CN106973772B - 一种可循环使用的转基因拟南芥水培装置及其水培方法 - Google Patents
一种可循环使用的转基因拟南芥水培装置及其水培方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106973772B CN106973772B CN201710328470.4A CN201710328470A CN106973772B CN 106973772 B CN106973772 B CN 106973772B CN 201710328470 A CN201710328470 A CN 201710328470A CN 106973772 B CN106973772 B CN 106973772B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- transgenic arabidopsis
- plate
- black
- seeds
- preservative film
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 title claims abstract description 55
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 54
- 241000219195 Arabidopsis thaliana Species 0.000 title claims abstract description 29
- 238000012136 culture method Methods 0.000 title claims description 13
- 241000219194 Arabidopsis Species 0.000 claims abstract description 43
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 27
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims abstract description 23
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims abstract description 23
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 claims abstract description 18
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 claims abstract description 18
- 239000010455 vermiculite Substances 0.000 claims abstract description 16
- 229910052902 vermiculite Inorganic materials 0.000 claims abstract description 16
- 235000019354 vermiculite Nutrition 0.000 claims abstract description 16
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 claims abstract description 7
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 claims abstract description 7
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 238000009958 sewing Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000005286 illumination Methods 0.000 claims description 10
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 9
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 9
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 claims description 9
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N heavy water Substances [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 claims description 6
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 6
- 239000005708 Sodium hypochlorite Substances 0.000 claims description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 4
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910021380 Manganese Chloride Inorganic materials 0.000 claims description 3
- GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L Manganese chloride Chemical compound Cl[Mn]Cl GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 229910015667 MoO4 Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 239000011565 manganese chloride Substances 0.000 claims description 3
- 238000005204 segregation Methods 0.000 claims description 3
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 2
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 claims description 2
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 claims 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 abstract description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 13
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract description 11
- 230000035800 maturation Effects 0.000 abstract description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 abstract description 2
- 230000005791 algae growth Effects 0.000 abstract description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 abstract description 2
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 abstract 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 abstract 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 5
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 5
- 239000003501 hydroponics Substances 0.000 description 4
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 3
- 101100438273 Arabidopsis thaliana CAN1 gene Proteins 0.000 description 2
- CBENFWSGALASAD-UHFFFAOYSA-N Ozone Chemical compound [O-][O+]=O CBENFWSGALASAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700001094 Plant Genes Proteins 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 238000004382 potting Methods 0.000 description 2
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 1
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 229910052564 epsomite Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012268 genome sequencing Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 235000021049 nutrient content Nutrition 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000010153 self-pollination Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000009827 uniform distribution Methods 0.000 description 1
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
- A01G31/00—Soilless cultivation, e.g. hydroponics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
- A01G31/00—Soilless cultivation, e.g. hydroponics
- A01G31/02—Special apparatus therefor
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P60/00—Technologies relating to agriculture, livestock or agroalimentary industries
- Y02P60/20—Reduction of greenhouse gas [GHG] emissions in agriculture, e.g. CO2
- Y02P60/21—Dinitrogen oxide [N2O], e.g. using aquaponics, hydroponics or efficiency measures
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Hydroponics (AREA)
Abstract
本发明公开了一种可循环使用的转基因拟南芥水培装置及其水培方法，属于转基因拟南芥筛选纯合株系的水培技术领域。该装置包括纵截面为梯形对的敞口容器、支撑平板和保鲜膜盖；支撑平板由黑色KT板和不锈钢网通过尼龙鱼线缝成一体，黑色KT板中间有小孔，孔内填充灭菌的蛭石；容器口部用保鲜膜盖密封。将具有某种抗性、符合孟德尔遗传规律的转基因拟南芥筛出，用消毒后的小勺取出，转移至黑色KT板小孔中的蛭石上，保鲜膜密封后进行水培培养。该装置一次制作，可循环使用，装置结构简单、操作方便；通过简单的营养液水位控制，转基因拟南芥移苗存活率高、服盆快，成熟早，同时克服了转基因拟南芥水培易倒伏、易长藻、易长菌的问题。
Description
技术领域
本发明属于植物栽培技术领域，具体为一种可循环使用的转基因拟南芥纯合株系筛选快速繁殖水培装置及其水培方法。
背景技术
拟南芥因其生长周期短、自花授粉、产种多、基因组小、基因高度纯合、基因组测序已经完成，是研究植物基因功能的重要模式植物。随着分子生物学的发展，各种基因功能的验证、基因的转录及调控、蛋白质组学研究都广泛的利用到转基因拟南芥。在植物转基因技术中，农杆菌介导转化法是应用广泛的一种，拟南芥是应用最为广泛的研究植物基因功能的载体。在转基因拟南芥研究中，一般要求获得大量基因纯合的T3代株系，然后利用纯合T3代进行基因功能验证研究。实验室内如何通过筛选获得一定数量的T3代基因纯合的拟南芥株系是实验成功的保证。
拟南芥植株细弱，抗逆性较小，对培育条件有着较高的需求。目前，人工温室培养拟南芥的方法主要有土培法和水培法。土培法不能严格控制培养介质营养成分，易受菌类、藻类影响，植株常较瘦弱，产种量不足；水培法能严格控制营养液成分，可培养出健壮、整齐一致的植株，产种量较多，满足转基因株系大样本统计的筛选要求，是培育筛选转基因拟南芥的较好方式。目前，水培拟南芥的装置较复杂，制作成本高，不能重复利用。在基因功能验证研究中，所用的T3代基因纯合的拟南芥株系通常需经过T1代至T3代的三代培育，每代培育前，必须先进行抗性筛选然后移苗，在一般温室条件下，移苗后，炼苗和服盆时间成为制约拟南芥成熟的主要因素；同时，转基因拟南芥每个世代均需要从大量的株系样本中进行筛选，所以转基因纯合拟南芥株系样本的获得过程是一个费时费力，又简单循环的培养过程。同时拟南芥水培法在人工温室内，营养液受光的照射，易长藻类、菌类，影响拟南芥的生长，甚至死亡；因此，急需一种可在人工温室内可循环使用的转基因拟南芥快繁水培装置及其水培方法。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明的目的是提供一种在人工温室内能快速培育T3代基因纯合拟南芥的可循环使用的水培装置及其水培方法。装置结构简单，原料易得，可不断循环利用，在较短时间内培育获得T3代转基因纯合拟南芥植株。
本发明的第一方面，提供一种可循环使用的转基因拟南芥快繁水培装置，包括纵截面为梯形的敞口容器、支撑平板和保鲜膜盖三个主体部分；敞口容器壁为黑色不透光，其敞口处的面积大于底部的面积，内装有营养液，支撑平板可漂浮于营养液上方，支撑平板由黑色KT板和不锈钢网用尼龙鱼线缝制而成；黑色KT板厚度0.5-1cm，黑色KT板中间设有直径0.5-1cm的小孔，小孔数量大于等于1，小孔间距需大于7cm，孔内填充无菌蛭石；不锈钢网的目数为60-80目，橡皮筋将保鲜膜盖固定于敞口容器口部，保鲜膜盖需大于梯形敞口容器口1.2倍以上。
本发明的第二方面，提供一种基于上述水培装置的拟南芥水培方法，具体包括如下步骤：
1)将培养装置各部分做灭菌处理，用超纯水配置改良的1/2Hoagland营养液，在经紫外杀菌后的温室内将营养液加入敞口容器内，添加量以液面与不锈钢网接触，观察到黑色KT板小孔中蛭石能完全吸水即可；
2)转基因拟南芥种子要在4℃冰箱中春化3天，经无菌水浸泡种子30min，用70％酒精浸泡种子30s，无菌水洗三遍，后用10％次氯酸钠浸泡5min，无菌水洗6遍，再用0.1％琼脂悬浮，然后点播于已经有抗生素等抗性的MS1/2培养基上；将播种的转基因拟南芥种子置于温度22±2℃黑暗中培养5-7天，观察抗性苗分离比，将符合孟德尔遗传规律的转基因拟南芥株系筛选出，用灭菌后的小勺取苗，转移至黑色KT板的蛭石上，尽快用橡皮筋套住保鲜膜进行密封；将装置放进人工温室，温度为22±2℃，相对湿度为75±10％，光照周期为16-18h光照/6-8h黑暗，光照强度为100-150μmolm-2s-1；
