CN106986852B - Myrtucommulone R及其在制备抗菌药物中的应用 - Google Patents

Myrtucommulone R及其在制备抗菌药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了Myrtucommulone R及其在制备抗菌药物中的应用。所述的间苯三酚三聚体Myrtucommulone R结构如式I所示，是新的天然产物。该化合物在较低浓度下即对金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、万古霉素中介耐药金葡菌和耐万古霉素屎肠球菌等具有显著的抗菌活性，且对真核细胞毒性很低，预示它具有良好的药用前景，可以应用于制备抗菌药物制剂。抗菌药物制剂中含有Myrtucommulone R，余量为药用辅料或其它可配伍的药物；所述的抗菌药物制剂包括多种临床药物剂型。

Description

Myrtucommulone R及其在制备抗菌药物中的应用
技术领域
本发明属于天然药物及化学药物领域，特别涉及一种间苯三酚三聚体Myrtucommulone R的抗菌活性及其在制备抗菌药物中的应用。
背景技术
细菌感染可引发人体多种疾病。目前，临床上耐药菌感染日益严重，如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、耐青霉素肺炎链球菌(PRSP)，耐多药结核分枝杆菌(MDR-TB)等不断蔓延，且细菌耐药性逐渐呈多药耐药发展趋势。近些年来，临床上因耐药菌感染所致的病死率逐年升高，反映出传统抗菌药物已难满足现代临床治疗的需求。因此，研究开发新型抗菌药物具有重要的临床应用价值。
香桃木(Myrtus communis Linn.)为桃金娘科(Myrtaceae)香桃木属植物，原产于地中海地区，常被用作防腐剂和消毒剂等。香桃木精油或其提取物具有较强的抗菌活性。1974年，Rotstein A等首次从香桃木中发现具有抗菌活性的酰基间苯三酚类化合物Myrtucommulones A-B(Antimicrobial Agents and Chemotherapy,1974,6:539-542)。近年来，有文献报道了香桃木中的间苯三酚类成分Myrtucommulones D-E具有良好的抗菌及降血糖活性(European Journal of Organic Chemistry,2006,10:2371-2377)。可见，间苯三酚类化合物可能是香桃木的主要活性成分。然而，目前香桃木间苯三酚类化学成分的研究尚不深入，仅报道了不足20个化合物。因此，其抗菌活性成分有待深入研究和发掘。化合物Myrtucommulone R仅作为合成产物被报道(Angewandte Chemie,InternationalEdition,2010,49:2045-2049)，其抗菌作用尚未见报道。此外，Myrtucommulone R的结构中具有四环体系，不同于Myrtucommulone A的三环体系和Myrtucommulones D-E的五环体系。
发明内容
本发明的首要目的在于提供一种具有抗菌活性的间苯三酚三聚体Myrtucommulone R。
本发明的另一目的在于提供上述化合物在抗菌药物制剂中的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
一种间苯三酚三聚体Myrtucommulone R，结构如式I所示，为首次从自然界分离得到的新天然产物；
上述间苯三酚三聚体的提取分离方法包括以下步骤：将香桃木(Myrtuscommunis)干燥枝叶粉碎，用95％(w/w)乙醇渗漉提取，提取物浓缩后用石油醚萃取，石油醚萃取部位通过硅胶柱层析、Sephadex LH-20、十八烷基键合硅胶(ODS)柱层析及制备型HPLC分离纯化，得到化合物Myrtucommulone R。
Myrtucommulone R在制备抗菌药物制剂中的应用，所述药物制剂中含有治疗有效量的Myrtucommulone R，余量为药用辅料或其它可配伍的药物；
所述的菌包括甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、万古霉素中介耐药金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、粪肠球菌、耐万古霉素屎肠球菌中的至少一种；
所述药用辅料是指常规的药用赋形剂，如溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂和粘合剂等；
所述其它可配伍的药物，指的是以有效剂量的Myrtucommulone R为药物原料，再配伍其它天然药物或化学药品；
所述的抗菌药物制剂包括多种临床药物剂型，如片剂、注射液、脂质体纳米粒、控释剂、消毒剂等。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
