CN106872628A - 一种测定普鲁卡因青霉素g含量的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种测定普鲁卡因青霉素G含量的方法，其特征在于：采用萃取溶剂超声萃取待测物中的普鲁卡因青霉素G,C18粉净化，采用超高压液相色谱‑串联质谱法测定其含量。本发明提供的乙腈超声萃取，经C18粉净化的前处理方法具有快速，回收率高，操作简便，准确度和精确度好，检测限低的特点。本发明可以实现牛奶中普鲁卡因青霉素G残留量的测定。

Description

一种测定普鲁卡因青霉素G含量的方法
技术领域
本发明属于分析化学领域，具体地，涉及一种测定普鲁卡因青霉素G含量的方法，更具体地，涉及牛奶中普鲁卡因青霉素G含量的测定方法。
背景技术
普鲁卡因青霉素G是内酰胺类抗生素，主要用于革兰氏阳性菌感染，亦用于放线菌及钩端螺旋体等感染。为了尽量降低药物在乳品中的残留，杜绝其对人类健康的危害，所以需要检测这类化合物的使用。
目前，检测的方法在一定程度上也存在不足之处。对于传统检测方法来说，其检测方法复杂、检测时间长、灵敏度不高、不易定量、重现性不好，进而导致其应用领域受限。
发明内容
针对上述缺陷，本发明提供的方法解决了测定待测物(牛奶)中普鲁卡因青霉素G的问题。实现了分析待测物(牛奶)中，是否存在有普鲁卡因青霉素G的检测。
本发明提供了一种测定普鲁卡因青霉素G含量的方法，其特征在于：采用萃取溶剂超声萃取待测物中的普鲁卡因青霉素G,经净化基质净化后，采用超高压液相色谱-串联质谱法测定其含量。
进一步地，本发明提供的测定普鲁卡因青霉素G含量的方法，还具有这样的特点：即、具体检测方法如下所示：
步骤一、于待测物中加入萃取溶剂，混匀，超声萃取15-60分钟，离心1-15分钟；
优选超声萃取0.5-1.5分钟，离心3-6分钟。在步骤一中，该混匀、和/或提取、和/或离心的过程可以为一次或多次，优选为2-3次。
步骤二、于步骤一处理后的待测物中，加入净化基质，均质0.5-5分钟后，离心1-15分钟；
在本步骤二中，取处理后的待测物的总量的50-90％进行净化的工序。
优选均质0.5-1.5分钟，离心3-6分钟。
步骤三、取上清液，于20-60℃，用保护气干燥(如：氮气等保护气吹干等方式)；
在本步骤三中，该上清液的取用量为总量的50-90％。
步骤四、用溶剂溶解步骤三获得的干燥产物，过滤后，采用超高压液相色谱-串联质谱法进行化学分析。
溶剂的用量，按检测的需要进行配置，或按浓度比例进行配置。
其中，上述步骤一的过程为至少一次；
上述步骤二的过程为至少一次。
进一步地，本发明提供的测定普鲁卡因青霉素G含量的方法，还具有这样的特点：即、步骤一中，上述萃取溶剂为乙腈；
每5g待测物中加入20-40ml的萃取溶剂；
上述离心的转速>6000r/min。
在本发明中，针对目标物质，乙腈的提取性极佳，远优于其他萃取剂，且提取率高，试验的回收率高。同时，乙腈具有沉淀蛋白的作用，在实验操作中可以除去试验样品中的蛋白，满足目前实验的需要。
进一步地，本发明提供的测定普鲁卡因青霉素G含量的方法，还具有这样的特点：即、步骤二中，上述净化基质选自C18粉、纳米级的净化材料等可实现净化效果的基质；
其中，C18粉具有净化基质作用的同时，还可以吸附脂肪，且效果好。
上述净化基质的添加量为100-300mg/每10ml处理后的待测物；
上述离心的转速>6000r/min。
进一步地，本发明提供的测定普鲁卡因青霉素G含量的方法，还具有这样的特点：即、步骤四中，上述溶剂为酸和乙腈的混合液；
过滤为过有机相滤膜。
进一步地，本发明提供的测定普鲁卡因青霉素G含量的方法，还具有这样的特点：即、步骤四中，步骤四中，上述酸选自质量百分比浓度为0.01-1％的甲酸、乙酸、丙酸的水溶液；
上述酸和乙腈的体积比为1:0.1-1。