3)转基因拟南芥移苗后4-6天，长出3-4对真叶时，将保鲜薄膜分次揭开小口进行炼苗，炼苗10天后完全揭开保鲜膜进行培养，幼苗根通过不锈钢网后，可以适当降低水位，保证KT板干燥，每隔10-13天更换营养液，直至果荚成熟；
转基因拟南芥水培的营养液为改良的1/2Hoagland培养液，改良的Hoagland全营养液的成分为：5mMKNO3、5mMCa(NO3)2·4H2O、2mMMgSO4·7H2O、1mMKH2PO4、0.02mMFeSO4·7H2O、0.045mMH3BO3、0.02mMNa2-EDTA·2H2O、0.01mM MnCl2·4H2O、0.8μMZnSO4·7H2O、0.4μMNa2MoO4·2H2O和0.3μMCuSO4·5H2O，用0.1MNaOH或0.1MHCl调节pH值至5.5±0.3。
移苗时，需在相对湿度较大的环境进行，湿度较大，保证拟南芥幼苗移苗过程不发生脱水现象；移苗后需尽快用橡皮筋套装保鲜膜将敞口容器密封，使容器短时间内就有较高的湿度，利于转基因拟南芥幼苗尽快的服盆，实现转基因拟南芥的快速发育成熟。
本发明采用上述技术路线，较同类培育装置及技术相比，具有以下的优点和实效。
1)本发明装置可不断的重复使用：针对转基因拟南芥纯合筛选过程中样本量大，需重复培养，本发明装置结构简单，部件少，操作灵活，耗材少，成本低，可不断的重复使用；循环使用装置使用前仅需简单消毒处理，装置一次制作后可重复使用。
2)本发明移苗后的转基因拟南芥具有高的存活率：通过良好的控制营养液的水位，移苗早期，水位刚与不锈钢网接触，保证厚度较大的黑色KT板小孔中蛭石湿润，但不至于湿度过大，保障移苗早期转基因拟南芥幼苗根的生长；幼苗根穿过不锈钢网后，可以适当降低水位，保证KT板干燥，能有效防止藻类、菌类生长，保证转基因拟南芥良好的生长发育。
3)本发明转基因拟南芥幼苗能较快的服盆：移苗时，环境湿度需较大；移苗后马上用保鲜膜将敞口容器密封，并用橡皮筋固定，使容器在短时间内有较高的湿度，减少幼苗服盆时间，拟南芥就能快速发育成熟，较同等条件下土培方式提前2周成熟。
4)本发明可防止水培的长藻、长菌和倒伏的问题：采用不透光敞口容器和可漂浮的黑色KT板组合，再通过简单的控制水位，保证营养液不直接暴露于光照，解决水培易长藻、长菌问题；通过使用钻有小孔径的KT厚板和蛭石组合，解决水培转基因拟南芥易倒伏问题。
5)本发明的水培法可生产足够量的转基因拟南芥种子：转基因拟南芥纯合的筛选需要大的样本进行统计分析，该水培法提供转基因拟南芥生长所需充足的水分和营养，植株长势健壮，产种量高，保证转基因纯合拟南芥筛选过程中实验的可靠性。
附图说明
图1为本发明的一种可循环使用的转基因拟南芥快繁水培装置示意图：
1纵截面为梯形的敞口容器，2支撑平板，3保鲜膜盖，4黑色KT板，5不锈钢网，6尼龙鱼线，7小孔，8无菌蛭石，9橡皮筋。
图2为转苗后、服盆后及发育中转基因拟南芥在快繁水培装置中的生长状况图。
具体实施方式
通过以下详细说明结合附图可以进一步理解本发明的特点和优点。所提供的实施例仅是对本发明方法的说明，而不以任何方式限制本发明揭示的其余内容。
【实施例1】
如图1所示，对本发明作进一步说明，一种可循环使用的转基因拟南芥快繁水培装置，包括纵截面为梯形的敞口容器、支撑平板和保鲜膜盖三个主体部分。
本发明不透光梯形塑料圆形盆(敞口处的直径×高度：19×8cm)为此装置的敞口容器；支撑平板由黑色KT板和不锈钢网用尼龙鱼线缝制而成，黑色KT板厚度0.5cm，直径17.5cm；不锈钢网80目，直径17.3cm；尼龙鱼线(直径约1.5mm)；黑色KT板和不锈钢网用尼龙鱼线紧密缝制成一体；黑色KT板中间有直径0.5-1cm均匀分布的小孔，小孔则间距7cm，每个小孔内填充灭菌后的小粒径蛭石。
本发明敞口容器内装入1/2Hoagland营养液，液面高度6.5cm,营养液面与不锈钢网刚好接触。保鲜膜(25×30cm)盖于敞口容器，保鲜膜盖通过橡皮筋固定将敞口容器口密封。
本发明的一种可循环使用的转基因拟南芥快繁水培装置的拟南芥水培方法，具体包括如下步骤：
1)对人工温室进行灭菌，先将温室清洗干净，再用紫外灯灭菌1h。然后开换气扇进行彻底通气，清除残余臭氧，防止残余臭氧对幼苗的伤害。
2)组装水培装置，将121℃灭菌20min的蛭石放入黑色KT板小孔内，堆放至形成小突起；若循环使用之前组装好的装置，则需事先将敞口容器和支撑平板用水冲洗干净，用10‰次氯酸钠浸泡1h，后用蒸馏水冲洗5遍后使用。
3)将具有潮霉素抗性的T1代种子在4℃冰箱中春化3天，用无菌水浸泡种子30min，再用70％酒精浸泡种子30s，无菌水洗三遍，后用10％次氯酸钠浸泡5min，无菌水洗6遍；接着用0.1％琼脂悬浮，后点播于含有0.25‰潮霉素的MS1/2培养基上，温度22±2℃黑暗中培养5-7天，观察转基因拟南芥的抗性分离比；将符合孟德尔遗传规律的转基因拟南芥筛选出，用灭菌后的小勺将幼苗小心转移到黑色KT板的蛭石上，用蛭石轻盖幼苗根部，然后尽快用橡皮筋套住保鲜膜将敞口容器进行密封；随后将装置放进人工温室温度为22±2℃，相对湿度75±10％，光照周期16h光照/8h黑暗，其光照强度为150μmolm-2s-1。
4)转基因拟南芥移苗后4-6天，拟南芥长出3-4对真叶时，需将保鲜薄膜分次揭开小口进行炼苗，炼苗10天后完全揭开保鲜膜进行培养，同时每隔10-13天更换营养液，直至拟南芥果荚成熟；水培的营养液为1/2改良的Hoagland培养液。改良的Hoagland全营养液的成分为：5mMKNO3、5mMCa(NO3)2·4H2O、2mM MgSO4·7H2O、1mMKH2PO4、0.02mMFeSO4·7H2O、0.045mMH3BO3、0.02mM Na2-EDTA·2H2O、0.01mM MnCl2·4H2O、0.8μMZnSO4·7H2O、0.4μMNa2MoO4·2H2O和0.3μMCuSO4·5H2O，用0.1MNaOH或0.1MHCl调节pH值至5.5±0.3。
