CN106884023B - 二十二碳六烯酸的发酵方法 - Google Patents

二十二碳六烯酸的发酵方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种二十二碳六烯酸的发酵方法，本发明的方法中，发酵培养阶段中通过检测菌体OD600值和糖耗值来控制发酵培养基的溶氧量和葡萄糖的流加速度，从而能够显著提高DHA的产量并显著降低发酵周期。

Description

二十二碳六烯酸的发酵方法
技术领域
本发明涉及二十二碳六烯酸发酵领域，具体地，涉及一种二十二碳六烯酸的发酵方法。
背景技术
二十二碳六烯酸(docosahexaenoicacid，简称DHA)化学名称为二十二碳-4，7，10，13，16，19-六烯酸，属n-3系列长链多不饱和脂肪酸，已知DHA对脑功能的维持、发展发挥着重要作用。人虽然具有由亚麻酸合成DHA的能力，但其合成量与所需量相比很少，需要从外部摄取DHA。因此，含有DHA的食品、营养补充剂、婴儿配方奶在大量销售。这些制品中含有的DHA可以从鱼油中提取得到，鱼油价格低廉且富含DHA，因此是优良的DHA的供给源，但考虑到近来DHA的需求增高，以及伴随海洋污染产生的PCB、重金属在鱼中的蓄积等，更安全和更稳定供给DHA的生产方法也日益增多。
最近的研究表明，除了从鱼油提取得到的DHA以外，还可以通过使用微生物发酵法制造DHA。例如可以通过裂殖壶菌发酵培养生产DHA，但是在发酵过程中DHA的产量较低，发酵周期也较长。
因此，显著急需一种能够显著提高DHA产量并降低发酵周期的发酵方法。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术中DHA产量较低且发酵周期较长的缺陷，提供一种二十二碳六烯酸的发酵方法。
为了实现上述目的，本发明提供了一种二十二碳六烯酸的发酵方法，该方法包括：采用裂殖壶菌(Schizochytrium sp.)依次进行活化培养、传代培养、种子培养和发酵培养，其中，在所述发酵培养阶段中通过检测菌体OD600值和糖耗值来控制所述发酵培养基的溶氧量和葡萄糖的流加速度，所述控制方式包括：依次进行下述步骤，
(1)菌体OD600值在60以下，糖耗小于4g/L/h时，控制溶氧量在80％以下，且不流加葡萄糖；菌体OD600值在60以下，糖耗大于4g/L/h时，控制溶氧量在80％以上，并控制葡萄糖的流加速度为3.5-4.5g/L/h；
(2)菌体OD600值在60以上70以下，糖耗小于3g/L/h时，控制溶氧量在80％以下，且不流加葡萄糖；菌体OD600值在60以上70以下，糖耗大于4g/L/h时，控制溶氧量在80％以上，并控制葡萄糖的流加速度为3.5-4.5g/L/h；
(3)菌体OD600值在70以上时，控制溶氧量在50％以下，并控制葡萄糖的流加速度为3.5-4.5g/L/h。
本发明的方法中，发酵培养阶段中通过检测菌体OD600值和糖耗值来控制发酵培养基的溶氧量和葡萄糖的流加速度，从而能够显著提高DHA的产量并显著降低发酵周期。
本发明的其它特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
具体实施方式
以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
本发明提供了一种二十二碳六烯酸的发酵方法，该方法包括：采用裂殖壶菌(Schizochytrium sp.)依次进行活化培养、传代培养、种子培养和发酵培养，其中，在所述发酵培养阶段中通过检测菌体OD600值和糖耗值来控制所述发酵培养基的溶氧量和葡萄糖的流加速度，所述控制方式包括：依次进行下述步骤，