(1)本发明首次从香桃木中分离鉴定了间苯三酚三聚体Myrtucommulone R，是新的天然产物。
(2)本发明发现Myrtucommulone R在较低浓度(0.25～1.00μg/mL)下即对甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、万古霉素中介耐药金葡菌、粪肠球菌和耐万古霉素屎肠球菌均具有显著的抗菌活性。
(3)本发明的Myrtucommulone R对真核细胞毒性较低。
附图说明
图1为间苯三酚三聚体Myrtucommulone R的1H NMR谱图
图2为间苯三酚三聚体Myrtucommulone R的13C NMR谱图
图3为间苯三酚三聚体Myrtucommulone R的X射线衍射结构图
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
化合物的提取分离和结构鉴定：
(1)香桃木(Myrtus communis)干燥枝叶18kg，粉碎成粗粉，用25L 95％(w/w)乙醇渗漉提取4次，合并渗漉液并减压浓缩至无醇味，得到总浸膏约1.9kg。总浸膏加5L水混悬后，用5L石油醚萃取，重复4次，合并萃取液，减压浓缩得到石油醚萃取部位489g。
(2)石油醚萃取部位进行硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂，按照石油醚和乙酸乙酯体积比为100:0、100:1、100:3、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、100:100和0:100的洗脱梯度进行洗脱，通过薄层色谱(TLC)分析后合并相似流份，得到10个主流份Fr.A～Fr.J。其中流份Fr.D(石油醚-乙酸乙酯100:5洗脱部分，75g)继续经硅胶柱层析，按照石油醚和乙酸乙酯体积比为100:0、100:3、100:5、100:7、100:10、100:20、100:50的洗脱梯度进行洗脱，得到7个亚流份Fr.D1～Fr.D7。
(3)①对亚流份Fr.D4(石油醚-乙酸乙酯100:7洗脱部分，21.3g)进行反相ODS柱层析，以甲醇-水(MeOH-H2O)为洗脱剂，按照甲醇和水体积比为50:50、60:40、70:30、80:20、90:10、100:0的洗脱梯度进行洗脱，收集洗脱液(洗脱体积100-3000mL)，通过TLC分析后合并相似流份，得到6个流份Fr.D4a～Fr.D4f。
②取流份Fr.D4d溶解后上样于Sephadex LH-20色谱柱，以体积比为1:1的氯仿-甲醇(CHCl3-MeOH)混合溶剂为洗脱剂，流速为0.5mL/min进行洗脱，收集洗脱液(洗脱体积100-2500mL)，通过TLC分析后合并相似流份，得到3个流份Fr.D4d1～Fr.D4d3。
③取流份Fr.D4d2减压浓缩后用甲醇溶解，然后用反相制备型HPLC分离纯化，以体积比为85:15的甲醇-水为洗脱剂，流速为3mL/min进行洗脱，得到Myrtucommulone R(2.6g)。
(4)Myrtucommulone R的结构鉴定
淡黄色块状晶体；香草醛-浓硫酸反应(TLC)显红色；m.p.215～216℃；UV(MeOH)λmax(logε)242(3.14),267(3.72),304(4.41)nm；IR(KBr)νmax 3421,2966,1717,1661,1602,1468,1388,1302,1182,1148,1120,1015,955,788,634,454cm-1；HR-ESI-MS m/z 651.3527[M+H]+(计算值C38H51O9:651.3528)。1H NMR、13C NMR图谱见图1～2。X射线衍射结构见图3。
根据以上理化和光谱数据，鉴定了Myrtucommulone R的结构。
实施例2
Myrtucommulone R对多种细菌的抑制作用
甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌S.aureus ATCC29213、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌S.aureus ATCC33591(MRSA)、万古霉素中介耐药金黄色葡萄球菌S.aureus Mu50(VISA)、凝固酶阴性葡萄球菌S.epidermidis ATCC12228、粪肠球菌E.faecalis ATCC29212、耐万古霉素屎肠球菌E.faecium ATCC700221、大肠埃希菌E.coli ATCC25922、铜绿假单胞菌Ps.aeruginosa ATCC 27853，以上菌株均来自中国医学科学院医药生物技术研究所。
采用肉汤微量二倍稀释法，测定化合物体外抑菌作用的最小抑菌浓度(MIC)，具体操作方法如下：
(1)细菌培养：以胰酪胨大豆肉汤(TSB)培养实验菌，35℃隔夜培养(12-16h)至约0.5个Mcfarland浓度(1×108CFU)时备用。
