学上可接受的载体。
本发明中，可将本发明中的OA采用本领域常规的方法制备成适用于局部注射给药的针剂，方便快捷，副作用小。因OA经胃肠道吸收具有一定的毒性，故不适宜做成口服剂型。本发明所述的药学上可接受的载体为组合物中制剂使用的辅料，可采用本领域常规的辅料，以不和本发明活性成分发生反应或不影响本发明药物的疗效为前提，所述制剂的制备方法可采用本领域常规的制备方法进行制备。
本发明中，组合物的制备方法没有限制，OA直接做成制剂，或者分别或/和辅料混合后做成制剂，然后按照本领域常规的方法制备成剂。本发明中的药物组合物的给药剂量根据给药对象及疾病时期不同而改变，选择局部给药为准。
冈田酸（OA），其分子式为C44H68O13，分子量为805.01，CAS No. 是78111-17-8，来源于Tocris Bioscience公司。
本发明技术方案通过局部注射给药法来研究OA能否对磨损颗粒诱导的小鼠颅骨骨溶解有治疗作用，同时测定PP2A（蛋白磷酸酶2A）、核因子κ B受体活化因子配体（RANKL）等指标来研究这种作用与破骨细胞活化的关系，探讨OA治疗关节置换术后骨溶解的机制及理论依据。
本发明通过80只C57BL/J6小鼠被随机分为Control组、Ti组、OA低剂量治疗组（L组）和OA高剂量治疗组（H组），每组20只。各组动物均在全麻下行常规手术操作，Ti组和OA治疗组的动物均在小鼠颅骨表面置入40µl 已配制的40%Ti颗粒PBS液（16mg/只），而Control组给予40µl的PBS。OA治疗组从术后当天开始每天小鼠颅骨骨膜下局部注射100µl含有OA的无菌PBS溶液（其中低剂量组和高剂量组给药剂量分别为0.4µg/kg和4µg/kg），Control组和Ti组每天小鼠骨膜下局部注射100µl无菌PBS溶液。各组于术后14天处死动物取颅骨行micro-CT及组织学检测，测定颅骨骨密度、骨体积分数、骨溶解面积、骨膜厚度以及成熟破骨细胞数量等分析颅骨骨溶解程度；同时应用免疫组化方法检测PP2A、RANKL等在颅骨标本中表达量。采用单因素方差分析对各组数据进行统计学分析。
有益效果：本发明结果表明，Ti组与Control组相比，颅骨表面有较多的陷窝，骨密度、骨体积、骨体积分数明显减少（**p<0.01）；骨膜内细胞数量增多，骨膜明显增厚（**p<0.01），颅骨矢状缝边缘有明显的虫蚀样变化，骨溶解面积显著增加（**p<0.01）；颅骨厚度变薄（**p<0.01），成熟破骨细胞数量增多（**p<0.01）；OA治疗组中颅骨表面陷窝数及骨表面孔隙率明显减少，骨密度、骨体积分数明显增加，骨溶解程度明显减轻，成熟破骨细胞数量减少，与Ti组比较差异有统计学意义（*p<0.01），尤其在高剂量治疗组作用更明显（**p<0.01）。
免疫组化结果显示，在Control组RANKL的浓度及PP2A的浓度较低；在Ti组，RANKL的含量及PP2A的含量急剧增加，与Control组相比，**p<0.01；在OA治疗组，RANKL及PP2A的含量随着OA浓度的增加显著下降。
该动物实验证实冈田酸对人工假体置换术后假体周围骨溶解有一定的防治作用，可使磨损颗粒诱导的破骨细胞活化得到抑制，可作为人工假体置换术后假体周围骨溶解的药物干预的一种新手段。
相对于现有技术中的方案，本发明的优点是：
本发明通过应用钛颗粒诱导的小鼠颅骨骨溶解模型，观察冈田酸（OA）对磨损颗粒诱导骨溶解的治疗作用，并评估破骨活化主要指标RANKL的改变，分析骨溶解的各项指标，从而阐明OA干预人工假体置换术后假体周围骨溶解的作用机制。人工假体长期磨损产生的微小颗粒能上调RANKL的表达，活化RANKL通路，引起破骨细胞活化，目前被认为是引起假体周围骨溶解的重要机制，而OA通过抑制此通路，抑制破骨细胞活化，这可能是OA对人工假体置换术后假体周围骨溶解防治作用的重要机制之一。
附图说明
图1为micro-CT扫描各实验组小鼠颅骨的三维模型，其中：A为Control组，B为Ti组，C为OA低剂量治疗组，D为OA高剂量治疗组；
图2为各实验组小鼠颅骨骨密度（BMD）的检测值；
图3为各实验组小鼠颅骨骨体积分数（BV/TV）的检测值；
图4为各实验组小鼠颅骨骨表面孔隙率（Porosity）的检测值；
图5为各实验组小鼠颅骨HE染色结果，其中：A为Control组，B为Ti组，C为OA低剂量治疗组，D为OA高剂量治疗组；