(1)菌体OD600值在60以下，糖耗小于4g/L/h时，控制溶氧量在80％以下，且不流加葡萄糖；菌体OD600值在60以下，糖耗大于4g/L/h时，控制溶氧量在80％以上，并控制葡萄糖的流加速度为3.5-4.5g/L/h；
(2)菌体OD600值在60以上70以下，糖耗小于3g/L/h时，控制溶氧量在80％以下，且不流加葡萄糖；菌体OD600值在60以上70以下，糖耗大于4g/L/h时，控制溶氧量在80％以上，并控制葡萄糖的流加速度为3.5-4.5g/L/h；
(3)菌体OD600值在70以上时，控制溶氧量在50％以下，并控制葡萄糖的流加速度为3.5-4.5g/L/h。
根据本发明所述的方法，其中，所述活化培养条件可以为本领域常规的裂殖壶菌活化培养条件，例如：培养温度可以为25-32℃，培养时间可以为12-36h，优选地，培养基为PDA固体培养基。
根据本发明所述的方法，PDA固体培养可以为本领域常规的组成，例如可以含有：马铃薯汁200-250g，葡萄糖20-25g，琼脂15-20g，水1000-1200mL。
根据本发明所述的方法，优选地，所述传代培养的传代次数为3-5代，即传代培养进行3-5代后再进行种子培养，更优选地，控制传代培养每代传代结束时的OD600值为25-35，从而更有利于后续种子培养和发酵培养的进行。其中，传代培养的条件可以包括：温度为25-32℃，时间为12-36h，摇床转速为100-200转/分钟，传代培养基可以含有：葡萄糖10-30g/L，酵母粉1-10g/L，玉米浆1-20g/L，CaCl2·2H2O 1-2g/L，Na2SO48-10g/L，KCl 1-2g/L，KH2PO4 1-4g/L，MgSO4·7H2O 1-2g/L，VB1 1-2mg/L，VB12 0.1-0.2mg/L，VB6 1-2mg/L，硼酸1-20mg/L。
本发明中，相对于1L的种子培养基，接种40-100mL传代培养得到的菌液。
根据本发明所述的方法，种子培养的方式可以为一级扩培或者多级扩培的方式进行培养，当一级扩培时，将一级扩培得到的种子液直接用于发酵培养；当多级扩培时，多级扩培的次数可以为2-4级。在多级扩培方案中，罐体大小的设计以及培养的级数根据最终产能的大小来决定。
根据本发明所述的方法，种子培养的条件可以本领域常规的条件，例如可以包括：温度为28-32℃，时间为12-36h，通风量为0.1-3vvm，搅拌速度50-800转/分钟，种子培养基可以含有：葡萄糖40-50g/L，酵母膏1-5g/L，蛋白胨1-5g/L，乙酸铵1-5g/L，谷氨酸钠1-10g/L，KH2PO4 1-4g/L，Na2SO4，5-12g/L，MgSO4·7H2O 2-3g/L，KCl 2-3g/L，MgCl2 1-3g/L，CaCl2·2H2O 1-2g/L，FeCl3 0.1-0.15g/L，VB1 5-10mg/L，VB12 0.15-0.3mg/L，VB6 0.3-0.5mg/L。
本发明中，传代培养基的配制方法可以为本领域常规的方法，例如可以包括：葡萄糖单独灭菌，酵母粉与玉米浆分别灭菌，除了维生素以外的其它原料一起灭菌，灭菌条件为121℃、30min，灭菌完成后，冷却至室温，在无菌条件下配制为所述培养基配方浓度即可；维生素配制为溶液后，经过0.1μm无菌过滤膜过滤，然后加入培养基中，然后将上述培养基装在含有挡板的250ml摇瓶中，保证最终装液量为50ml，自然pH值，以用于传代培养。