(2)先将测试样品在乙醇中溶解成较高浓度，继而用Cation-Adjusted MuellerHinton(CAMH)肉汤进行系列倍比稀释使样品浓度范围从256μg/mL到0.25μg/mL。另外，采用相同培养液配制好一定浓度的苯唑西林和万古霉素作为阳性对照。
(3)在96孔板上每孔加入100μL不同浓度的含药培养液和100μL经CAMH适当稀释的含菌培养液，使最终菌浓度达5×105CFU/mL。以不含药的CAMH肉汤加菌液作阴性对照(CAMH培养基、菌液各100μL)，以不加菌液的CAMH肉汤培养基作空白对照(CAMH培养基200μL)。将96孔板密封后置于35℃恒温培养箱中，孵育24h。
(4)以阴性对照孔内细菌明显生长为前提条件，通过肉眼观察，以加药后孔内细菌无明显生长的药物最低浓度为该药物的MIC(μg/mL)，实验平行重复三次。结果见表1。
表1.Myrtucommulone R对多种细菌的抑制作用
结果显示，化合物Myrtucommulone R对甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、万古霉素中介耐药金葡菌、凝固酶阴性葡萄球菌、粪肠球菌、耐万古霉素屎肠球菌均具有显著的抗菌活性，MIC值为0.25–8μg/mL。
尤其是上述化合物对耐甲氧西林金葡菌，万古霉素中介耐药金葡菌和耐万古霉素屎肠球菌的抗菌活性显著优于苯唑西林、万古霉素等现有临床药物，这对于将该类化合物作为新型抗耐药菌药物研发具有重要意义。
本发明的Myrtucommulone R作为新天然产物，对于耐药菌具有良好的活性，有可能发展为新型抗菌药物。
实施例3
Myrtucommulone R对正常细胞的影响
试验方法：人胚肾细胞HEK 293(购自中国科学院上海细胞库)于含有10％(v/v)胎牛血清及双抗(青霉素和链霉素各100U/ml)的DMEM培养基培养至对数期，用PBS洗涤，0.25％(w/v)的胰蛋白酶消化，然后用新鲜DMEM培养基悬浮细胞，调整细胞密度为1×106个/ml，铺96孔板，每孔200μl，待细胞贴壁后，加不同浓度的样品，在37℃、5％CO2条件下共培养24小时，培养结束后，每孔加入20μl 5mg/ml MTT溶液，继续培养4h，用移液枪吸出孔中液体，每孔加入100μl DMSO，室温下轻摇10分钟，用酶标仪在570nm波长处检测每个孔的吸光度OD值。按下列公式计算细胞生长抑制率，重复实验至少3次以上。细胞生长抑制率计算公式：抑制率(％)＝(1-加药组OD值)/对照组OD值×100％。结果见表2。
表2.Myrtucommulone R对HEK 293的细胞毒性
试验结果显示：即使在200μg/ml的高浓度下，本发明的化合物Myrtucommulone R对人正常细胞胚胎肾细胞HEK 293仅表现出很低的细胞毒作用，细胞生长抑制率为15.19％。
实施例4片剂的制备
Myrtucommulone R 0.5g，乳糖20g，淀粉浆适量，硬脂酸镁0.1g，混合，过筛，干燥后压片。每片含Myrtucommulone R 0.05g。
实施例5注射液的制备
Myrtucommulone R 0.5g，丙二醇5g，研磨，再加少量注射用水稀释，混匀，然后加入氯化钠适量，溶解后再加入注射用水至100ml，调PH值5.5-6.5，滤过，灌封，灭菌，即得100支注射用针剂。
实施例6脂质体纳米粒的制备
Myrtucommulone R 0.5g，大豆卵磷脂50mg，溶于2.5ml乙醇中，另取硬脂酸20mg和大豆卵灵脂50mg溶于2.5ml环己烷中，混合搅拌均匀。于37℃恒温水浴中减压旋转蒸发除去有机溶剂，使药物及辅料在烧瓶壁形成均匀脂质薄膜，于真空干燥器中放置过夜，除尽有机溶剂；另取聚乙二醇单硬脂酸酯375mg，搅拌溶解在17.5ml水中，加入上述薄膜中，超声10min，定容至25ml，得淡黄色透明溶液。将此溶液冷冻干燥可得冻干粉。用球磨机研磨24小时，制得粒径均匀的纳米粒，混匀并分装。每袋含Myrtucommulone R 0.05g。
实施例7控释剂的制备
Myrtucommulone R 0.5g，乳糖4g和淀粉浆适量直接装到旋转制粒机/包衣器制备颗粒，将稀释到15％固体的塑化乙基纤维素包衣剂悬浮液喷雾到Myrtucommulone R颗粒的旋转床上。在喷雾期间，用泊洛沙姆188制成的分散体载体膜包衣颗粒，形成平均颗粒度大约为450μm的持续释放的颗粒。混匀装入胶囊，每个胶囊含Myrtucommulone R 0.05g。
实施例8消毒剂的制备
Myrtucommulone R 0.5g，溶解于10ml乙醇中，依次加入聚乙二醇0.15g，聚山梨醇酯2.0g，最后加纯水至1000g，制成消毒制剂。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种具有抗菌活性的间苯三酚三聚体Myrtucommulone R，结构式如式I所示：