图6为各实验组小鼠颅骨厚度（BT）的检测值；
图7为各实验组小鼠颅骨骨溶解面积（BES）的检测值；
图8为各实验组小鼠颅骨TRAP染色结果，其中：A为Control组，B为Ti组，C为OA低剂量治疗组，D为OA高剂量治疗组；
图9为各实验组小鼠颅骨TRAP染色阳性细胞计数结果；
图10为各实验组小鼠颅骨PP2A免疫组化染色结果，其中：A为Control组，B为Ti组，C为OA低剂量治疗组，D为OA高剂量治疗组；
图11为各实验组小鼠颅骨免疫组化表达PP2A阳性细胞计数结果；
图12为各实验组小鼠颅骨RANKL免疫组化染色结果，其中：A为Control组，B为Ti组，C为OA低剂量治疗组，D为OA高剂量治疗组；
图13为各实验组小鼠颅骨免疫组化表达RANKL阳性细胞计数结果。
具体实施方式
具体实施方式：
一、材料与方法
1、材料
1.1 试剂及实验设备
1.1.1主要药品及试剂
冈田酸（OA），购自Tocris Bioscience公司，英国；TRAP染色试剂盒，购自Sigma，美国；多聚甲醛、PBS、DAB显色剂、苏木素、伊红、无水乙醇、蒸馏水、10%水合氯醛。钛颗粒购自美国Johnson Matthey chemicals公司 ( catalog #00681; Ward Hill, Massachusetts )；PP2A抗体购自Cell Signaling Technology公司，美国；RANKL、TNF-α抗体购自Abcam公司，英国；
1.1.2主要仪器
Micro-CT（SkyScan 1176，比利时）、石蜡切片机（Leica 2135，德国）、烤片机（Leica1120，德国）、石蜡包埋机（Leica 1150，德国）、Axiovert 40C光学显微镜（Zeiss，德国）、手术器械一套等。
1.2实验动物
健康C57BL/J6小鼠80只，雄性，体重19～22g，6～8周龄，清洁级，由苏州大学动物实验中心提供。喂养条件如下：五只一笼，室温18～20℃，湿度50～60%，通风良好，自由摄食进水。
2、实验方法
2.1 Ti颗粒的处理
95%的颗粒直径<4μm。为去除内毒素，将颗粒溶于体积分数75%乙醇，常温下振荡1h，共4次，100%乙醇浸泡过夜，等渗盐水洗涤3次，180℃的烘箱里烘干6小时，4℃保存备用。
2.2 实验动物分组
将C57BL/J6小鼠80只，随机分为以下4组：
（1）Control组：20只，操作与Ti组相同，仅将置入的钛颗粒改为等量的无菌PBS溶液，术后每天颅骨骨膜下局部注射0.1ml无菌PBS溶液，2周后处死；
（2）Ti组：20只，在小鼠颅骨表面置入40µl 已配制的40%Ti颗粒PBS液（16mg/只），术后每天颅骨骨膜下局部注射0.1ml无菌PBS溶液，2周后处死；
（3）L组：20只，为OA低剂量治疗组，在小鼠颅骨表面置入40µl 已配制的40%Ti颗粒PBS液（16mg/只），每天颅骨骨膜下局部注射0.1ml含有OA的无菌PBS溶液（0.4µg/kg），2周后处死；
（4）H组：20只，为LDME高剂量治疗组，：在小鼠颅骨表面置入40µl 已配制的40%Ti颗粒PBS液（16mg/只），每天颅骨骨膜下局部注射0.1ml含有OA的无菌PBS溶液（4µg/kg），2周后处死。
2.3 小鼠颅骨骨溶解模型的制备
本发明采用钛颗粒（Ti）诱导的小鼠颅骨骨溶解模型来模拟TJA术后假体周围骨溶解发生的病理过程（Kaar SG, et al. Rapid repair of titanium particle-inducedosteolysis is dramatically reduced in aged mice. J Orthop Res. 2001; 19(2):171-8.）。实验小鼠用4%水合氯醛500mg/kg腹腔内注射麻醉。颅顶皮肤去毛、安尔碘消毒3遍后, 在颅顶处作一约1cm正中矢状切口，暴露1.0cm×1.0cm骨膜， 植入准备好的40µl 已配制的40%Ti颗粒PBS液（16mg/只）。皮肤以4-0缝线缝合。所有手术均在在同一天完成, 手术期间使用无菌润滑剂眼药膏保护小鼠眼睛。
2.4 标本采集