本发明中，种子培养基的配制方法可以为本领域常规的方法，例如可以包括：葡萄糖单独灭菌，酵母粉单独灭菌，除了维生素以外的其它原料一起灭菌，灭菌条件为121℃、30min，灭菌完成后，冷却至室温，在无菌条件下配制为所述培养基配方浓度即可；维生素配制为溶液后，经过0.1μm无菌过滤膜过滤，然后加入培养基中，然后将上述培养基装在含有挡板的250ml摇瓶中，保证最终装液量为50ml，自然pH值，以用于种子培养。
根据本发明所述的方法，发酵培养的条件除了上述控制的发酵培养基的溶氧量和葡萄糖的流加速度外，还可以包括：温度为25-32℃，发酵初始培养基可以含有：葡萄糖10-30g/L，酵母粉1-10g/L，玉米浆1-20g/L，Na2SO4 5-12g/L，CaCl2.2H2O 1-2g/L，KCl 1-6g/L，KH2PO4 1-4g/L，MnCl2 0.5-1g/L，MgSO4·7H2O 2-3g/L，硼酸1-20mg/L，溴化钾1-20mg/L，VB15-10mg/L，VB12 0.15-0.3mg/L，VB6 0.3-0.5mg/L。
本发明发酵培养基的配制方法可以为本领域常规的配制方法，例如可以包括：配置浓度为600g/L的葡萄糖溶液，于密封补料容器中单独灭菌；酵母粉和玉米浆于密封补料容器中单独灭菌；维生素配制为溶液后，经过0.1μm无菌过滤膜过滤，然后加入培养基中；其它成分于发酵罐中配置完成后灭菌，灭菌条件均为121℃、30min，培养基pH值用灭菌后酸和碱控制为5-7，选用的酸为有机酸，如柠檬酸；或者无机酸，如稀盐酸和/或硫酸，选用的碱为氢氧化钠以及其它碱性物如氨水。
本发明的发酵条件还可以包括：相对于1L的发酵培养基，接种OD600值为20-40的经种子培养后的种子培养液40-100mL。
本发明中，控制培养基溶氧量的方法可以为本领域常规的方法，例如可以通过调节空气流量和/或搅拌转速来控制发酵培养基的溶氧量，优选地，通过自动程序调节空气流量和搅拌转速以控制发酵培养基的溶氧量。例如infors公司的Multifors发酵罐中，可以在与发酵罐连接控制设备上输入需要控制的溶氧量值，以实现溶氧量的自动控制。
本发明中，采用流加补料设备向发酵培养基中流加葡萄糖，并通过调节该设备中的蠕动泵的转速来控制流加速度，即通过调节用于流加葡萄糖液的蠕动泵的转速来控制流加速度。通过调节该设备中的蠕动泵的转速来控制流加速度的技术为本领域的公知技术。通过调节该设备中的蠕动泵的转速来控制流加速度中，针对不同的流加补料设备，蠕动泵的转速与葡萄糖的流加速度之间的关系不同，为了便于操作，在优选的方案中，发酵设备中集成有流加补料设备，即发酵设备可以实现溶氧量和流加速度的控制。当发酵设备中集成有流加补料设备，通过自动程序可以调节葡萄糖的流加速度。
本发明一种优选实施方式中，将甘油管冻存的菌种采用涂布法将含菌菌液接种至固体PDA培养基进行活化培养，并挑取固体PDA上的单菌落接种于传代培养基中进行摇瓶传代培养3至5代，更优选地，控制传代培养每代传代结束时的OD600值为25-35；将传代培养得到的菌液接种至种子培养基中进行种子培养即得到种子培养基接种液，用于接种一级种子培养液，当OD600值为25-30时，进行二级种子培养，一级种子培养基与二级种子培养基分别在1-2m3和6-9m3的罐中进行。二级培养后的种子液(OD600值为20-40)接入发酵罐(20m3)发酵初始培养液中，相对于1L的发酵培养基，接种OD600值为20-40的经种子培养后的种子培养液40-100mL，开始进行发酵培养，并通过检测菌体OD600值和糖耗值来控制所述发酵培养基的溶氧量和葡萄糖的流加速度，所述控制方式包括：