2.权利要求1所述的间苯三酚三聚体在制备抗菌药物制剂中的应用，其特征在于：所述的菌包括甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、万古霉素中介耐药金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、粪肠球菌或耐万古霉素屎肠球菌中的至少一种。
3.根据权利要求2所述的间苯三酚三聚体在制备抗菌药物制剂中的应用，其特征在于：所述的抗菌药物包括Myrtucommulone R以及药学上可接受的辅料。
4.根据权利要求2所述的间苯三酚三聚体在制备抗菌药物制剂中的应用，其特征在于：所述的抗菌药物制剂是片剂、注射液、脂质体纳米粒、控释剂或消毒剂。
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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107501287B (zh) * 2017-08-22 2019-09-13 中国科学院华南植物园 Myrtuco mmulone J和Myrtucommuacetalone及其类似物的制备方法
CN108753646B (zh) * 2018-06-12 2021-10-22 上海交通大学医学院附属仁济医院 一株对革兰阳性耐药菌具有广谱抗菌活性的人葡萄球菌及其筛选方法和应用
CN113461702B (zh) * 2021-07-26 2022-06-21 中国科学院昆明植物研究所 酰基间苯三酚低聚体其制备方法和应用
CN116473985A (zh) * 2023-03-29 2023-07-25 暨南大学 一种多烯类抗真菌药物组合物及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2783425A1 (fr) * 1998-09-17 2000-03-24 Fabre Pierre Dermo Cosmetique Extrait de myrte titre en myrtucommulone b', son procede de preparation et son application en dermatologie et en cosmetologie
US20080269510A1 (en) * 2005-12-23 2008-10-30 International Institute Of Chemical Sciences New alpha-glucosidase inhibitors and antibacterial compounds from Myrtus communis L.

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2783425A1 (fr) * 1998-09-17 2000-03-24 Fabre Pierre Dermo Cosmetique Extrait de myrte titre en myrtucommulone b', son procede de preparation et son application en dermatologie et en cosmetologie
US20080269510A1 (en) * 2005-12-23 2008-10-30 International Institute Of Chemical Sciences New alpha-glucosidase inhibitors and antibacterial compounds from Myrtus communis L.

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Isolation and Antibacterial Activity of Acylphloroglucinols from Myrtus communis;A.Rotstein等;《Antimicrobial Agents Chemotherapy》;19741231;第6卷(第5期);539-542 *
New α-glucosidase inhibitors and antibacterial compounds from Myrtus communis L;Farzana Shaheen等;《Eur. J. Org. Chem.》;20060308(第10期);2371-2377 *
Oligomeric Acylphloroglucinols from Myrtle (Myrtus communis);Giovanni Appendino 等;《J. Nat. Prod.》;20020219;第65卷;334-338 *
Total Synthesis of Myrtucommulone A;Hans Muller 等;《Angew. Chem. Int. Ed.》;20101231;第49卷;2045-2049 *

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