CN107012235A - 检测fgl2基因或fgl2蛋白表达水平的物质在诊断和预示肾癌产品中的应用 - Google Patents

检测fgl2基因或fgl2蛋白表达水平的物质在诊断和预示肾癌产品中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN107012235A
CN107012235A CN201710302047.7A CN201710302047A CN107012235A CN 107012235 A CN107012235 A CN 107012235A CN 201710302047 A CN201710302047 A CN 201710302047A CN 107012235 A CN107012235 A CN 107012235A
Authority
CN
China
Prior art keywords
fgl2
kidney
genes
application
primer
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201710302047.7A
Other languages
English (en)
Inventor
唐铭
曹漵
张克勤
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
First Affiliated Hospital of TMMU
Original Assignee
First Affiliated Hospital of TMMU
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by First Affiliated Hospital of TMMU filed Critical First Affiliated Hospital of TMMU
Priority to CN201710302047.7A priority Critical patent/CN107012235A/zh
Publication of CN107012235A publication Critical patent/CN107012235A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57438—Specifically defined cancers of liver, pancreas or kidney
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/112—Disease subtyping, staging or classification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/118—Prognosis of disease development
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/136—Screening for pharmacological compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/56—Staging of a disease; Further complications associated with the disease

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及检测FGL2基因或FGL2蛋白表达水平的物质在诊断和预示肾癌产品中及筛选治疗肾癌的药物的应用，根据该物质对FGL2基因或FGL2蛋白表达水平的检测结果，可以对肾癌进行早期诊断或对肾癌预后作出预测，以减少肾癌患者死亡率；通过该物质对癌细胞添加测试药物后或在对肿瘤模型动物施用测试药物后的某个时期检测FGL2基因或FGL2蛋白表达水平来测定抗肿瘤药物的治疗效果，筛选出能治疗肾癌的有效药物；还提供了调控FGL2基因或FGL2蛋白表达下调的物质在制备治疗肾癌药物中的应用，该药物可以从阻断内源性FGL2蛋白的过多表达和分泌及减弱FGL2蛋白的活性两方面来治疗因FGL2蛋白过表达介导的肾癌。