(1)菌体OD600值为42-55，糖耗为3-3.5g/L/h时，控制溶氧量为60-70％，且不流加葡萄糖；菌体OD600值为50-55，糖耗为4.5-5g/L/h时，控制溶氧量在85-95％以上，并控制葡萄糖的流加速度为3.5-4.5g/L/h；
(2)菌体OD600值在60以上70以下，糖耗为2-2.5g/L/h时，控制溶氧量为65-70％，且不流加葡萄糖；菌体OD600值在60以上70以下，糖耗为4.5-5g/L/h时，控制溶氧量为85-90％，并控制葡萄糖的流加速度为3.5-4.5g/L/h；
(3)菌体OD600值为75-80时，控制溶氧量为35-45％，并控制葡萄糖的流加速度为3.5-4.5g/L/h。
本发明中裂殖壶菌(Schizochytrium sp.)可以为本领域各种可以产生DHA的裂殖壶菌菌株，例如可以商购自CGMCC，保藏号为CGMCC No.3535的裂殖壶菌菌株，发明人发现，采用上述保藏号的裂殖壶菌菌株，在本发明的培养模式下进行裂殖壶菌的发酵培养，能够显著提高DHA的产量并降低发酵周期。
实施例
裂殖壶菌菌种购自CGMCC，保藏号为CGMCC No.3535。
PDA固体培养由马铃薯汁200g，葡萄糖20g，琼脂15g，水1000mL组成。
传代培养由葡萄糖20g/L，酵母粉5g/L，玉米浆15g/L，CaCl2·2H2O 1.5g/L Na2SO49g/L，KCl 1.5g/L，KH2PO4 2g/L，MgSO4·7H2O 1.5g/L，VB1 1.5mg/L，VB12 0.15mg/L，VB61.5mg/L，硼酸15mg/L组成；配制方法为：葡萄糖单独灭菌，酵母粉与玉米浆分别灭菌，除了维生素以外的其它原料一起灭菌，灭菌条件为121℃、30min，灭菌完成后，冷却至室温，在无菌条件下配制为所述培养基配方浓度即可；维生素配制为溶液后，经过0.1μm无菌过滤膜过滤，然后加入培养基中，将上述培养基装在含有挡板的250ml摇瓶中，保证最终装液量为50ml，自然pH值，以用于传代培养。
一级和二级种子培养基均为：葡萄糖45g/L，酵母膏3g/L，蛋白胨2g/L，乙酸铵3g/L，谷氨酸钠5g/L，KH2PO4 2g/L，Na2SO4，8g/L，MgSO4·7H2O 2g/L，KCl 2g/L，MgCl2 2g/L，CaCl2·2H2O 1g/L，FeCl3 0.1g/L，VB1 7mg/L，VB12 0.15mg/L，VB6 0.3mg/L。配制方法为：葡萄糖单独灭菌，酵母粉单独灭菌，除了维生素以外的其它原料一起灭菌，灭菌条件为121℃、30min，灭菌完成后，冷却至室温，在无菌条件下配制为所述培养基配方浓度即可；维生素配制为溶液后，经过0.1μm无菌过滤膜过滤，然后加入培养基中，将上述培养基装在含有挡板的250ml摇瓶中，保证最终装液量为50ml，自然pH值，以用于种子培养。
发酵初始培养基由葡萄糖20g/L，酵母粉5g/L，玉米浆10g/L，Na2SO4 8g/L，CaCl2.2H2O 1.5g/L，KCl 3g/L，KH2PO4 2g/L，MnCl2 0.5g/L，MgSO4·7H2O 2g/L，硼酸10mg/L，溴化钾10mg/L，VB1 8mg/L，VB12 0.15mg/L，VB6 0.3mg/L组成，配制方法为：配置浓度为600g/L的葡萄糖溶液，于密封补料容器中单独灭菌；酵母粉和玉米浆于密封补料容器中单独灭菌；维生素配制为溶液后，经过0.1μm无菌过滤膜过滤，然后加入培养基中；其它成分于发酵罐中配置完成后灭菌，灭菌条件均为121℃、30min，培养基pH值用灭菌后酸和碱控制为6，选用的酸为稀盐酸，选用的碱为氢氧化钠。