进一步地，本发明提供的测定普鲁卡因青霉素G含量的方法，还具有这样的特点：即、上述超高压液相色谱-串联质谱法中，离子源为电喷雾离子源，正离子模式，多反应检测；离子源温度为150℃；毛细管电压为2.0kV；雾化温度为400℃；雾化气流速为800L/h。
进一步地，本发明提供的测定普鲁卡因青霉素G含量的方法，还具有这样的特点：即、上述超高压液相色谱-串联质谱法中，色谱柱选用ACQUITY UPLCBEH C18柱；
流动相为含有0.1％甲酸的水溶液-乙腈；
上述锥孔电压和碰撞能量为52V和36eV。
进一步地，本发明提供的测定普鲁卡因青霉素G含量的方法，还具有这样的特点：即、上述超高压液相色谱-串联质谱法中，定性离子对为237.1/100.2和237.1/119.9；
定量离子对为237.1/119.996。
进一步地，本发明提供的测定普鲁卡因青霉素G含量的方法，还具有这样的特点：即、上述待测物为乳制品；
上述待测物优选为牛奶。
本发明的作用和效果
本发明首次采用了超高效液相色谱—串联质谱法来实现待测物质(牛奶)中的普鲁卡因青霉素G含量的测定。此外，本发明提供的乙腈超声萃取，C18粉净化的方法快速，回收率高，操作简便，准确度和精确度好，对仪器不造成污染，检测限低的特点。
附图说明
附图1、普鲁卡因青霉素G总离子流图。
具体实施方式
实施例一、牛奶中普鲁卡因青霉素G残留量的测定。
1.样品的制备：
称样品(5g±0.05)于50mL离心管中，加30mL乙腈(根据样品溶解程度的不同，乙腈的加入量可以为20ml、25ml、35ml、40ml不等，此外，该步骤还可以为少量多次的萃取方案)，混匀，超声30min(根据样品溶解程度的不同，该超声萃取的时间可以为15min、20min、40min、50min、60min不等)，8000r/min离心5min(根据样品浓度和溶解程度的不同，该高速离心的时间可以为1min、10min、15min不等)。
取10ml于另一试管中，加入200mg C18粉(根据脂肪含量的差异，可加入100mg、300mg不等的基质)，漩涡混匀1min(根据基质净化程度和能力的不同，该均质的时间可以为0.5min、1.5min不等)，后8000r/min离心5min(根据基质加入的量的不同，该高速离心的时间可以为1min、10min、15min不等)。
取6ml上清液于罗马管中，氮气吹干。
加1mL0.1％甲酸水溶液-乙腈(根据溶解度的不同，该酸和乙腈的体积比为10/90、20/80、30/70、40/60、50/50、60/40、70/30、80/20、90/10不等)溶解干物，过0.22μm有机相滤膜后，待测定。
2.设定仪器参数
1)液相色谱仪条件：
色谱柱选用ACQUITY UPLCBEH C18柱；流动相为含有0.1％甲酸的水溶液-乙腈；流速为300μL/min；进样量为5.0μL。
流动相梯度洗脱条件为：
时间/min 0.1％甲酸水溶液/％ 乙腈/％
2.0 90 10
3.5 90 10
4.0 10 90
5.0 10 90
2)质谱条件：
离子源为电喷雾离子源，正离子模式，多反应检测；离子源温度为150℃；
毛细管电压为2.0kV；雾化温度为400℃；雾化气流速为800L/h。
3.定性和定量
定性离子对为237.1/100.2和237.1/119.9，定量离子对为237.1/119.996。
4.精密度试验(如下表一所示)
表一、精密度数据表
5.检出限
根据仪器信噪比，普鲁卡因青霉素G的仪器检出限为2.0μg/kg，在该浓度下仪器信噪比为9.6，定量限为10μg/mL；由图1可知，在仪器检出限条件下，符合定性分析要求。
6.回收率试验
由表二可知，普鲁卡因青霉素G的平均回收率为92.2％,其RSD分别为1.3％。表明该方法回收率符合定量分析要求。
表二、普鲁卡因青霉素G回收率数据表