各组动物均于术后2周，腹腔注射10%水合氯醛麻醉，仰卧外固定于小鼠操作架上，开胸暴露心脏，经心尖向左心室插管灌注，剪开右心耳，结扎降主动脉后开放生理盐水冲洗至右心耳流出清凉液体，再以4%中性多聚甲醛200～300ml灌注，至动物四肢抽搐、变硬。灌注完毕后迅速取出颅骨，剔除颅底附着软组织。每组中10个颅骨置于4%多聚甲醛固定24h后，每组取5只先行micro-CT检测，另外5只再以10%EDTA脱钙3周，石蜡包埋，行组织学检测。
2.5 micro-CT检测
小鼠颅骨固定24h后，行micro-CT扫描。扫描参数：分辨率18μm，电压80kV；电流100µA；每次曝光时间为100ms；0.9°/8 images。采用Wedemeyer C方法（Wedemeyer C, et al.Particle-induced osteolysis in three-dimensional micro-computed tomography.Calcif Tissue Int. 2007; 81(5): 394-402.），选定一圆柱形感兴趣区域（ROI；直径3mm，高度1mm），应用Micro-CT图像分析软件对图像进行3D分析，记录ROI颅骨的骨密度(BMD,mg/mm2)，骨体积与组织体积比值(BV/TV)，骨表面孔隙率（Porosity）。
2.6组织学染色
颅骨经10%EDTA脱钙后，常规石蜡包埋。取颅骨水平位，于颅骨矢状缝处连续切片，片厚5µm。分别行HE和TRAP染色。
2.6.1 HE染色步骤：
（1）石蜡切片经二甲苯（10min×3次）脱蜡后，依次经过100%、100%、95%、90%，85%的乙醇至水，每道5min；
（2）蒸馏水冲洗3min，苏木素溶液染色5min，自来水冲洗5min；
（3）1％盐酸酒精溶液分化60s，自来水冲洗1min；
（4）10％氨水溶液中反蓝60s，自来水冲洗1min；
（5）l％伊红溶液复染3min，自来水冲洗1min；
（6）常规脱水、透明、封片。
光镜下观察颅骨的形态学变化。用显微镜计算机图像分析系统（Image-Proplus6.0），参照von Knoch M法（von Knoch M, et al. Decrease in particle-inducedosteolysis in obese (ob/ob) mice. Biomaterials. 2004; 25: 4675-81），计算骨膜厚度（Periosteum thickness, PT）、颅骨厚度（Calvarial bone thickness, BT）以及骨溶解面积（Bone eroded surface，BES）。
2.6.2 抗酒石酸酸性磷酸酶染色：
抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)为破骨细胞所特有，分布于破骨细胞胞浆。在含酒石酸盐的酸性条件下，TRAP能将萘酚ASBI磷酸盐水解，产生萘酚ASB1，后者立即与染液中的六偶氮副品红结合，在酶活性部位形成不溶性红色染料。通过观察这种染料可间接了解酸性磷酸酶活性。TRAP染色被用来鉴别破骨样细胞。染色采用TRAP染色试剂盒(Sigma 387A) 。
2.6.2.1试剂配制：
备2个试管，一个加0.5ml fast Garnet GBC Base Solution(副品红)，另一个加0.5mlSodium Nitrite Solution(亚硝酸钠)，混合30s，静置2min；备2个100ml烧杯，标记A，B，配制TRAP染液(pH5.2)：
2.6.2.2 染色步骤：
（1）石蜡切片脱蜡和水化后，用PBS冲洗3次，每次3min
（2）将准备好的标本切片在丙酮溶液中固定30s；
（3）蒸馏水冲洗，不让其干；
（4）TRAP染液37度孵育1h，避光；
（5）蒸馏水冲洗3次，苏木素复染2min，PBS冲洗反蓝。
TRAP染色阳性结果为紫红色点、片状区域，参照Nich C法（Nich C, et al. Roleof direct estrogen receptor signaling in wear particle-induced osteolysis.Biomaterials. 2013; 34(3): 641-50.），以颅骨矢状缝为中心，20×光镜视野下计数成熟破骨细胞数量。
2.7 免疫组化检测PP2A、RANKL 2.7.1脱蜡和水化 脱蜡前，将切片在室温中放置60分钟或60℃恒温箱中烘烤30分钟。
1）切片置于二甲苯中浸泡10分钟，更换二甲苯后再浸泡10分钟； 2）无水乙醇中浸泡5分钟； 3）95%乙醇中浸泡5分钟； 4）70%乙醇中浸泡5分钟； 2.7.2抗原修复酶消化方法：常用0.1%胰蛋白酶，胰蛋白酶使用前预热至37℃，切片也预热至37℃，每张切片滴加0.2ml消化液覆盖完全组织，于37℃温箱内消化约5~30分钟，避光。 2.7.3免疫组织化学染色 1）PBS洗2～3次各5分钟； 2）滴加正常山羊血清封闭液,室温20分钟。甩去多余液体。 3）滴加Ⅰ抗100μl，室温静置1小时或者4℃过夜或者37℃1小时。 4）4℃过夜后需在37℃复温45分钟。5）PBS洗3次各5分钟； 6）滴加Ⅱ抗40～50μl，室温静置，或37℃1小时； 7）PBS洗3次各5分钟； 8）DAB显色5～10分钟，在显微镜下掌握染色程度； 9）PBS或自来水冲洗10分钟； 10）苏木精复染3分钟，盐酸酒精分化； 11）自来水冲洗10～15分钟； 12）脱水、透明、封片、镜检。
2.8 统计学分析
结果数据采用SPSS11.0统计软件分析，数据用均数±标准差（）表示，多组比较选用单因素方差分析（one-way ANOVA 检验），两两比较在总体方差齐的条件下，选用LSD及Dunnett-t法进行分析。p<0.05为差异有统计学意义。
二、结果
1、实验动物一般情况
各组动物均在术后30～60min内苏醒，可在笼内自由活动，正常进食，精神状态无明显变化。无切口无红肿、渗液等炎性反应，均一期愈合。实验过程中无动物死亡。
2、micro-CT检测
运用micro-CT扫描实验小鼠颅骨并进行三维图像重建及定量分析，可以较为准确的描述骨量和骨微结构，从而判定骨溶解的程度。其中，A为Control组，B为Ti组，C为L组（Ti颗粒+0.4µg/kgOA），D为H组（Ti颗粒+4µg/kgOA）。三维图像显示，与Control组比较，Ti组颅骨表面有较多的陷窝，骨溶解明显，给予OA后，颅骨表面的陷窝明显减少，骨溶解减轻（图1）。
骨密度（BMD）变化：Ti加入后，小鼠颅骨骨密度明显降低，与Control组比较，差异有统计学意义（**p<0.01）；与Ti组比较，治疗组小鼠颅骨骨密度显著增加，其中OA低浓度治疗组与Ti组比较，*p<0.05，OA高剂量治疗组与Ti组比较，**p<0.01。见图2。
骨体积分数（BV/TV）：Ti组骨体积分数明显降低，与Control组比较，**p<0.01。而OA治疗后，骨体积分数明显增加，其中，高剂量OA治疗组与Ti组比较，**p<0.01，低剂量OA治疗组与Ti组相比较，*p<0.05。见图3。
骨表面孔隙率（Porosity）：Ti加入后，小鼠颅骨表面孔隙率明显增高，与Control组比较，差异有统计学意义（**p<0.01）；与Ti组比较，治疗组小鼠颅骨表面孔隙率显著降低，其中OA高剂量治疗组与Ti组比较，**p<0.01，OA低浓度治疗组与Ti组比较，*p<0.05。见图4。
3、组织学检测
3.1 HE染色结果
光镜下，Control组骨组织表面平整，骨膜厚度均匀，骨膜内细胞数量少，排列整齐；Ti组骨组织有虫蚀样变化，骨膜明显增厚，骨膜内细胞数量增多，且多为炎性细胞；OA治疗组，骨组织有破坏，但程度较轻；骨膜有轻度增厚，有少量炎性细胞，成纤维细胞排列尚规则。见图5，其中A为Control组，B为Ti组，C为L组（Ti颗粒+0.4µg/kgOA），D为H组（Ti颗粒+4µg/kgOA）。
骨厚度（BT）：与Control组（0.273±0.020mm）比较，Ti组（0.083±0.015mm）颅骨厚度明显变薄，差异有统计学意义（**p<0.01）。OA治疗后，颅骨厚度分别为0.137±0.015mm（L组），0.207±0.025mm（H组），与Ti组相比，差异有统计学意义（*p<0.05）。OA高剂量治疗组与Ti组相比，差异有统计学意义（**p<0.01），OA低剂量治疗组与Ti组相比，差异有统计学意义（*p<0.05）。见图6。
骨溶解面积（BES）：Ti组骨溶解面积为（0.147±0.021mm2），与Control组（0.027±0.012mm2）相比，差异有统计学意义（**p<0.01），表明Ti颗粒能引起明显的骨溶解；OA加入后，骨溶解面积分别为（L组，0.090±0.017 mm2；H组，0.047±0.012 mm2）。OA高剂量治疗组与Ti组相比，差异有统计学意义（**p<0.01），OA低剂量治疗组与Ti组相比，差异有统计学意义（*p<0.05）。见图7。