实施例1
本实施例用于说明本发明的二十二碳六烯酸的发酵方法。
将甘油管冻存的裂殖壶菌菌种采用涂布法将含菌菌液接种至固体PDA培养基在25℃下进行活化培养36h，然后挑取固体PDA上的单菌落接种于传代培养基中30℃、摇床转速为200转/分钟下进行摇瓶传代培养3代(时间为12h)，控制传代培养每代传代结束时的OD600值为30；将50mL传代培养得到的菌液接种至1L一级种子培养液，在28℃、0.1vvm、800转/分钟搅拌速度下进行一级种子培养，当菌液OD600值为25(时间为15h)时，将40mL菌液接种于1L二级种子培养液中，在30℃、0.1vvm、800转/分钟搅拌速度下进行二级种子培养，菌液OD600值为25(时间为12h)时，结束二级种子培养，一级种子培养基与二级种子培养基分别在2m3和6m3的罐中进行；400mL二级培养后的种子液(OD600值为25)接入发酵罐(20m3)的10L初始发酵培养液中，在25℃下开始进行发酵培养，培养84h后，结束发酵培养，发酵培养过程中通过检测菌体OD600值和糖耗值来控制发酵培养基的溶氧量和葡萄糖的流加速度，控制方式为依次进行下述步骤：(1)菌体OD600值为55，糖耗为3.5g/L/h时，通过自动程序调节空气流量和搅拌转速以控制溶氧量为60％，且不流加葡萄糖；菌体OD600值为55，糖耗为4.5g/L/h时，通过自动程序调节空气流量和搅拌转速以控制溶氧量为95％，通过自动程序调节葡萄糖流加设备中蠕动泵的转速，以控制葡萄糖的流加速度为3.5g/L/h；(2)菌体OD600值为60，糖耗为2.5g/L/h时，通过自动程序调节空气流量和搅拌转速以控制溶氧量为65％，且不流加葡萄糖；菌体OD600值为60，糖耗为4.5g/L/h时，通过自动程序调节空气流量和搅拌转速以控制溶氧量为90％，通过自动程序调节葡萄糖流加设备中蠕动泵的转速，以控制葡萄糖的流加速度为3.5g/L/h；(3)菌体OD600值为75时，通过自动程序调节空气流量和搅拌转速以控制溶氧量为45％，通过自动程序调节葡萄糖流加设备中蠕动泵的转速，以控制葡萄糖的流加速度为3.5g/L/h。
实施例2
本实施例用于说明本发明的二十二碳六烯酸的发酵方法。
将甘油管冻存的裂殖壶菌菌种采用涂布法将含菌菌液接种至固体PDA培养基在30℃下进行活化培养20h，然后挑取固体PDA上的单菌落接种于传代培养基中25℃、摇床转速为150转/分钟下进行摇瓶传代培养4代(时间为20h)，控制传代培养每代传代结束时的OD600值为25；将60mL活化后的菌液接种至1L一级种子培养液，在30℃、0.2vvm、500转/分钟搅拌速度下进行一级种子培养，当菌液OD600值为25(时间为20h)时，将50mL菌液接种于二级种子培养液中，在30℃、0.2vvm、500转/分钟搅拌速度下进行二级种子培养，当菌液OD600值为25(时间为12h)时，结束二级种子培养，一级种子培养基与二级种子培养基分别在2m3和6m3的罐中进行；400mL二级培养后的种子液(OD600值为25)接入发酵罐(20m3)10L发酵培养液中，在30℃下开始进行发酵培养，培养87h后，结束发酵培养，发酵培养过程中通过检测菌体OD600值和糖耗值来控制发酵培养基的溶氧量和葡萄糖的流加速度，控制方式为依次进行下述步骤：(1)菌体OD600值为42，糖耗为3g/L/h时，通过自动程序调节空气流量和搅拌转速以控制溶氧量为65％，且不流加葡萄糖；菌体OD600值为50，糖耗为5g/L/h时，通过自动程序调节空气流量和搅拌转速以