Description

检测FGL2基因或FGL2蛋白表达水平的物质在诊断和预示肾癌 产品中的应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及检测FGL2基因或FGL2蛋白表达水平的物质在诊断和预示肾癌产品中的应用。
背景技术
肾细胞癌是发生于肾脏实质的恶性肿瘤，简称肾癌，它来源于肾小管上皮，占成人恶性肿瘤的3％，肾脏恶性肿瘤的90％-95％，是目前最常见的肾脏恶性肿瘤。肾癌起病隐匿，早期的临床表现缺乏特异性，许多患者初诊时即发生了转移，既往典型的“血尿、肿块、疼痛”三联征出现时多属肿瘤晚期，同时肾癌对放化疗均不敏感，对晚期肾癌缺乏有效的治疗手段，预后不良。因此，肾癌的早期诊断对肾癌病人的治疗有极为重要的意义。
目前肾癌的临床诊断方式主要有：X线检查(尿路平片、静脉肾盂造影)、超声、CT、MRI、肾动脉造影、术中、术后病理活检等。X线检查通常对于典型的较晚期病例才会出现特征的影像学改变，因此平片的诊断价值不大；超声检查图像无特异性，对于直径小于2cm或不典型者，诊断上有一定困难，通常需要有经验的技师才能准确诊断，受主观因素影响较大；CT及MRI对于肾癌的诊断价值相似，是目前应用最广的肾癌诊断方式，但对少数病例在术前不能做到定性诊断，对于不典型及小肾癌有可能漏诊、误诊,而且MRI检查不适用于体内有金属的患者；肾癌通常有丰富的血供，肾动脉造影可能清楚地显示病变，而且可以同时进行选择性肾动脉栓塞，有利于其后手术的进行，但属于有创检查，有可能会增加患者的痛苦；术后病理活检为诊断金标准，有利于诊断，然而对于晚期患者来说其治疗意义远没有诊断意义大。因此，研究更有效的肾癌标记物对提高肾癌的早期诊断，减少肾癌患者死亡率和改善生活质量有重要的意义。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于：(1)提供检测FGL2基因或FGL2蛋白表达水平的物质在诊断和预示肾癌产品中的应用；(2)调控FGL2基因或FGL2蛋白表达下调的物质在制备治疗肾癌药物中的应用；(3)检测FGL2基因或FGL2蛋白表达水平的物质在筛选治疗肾癌的药物中的应用。
为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：
1、检测FGL2基因或FGL2蛋白表达水平的物质在诊断和预示肾癌产品中的应用。
进一步，所述诊断和预示具体为：肾癌的发生、TNM分期的判断、治疗效果的动态监测和预后判断。
进一步，所述检测FGL2基因表达水平的物质包含能够特异性扩增FGL2基因的引物，所述引物的正向序列如SEQ ID NO.1所示；所述引物的反向序列如SEQ ID NO.2所示。
进一步，所述检测FGL2蛋白表达水平的物质包含可以特异性结合所述FGL2蛋白的抗体或所述抗体的片段。
进一步，所述产品为试剂盒、芯片、试纸或高通量测序平台中的一种。
进一步，所述试剂盒为：
(1)为基于染料法的FGL2 mRNA实时定量检测试剂盒，包括能够特异性扩增FGL2基因的引物，所述引物的正向序列如SEQ ID NO.1所示，所述引物的反向序列如SEQ ID NO.2所示；或
(2)FGL2免疫组化试剂盒，包括抗FGL2蛋白单抗，酶标二抗及显色剂；或
(3)蛋白印迹试剂盒，包括固相载体、抗FGL2蛋白单抗、酶标二抗及显色底物。
进一步，所述基于染料法的FGL2 mRNA实时定量检测试剂盒还包括内参引物，所述内参引物的上游引物如SEQ ID NO.3所示，下游引物如SEQ ID NO.4所示。
2、调控FGL2基因或FGL2蛋白表达下调的物质在制备治疗肾癌药物中的应用。
3、检测FGL2基因或FGL2蛋白表达水平的物质在筛选治疗肾癌的药物中的应用。
本发明的有益效果在于：本发明提供检测FGL2基因或FGL2蛋白表达水平的物质在诊断和预示肾癌产品中的应用，根据该物质对FGL2基因或FGL2蛋白表达水平的检测结果，可以对肾癌进行早期诊断或者对肾癌预后作出预测，在减少肾癌患者死亡率和改善生活质量方面具有重要的意义。本发明还提供了调控FGL2基因或FGL2蛋白表达下调的物质在制备治疗肾癌药物中的应用，该药物一方面可以从阻断内源性FGL2蛋白的过多表达和分泌及减弱FGL2蛋白的活性两方面来治疗因FGL2蛋白过表达介导的肾癌。另外，本发明还提供了检测FGL2基因或FGL2蛋白表达水平的物质在筛选治疗肾癌的药物中的应用，通过该物质对癌细胞添加测试药物后或在对肿瘤模型动物施用测试药物后的某个时期检测FGL2基因或FGL2蛋白表达水平来测定抗肿瘤药物的治疗效果，从而筛选出能治疗肾癌的有效药物。
附图说明
为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图进行说明：
图1为癌组织及对应癌旁组织中FGL2 mRNA表达水平对比图；
图2为利用ImageJ软件分析癌组织及癌旁组织中FGL2蛋白条带灰度图；
图3为显微镜下(放大倍数为200倍)癌组织及癌旁组织中FGL2蛋白表达水平对比图；
图4为利用Kaplan-Meier法和Log-rank检验分析FGL2蛋白表达水平与肾细胞癌患者生存率之间的关系图。
具体实施方式
下面将对本发明的优选实施例进行详细的描述。
实施例1
检测肾癌组织中FGL2 mRNA表达水平
1、材料
选取13例肾癌患者癌组织及对应癌旁组织，取样来源于重庆西南医院2015年10月到2015年12月期间行肾全切或部分切除的肾癌患者(病理确诊)，手术切除后立即分离肾癌及癌旁组织，编号后放入液氮保存。