3.2 TRAP染色结果
TRAP染色阳性区域为紫红色，Control组可见点状的阳性改变，且主要集中于髓腔边缘；Ti组颅骨溶解侧可见大片紫红色区域，表明颅骨溶解侧有大量的成熟的破骨细胞存在；OA治疗组仅在在颅骨溶解边缘有少量阳性区域。见图8。光镜下计数结果显示Ti组TRAP阳性细胞为59±4，与Control组（6±2）相比， **p<0.01；而OA低浓度和高浓度治疗组TRAP细胞数分别为43±7，20±6。OA高剂量治疗组与Ti组相比，差异有统计学意义（**p<0.01），OA低剂量治疗组与Ti组相比，差异有统计学意义（*p<0.05）。见图9。
4、免疫组化检测
免疫组化结果显示，PP2A的表达量在光学显微镜下观察，见图10。与Control组（12±3mmˉ²）比较，Ti组（52±7mmˉ²）PP2A表达量明显增加，差异有统计学意义（**p<0.01）。OA治疗后，PP2A表达量分别为32±4mmˉ²（L组），21±5mmˉ²（H组），OA高剂量治疗组与Ti组相比，差异有统计学意义（**p<0.01），OA低剂量治疗组与Ti组相比，差异有统计学意义（**p<0.01）。见图11。
进一步进行RANKL表达量的测定，见图12，Control组（8±2mmˉ²），Ti组（39±5mmˉ²）RANKL表达量明显增加，差异有统计学意义（**p<0.01）。OA治疗后，PP2A表达量分别为26±3mmˉ²（L组），14±4mmˉ²（H组），OA高剂量治疗组与Ti组相比，差异有统计学意义（**p<0.01），OA低剂量治疗组与Ti组相比，差异有统计学意义（**p<0.01）。见图13。
本实验通过OA局部注射的方式干预小鼠颅骨骨溶解模型，结果表明治疗组颅骨骨量丢失程度减轻，炎症性骨破坏程度减轻，成熟破骨细胞数减少，PP2A、RANKL表达量减低，尤以高剂量组作用更为明显，可以明显减少成熟破骨细胞数量，抑制磨损颗粒引起的骨溶解并降低PP2A、RANKL在颅骨的表达。证明OA对磨损颗粒引起的骨溶解有一定的治疗作用，且高剂量的作用较为明显。
本发明人推测OA对磨损颗粒引起骨溶解的作用机制可能与其抑制PP2A及破骨细胞活化有关。RANKL是由成骨细胞分泌，对于破骨细胞活化起重要作用，是调控破骨细胞活化的关键因子。在本实验中，OA作为PP2A的特异性抑制剂，能够强有力的抑制PP2A的表达，这与本实验中治疗组小鼠颅骨组织中PP2A表达量降低相符合。近年来RANKL诱导的破骨细胞活化被认为对骨溶解的发生发展起主要作用，本实验中小鼠颅骨组织RANKL含量减少，与Ti组比较，OA治疗组中颅骨组织成熟破骨细胞数明显减少，说明OA通过干预RANKL通路抑制破骨细胞活化，故本发明人故而推测OA治疗骨溶解的机制可能是通过抑制PP2A的表达下调RANKL，从而抑制破骨细胞活化，减轻骨溶解从而起到治疗作用。

Claims (6)

1.冈田酸在制备用于治疗假体周围骨溶解的药物组合物中的用途，冈田酸为式（Ⅰ）的结构：
（Ⅰ）。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的假体周围骨溶解为人工关节置换术后发生的假体周围骨溶解。
3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的药物组合物包含药学上有效剂量的冈田酸和药学上可接受的载体。
4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：将冈田酸制备成适用于局部注射用给药针剂。
5.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述的药学上可接受的载体为组合物中制剂使用的辅料。
6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的药物组合物的给药剂量根据给药对象及疾病时期不同而改变，选择局部给药为准。
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