营养液的水位控制技术：移栽早期，水位刚与不锈钢网接触，黑色KT板小孔中蛭石湿润，但不至于湿度过大，保障移苗早期转基因拟南芥幼苗根的生长；幼苗根通过不锈钢网后，适当降低水位，纵截面为梯形的敞口容器便可卡住支撑KT板，保证KT板干燥，因此，该装置仅通过简单的营养液水位控制，就能有效防止藻类、菌类生长，保证转基因拟南芥的生长发育良好。
转苗后、服盆后及发育中转基因拟南芥在快繁水培装置中的生长状况如图2所示，可见本发明的装置和方法适合培养转基因拟南芥。
该水培装置和水培方法，转基因拟南芥较同等条件下土培方式提前2周成熟。
Claims (2)
1.一种可循环使用的转基因拟南芥快繁水培装置，其特征在于，包括纵截面为梯形的敞口容器（1）、支撑平板（2）和保鲜膜盖（3）三个主体部分；敞口容器壁为黑色不透光，其敞口处的面积大于底部的面积，内装有营养液，支撑平板可漂浮于营养液上方，支撑平板由黑色KT板（4）和不锈钢网（5）用尼龙鱼线（6）缝制而成；纵截面为梯形的敞口容器可卡住黑色KT板，黑色KT板厚度0.5-1cm，黑色KT板中间设有直径0.5-1cm的小孔（7），小孔数量大于1，小孔间距大于7cm，孔内填充无菌蛭石（8）；不锈钢网的目数为60-80目，保鲜膜盖大于梯形敞口容器口1.2倍，橡皮筋（9）将保鲜膜盖固定于敞口容器口部。
2.一种基于权利要求1所述水培装置的转基因拟南芥水培方法，具体包括如下步骤：
1）将培养装置各部分做灭菌处理，用超纯水配置1/2改良的Hoagland全营养液，在经紫外杀菌后的温室内将营养液加入敞口容器内，添加量以液面与不锈钢网接触，观察到黑色KT板小孔中蛭石能完全吸水即可；
2）转基因拟南芥种子要在4℃冰箱中春化3天，经无菌水浸泡种子30min，用70%酒精浸泡种子30s，无菌水洗三遍，后用10%次氯酸钠浸泡5min，无菌水洗6遍，再用0.1%琼脂悬浮，然后点播于已经有潮霉素抗性的1/2MS培养基上；将播种的转基因拟南芥种子置于温度22±2℃黑暗中培养5-7天，观察转基因拟南芥的抗性分离比，将符合孟德尔遗传规律的转基因拟南芥筛选出，用灭菌后的小勺取苗，转移至黑色KT板的蛭石上，尽快用橡皮筋套住保鲜膜盖进行密封；将装置放进人工温室，温度为22±2℃，相对湿度为75±10%，光照周期为16-18h光照/6-8h黑暗，光照强度为100-150μmolm-2s-1；
3)转基因拟南芥移苗后4-6天，长出3-4对真叶时，将保鲜膜盖分次揭开小口进行炼苗，炼苗10天后完全揭开保鲜膜盖进行培养，幼苗根通过不锈钢网后，降低水位，保证KT板干燥，每隔10-13天更换营养液，直至果荚成熟；
改良的Hoagland全营养液的成分为：5mMKNO3、5mMCa(NO3)2·4H2O、2mMMgSO4·7H2O、1mMKH2PO4、0.02mMFeSO4·7H2O、0.045mMH3BO3、0.02mMNa2-EDTA·2H2O、0.01mM MnCl2·4H2O、0.8μMZnSO4·7H2O、0.4μMNa2MoO4·2H2O和0.3μMCuSO4·5H2O，用0.1MNaOH或0.1MHCl调节pH值至5.5±0.3。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710328470.4A CN106973772B (zh) | 2017-05-11 | 2017-05-11 | 一种可循环使用的转基因拟南芥水培装置及其水培方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710328470.4A CN106973772B (zh) | 2017-05-11 | 2017-05-11 | 一种可循环使用的转基因拟南芥水培装置及其水培方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106973772A CN106973772A (zh) | 2017-07-25 |
| CN106973772B true CN106973772B (zh) | 2021-01-01 |
Family
ID=59343430
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710328470.4A Expired - Fee Related CN106973772B (zh) | 2017-05-11 | 2017-05-11 | 一种可循环使用的转基因拟南芥水培装置及其水培方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106973772B (zh) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107455251A (zh) * | 2017-09-19 | 2017-12-12 | 中国农业科学院棉花研究所 | 一种拟南芥批量水培装置及水培方法 |
| CN107637491A (zh) * | 2017-09-22 | 2018-01-30 | 浙江省林业科学研究院 | 适于生理和遗传研究的拟南芥培养方法及专用培养装置 |
| CN109042275A (zh) * | 2018-09-03 | 2018-12-21 | 中国农业科学院油料作物研究所 | 一种拟南芥水培装置及水培方法 |