2、提取组织样本中RNA
采用Trizol(Takara，货号9109)法提取组织中RNA实验操作按产品说明书进行，具体操作如下：
(1)将13例肾癌患者癌组织及对应癌旁组织样本分别放入已用液氮预冷的研钵中研磨成粉末状，分别收集于容量为1.5mL无RNA酶离心管中：
(2)分别向步骤(1)中无RNA酶离心管中加入1mL Trizol，18-25℃下放置10分钟；
(3)分别向步骤(2)无RNA酶离心管中加入0.2mL氯仿，用力振荡15s，充分混匀后18-25℃下静置10分钟；
(4)将步骤(3)中各离心管以12000rpm高速离心15分钟后吸取上层水相(约400ul)到对应的另一新的容量为1.5mL无RNA酶离心管中，分别加入等体积的异丙醇(约400ul)，充分颠倒混匀，冰上静置10分钟；
(5)将步骤(4)中加入异丙醇的各离心管以12000rpm高速离10分钟后弃去上清，分别加入1ml体积分数为75％的DEPC乙醇洗涤沉淀，轻轻震荡，4℃下以7500rpm离心5分钟；
(6)弃去步骤(5)中各离心管中乙醇后18-25℃下放置5分钟以充分晾干沉淀，再分别加入DEPC处理过的水溶解沉淀，获得各样本的RNA；
3、RNA浓度、纯度检测
分别取各离心管中RNA 2ul，利用Nanodrop2000紫外分光光度计测量，13例肾癌患者癌组织及对应癌旁组织样本的RNA OD260/OD280值见表1，由表1可知，所提取的13例肾癌患者癌组织及对应癌旁组织样本的RNA纯度高、杂质少。将各样本RNA置于-20℃下保存。
表1 13例肾癌患者癌组织及对应癌旁组织样本的RNA OD260/OD280值
4、逆转录
采用PrimeScriptTM RT reagent Kit(Takara，货号RR047A)进行cDNA反转录，具体操作如下：
(1)取各样本的RNA 1ul分别加入逆转录缓冲液，采用20μL反应体系。具体如下表：
试剂 剂量(ul)
gDNA Eraser 1
gDNA Eraser Buffer 2
PrimeScript RT Enzyme Mix 1
PrimeScript Buffer 2 4
RT Primer Mix 1
RNase Free H2O 10
总RNA 1
总体积 20
(2)在37℃孵育15min，85℃5s，然后迅速冷却至4℃。逆转的cDNA存放于-20℃冰箱备用。
5、Real-Time PCR
(1)采用Premix Ex TaqTM II配制反应液，如下表：
(2)引物对和内参基因引物对
(3)仪器及分析方法
用ABI 7500型荧光定量PCR仪，采用：95℃预变性30s；95℃变性30s，59℃退火34s，72℃延伸20s，共40个循环。利用公式2-ΔΔCT进行数据分析。实验重复3次。所得数据如表2所示。分析结果如图1所示，与癌旁对照组织相比，肾癌组织中FGL2基因mRNA表达水平升高，差异具有统计学意义(P<0.05)。
表2 RT-PCR检测ccRCC患者癌和癌旁组织中FGL2 mRNA的相对表达水平
实施例2
检测新鲜肾癌组织中FGL2蛋白表达水平
1、样本
收集重庆西南医院经病理确诊、手术切除的新鲜肾癌组织以及癌旁组织，纳入病例术前均未经任何治疗，所有的临床信息皆从患者病历资料中收集得到。
2、蛋白印迹检测(Western blot)
收集的肾组织使用RIPA裂解液(Beyotime Biotechnology)提取总蛋白，BCA法测定总蛋白浓度。将十二烷基硫酸钠(SDS)上样缓冲液与蛋白样品按体积比1:4混合，将混合样品置于沸水中10min使蛋白变性，冷却至室温。将蛋白样品加入SDS-PAGE凝胶上样孔中(30μg蛋白/孔)，电泳起始电压为80V，待蛋白样品电泳到分离胶后将电压调整为120V，电泳至溴酚兰刚跑出即可终止电泳，进行转膜。利用20V恒压将目的蛋白转移至PVDF膜(转膜时间1h)。TBS-T洗涤后，膜用体积分数为5％的BSA室温封闭1h，FGL2鼠单克隆抗体(1:200，货号：H00010875-M01，Abnova)4℃孵育过夜。TBS-T洗涤膜，用辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗(1:5000，货号：ZB-2305，中杉金桥)在室温下孵育1h。采用增强化学发光法(ECL，Millipore)检测蛋白质。
3、结果
利用ImageJ软件分析蛋白条带灰度。如图2所示，FGL2蛋白在新鲜肾癌组织中表达，而在癌旁组织中几乎不表达，说明肾癌组织较癌旁组织中FGL2蛋白表达水平显著升高。
实施例3
检测石蜡包埋肾癌组织切片中FGL2蛋白的表达水平
1、样本
收集重庆西南医院2010年1月到2011年12月间经病理确诊、手术切除的肾癌组织(石蜡包埋，170例)以及癌旁组织(石蜡包埋，40例)。纳入病例术前均未经任何治疗，所有的临床信息皆从患者病历资料中收集得到。
2、免疫组织化学检测
各石蜡包埋块行4μm连续切片，65℃下烘烤2h。二甲苯脱蜡2次(10min/次)，梯度酒精中复水，0.01M柠檬酸盐缓冲液(pH值6.0)抗原修复20min(微波法)，体积分数为3％的过氧化氢室温10min(去除内源性过氧化物酶)，体积分数为5％的BSA抗原封闭1h，FGL2鼠单克隆抗体(1:200，货号：H00010875-M01，Abnova)4℃孵育过夜。设置不加抗体阴性对照组。PBS漂洗后，用辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗(1:800，货号：ZB-2305，中杉金桥)在室温下孵育1h，PBS漂洗后DAB显色3min。切片经苏木素染色，脱水、透明、干燥和封片后显微镜下观察。所有切片由2名独立的病理科工作人员显微镜下(放大倍数为200)随机选取4个视野进行评估。组织染色评分由染色强度和阳性细胞百分比的乘积确定，染色强度分为：0(阴性、1(弱阳性)、2(中度)和3(强阳性)；阳性细胞百分比分为：0(＜5％)、1(5-25％)、2(25-50％)、3(50-75％)、4(＞75％)。组织染色评分≥6提示FGL2蛋白高表达，评分≤4提示FGL2蛋白低表达。
3、结果
如图3所示，FGL2蛋白主要表达于细胞质和细胞膜，癌组织染色明显高于癌旁组织。图3A显示，FGL2蛋白在癌旁组织中几乎不表达；而在不同肾透明细胞癌患者的癌组织中，FGL2蛋白既有低表达(图3B，染色评分≤4)，也可出现高表达(图3C，染色评分≥6)。
实施例4
FGL2蛋白在肾透明细胞癌组织中的表达与临床病理特征之间的关系
1、分析方法
利用SPSS 19.0(SPSS，美国)统计软件对临床数据进行分析，计量资料以均值±标准差表示。根据数据处理的不同方法及统计学处理的不同要求，选用方差分析或t检验进行分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。
2、结果
如表3所示，170例肾细胞癌标本中，103例强阳性染色，67例为弱阳性染色。利用COX回归分析了FGL2蛋白表达与肾癌临床病理特征之间的关系，FGL2蛋白表达上调与肾癌肿瘤大小(P＝0.002)、T分期(P＝0.003)以及TNM分期(P＝0.002)之间高度相关。然而与年龄、性别、Fuhrman分级和坏死之间无相关性(P＞0.05)。
表3 FGL2蛋白在肾透明细胞癌组织中的表达与临床病理特征之间的关系表
实施例5
FGL2蛋白表达与生存率之间的关系
1、免疫组织化学检测
石蜡包埋块行4μm连续切片，65℃下烘烤2h。二甲苯脱蜡2次(10min/次)，梯度酒精中复水，0.01M柠檬酸盐缓冲液(pH值6.0)抗原修复20min(微波法)，3％过氧化氢室温10min(去除内源性过氧化物酶)，体积分数为5％的BSA抗原封闭1h，FGL2鼠单克隆抗体(1:200，货号：H00010875-M01，Abnova)4℃孵育过夜。设置不加抗体阴性对照组。PBS漂洗后，用辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗(1:800，货号：ZB-2305，中杉金桥)在室温下孵育1h，PBS漂洗后DAB显色3min。切片经苏木素染色，脱水、透明、干燥和封片后显微镜下观察。所有切片由2名独立的病理科工作人员高倍镜下随机选取4个视野进行评估。组织染色评分由染色强度和阳性细胞百分比的乘积确定，染色强度分为：0(阴性)、1(弱阳性)、2(中度)和3(强阳性)；阳性细胞百分比分为：0(＜5％)、1(5-25％)、2(25-50％)、3(50-75％)、4(＞75％)。组织染色评分≥6提示FGL2蛋白高表达，评分≤4提示FGL2蛋白低表达。
2、生存分析
利用Kaplan-Meier法和Log-rank检验分析FGL2蛋白高表达对肾细胞癌患者生存的影响。首先，分析了肾透明细胞癌组织中FGL2蛋白的表达情况与患者术后生存率之间的关系，结果如图4A-B所示，由图4A-B可知：FGL2蛋白低表达组患者(n＝67)的OS及RFS均明显高于FGL2蛋白高表达组患者，差异具有统计学意义(log-rank test，P<0.001)，提示FGL2蛋白低表达患者预后明显好于FGL2蛋白高表达者。然后，分别对早期(TNM分期，I+II)和晚期(TNM分期，II+IV)肾透明细胞癌癌患者肾组织中FGL2蛋白的表达与术后患者生存率之间的关系进行了分析。结果显示，在早期肾透明细胞癌中(TNM，I+II)，FGL2蛋白高表达组患者(n＝76)的OS及RFS均明显低于FGL2蛋白低表达组(n＝62)(log-rank test，P<0.001)(图4C-D)；而对于晚期肾透明细胞癌患者，FGL2蛋白高表达组患者的OS及RFS与FGL2蛋白低表达组之间无统计学差异(OS:P＝0.327；RFS:P＝0.396)(图4E-F)。提示FGL2蛋白的高表达对于早期肾癌预后的判定更为敏感。
最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 中国人民解放军第三军医大学第一附属医院
<120> 检测FGL2基因或FGL2蛋白表达水平的物质在诊断和预示肾癌产品中的应用
<160> 4
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
aggcagaaac ggactgttgt 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
ccaggcgacc atgaagtaca 20
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
ctctgctcct cctgttcgac 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
gcgcccaata cgaccaaatc 20

Claims (9)

1.检测FGL2基因或FGL2蛋白表达水平的物质在诊断和预示肾癌产品中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述诊断和预示具体为：肾癌的发生、TNM分期的判断、治疗效果的动态监测和预后判断。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测FGL2基因表达水平的物质包含能够特异性扩增FGL2基因的引物，所述引物的正向序列如SEQ ID NO.1所示；所述引物的反向序列如SEQ ID NO.2所示。
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测FGL2蛋白表达水平的物质包含可以特异性结合所述FGL2蛋白的抗体或所述抗体的片段。
5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品为试剂盒、芯片、试纸或高通量测序平台中的一种。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述试剂盒为：
(1)为基于染料法的FGL2mRNA实时定量检测试剂盒，包括能够特异性扩增FGL2基因的引物，所述引物的正向序列如SEQ ID NO.1所示，所述引物的反向序列如SEQ ID NO.2所示；或
(2)FGL2免疫组化试剂盒，包括抗FGL2蛋白单抗，酶标二抗及显色剂；或
(3)蛋白印迹试剂盒，包括固相载体、抗FGL2蛋白单抗、酶标二抗及显色底物。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述基于染料法的FGL2mRNA实时定量检测试剂盒还包括内参引物，所述内参引物的上游引物如SEQ ID NO.3所示，下游引物如SEQ IDNO.4所示。
8.调控FGL2基因或FGL2蛋白表达下调的物质在制备治疗肾癌药物中的应用。
9.检测FGL2基因或FGL2蛋白表达水平的物质在筛选治疗肾癌的药物中的应用。
CN201710302047.7A 2017-05-02 2017-05-02 检测fgl2基因或fgl2蛋白表达水平的物质在诊断和预示肾癌产品中的应用 Pending CN107012235A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710302047.7A CN107012235A (zh) 2017-05-02 2017-05-02 检测fgl2基因或fgl2蛋白表达水平的物质在诊断和预示肾癌产品中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710302047.7A CN107012235A (zh) 2017-05-02 2017-05-02 检测fgl2基因或fgl2蛋白表达水平的物质在诊断和预示肾癌产品中的应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107012235A true CN107012235A (zh) 2017-08-04