Claims (10)

1.一种测定普鲁卡因青霉素G含量的方法，其特征在于：采用萃取溶剂超声萃取待测物中的普鲁卡因青霉素G,经净化基质净化后，采用超高压液相色谱-串联质谱法测定其含量。
2.如权利要求1所述的一种测定普鲁卡因青霉素G含量的方法，其特征在于，具体检测方法如下所示：
步骤一、于待测物中加入萃取溶剂，混匀，超声萃取15-60分钟，离心1-15分钟；
步骤二、于步骤一处理后的待测物中，加入净化基质，均质0.5-5分钟后，离心1-15分钟；
步骤三、取上清液，于20-60℃，用保护气干燥；
步骤四、用溶剂溶解步骤三获得的干燥产物，过滤后，采用超高压液相色谱-串联质谱法进行化学分析。
其中，所述步骤一的过程为至少一次；
所述步骤二的过程为至少一次。
3.如权利要求2所述的一种测定普鲁卡因青霉素G含量的方法，其特征在于：步骤一中，所述萃取溶剂为乙腈；
每5g待测物中加入20-40ml的萃取溶剂；
所述离心的转速>6000r/min。
4.如权利要求2所述的一种测普鲁卡因青霉素G含量的方法，其特征在于：步骤二中，所述净化基质选自C18粉、纳米净化材料；
所述净化基质的添加量为100-300mg/每10ml处理后的待测物；
所述离心的转速>6000r/min。
5.如权利要求2所述的一种测普鲁卡因青霉素G含量的方法，其特征在于：步骤四中，所述溶剂为酸和乙腈的混合液；
过滤为过有机相滤膜。
6.如权利要求5所述的一种测普鲁卡因青霉素G含量的方法，其特征在于：步骤四中，所述酸选自质量百分比浓度为0.01-1％的甲酸、乙酸、丙酸的水溶液；所述酸和乙腈的体积比为1:0.1-1。
7.如权利要求2所述的一种测普鲁卡因青霉素G含量的方法，其特征在于：所述超高压液相色谱-串联质谱法中，离子源为电喷雾离子源，正离子模式，多反应检测；离子源温度为150℃；毛细管电压为2.0kV；雾化温度为400℃；雾化气流速为800L/h。
8.如权利要求2所述的一种测普鲁卡因青霉素G含量的方法，其特征在于：所述超高压液相色谱-串联质谱法中，色谱柱选用ACQUITY UPLCBEH C18柱；流动相为含有0.1％甲酸的水溶液-乙腈；
所述锥孔电压和碰撞能量为52V和36eV。
9.如权利要求2所述的一种测定普鲁卡因青霉素G含量的方法，其特征在于：所述超高压液相色谱-串联质谱法中，定性离子对为237.1/100.2和237.1/119.9；
定量离子对为237.1/119.996。
10.如权利要求1-9任一所述的一种测定普鲁卡因青霉素G含量的方法，其特征在于：
所述待测物为乳制品；
所述待测物优选为牛奶。
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陈雪等: "UPLC-MS/MS法测定牛奶中普鲁卡因青霉素G残留量", 《广州化工》 *

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