控制溶氧量为90％，通过自动程序调节葡萄糖流加设备中蠕动泵的转速，以控制葡萄糖的流加速度为4g/L/h；(2)菌体OD600值为65，糖耗为2g/L/h时，通过自动程序调节空气流量和搅拌转速以控制溶氧量为70％，且不流加葡萄糖；菌体OD600值为65，糖耗为5g/L/h时，通过自动程序调节空气流量和搅拌转速以控制溶氧量为85％，通过自动程序调节葡萄糖流加设备中蠕动泵的转速，以控制葡萄糖的流加速度为4g/L/h；(3)菌体OD600值为80时，通过自动程序调节空气流量和搅拌转速以控制溶氧量为35％，通过自动程序调节葡萄糖流加设备中蠕动泵的转速，以控制葡萄糖的流加速度为4g/L/h。
实施例3
本实施例用于说明本发明的二十二碳六烯酸的发酵方法。
将甘油管冻存的裂殖壶菌菌种采用涂布法将含菌菌液接种至固体PDA培养基在32℃下进行活化培养12h，然后挑取固体PDA上的单菌落接种于传代培养基中32℃、摇床转速为100转/分钟下进行摇瓶传代培养5代(时间为32h)，控制传代培养每代传代结束时的OD600值为30；将40mL活化后的菌液接种至1L一级种子培养液，在32℃、0.2vvm、100转/分钟搅拌速度下进行一级种子培养，当菌液OD600值为30(时间为18h)时，将100mL菌液接种于二级种子培养液中，在32℃、0.2vvm、100转/分钟搅拌速度下进行二级种子培养，当菌液OD600值为30(时间为10h)时，结束二级种子培养，一级种子培养基与二级种子培养基分别在2m3和6m3的罐中进行；400mL二级培养后的种子液(OD600值为30)接入发酵罐(20m3)10L发酵培养液中，在32℃下开始进行发酵培养，培养89h后，结束发酵培养，发酵培养过程中通过检测菌体OD600值和糖耗值来控制发酵培养基的溶氧量和葡萄糖的流加速度，控制方式为依次进行下述步骤：(1)菌体OD600值为45，糖耗为3.5g/L/h，通过自动程序调节空气流量和搅拌转速以控制溶氧量为70％，且不流加葡萄糖；菌体OD600值为55，糖耗为4.5g/L/h，通过自动程序调节空气流量和搅拌转速以控制溶氧量为85％，通过自动程序调节葡萄糖流加设备中蠕动泵的转速，以控制葡萄糖的流加速度为4.5g/L/h；(2)菌体OD600值为70，糖耗为2g/L/h，通过自动程序调节空气流量和搅拌转速以控制溶氧量为65％，且不流加葡萄糖；菌体OD600值为70，糖耗为4.5g/L/h，通过自动程序调节空气流量和搅拌转速以控制溶氧量在85％以上，通过自动程序调节葡萄糖流加设备中蠕动泵的转速，以控制葡萄糖的流加速度为4.5g/L/h；(3)菌体OD600值为80时，通过自动程序调节空气流量和搅拌转速以控制溶氧量为45％，通过自动程序调节葡萄糖流加设备中蠕动泵的转速，以控制葡萄糖的流加速度为4.5g/L/h。
试验例
将实施例1-3的发酵产物进行DHA产量检测，并测定发酵得到菌株的生物量干重，生物干重中油脂含量和油脂中DHA含量，结果见下表1。
表1
Figure GDA0002192236240000111
通过表1的数据可以看出，本发明的发酵方法能够显著提高DHA的产量并显著降低发酵周期。
本发明的发酵方法中，发酵培养阶段中通过检测菌体OD600值和糖耗值来控制发酵培养基的溶氧量和葡萄糖的流加速度，从而能够显著提高DHA的产量并显著降低发酵周期。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。

Claims (11)

1.一种二十二碳六烯酸的发酵方法，其特征在于，该方法包括：采用裂殖壶菌(Schizochytrium sp.)依次进行活化培养、传代培养、种子培养和发酵培养，其中，在所述发酵培养阶段中通过检测菌体OD600值和糖耗值来控制所述发酵培养基的溶氧量和葡萄糖的流加速度，所述控制方式包括：依次进行下述步骤，
(1)菌体OD600值为42-55，糖耗为3-3.5g/L/h时，控制溶氧量为60-70％，且不流加葡萄糖；菌体OD600值为50-55，糖耗为4.5-5g/L/h时，控制溶氧量在85-95％以上，并控制葡萄糖的流加速度为3.5-4.5g/L/h；
(2)菌体OD600值在60以上70以下，糖耗为2-2.5g/L/h时，控制溶氧量为65-70％，且不流加葡萄糖；菌体OD600值在60以上70以下，糖耗为4.5-5g/L/h时，控制溶氧量为85-90％，并控制葡萄糖的流加速度为3.5-4.5g/L/h；
(3)菌体OD600值为75-80时，控制溶氧量为35-45％，并控制葡萄糖的流加速度为3.5-4.5g/L/h。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述传代培养的传代次数为3-5代。
3.根据权利要求2所述的方法，其中，控制传代培养每代传代结束时的OD600值为25-35。
4.根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其中，传代培养基含有：葡萄糖10-30g/L，酵母粉1-10g/L，玉米浆1-20g/L，CaCl2·2H2O 1-2g/L，Na2SO48-10g/L，KCl 1-2g/L，KH2PO41-4g/L，MgSO4·7H2O 1-2g/L，VB1 1-2mg/L，VB12 0.1-0.2mg/L，VB6 1-2mg/L，硼酸1-20mg/L。
5.根据权利要求1所述的方法，其中，种子培养基含有：葡萄糖40-50g/L，酵母膏1-5g/L，蛋白胨1-5g/L，乙酸铵1-5g/L，谷氨酸钠1-10g/L，KH2PO41-4g/L，Na2SO4，5-12g/L，MgSO4·7H2O 2-3g/L，KCl 2-3g/L，MgCl2 1-3g/L，CaCl2·2H2O 1-2g/L，FeCl3 0.1-0.15g/L，VB1 5-10mg/L，VB12 0.15-0.3mg/L，VB6 0.3-0.5mg/L。
6.根据权利要求1所述的方法，其中，发酵培养基含有：葡萄糖10-30g/L，酵母粉1-10g/L，玉米浆1-20g/L，Na2SO4 5-12g/L，CaCl2.2H2O 1-2g/L，KCl 1-6g/L，KH2PO4 1-4g/L，MnCl20.5-1g/L，MgSO4·7H2O 2-3g/L，硼酸1-20mg/L，溴化钾1-20mg/L，VB1 5-10mg/L，VB12 0.15-0.3mg/L，VB6 0.3-0.5mg/L。
7.根据权利要求1所述的方法，其中，活化培养基为PDA固体培养基。
8.根据权利要求1所述的方法，其中，所述裂殖壶菌(Schizochytrium sp.)为保藏号为CGMCC No.3535的裂殖壶菌。
9.根据权利要求1所述的方法，其中，通过调节空气流量和/或搅拌转速来控制发酵培养基的溶氧量。
10.根据权利要求1所述的方法，其中，通过调节空气流量和搅拌转速来控制发酵培养基的溶氧量。
11.根据权利要求1所述的方法，其中，采用流加补料设备向发酵培养基中流加葡萄糖，并通过调节该设备中的蠕动泵的转速来控制流加速度。
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