Family

ID=59447246

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710302047.7A Pending CN107012235A (zh) 2017-05-02 2017-05-02 检测fgl2基因或fgl2蛋白表达水平的物质在诊断和预示肾癌产品中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107012235A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109541213A (zh) * 2018-11-23 2019-03-29 新乡医学院 一种食管癌筛查试剂盒
CN113307835A (zh) * 2021-04-21 2021-08-27 南通大学 一种siRNA及其在制备慢性疼痛治疗药物中的应用

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GUANHUA SU 等: "Fibrinogen-like protein 2 expression correlates with microthrombosis in rats with type 2 diabetic nephropathy", 《JOURNAL OF BIOMEDICAL RESEARCH》 *
JIEMIAO HU 等: "The Duality of Fgl2 - Secreted Immune Checkpoint Regulator Versus Membrane-Associated Procoagulant: Therapeutic Potential and Implications", 《INTERNATIONAL REVIEWS OF IMMUNOLOGY》 *
MING TANG 等: "Increased expression of Fibrinogen-Like Protein 2 is associated with poor prognosis in patients with clear cell renal cell carcinoma", 《SCIENTIFIC REPORTS》 *
XIN-GUANG LIU 等: "Soluble fibrinogen like protein 2 (sFGL2), the novel effector molecule for immunoregulation", 《ONCOTARGET》 *
曹溆 等: "FGL2在肾透明细胞癌中的表达及其临床意义", 《现代泌尿外科杂志》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109541213A (zh) * 2018-11-23 2019-03-29 新乡医学院 一种食管癌筛查试剂盒
CN113307835A (zh) * 2021-04-21 2021-08-27 南通大学 一种siRNA及其在制备慢性疼痛治疗药物中的应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Trouillas et al. Polysialylated neural cell adhesion molecules expressed in human pituitary tumors and related to extrasellar invasion
Palesty et al. Axillary recurrence in women with a negative sentinel lymph node and no axillary dissection in breast cancer
CN101261279B (zh) 子宫内膜癌诊断试剂、试剂盒及防治药物
CN107177683B (zh) 一种膀胱癌筛选检测试剂盒
WO2018133635A1 (zh) 一种肿瘤细胞异种移植斑马鱼模型、其构建方法及应用
Fernandez-Gonzalez et al. The shift from sentinel lymph node biopsy performed either before or after neoadjuvant systemic therapy in the clinical negative nodes of breast cancer patients. Results, and the advantages and disadvantages of both procedures
Stabenow et al. Angiogenesis as an indicator of metastatic potential in papillary thyroid carcinoma
Uchida et al. Utility of pancreatic duct brushing for diagnosis of pancreatic carcinoma
CN107012235A (zh) 检测fgl2基因或fgl2蛋白表达水平的物质在诊断和预示肾癌产品中的应用
CN105925719A (zh) 与肝癌分化相关的基因及其应用
CN107475386A (zh) 用于诊治骨肉瘤的长链非编码rna标志物
CN107312865A (zh) Loc100130111在制备骨肉瘤诊断产品、治疗药物中的用途
Goldsmith et al. Targeting the platelet-derived growth factor-beta stimulatory circuitry to control retinoblastoma seeds
CN106075468A (zh) Gps2用于制备软组织肿瘤预后、诊断或防治的药物的用途
CN107144695B (zh) Arl13b蛋白在癌症诊断中的应用
CN113025715A (zh) Hop在预测胃癌预后中的应用
CN107083428A (zh) Pak5在癌症诊断预后治疗及药物筛选中的应用
Mehaffey et al. Distribution of prognostically important vascular patterns across multiple levels in ciliary body and choroidal melanomas
CN107354214A (zh) CA15‑3基因mRNA核酸检测试剂盒（PCR‑荧光探针法）
Jaunalksne et al. ECHO-7 oncolytic virus Rigvir® in an adjuvant setting for stage I uveal melanoma; A retrospective case report
CN107022627A (zh) KPNA2基因的应用和抑制KPNA2基因表达的siRNA的应用
CN107385100A (zh) Mcm8作为胃腺癌转移标志物的用途
CN107365859A (zh) LncRNA作为诊治骨肉瘤的分子标志物
Zhang et al. Clinical Value Analysis of Serum TK1, SCC-Ag, and MUC-1 in the Diagnosis and Prognosis Evaluation of Cervical Cancer.
Qureshi et al. Frequency of transducer-like enhancer of split 1 immunohistochemical expression in synovial sarcoma: an institution-based cross-sectional study

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20170804