| CN109169225A (zh) * | 2018-09-28 | 2019-01-11 | 武汉华天园林艺术有限公司 | 适合多种水生漂浮植物的种植方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1535569A (zh) * | 2003-04-10 | 2004-10-13 | 浙江大学 | 植物漂浮栽培方法及专用装置 |
| CN102696463A (zh) * | 2012-06-07 | 2012-10-03 | 山东理工大学 | 一种有效防止绿藻产生的拟南芥水培方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE20312530U1 (de) * | 2002-09-25 | 2004-01-15 | CLF analytische laborgeräte GmbH | Pflanzenzuchtvorrichtung |
| US9606553B2 (en) * | 2013-05-05 | 2017-03-28 | Sadeg M. Faris | SanSSoil (soil-less) indoor farming for food and energy production |
| CN105961175A (zh) * | 2016-07-04 | 2016-09-28 | 浙江工业大学 | 一种拟南芥无菌水培装置及其水培方法 |
| CN106386431A (zh) * | 2016-08-31 | 2017-02-15 | 黄福萍 | 拟南芥的抑菌水培方法 |
-
2017
- 2017-05-11 CN CN201710328470.4A patent/CN106973772B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1535569A (zh) * | 2003-04-10 | 2004-10-13 | 浙江大学 | 植物漂浮栽培方法及专用装置 |
| CN102696463A (zh) * | 2012-06-07 | 2012-10-03 | 山东理工大学 | 一种有效防止绿藻产生的拟南芥水培方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 拟南芥直播水培法;郁晓敏等;《植物生理学通讯》;20040229;第40卷(第1期);第81-82页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN106973772A (zh) | 2017-07-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106973772B (zh) | 一种可循环使用的转基因拟南芥水培装置及其水培方法 | |
| CN101731135B (zh) | 一种拟南芥直播水培装置及其应用 | |
| CN103960134B (zh) | 一种水培方式生产甘薯脱毒种苗的方法 | |
| CN105104152B (zh) | 一种拟南芥水培装置及水培方法 | |
| CN105724206A (zh) | 马铃薯种芽漂浮育苗方法 | |
| CN109275557A (zh) | 一种自动化烟草立体漂浮育苗装置和方法 | |
| CN106069543B (zh) | 一种猕猴桃脱毒组培苗移栽方法 | |
| CN105993865A (zh) | 一种栓皮栎无菌苗的培育方法 | |
| CN207665720U (zh) | 一种海绵板水培育苗装置 | |
| CN105875370A (zh) | 一种花生芽的培育方法 | |
| CN107018896A (zh) | 一种设施化扦插南京椴的方法 | |
| RU2738382C2 (ru) | Способ совместного выращивания объектов аквабиокультуры и растений | |
| CN102845287B (zh) | 香蕉苗的水培方法和系统 | |
| CN103798143A (zh) | 一种北美红杉组培苗瓶外扦插生根方法 | |
| CN106962085B (zh) | 一种能使稻属植株快速脱病脱毒的扦插育苗方法 | |
| CN107787698A (zh) | 一种避免土传病害侵染的马铃薯种薯的生产方法 | |
| CN104663439A (zh) | 一种伊乐藻组织培养与快速繁殖方法 | |
| CN105104200B (zh) | 一种合柱金莲木的组织培养快速繁殖方法 | |
| CN105145042B (zh) | 马铃薯脱毒原原种土壤培养方法 | |
| CN105993944A (zh) | 大樱桃砧木大青叶的繁殖方法 | |
| CN101313661A (zh) | 木本花卉组培苗大批量移栽方法 | |
| CN106465680A (zh) | 一种快速的芹菜组培体系 | |
| CN111034557B (zh) | 一种大麦黄花叶病室内接种用幼苗及接种后幼苗的培养方法 | |
| CN108782205B (zh) | 一种拟南芥壮苗的培育方法 | |
| CN108886908A (zh) | 一种西瓜嫁接砧木葫芦种子催芽方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20210101 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |