CN106866737A - 膦酸衍生物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于医药化学领域，涉及一类治疗病毒感染性疾病的膦酸衍生物及其应用，具体涉及一类式(I)所示的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，它们的制备方法以及含有这些化合物的药物组合物和这些化合物或组合物在制备治疗病毒感染性疾病的药物中的用途。

Description

膦酸衍生物及其应用
技术领域
本发明属于医药化学领域，具体涉及膦酸衍生物类化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，它们的制备方法以及含有这些化合物的药物组合物和这些化合物或组合物在制备治疗病毒感染性疾病的药物中的用途。
背景技术
乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)是一种DNA病毒，属于嗜肝DNA病毒科(hepadnavividae)，其引起人类急性或慢性乙型病毒性肝炎。HBV感染是世界范围内的主要的公众健康问题，有4亿的慢性携带者。估计这些被感染的患者中的25-40％发展为肝硬化和肝癌。
人类免疫缺陷病毒(HIV)是一种感染人类免疫系统细胞的慢病毒(Lentivirus)，属逆转录病毒，其引起获得性免疫缺陷综合征(AIDS)。AIDS是严重损害人免疫系统的疾病且导致死亡。
HBV的目前治疗主要是用干扰素或直接作用剂例如合成的核苷。乙型肝炎病毒DNA(脱氧核糖核酸)是乙肝病毒的核心物质和病毒复制的基础，核苷类化合物可通过直接竞争性地与天然脱氧核糖底物相结合而抑制病毒聚合酶，及通过插入DNA中终止DNA链，因此核苷类化合物是治疗乙型肝炎的主要药物，其中包括西多福韦、阿德福韦、拉米夫定以及替诺福韦等。
HIV的目前治疗主要是使用核苷类逆转录酶抑制剂、非核苷类逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂，其中核苷类逆转录酶抑制剂例如有恩曲他滨、齐多夫定、拉米夫定、司他夫定、替诺福韦，非核苷类逆转录酶抑制剂例如有利匹韦林、依曲韦林、地拉韦定、依非韦伦、奈韦拉平，蛋白酶抑制剂例如有替拉那韦、奈非那韦、利托那韦等。
不过，现有的治疗方法仍存在对核苷的抗性、中止治疗后病毒复制的回升、生物利用度低以及毒副作用等限制。因此，亟需具有更好疗效的新的抗病毒化合物和方法。
发明内容
本发明的一个目的是提供一类具有通式I结构的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，
其中：
R1选自H和烷基，所述烷基任选被一个或多个烷基、环烷基、杂环烷基、烷氧基、烷基氨基、卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、烷基酰基、氨基酰基、烷氨基酰基、磺酰基、亚磺酰基、巯基、芳基或杂芳基取代；
R2选自H、烷基、环烷基、芳基和杂芳基，所述烷基、环烷基、芳基和杂芳基任选被一个或多个烷基、环烷基、杂环烷基、烷氧基、烷基氨基、卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、烷基酰基、氨基酰基、烷氨基酰基、磺酰基、亚磺酰基、巯基、芳基或杂芳基取代；
Cy1选自芳基和杂芳基，所述的芳基和杂芳基任选被一个或多个卤素、羟基、烷基、环烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、氨基、烷基氨基、烷基酰基氨基、烷基酰基、氨基酰基、烷基氨基酰基、硝基、氰基取代；和
Cy2选自芳基、杂芳基、杂环烷基和杂环烯基，所述的芳基、杂芳基、杂环烷基和杂环烯基任选被一个或多个卤素、羟基、烷基、环烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、氨基、烷基氨基、烷基酰基氨基、烷基酰基、氨基酰基、烷基氨基酰基、氧代、硝基、氰基取代。
本发明的另一个目的是提供制备本发明的通式I的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药的方法。
本发明的再一个目的是提供包含本发明的通式I的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药和药学可接受的载体的组合物，以及包含本发明的通式I的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药和另一种或多种抗病毒感染性疾病的药物的组合物。
本发明的还一个目的是提供本发明的通式I的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药治疗病毒感染性疾病，尤其是治疗人类免疫缺陷病毒或乙型肝炎病毒感染性疾病的方法，以及本发明的通式I的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药在制备用于治疗病毒感染性疾病，尤其是治疗人类免疫缺陷病毒或乙型肝炎病毒感染性疾病的药物中的应用。
针对上述目的，本发明提供以下技术方案：
第一方面，本发明提供通式I的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，
其中：
R1选自H和烷基，所述烷基任选被一个或多个烷基、环烷基、杂环烷基、烷氧基、烷基氨基、卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、烷基酰基、氨基酰基、烷氨基酰基、磺酰基、亚磺酰基、巯基、芳基或杂芳基取代；
R2选自H、烷基、环烷基、芳基和杂芳基，所述烷基、环烷基、芳基和杂芳基任选被一个或多个烷基、环烷基、杂环烷基、烷氧基、烷基氨基、卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、烷基酰基、氨基酰基、烷氨基酰基、磺酰基、亚磺酰基、巯基、芳基或杂芳基取代；
Cy1选自芳基和杂芳基，所述的芳基和杂芳基任选被一个或多个卤素、羟基、烷基、环烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、氨基、烷基氨基、烷基酰基氨基、烷基酰基、氨基酰基、烷基氨基酰基、硝基、氰基取代；和
Cy2选自芳基、杂芳基、杂环烷基和杂环烯基，所述的芳基、杂芳基、杂环烷基和杂环烯基任选被一个或多个卤素、羟基、烷基、环烷基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基、卤代烷氧基、氨基、烷基氨基、烷基酰基氨基、烷基酰基、氨基酰基、烷基氨基酰基、氧代、硝基、氰基取代。
在一些优选的实施方案中，本发明的化合物为通式I的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，其中：
R1选自H和C1-6烷基，所述烷基任选被一个或多个烷基、环烷基、杂环烷基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基、烷基氨基、卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、烷基酰基、氨基酰基、烷氨基酰基、磺酰基、亚磺酰基、巯基、芳基或杂芳基取代。
进一步优选地，R1选自H和C1-3烷基，所述的烷基可以被一个或多个C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8杂环烷基、卤代C1-6烷基、羟基C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基、卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、C1-6烷基酰基、氨基酰基、C1-6烷氨基酰基、磺酰基、亚磺酰基、巯基、芳基或杂芳基取代。
更进一步优选地，R1选自H和C1-3烷基，所述的烷基可以被一个或多个C1-3烷基、C3-6环烷基、C3-6杂环烷基、卤代C1-3烷基、羟基C1-3烷基、C1-3烷氧基、C1-3烷基氨基、卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、C1-3烷基酰基、氨基酰基、C1-3烷氨基酰基、磺酰基、亚磺酰基、巯基、苯基或杂芳基取代。
在一些优选的实施方案中，本发明的化合物为通式I的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，其中：
R2选自H、C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-12芳基和C6-12杂芳基，所述烷基、环烷基、芳基和杂芳基任选被一个或多个烷基、环烷基、杂环烷基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基、烷基氨基、卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、烷基酰基、氨基酰基、烷氨基酰基、磺酰基、亚磺酰基、巯基、芳基或杂芳基取代。
进一步优选地，R2选自H、C1-6烷基、C3-6环烷基、C6-10芳基和C6-10杂芳基，所述的烷基、环烷基、芳基和杂芳基可以被一个或多个C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8杂环烷基、卤代C1-6烷基、羟基C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基、卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、C1-6烷基酰基、氨基酰基、C1-6烷氨基酰基、磺酰基、亚磺酰基、巯基、芳基或杂芳基取代。
更进一步优选地，R2选自H、C1-3烷基、C3-6环烷基、C6-8芳基和C6-8杂芳基，所述的烷基、环烷基、芳基和杂芳基可以被一个或多个C1-3烷基、C3-6环烷基、C3-6杂环烷基、卤代C1-3烷基、羟基C1-3烷基、C1-3烷氧基、C1-3烷基氨基、卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、C1-3烷基酰基、氨基酰基、C1-3烷氨基酰基、磺酰基、亚磺酰基、巯基、苯基或杂芳基取代。
在一些具体的实施方案中，本发明的化合物为通式I的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，其中：
R1选自H、甲基、乙基和丙基。
在一些优选的实施方案中，本发明的化合物为通式I的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，其中：
Cy1为苯基，Cy2选自苯基、杂芳基、杂环烷基和杂环烯基，所述的苯基、杂芳基、杂环烷基和杂环烯基任选被一个或多个卤素、羟基、C1-6烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-6环烷基、卤代C1-6烷基、羟基C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷氧基、氨基、C1-6烷基氨基、C1-6烷基酰基氨基、C1-6烷基酰基、氨基酰基、C1-6烷基氨基酰基、氧代、硝基、氰基取代。
进一步优选地，Cy1为苯基，Cy2选自苯基、杂芳基、C3-8杂环烷基和C3-8杂环烯基，所述的苯基、杂芳基、杂环烷基和杂环烯基任选被一个或多个卤素、羟基、C1-3烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-6环烷基、卤代C1-3烷基、羟基C1-3烷基、C1-3烷氧基、卤代C1-3烷氧基、氨基、C1-3烷基氨基、C1-3烷基酰基氨基、C1-3烷基酰基、氨基酰基、C1-3烷基氨基酰基、氧代、硝基、氰基取代。
更进一步优选地，Cy1为苯基，Cy2选自苯基、杂芳基、C3-6杂环烷基和C3-6杂环烯基，所述的苯基、杂芳基、杂环烷基和杂环烯基任选被一个或多个卤素、羟基、C1-3烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-6环烷基、卤代C1-3烷基、羟基C1-3烷基、C1-3烷氧基、卤代C1-3烷氧基、氨基、C1-3烷基氨基、C1-3烷基酰基氨基、C1-3烷基酰基、氨基酰基、C1-3烷基氨基酰基、氧代、硝基、氰基取代。
在另一些优选的实施方案中，Cy1为苯基，Cy2选自至少含有一个N原子的五元或六元杂芳基、杂环烷基和杂环烯基，所述的苯基、五元或六元杂芳基、杂环烷基或杂环烯基任选被一个或多个卤素、羟基、C1-6烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-6环烷基、卤代C1-6烷基、羟基C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷氧基、氨基、C1-6烷基氨基、C1-6烷基酰基氨基、C1-6烷基酰基、氨基酰基、C1-6烷基氨基酰基、氧代、硝基、氰基取代。
在另一些优选的实施方案中，Cy1为苯基，Cy2选自含有1-3个N原子的五元或六元杂芳基、杂环烷基和杂环烯基，所述的苯基、五元或六元杂芳基、杂环烷基或杂环烯基任选被一个或多个卤素、羟基、C1-6烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-6环烷基、卤代C1-6烷基、羟基C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷氧基、氨基、C1-6烷基氨基、C1-6烷基酰基氨基、C1-6烷基酰基、氨基酰基、C1-6烷基氨基酰基、氧代、硝基、氰基取代。
在另一些优选的实施方案中，Cy1为苯基，Cy2选自苯基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、三氮唑基、噻二唑基、噁二唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、苯并氮杂环基、苯并氧杂环基、苯并硫杂环基、苯并二氮杂环基、苯并二氧杂环基、苯并二硫杂环基、苯并氧氮杂环基、苯并硫氮杂环基，所述的呋喃基、吡咯基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、三氮唑基、噻二唑基、噁二唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、苯并氮杂环基、苯并氧杂环基、苯并硫杂环基、苯并二氮杂环基、苯并二氧杂环基、苯并二硫杂环基、苯并氧氮杂环基、苯并硫氮杂环基任选被一个或多个卤素、羟基、C1-6烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-6环烷基、卤代C1-6烷基、羟基C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷氧基、氨基、C1-6烷基氨基、C1-6烷基酰基氨基、C1-6烷基酰基、氨基酰基、C1-6烷基氨基酰基、氧代、硝基、氰基取代。
在另一些优选的实施方案中，Cy1选自呋喃基、吡咯基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、三氮唑基、噻二唑基、噁二唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、苯并氮杂环基、苯并氧杂环基、苯并硫杂环基、苯并二氮杂环基、苯并二氧杂环基、苯并二硫杂环基、苯并氧氮杂环基、苯并硫氮杂环基，Cy2选自苯基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、三氮唑基、噻二唑基、噁二唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、苯并氮杂环基、苯并氧杂环基、苯并硫杂环基、苯并二氮杂环基、苯并二氧杂环基、苯并二硫杂环基、苯并氧氮杂环基、苯并硫氮杂环基，所述的苯基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、三氮唑基、噻二唑基、噁二唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、苯并氮杂环基、苯并氧杂环基、苯并硫杂环基、苯并二氮杂环基、苯并二氧杂环基、苯并二硫杂环基、苯并氧氮杂环基、苯并硫氮杂环基任选被一个或多个卤素、羟基、C1-6烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、卤代C1-6烷基、羟基C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷氧基、氨基、C1-6烷基氨基、C1-6烷基酰基氨基、C1-6烷基酰基、氨基酰基、C1-6烷基氨基酰基、氧代、硝基、氰基取代。
在一些具体的实施方案中，本发明的化合物为通式I的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，其中Cy1为苯基，Cy2选自苯基、吡啶基、嘧啶基、噻唑基、噻吩基、噁唑基、吡唑基和哒嗪基，所述苯基、吡啶基、嘧啶基、噻唑基、噻吩基、噁唑基、吡唑基或哒嗪基任选被甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、氟、氯、溴、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、羟基丙基、羟基异丙基、氨基、甲基氨基、乙基氨基、丙基氨基、异丙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、二丙基氨基、三氟甲基、三氟乙基、三氟丙基、三氟甲氧基、三氟乙氧基、三氟丙氧基、氧代、硝基和氰基中的一个或多个基团取代。
本发明提供了以下具体化合物：
另一方面，本发明提供本发明的通式I化合物的制备方法，该方法包括以下步骤：
a)式(1)的化合物在碱性条件下与式(2)的化合物缩合，制得式(3)的化合物：
b)式(3)的化合物与二氯亚砜反应，制得式(4)的化合物；
c)式(4)的化合物与式(5)的化合物反应制得通式(I)的化合物。
手性异构体(I_1)、(I_2)可以通过对异构体混合物(I)的手性柱分离得到：
其中，R1、R2、Cy1、Cy2如以上通式I中所定义。
第三方面，本发明提供药物组合物，其包含本发明的通式I所示化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药与药学上可接受载体。
可以将本发明的通式I所示化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药与药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合制备成药物制剂，以适合于经口或胃肠外给药。给药方法包括，但不限于皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内和经口途径。所述制剂可以通过任何途径施用，例如通过输注或推注，通过经上皮或皮肤粘膜(例如口腔粘膜或直肠等)吸收的途径施用。给药可以是全身的或局部的。经口施用制剂的实例包括固体或液体剂型，具体而言，包括片剂、丸剂、粒剂、粉剂、胶囊剂、糖浆、乳剂、混悬剂等。所述制剂可通过本领域已知的方法制备，且包含药物制剂领域常规使用的载体、稀释剂或赋形剂。
第四方面，本发明提供本发明的通式I所示化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药或本发明的药物组合物治疗病毒性感染疾病的受治疗者的方法，包括向所述受治疗者施用通式I的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药或者包含通式I的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药的药物组合物，以有效减少所述受治疗者中所述病毒的病毒载量的量施用。在一个实施方案中，本发明提供用于治疗和/或预防病毒感染例如HBV和/或HIV病毒感染的方法，包括向需要此治疗的个体给予本发明的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药或其药物组合物。在另一个实施方案中，本发明提供抑制病毒感染例如HBV和/或HIV病毒感染的方法，包括使所述病毒与治疗有效量的本发明的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药或其药物组合物接触。
另一方面，本发明提供本发明的通式I所示化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药用于预防或治疗病毒性感染，尤其是HBV和/或HIV病毒感染疾病的应用，以及在制备预防和/或治疗病毒性感染疾病的药物中的应用，特别是在制备预防和/或治疗HBV和/或HIV病毒感染性疾病的药物中的应用。该类疾病的实例有急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、HIV感染以及乙型肝炎和丙型肝炎或丁型肝炎的混合感染。
术语定义
除非另外定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。
本发明的化合物含有多个不对称中心，因此，可以以单一对映异构体、对映异构体、单一对映异构体混合物、非对映异构体、非对映异构体混合物和单一非对映异构体的形式存在。本发明的“异构体”包括例如互变异构体、顺反异构体、对映异构体、构象异构体形式。因此，本发明的化合物的单个立体异构体以及对映异构体、非对映异构体混合物均在本发明的范围内。除非另外指明，本发明化合物的全部互变异构体形式在本发明的范围内。
本发明的“药学上可接受的盐”是指本发明所述的化合物与酸形成的药学上可接受的盐，所述的酸例如可选自，但不限于：磷酸、硫酸、盐酸、氢溴酸、柠檬酸、马来酸、丙二酸、扁桃酸、琥珀酸、富马酸、半富马酸、醋酸、乳酸、硝酸、磺酸、对甲苯磺酸、苹果酸、甲磺酸或其类似物。
本发明“溶剂化物”在常规意义上是指溶质(如活性化合物、活性化合物的盐)和溶剂(如水)组合形成的复合物。溶剂是指本领域的技术人员所知的或容易确定的溶剂。如果是水，则溶剂化物通常被称作水合物，例如一水合物、二水合物、三水合物等。
本发明的“前药”是指在生物体中的生理条件下，由于与酶、胃酸等反应而转化成式(I)的化合物的化合物，即通过酶的氧化、还原、水解等转化成式(I)的化合物的化合物和/或通过胃酸等的水解反应等转化成式(I)的化合物的化合物等。
本发明“药物组合物”是指包含任何一种本文所述的化合物，包括对应的异构体、前药、溶剂化物、药学上可接受的盐或其化学的保护形式，和一种或多种药学上可接受载体的混合物。药用组合物的目的是促进化合物对生物体的给药。所述组合物通常用于制备治疗和/或预防由一种或多种激酶介导的疾病的药物。
本发明“药学上可接受的载体”是指对有机体不引起明显刺激性和不干扰所给予化合物的生物活性和性质的载体，包含所有的溶剂、稀释剂或其它赋形剂、分散剂、表面活性剂等渗剂、增稠剂或乳化剂、防腐剂、固体粘合剂、润滑剂等。除非任何常规载体介质与本发明化合物不相容。可以作为药学上可接受的载体的一些实例包括，但不限于糖类，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、以及纤维素和乙酸纤维素；麦芽、明胶等。
本发明“烷基”指直链或支链的饱和脂肪烃基团，优选含1至6个碳原子的直链或支链基团，进一步优选含有1至3个碳原子的直链或支链基团，非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基等。烷基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上。本发明的“卤代烷基”是指至少被一个卤素原子取代的烷基。
本发明的“环烷基”是指环状的饱和烃基，优选8个碳原子以下的烃基。本发明的“C3-8环烷基”是指含有3-8个碳原子的环状饱和烃基。本发明的“C3-6环烷基”是指含有3-6个碳原子的直链或支链的饱和烃基。
本发明的“烷氧基”是指-O-烷基。
本发明的“卤素”是指氟、氯、溴、碘。
本发明的“烷基氨基”是指-NH-烷基或-N-(烷基)(烷基)。
本发明的“烷基酰基”是指-C(O)-烷基。
本发明的“氨基酰基”是指-C(O)-NH2，术语“烷氨基酰基”是指-C(O)-NH-烷基或-C(O)-N-(烷基)(烷基)。
本发明的“磺酰基”是指-S(O)2-烷基，术语“亚磺酰基”是指-S(O)-烷基。
本发明的“芳基”是指含有一个或多个苯环的芳烃基团。合适的芳基包括苯基、萘基。
本发明的“杂芳基”是指芳基中至少有一个碳原子被杂原子替代的芳香性基团。所述的杂原子为O、S、N。例如，本文所述杂芳基包括但不限于吡啶基、吡唑基、噁唑基、噻唑基、噻吩基、呋喃基、吡咯基、异噁唑基、异噻唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、噁二唑基、噻二唑基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基和三嗪基。
本发明的“杂环烷基”是指至少含有一个杂原子的饱和环状基团，其中杂原子为N、O或S。
本发明的“杂环烯基”是指至少含有一个杂原子的不饱和环状基团，其中杂原子为N、O或S。
具体实施方式
下面代表性的实施例及实验例是为了更好地说明本发明，而非用于限制本发明的保护范围。
实施例1 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(联苯-4-基)氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 9-[(R)-2-[[羟基[(联苯-4-基)氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
在2L的三颈瓶中，依次加入对羟基联苯(19.0g,115.0mmol)，替诺福韦(30.0g,104.5mmol)，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(50g,263mmol)，1,4-二氧六烷(1300mL)和吡啶(100mL)。上述反应体系加热到100℃，反应12h。反应液减压蒸馏除去溶剂得到油状物，加水(200mL)，用饱和的氢氧化钠溶液调节pH值到12，得到澄清的溶液，用乙酸乙酯(3×100mL)萃取，水相在搅拌条件下，用浓盐酸调节pH到3，析出灰白色固态标题化合物。ESI-MS m/z:440.1[M+H]+.
步骤2 9-[(R)-2-[[氯代[(联苯-4-基)氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
在250mL的单口瓶中，加入实施例1步骤1得到的9-[(R)-2-[[羟基[(联苯-4-基)氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤(10g，22.8mmol)，乙腈(100mL)和二氯亚砜(19.44g,163mmol)。反应体系在80℃搅拌3h。反应液减压蒸馏得到标题化合物，不需要进一步纯化直接用于下一步。
步骤3 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(联苯-4-基)氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
在250mL的单口瓶中，加入实施例1步骤2得到的9-[(R)-2-[[氯代[(联苯-4-基)氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤和二氯甲烷(100mL)。反应体系冷却到-20℃,缓慢滴加L-丙氨酸异丙酯盐酸盐(7.67g,45.66mmol)溶在二氯甲烷(50mL)中的溶液，接着滴加三乙胺(9.2g,91.84mmol)。反应体系在-20℃搅拌1h。反应体系用水(50mL)淬灭，二氯甲烷(3×100mL)萃取。合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析纯化得到白色固态标题化合物。1HNMR(300MHz,DMSO-d6):δ8.12-8.14(m,2H),7.55-7.68(m,4H),7.41-7.48(m,2H),7.32-7.38(m,1H),7.09-7.23(m,4H),5.49-5.67(m,1H),4.76-4.92(m,1H),4.12-4.36(m,2H)，3.75-3.95(m,4H),1.02-1.23(m,12H).ESI-MS m/z:553.2[M+H]+.
实施例2 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4'-甲基联苯-4-基)氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4'-甲基联苯-4-基)氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例1步骤1-3制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(联苯-4-基)氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料对羟基联苯替换为4-(4-甲基苯基)苯酚，制得标题化合物。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ8.13(s,2H),7.53-7.63(m,4H),7.10-7.58(m,6H),5.52-5.68(m,1H),4.83-4.87(m,1H),4.30-4.13(m,2H)，3.82-4.10(m,4H),2.32(s,3H),1.02-1.23(m,12H).ESI-MS m/z:567.3[M+H]+.
实施例3 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(噻唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 4-(噻唑-4-基)苯酚的制备
在100mL的三颈瓶中，依次加入4-羟基苯硼酸(10.0g,61.4mmol)，4-溴噻唑(10.2g,73.7mmol)，碳酸钾(25.4g,184.2mmol)，1,4-二氧六烷(30mmol)，水(10mL)和双三苯基磷二氯化钯(2.15g,3.07mmol)。在氮气保护下，反应体系加热到90℃，搅拌3h。减压浓缩蒸馏除去溶剂，残留物溶于乙酸乙酯(100mL)，加入饱和食盐水，萃取分液。合并有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得淡黄色油状粗品，经柱层析纯化得到米黄色固态标题产物。ESI-MS m/z:178.0[M+H]+.
步骤2 9-[(R)-2-[[羟基[(4-(噻唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
以实施例3步骤1制备得到的化合物4-(噻唑-4-基)苯酚和替诺福韦为原料，按照实施例1步骤1的方法制备得到标题化合物。ESI-MS m/z:447.0[M+H]+.
步骤3 9-[(R)-2-[[氯代[(4-(噻唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
以实施例3步骤2制备得到的9-[(R)-2-[[羟基[(4-(噻唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤为原料，按照实施例1步骤2的方法制备得到标题化合物。
步骤4 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(噻唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
以实施例3步骤3制备得到的9-[(R)-2-[[氯代[(4-(噻唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤为原料，按照实施例1步骤3的方法制备得到标题化合物。1HNMR(500MHz,CD3OD):δ9.18(s,1H),8.10-8.14(m,2H),7.90-7.97(m,2H),7.12-7.20(m,3H),5.42-5.67(m,1H),4.71-4.91(m,1H),4.12-4.41(m,2H),3.72-4.02(m,3H),1.02-1.23(m,12H).ESI-MS m/z:560.2[M+H]+ .
实施例4 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(5-氯噻唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 4-(5-氯噻唑-4-基)苯酚的制备
在250mL三颈瓶中，加入实施例3步骤1得到的4-(噻唑-4-基)苯酚(5g,28.21mmol)，N-氯代丁二酰亚胺(4.50g,33.85mmol)和乙腈(50mL)。反应体系在50℃，加热反应2h。原料消失，加入水(50mL)淬灭上述反应体系，用乙酸乙酯(3×60mL)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析纯化得到标题化合物。ESI-MS m/z:211.9[M+H]+.
步骤2 9-[(R)-2-[[羟基[(4-(5-氯噻唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
以实施例4步骤1制备得到的化合物4-(5-氯噻唑-4-基)苯酚和替诺福韦为原料，按照实施例1步骤1的方法制备得到标题化合物。ESI-MS m/z:481.0[M+H]+.
步骤3 9-[(R)-2-[[氯代[(4-(5-氯噻唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
在以实施例4步骤2制备得到的9-[(R)-2-[[羟基[(4-(5-氯噻唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤为原料，按照实施例1步骤2的方法制备得到标题化合物。
步骤4 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(5-氯噻唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
以实施例4步骤3制备得到的9-[(R)-2-[[氯代[(4-(5-氯噻唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤为原料，按照实施例1步骤3的方法制备得到标题化合物。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ9.13(s,1H),8.32-8.41(m,2H),7.82-8.13(m,3H),7.12-7.30(m,3H),5.55-5.67(m,1H),4.71-4.91(m,1H),4.12-4.41(m,2H),3.72-4.02(m,4H),1.02-1.23(m,12H).ESI-MS m/z:594.1[M+H]+.
实施例5 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(5-甲基噁唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 2-溴-1-(4-甲氧基苯基)丙烷-1-酮的制备
在1000mL的单口瓶中，先加入1-(4-甲氧苯基)丙酮(30g,0.2mol)和乙腈(500mL)，接着在室温下加入4-甲基苯磺酸(38.0g,0.2mol)。反应体系搅拌5分钟后，分批加N-溴代丁二酰亚胺(35.6g,0.2mol)，加毕，升温回流3h，补加N-溴代丁二酰亚胺(5.0g,0.028mol)，继续回流2h，反应结束。减压除去乙腈，残留物溶于乙酸乙酯(400mL)，用饱和碳酸氢钠溶液调pH到10，萃取分液，有机相用水洗，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得淡黄色油状粗品。粗品冰浴下重结晶(乙酸乙酯：石油醚＝3:1，80mL)，得白色固态标题化合物。
步骤2 4-(4-甲氧基苯基)-5-甲基噁唑的制备
在250mL的单口瓶中，加入实施例5步骤1得到的2-溴-1-(4-甲氧基苯基)丙烷-1-酮(35.0g,0.153mol)和甲酰胺(150mL)，加热至130℃反应2h，原料反应完全。冷却至室温，缓慢倒入冰水中，乙酸乙酯(5×200mL)萃取，有机相干燥后浓缩，得到褐色固态标题化合物。不需要进一步纯化，直接用于下步反应。ESI-MS m/z:190[M+H]+.
步骤3 4-(5-甲基噁唑-4-基)苯酚的制备
在50mL的单口瓶中，加入实施例5步骤2制备得到的4-(4-甲氧基苯基)-5-甲基噁唑(1.3g，6.22mmol)和甲磺酸(15mL)，加入DL-蛋氨酸(3.71g,24.8mmol)，加毕，60℃搅拌24h，原料基本反应完全。冷却，倒入冰水，乙酸乙酯(3×50mL)萃取，合并的有机相干燥浓缩，柱层析纯化得到白色固态标题化合物。ESI-MS m/z:176.0[M+H]+.
步骤4 9-[(R)-2-[[羟基[(4-(5-甲基噁唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
以实施例5步骤3制备得到的4-(5-甲基噁唑-4-基)苯酚和替诺福韦为原料，按照实施例1步骤1的方法制备得到标题化合物。ESI-MS m/z:445.0[M+H]+.
步骤5 9-[(R)-2-[[氯代[(4-(5-甲基噁唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
在以实施例5步骤4制备得到的9-[(R)-2-[[羟基[(4-(5-甲基噁唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤为原料，按照实施例1步骤2的方法制备得到标题化合物。
步骤6 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(5-甲基噁唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
以实施例5步骤5制备得到的9-[(R)-2-[[氯代[(4-(5-甲基噁唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤为原料，按照实施例1步骤3的方法制备得到标题化合物。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ8.27(s,1H),8.13(d,2H),7.53-7.65(m,2H),7.08-7.22(m,4H),5.45-5.70(m,1H),4.73-4.89(m,1H),4.10-4.32(m,2H),3.75-4.02(m,4H),2.42-2.58(m,3H),1.02-1.18(m,12H).ESI-MS m/z:558.2[M+H]+.
实施例6 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(3-氯吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(3-氯吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例3步骤1-4制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(噻唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料4-溴噻唑替换为2-溴-3-氯吡啶，制得标题化合物。1HNMR(300MHz,DMSO-d6):δ8.62(d,1H),8.13(d,2H),8.04(d,1H),7.67(d,2H),7.64(d,1H),7.41-7.45(m,2H),7.17-7.24(m,2H),5.57-5.76(m,1H),4.80-5.76(m,1H),4.14-4.32(m,2H),3.78-4.02(m,4H),1.06-1.17(m,12H).ESI-MS m/z:588.0[M+H]+.
实施例7 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(2-氟代联苯-4-基)氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(2-氟代联苯-4-基)氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例3步骤1-4制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(噻唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料4-溴噻唑替换为4-溴-3-氟苯酚，将4-羟基苯硼酸替换为苯硼酸，制得标题化合物。1HNMR(300MHz,DMSO-d6):δ8.12(d,2H),7.38-7.53(m,6H),7.17(s,2H),6.98-7.13(m,2H),5.65-5.80(m,1H),4.78-4.86(m,1H),4.13-4.32(m,2H),3.85-4.00(m,4H),1.08-1.18(m,12H).ESI-MS m/z:571.2[M+H]+.
实施例8 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(吡啶-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(吡啶-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例3步骤1-4制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(噻唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料4-溴噻唑替换为对溴吡啶，制得标题化合物。1HNMR(300MHz,DMSO-d6):δ8.62(d,2H),8.13(d,2H),7.68-7.81(m,4H),7.16-7.25(m,4H),5.60-5.69(m,1H),4.80-4.89(m,1H),4.12-4.32(m,2H),3.81-4.04(m,4H),1.02-1.15(m,12H).ESI-MS m/z:554.2[M+H]+.
实施例9 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(3-氟吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(3-氟吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例3步骤1-4制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(噻唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料4-溴噻唑替换为2-溴-3-氟吡啶，制得标题化合物。1HNMR(300MHz,DMSO-d6):δ8.54(s,1H),8.12-8.14(m,2H),7.79-7.92(m,3H),7.44-7.49(m,1H),7.16-7.28(m,4H),5.55-5.73(m,1H),4.79-4.89(m,1H),4.13-4.32(m,2H),3.79-3.01(m,4H),1.07-1.17(m,12H).ESI-MS m/z:572.2[M+H]+.
实施例10 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4'-氟代联苯-4-基)氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4'-氟代联苯-4-基)氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例3步骤1-4制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(噻唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料4-溴噻唑替换为4-氟溴苯，制得标题化合物。1HNMR(300MHz,DMSO-d6):δ8.11-8.14(m,2H),7.54-7.69(m,4H),7.09-7.30(m,6H),5.50-5.68(m,1H),4.81-4.87(m,1H),4.17-4.32(m,2H),3.77-4.01(m,4H),1.06-1.18(m,12H).ESI-MSm/z:571.2[M+H]+.
实施例11 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(噻吩-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(噻吩-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例3步骤1-4制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(噻唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料4-溴噻唑替换为2-溴噻吩，制得标题化合物。1HNMR(300MHz,CDCl3):δ8.22-8.28(m,2H),7.49-7.56(m,2H),7.04-7.25(m,5H),4.87-4.99(m,1H),4.38-4.50(m,1H),4.21-4.26(m,1H),4.16-4.18(m,2H),3.64-3.88(m,2H),1.18-1.30(m,12H).ESI-MS m/z:559.1[M+H]+.
实施例12 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4'-氯代联苯-4-基)氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4'-氯代联苯-4-基)氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例3步骤1-4制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(噻唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料4-溴噻唑替换为4-氯溴苯，制得标题化合物。1HNMR(300MHz,DMSO-d6):δ8.11-8.14(m,2H),7.49-7.68(m,6H),7.10-7.20(m,4H),5.53-5.70(m,1H),4.78-4.88(m,1H),4.12-4.31(m,2H),3.74-4.03(m,4H),1.09-1.23(m,12H).ESI-MSm/z:587.1[M+H]+.
实施例13 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(3-甲基-4-(3-氟吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(3-甲基-4-(3-氟吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例1步骤1-3制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(联苯-4-基)氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料对羟基联苯替换为4-(3-氟吡啶-2-基)-3-甲基苯酚，制得标题化合物。1HNMR(300MHz,DMSO-d6):δ8.52(d,1H),8.13(d,2H),7.82(t,1H),7.42-7.56(m,1H),6.95-7.30(m,5H),5.48-5.73(m,1H),4.77-4.88(m,1H),4.10-4.32(m,2H),3.75-4.02(m,4H),2.02-2.17(m,3H),1.00-1.20(m,12H).ESI-MS m/z:586.2[M+H]+.
实施例14 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(5-甲基噻吩-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(5-甲基噻吩-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例1步骤1-3制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(联苯-4-基)氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料对羟基联苯替换为4-(5-甲基噻吩-2-基)苯酚，制得标题化合物。1HNMR(300MHz,DMSO-d6):δ8.05-8.19(m,2H),7.50(dd,2H),7.00-7.38(m,5H),6.80(s,1H),5.42-5.68(m,1H),4.72-4.89(m,1H),4.06-4.31(m,2H),3.71-4.05(m,4H),2.46(s,3H),1.00-1.22(m,12H).ESI-MS m/z:573.1[M+H]+.
实施例15 9-[(R)-2-[[[[1-甲基-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(联苯-4-基)氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 9-[(R)-2-[[[[1-甲基-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(联苯-4-基)氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例1步骤1-3制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(联苯-4-基)氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料L-丙氨酸异丙酯盐酸盐替换为2-氨基-2-甲基丙酸异丙酯盐酸盐，制得标题化合物。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ8.13(s,2H),7.53-7.63(m,4H),7.45-7.58(m,2H),7.44-7.45(m,1H),7.11-7.26(m,4H),5.22-5.24(m,1H),4.86-4.90(m,1H),4.23-4.26(m,1H),4.19-4.23(m,1H),3.98-4.02(m,1H),3.76-3.92(m,2H),1.32-1.36(m,6H),1.02-1.23(m,9H).ESI-MS m/z:567.2[M+H]+.
实施例16 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(5-氯吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(5-氯吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例3步骤1-4制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(噻唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料4-溴噻唑替换为2-溴-5-氯吡啶，制得标题化合物。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ8.70(s,1H),8.10(s,3H),7.95-8.10(m,5H),7.58-7.95(m,2H),6.85(d,1H),5.50-5.75(m,2H),4.80-5.50(m,2H),4.10-4.30(m,4H),1.26-1.30(m,3H),1.02-1.23(m,9H).ESI-MS m/z:588.2[M+H]+.
实施例17 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(4-氯吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(4-氯吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例3步骤1-4制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(噻唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料4-溴噻唑替换为2-溴-4-氯吡啶，制得标题化合物。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ8.61(s,1H),8.07-8.13(m,5H),7.47-7.50(m,1H),7.18-7.24(m,4H),5.57-5.71(m,1H),4.80-4.86(m,1H),4.17-4.33(m,2H),3.82-4.01(m,4H),1.06-1.15(m,12H).ESI-MS m/z:588.3[M+H]+.
实施例18 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(3-氯-6-甲氧基吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 2-溴-3-氯-6-甲氧基吡啶的制备
在100mL的三颈瓶中，依次加入2-溴-6-甲氧基吡啶(2.0g,10mmol)，DMF(30mL)和N-氯代丁二酰亚胺(1.42g,10mmol)。在氮气保护下，室温搅拌2天。加入饱和食盐水，以乙酸乙酯萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析纯化，制得标题化合物。
步骤2 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(3-氯-6-甲氧基吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例3步骤1-4制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(噻唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料4-溴噻唑替换为实施例18步骤1制得的2-溴-3-氯-6-甲氧基吡啶，制得标题化合物。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ8.13(d,2H),7.88(d,1H),7.68-7.87(m,2H),7.16-7.24(m,4H),6.84-6.87(m,1H),5.56-5.74(m,1H),4.80-4.90(m,1H),4.13-4.32(m,2H),3.83-4.00(m,7H),1.13-1.19(m,9H),1.06-1.10(m,3H).ESI-MS m/z:618.3[M+H]+.
实施例19 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(3-甲氧基吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(3-甲氧基吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例3步骤1-4制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(噻唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料4-溴噻唑替换为2-溴-3-甲氧基吡啶，制得标题化合物。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ8.50-8.90(m,2H),8.45(s,2H),7.80-7.95(m,3H),7.63(d,1H),7.42(d,1H),7.10-7.20(m,2H),5.50-5.72(m,1H),4.86-4.93(m,2H),4.30-4.45(m,2H),3.82-4.10(m,3H),1.25-1.34(m,3H),1.02-1.23(m,12H).ESI-MS m/z:584.3[M+H]+.
实施例20 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(4-(2-羟基丙烷-2-基)苯基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 4-(4-乙酰基苯基)苯酚的制备
制备方法同实施例3步骤1制得的4-(噻唑-4-基)苯酚的制备方法，不同的是将原料4-溴噻唑替换为4-溴苯乙酮，制得标题化合物。
步骤2 4-(4-(2-羟基丙烷-2-基)苯基)苯酚的制备
在250mL的双颈瓶中，加入实施例20步骤1得到的4-(4-乙酰基苯基)苯酚(2.0g,9.4mmol)和无水THF(50mL)，氮气保护。反应体系冷却到-20℃,缓慢滴加3M甲基溴化镁试剂(15.7mL)，反应体系在-20℃搅拌1h，升至室温，继续反应过夜。反应体系在低温下用饱和氯化铵水溶液淬灭,乙酸乙酯萃取。合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析纯化。制得标题化合物。
步骤3 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(4-(2-羟基丙烷-2-基)苯基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例3步骤1-4制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(噻唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料4-溴噻唑替换为实施例20步骤2制得的4-(4-(2-羟基丙烷-2-基)苯基)苯酚，制得标题化合物。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ8.12-8.15(m,2H),7.51-7.62(m,6H),7.16-7.22(m,3H),7.08-7.11(m,1H),5.51-5.69(m,1H),5.03(s,1H),4.79-4.90(m,1H),4.23-4.34(m,2H)，3.74-4.03(m,4H),1.45(s,6H),1.06-1.18(m,12H).ESI-MS m/z:610.9[M+H]+.
实施例21 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(4-氯-1-甲基-1H-吡唑-3-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(4-氯-1-甲基-1H-吡唑-3-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例1步骤1-3制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(联苯-4-基)氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料对羟基联苯替换为4-(4-氯-1-甲基-1H-吡唑-3-基)苯酚，制得标题化合物。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ8.13-8.15(m,2H),8.02(s,1H),7.73-7.79(m,2H),7.15-7.22(m,4H),5.52-5.71(m,1H),4.81-4.90(m,1H),4.14-4.34(m,2H),3.80-4.03(m,7H),1.08-1.22(m,12H).ESI-MS m/z:591.2[M+H]+.
实施例22 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例3步骤1-4制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(噻唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料4-溴噻唑替换为3-溴-1-甲基-1H-吡唑，制得标题化合物。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ8.13(s,2H),7.65-7.80(m,4H),7.25(d,2H),7.01-7.20(m,2H),6.75(s,1H),5.50-5.77(m,1H),4.78-4.89(m,1H),4.10-4.30(m,2H),3.70-4.01(m,6H),1.02-1.23(m,12H).ESI-MS m/z:557.2[M+H]+.
实施例23 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(嘧啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(嘧啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例3步骤1-4制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(噻唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料4-溴噻唑替换为2-溴嘧啶，制得标题化合物。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ8.90(s,2H),8.31-8.40(m,2H),8.12(s,2H),7.45(d,1H),7.10-7.32(m,4H),5.58-5.85(m,1H),4.85-4.95(m,1H),4.10-4.35(m,2H),3.82-4.10(m,4H),1.02-1.33(m,12H).ESI-MS m/z:555.3[M+H]+.
实施例24 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(哒嗪-3-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(哒嗪-3-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例3步骤1-4制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(噻唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料4-溴噻唑替换为3-溴哒嗪，制得标题化合物。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ9.19-9.20(d,1H),8.10-8.22(m,5H),7.77-7.79(m,1H),7.19-7.29(m,4H),5.62-5.77(m,1H),4.81-4.85(m,1H),4.15-4.29(m,2H),3.80-4.00(m,4H),1.09-1.19(m,12H).ESI-MS m/z:554.8[M+H]+.
实施例25 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(3-氯-6-异丙氧基吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 2-溴-6-异丙氧基吡啶的制备
将钠(5.0g,217.49mmol)缓慢加入到异丙醇(100mL)中，60℃加热直至钠块消失。将2,6-二溴吡啶(51.52g,217.49mmol)加入体系，80℃加热5h。加水(100mL)淬灭反应，乙酸乙酯(100mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥。经柱层析纯化，制得标题化合物。
步骤2 2-溴-3-氯-6-异丙氧基吡啶的制备
在100mL的三颈瓶中，依次加入实施例25步骤1制得的2-溴-6-异丙氧基吡啶(2.0g,10mmol)，DMF(30mL)和N-氯代丁二酰亚胺(1.42g,10mmol)。在氮气保护下，室温搅拌2天。加入饱和食盐水，以乙酸乙酯萃取分液。合并有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得淡黄色油状粗品，经柱层析纯化，制得标题化合物。
步骤3 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(3-氯-6-异丙氧基吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例3步骤1-4制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(噻唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料4-溴噻唑替换为实施例25步骤2制得的2-溴-3-氯-6-异丙氧基吡啶，制得标题化合物。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ8.13(d,2H),7.84(d,1H),7.68(dd,2H),7.03-7.15(m,4H),6.77(d,1H),5.68(dt,1H),5.22(dq,1H),4.84(dt,1H),4.29(dd,1H),4.18(ddd,1H),3.81-4.03(m,4H),1.29(d,6H),1.11-1.18(m,9H),1.06-1.09(m,3H).ESI-MSm/z:645.8[M+H]+.
实施例26 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(6-异丙氧基吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(6-异丙氧基吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例3步骤1-4制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(噻唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料4-溴噻唑替换为2-溴-6-异丙氧基吡啶，制得标题化合物。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ8.18-8.10(m,2H),8.01(dd,2H),7.74(t,1H),7.47(t,1H),7.14-7.22(m,4H),6.67(d,1H),5.56-5.72(m,1H),5.39(dt,1H),4.83(tt,1H),4.29(dd,1H),4.14-4.23(m,1H),3.77-4.03(m,4H),1.34(d,6H),1.14(dd,9H),1.07(t,3H).ESI-MS m/z:611.8[M+H]+.
实施例27 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(3-氯-6-氨基吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 6-溴-5-氯-2-氨基吡啶的制备
制备方法同实施例18步骤1制得的2-溴-3-氯-6-甲氧基吡啶的制备方法，不同的是将原料2-溴-6-甲氧基吡啶替换为6-溴-2-氨基吡啶，制得标题化合物。
步骤2 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(3-氯-6-氨基吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例3步骤1-4制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(噻唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料4-溴噻唑替换为实施例27步骤1制得的6-溴-5-氯-2-氨基吡啶，制得标题化合物。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ8.13(s,2H),7.42-7.63(m,3H),7.09-7.20(m,4H),6.45(s,1H),6.20(s,2H),5.50-5.75(m,1H),4.80-4.90(m,1H),4.10-4.30(m,2H),3.80-4.03(m,4H),1.02-1.23(m,12H).ESI-MS m/z:603.0[M+H]+.
实施例28 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(3-氯-6-甲氨基吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 6-溴-2-甲氨基吡啶的制备
在100mL水热反应釜中加入2,6二溴吡啶(2.0g,8.5mmol)，40％甲胺水溶液(3.3g,25.5mmol)和乙醇(50mL)，90℃反应3h。减压浓缩，柱层析纯化，制得标题化合物。
步骤2 6-溴-5-氯-2-甲氨基吡啶的制备
制备方法同实施例18步骤1制得的2-溴-3-氯-6-甲氧基吡啶的制备方法，不同的是将原料2-溴-6-甲氧基吡啶替换为实施例30步骤1制得的6-溴-2-甲氨基吡啶，制得标题化合物。
步骤3 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(3-氯-6-甲氨基吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例3步骤1-4制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(噻唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料4-溴噻唑替换为实施例28步骤2制得的6-溴-5-氯-2-甲氨基吡啶，制得标题化合物。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ8.13(s,2H),7.55-7.63(m,2H),7.50(d,1H),7.10-7.25(m,4H),6.72(s,1H),6.45(d,1H),5.55-5.75(m,1H),4.80-4.95(m,1H),4.10-4.35(m,2H),3.75-4.00(m,4H),2.72(s,3H),1.02-1.23(m,12H).ESI-MS m/z:617.0[M+H]+.
实施例29 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(3-氯-6-二甲氨基吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(3-氯-6-二甲氨基吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例28步骤1-3制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(3-氯-6-甲氨基吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料甲胺溶液替换为二甲胺溶液，制得标题化合物。
1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ8.16-8.17(m,2H),7.55-7.68(m,3H),7.27-7.39(m,1H),7.13-7.20(m,2H),6.64-6.67(m,1H),5.53-5.71(m,1H),4.79-4.89(m,1H),4.18-4.32(m,2H)，3.82-4.01(m,4H),3.17(s,1H),3.04(s,6H),1.06-1.18(m,12H).ESI-MS m/z:631.3[M+H]+.
实施例30 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(3-甲基-6-甲氧基吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 4-(3-氯-6-甲氧基吡啶-2-基)苯酚的制备
制备方法同实施例3步骤1中制得的4-(噻唑-4-基)苯酚的制备方法，不同的是将原料4-溴噻唑替换为实施例18步骤1中制得的2-溴-3-氯-6-甲氧基吡啶，制得标题化合物。
步骤2 4-(3-甲基-6-甲氧基吡啶-2-基)苯酚的制备
在100mL的三颈瓶中，依次加入实施例30步骤1中制得的4-(3-氯-6-甲氧基吡啶-2-基)苯酚(10.0g,42.5mmol)，三甲基环三硼氧烷(10g,80mmol)，碳酸钾(25.4g,184.2mmol)，1,4-二氧六烷(30mmol)，水(10mL)和双三苯基磷二氯化钯(2.15g,3.07mmol)。在氮气保护下，反应体系加热到90℃，搅拌3h。减压浓缩蒸馏除去溶剂，残留物溶于乙酸乙酯(100mL)，加入饱和食盐水，萃取分液。合并有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，经柱层析纯化制得标题化合物。
步骤3 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(3-甲基-6-甲氧基吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例3步骤2-4制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(噻唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料4-(噻唑-4-基)苯酚替换为实施例30步骤2中制得的4-(3-甲基-6-甲氧基吡啶-2-基)苯酚，制得标题化合物。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ8.13(d,2H),7.55-7.68(m,3H),7.13-7.20(m,4H),6.60-6.67(m,1H),5.52-5.71(m,1H),4.79-4.90(m,1H),4.13-4.32(m,2H),3.78-4.00(m,4H),3.04(s,6H),1.08-1.18(m,12H).ESI-MS m/z:598.3[M+H]+.
实施例31 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(6-三氟甲基吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
制备方法同实施例3步骤1-4制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(噻唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料4-溴噻唑替换为2-溴-6-三氟甲基吡啶，制得标题化合物。
1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ8.30(d,1H),8.03-8.20(m,4H),7.95(d,1H),7.85(d,1H),7.21-7.31(m,2H),7.15(s,2H),5.55-5.86(m,1H),4.75-4.89(m,1H),4.05-4.30(m,2H)，3.82-4.10(m,4H),1.02-1.23(m,12H).ESI-MS m/z:622.0[M+H]+.
实施例31A 9-[(R)-2-[[(S)-[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(6-三氟甲基吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
将实施例31中制得的粗产物9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(6-三氟甲基吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤(54.81mg)经HPLC制备分离(制备柱：ChiralpakAS，流动相：A:CO2；B:乙醇)后得到3.41mg标题化合物9-[(R)-2-[[(S)-[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(6-三氟甲基吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤(保留时间：2.17min)。
实施例31B 9-[(R)-2-[[(S)-[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(6-三氟甲基吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
将实施例31中制得的粗产物9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(6-三氟甲基吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤(54.81mg)经HPLC制备分离(制备柱：ChiralpakAS，流动相：A:CO2；B:乙醇)后得到5.95mg标题化合物9-[(R)-2-[[(R)-[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(6-三氟甲基吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤(保留时间：4.18min)。
实施例32 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(3-氯-6-三氟甲基吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(3-氯-6-三氟甲基吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例18步骤1-2制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(3-氯-6-甲氧基吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料2-溴-6-甲氧基吡啶替换为2-溴-6-三氟甲基吡啶，制得标题化合物。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ8.35(d,1H),8.15-8.16(m,2H),7.92-7.95(m,1H),7.67-7.73(m,2H),7.22-7.29(m,4H),5.58-5.76(m,1H),4.79-4.89(m,1H),4.14-4.33(m,2H),3.80-4.02(m,4H),1.07-1.18(m,12H).ESI-MS m/z:656.2[M+H]+.
实施例33 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(4-三氟甲氧基苯基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(4-三氟甲氧基苯基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例3步骤1-4制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(4-(噻唑-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料4-溴噻唑替换为4-三氟甲氧基溴苯，制得标题化合物。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ8.11-8.14(m,2H),7.73-7.77(m,2H),7.58-7.66(m,2H),7.42-7.46(m,2H),7.12-7.21(m,4H),5.52-5.66(m,1H),4.81-4.87(m,1H),3.96-4.03(m,2H),3.79-3.94(m,4H),1.06-1.18(m,12H).ESI-MS m/z:637.3[M+H]+.
实施例34 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(5-甲基吡啶-2(1H)-酮-1-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 1-(4-羟基苯基)-5-甲基吡啶-2(1H)-酮的制备
在500mL的单口瓶中加入对溴苯酚(5.0g,28.9mmol)，2-羟基-4-甲基吡啶(1.76g,16mmol)，碳酸钾(2.67g,19mmol)，氧化亚铜(1.28g,8.9mmol)和DMF(50mL)，室温搅拌过夜，乙酸乙酯萃取，柱层析纯化，制得标题化合物。
步骤2 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(5-甲基吡啶-2(1H)-酮-1-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例1步骤1-3制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(联苯-4-基)氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料对羟基联苯替换为实施例34步骤1制得的1-(4-羟基苯基)-5-甲基吡啶-2(1H)-酮，制得标题化合物。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ8.13(s,3H),7.53-7.63(m,5H),7.12-7.20(m,2H),6.43-6.52(m,1H),4.82-4.92(m,1H),4.10-4.40(m,3H),4.00(s,1H),3.75-3.90(m,3H),2.05(s,3H),1.02-1.23(m,12H).ESI-MS m/z:584.0[M+H]+.
实施例35 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][2-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)-5-甲基苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 O-(2-氨基-5-甲基苯基)-4-甲基苯磺酸酯的制备
将2-羟基-5-甲基苯胺(25g,203.00mol)溶于二氯甲烷(200mL)中，加入对甲苯磺酰氯(42.57g,223.30mmol)，搅拌15min，将三乙胺(30.81mL,304.50mmol)溶于二氯甲烷(50mL)中，滴加入体系。室温搅拌3h。柱层析纯化，制得标题化合物。。
步骤2 O-(2-肼基-5-甲基苯基)-4-甲基苯磺酸酯的制备
将实施例35步骤1制得的O-(2-氨基-5-甲基苯基)-4-甲基苯磺酸酯(12.00g,43.27mmol)，亚硝酸钠(4.48g,64.90mmol)置于250mL圆底烧瓶中，在冰水浴条件下缓慢加入5M HCl(100mL)，控制温度不超过5℃。待滴加完毕，反应3h后，将二氯化锡(19.53g,102.98mmol)加入体系，90℃反应3h。浓缩，直接进行下一步反应。
步骤3 O-(2-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)-5-甲基苯基)-4-甲基苯磺酸酯的制备
将实施例35步骤2制得O-(2-肼基-5-甲基苯基)-4-甲基苯磺酸酯(12.65g,43.27mmol)溶于四氢呋喃(200mL)中，加入乙酰丙酮(4.33g,43.27mmol)，回流3h。反应无需处理，直接进行下一步。
步骤4 2-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)-5-甲基苯酚的制备
将实施例35步骤3制得的O-(2-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)-5-甲基苯基)-4-甲基苯磺酸酯(12.65g,43.27mmol)的四氢呋喃溶液直接置于100mL烧瓶中，加入氢氧化钾(4.72g,84.17mmol)溶液。80℃加热1h。无需处理，直接进行下一步反应。
步骤5 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][2-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)-5-甲基苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例1步骤1-3制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(联苯-4-基)氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料对羟基联苯替换为实施例35步骤4中制得的2-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)-5-甲基苯酚，制得标题化合物。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ8.12(d,1H),7.96(d,1H),7.26(d,1H),7.01-7.19(m,3H),6.59-6.86(m,1H),5.91-6.00(m,1H),5.53-5.81(m,1H),4.83(dq,1H),4.11(qd,2H),3.49-3.88(m,4H),2.25-2.40(m,3H),2.10-2.19(m,3H),2.03(d,3H),1.02-1.28(m,9H),0.93-0.96(m,3H).ESI-MS m/z:585.3[M+H]+.
实施例36 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(2-甲氧基-5-氯嘧啶-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 4-(2,5-二氯嘧啶-4-基)苯酚的制备
制备方法同实施例3步骤1制得的4-(噻唑-4-基)苯酚的制备方法，不同的是将原料4-溴噻唑替换为2,4,5-三氯嘧啶，制得标题化合物。
步骤2 4-(2-甲氧基-5-氯嘧啶-4-基)苯酚的制备
在50mL的单口烧瓶中加入实施例36步骤1制得的4-(2,5-二氯嘧啶-4-基)苯酚(1g,4.1mmol)，甲醇钠(224mg,4.15mmol)和甲醇(20mL)，70℃反应2h，经柱层析纯化，制得标题化合物。
步骤3 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(2-甲氧基-5-氯嘧啶-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例1步骤1-3制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(联苯-4-基)氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料对羟基联苯替换为实施例36步骤2中制得的4-(2-甲氧基-5-氯嘧啶-4-基)苯酚，制得标题化合物。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ8.76(s,1H),8.12-8.13(m,2H),7.82-7.88(m,2H),7.16-7.29(m,4H),5.60-5.78(m,1H),4.81-4.89(m,1H),4.12-4.32(m,2H),3.79-3.97(m,7H),1.08-1.18(m,12H).ESI-MS m/z:619.3[M+H]+.
实施例37 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 4-(2-氯代-5-甲基嘧啶-4-基)苯酚的制备
制备方法同实施例30步骤1-2中制得的4-(3-甲基-6-甲氧基吡啶-2-基)苯酚的制备方法，不同的是将原料实施例18步骤1中制得的2-溴-3-氯-6-甲氧基吡啶替换为4-溴-2,5-二氯嘧啶，制得标题化合物。
步骤2 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例1步骤1-3制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(联苯-4-基)氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料对羟基联苯替换为实施例37步骤1中制得的4-(2-氯代-5-甲基嘧啶-4-基)苯酚，制得标题化合物。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ8.70(s,1H),8.13(d,2H),7.68(dd,2H),7.08-7.35(m,4H),5.55-5.84(m,1H),4.84(dq,1H),4.10-4.37(m,2H),3.77-4.06(m,4H),2.35(s,3H),1.12-1.16(m,9H),1.04-1.11(m,3H).ESI-MS m/z:603.2[M+H]+.
实施例38 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][3-氯-4-(4-(2-羟基丙烷-2-基)苯基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 3-氯-4-(4-乙酰基苯基)苯酚的制备
制备方法同实施例20步骤1制得的4-(4-乙酰基苯基)苯酚的制备方法，不同的是将原料4-羟基苯硼酸替换2-氯代-4-羟基苯硼酸，制得标题化合物。
步骤2 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][3-氯-4-(4-(2-羟基丙烷-2-基)苯基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例20步骤2-3制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(4-(2-羟基丙烷-2-基)苯基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料4-(4-乙酰基苯基)苯酚替换为实施例38步骤1制得的3-氯-4-(4-乙酰基苯基)苯酚，制得标题化合物。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ8.11-8.20(m,2H),7.53-7.56(m,2H),7.33-7.39(m,4H),7.06-7.15(m,3H),5.66-5.80(m,1H),5.04(s,1H),4.81-4.87(m,1H),3.92-4.02(m,2H),3.88-3.90(m,4H),1.46(s,6H),1.07-1.19(m,12H).ESI-MS m/z:645.3[M+H]+.
实施例39 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(3-甲基-6-三氟甲基吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 4-(3-氨基-6-三氟甲基吡啶-2-基)苯酚的制备
制备方法同实施例3步骤1制得的4-(噻唑-4-基)苯酚的制备方法，不同的是将原料4-溴噻唑替换为2-溴-3-氨基-6-三氟甲基吡啶，制得标题化合物。
步骤2 4-(3-氯-6-三氟甲基吡啶-2-基)苯酚的制备
在500mL圆底烧瓶中加入实施例39步骤1制得的4-(3-氨基-6-三氟甲基吡啶-2-基)苯酚(10g,39.4mmol)，亚硝酸钠(3.2g,47.3mmol)，浓盐酸(100mL)，0℃反应1小时。加入氯化亚铜(5.8g,59.1mmol)，加热至40℃反应1小时。加乙酸乙酯(80mL×3)萃取，饱和氯化钠溶液(150mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。柱层析纯化，制得标题化合物。
步骤3 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(3-甲基-6-三氟甲基吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例30步骤2-3制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(3-甲基-6-甲氧基吡啶-2-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料4-(3-氯-6-甲氧基吡啶-2-基)苯酚替换为4-(3-氯-6-三氟甲基吡啶-2-基)苯酚，制得标题化合物。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ8.13-8.14(m,2H),8.01-8.03(m,1H),7.78-7.81(m,1H),7.51-7.78(m,2H),7.17-7.25(m,4H),5.57-5.75(m,1H),4.79-4.80(m,1H),3.94-4.04(m,2H),3.78-3.91(m,4H),2.41(s,3H),1.07-1.18(m,12H).ESI-MS m/z:636.3[M+H]+.
实施例40 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(2,5-双(丙烷-2-基)嘧啶-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤
步骤1 4-(2,5-双(丙烯-2-基)嘧啶-4-基)苯酚的制备
在100mL的圆底烧瓶中，依次加入实施例36步骤1制得的4-(2,5-二氯嘧啶-4-基)苯酚(1.0g,4mmol)和烯丙基频那硼酸酯(2g,12mmol),碳酸钾(2.5g,18mmol)，1,4-二氧六烷(15mmol)，水(5mL)和双三苯基磷二氯化钯(0.2g,0.4mmol)。在氮气保护下，反应体系加热到90℃，搅拌3h。减压浓缩蒸馏除去溶剂，残留物溶于乙酸乙酯(100mL)，加入饱和食盐水，萃取分液。合并有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，经柱层析纯化制得标题化合物。
步骤2 4-(2,5-双(丙烷-2-基)嘧啶-4-基)苯酚的制备
在500mL反应瓶中加入甲醇(250mL)、实施例40步骤1制得的4-(2,5-双(丙烯-2-基)嘧啶-4-基)苯酚(2.5g，10mmol)，两滴醋酸和两勺10％湿钯炭。通入氢气反应过夜，过滤，浓缩，制得标题化合物。
步骤3 9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][4-(2,5-双(丙烷-2-基)嘧啶-4-基)苯氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备
制备方法同实施例1步骤1-3制得的9-[(R)-2-[[[[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基][(联苯-4-基)氧基]氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的制备方法，不同的是将原料对羟基联苯替换为实施例40步骤2制得的4-(2,5-双(丙烷-2-基)嘧啶-4-基)苯酚，制得标题化合物。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ8.80(s,1H),8.13(s,2H),7.43-7.53(m,2H),7.15-7.25(m,4H),5.50-5.70(m,1H),4.76-4.90(m,1H),4.12-4.35(m,2H),3.80-4.10(m,4H),3.00-3.16(m,2H)，1.02-1.34(m,24H).ESI-MS m/z:639.0[M+H]+.
药理活性评价
实验例1 体外抗HBV活性、对细胞活力影响实验
1 实验材料
1.1 细胞
HepG2.2.15细胞系由上海药明康德新药开发有限公司提供。
1.2 化合物
对照化合物1为WO 2002/008241(PCT/US2001/023104)实施例3中公开的化合物GS-7340，参照WO2002/008241中描述的方法制备并通过氢谱和质谱鉴定。
对照化合物2为CN103665043(CN201310041647.4)实施例1中公开的化合物Ia，参照CN103665043中描述的方法制备并通过氢谱和质谱鉴定。
化合物准备：将本发明以上实施例制备的化合物及对照化合物用二甲基亚砜(DMSO)配制成10mM母液，暂存氮气柜中。
1.3 主要试剂
本实验使用的主要试剂包括QIAamp 96 DNA Blood Kit(12)(购于Qiagen公司)，FastStart UniversalProbe Master(购于Roche公司)，Cell-titer Blue检测试剂(购于Promega公司)。
2 实验方法
2.1 受试化合物体外抗HBV活性实验
1)：化合物稀释：用于体外抗HBV活性实验的所有化合物起始浓度为1μM，4倍稀释，8个浓度；用于细胞毒性实验的所有化合物起始浓度10μM，4倍稀释，8个浓度；用DMSO对化合物母液进行稀释。
2)：体外抗HBV活性实验：种HepG2.2.15细胞(4×104细胞/孔)到96孔板，在37℃，5％CO2培养箱中培养过夜。第二天，加入含不同浓度化合物的新鲜培养液到培养孔中。第五天，吸除培养孔中旧的培养液，加入含不同浓度化合物的新鲜培养液。第八天，收集培养孔中的上清液，用于提取上清液中的HBV DNA。使用qPCR实验检测细胞HepG2.2.15上清液中的HBV DNA含量。设置不添加化合物的DMSO对照组。
分析数据和计算抑制百分比：应用如下公式计算抑制百分比：
％Inh.＝(HBVDMSO-HBVCOM)/HBVDMSO×100％
其中HBVDMSO为DMSO对照组的HBVDNA量，HBVCOM为化合物组的HBVDNA量。
用GraphPad Prism软件计算化合物的50％有效浓度(EC50)值。部分实验数据见表1。
2.2 受试化合物对细胞活力影响实验
细胞活力实验：种HepG2.2.15细胞到96孔板(4×104细胞/孔)，在37℃，5％CO2培养箱中培养过夜。第二天，加入含不同浓度化合物的新鲜培养液到培养孔中。第五天，吸除培养孔中旧的培养液，加入含不同浓度化合物的新鲜培养液。第八天，每孔加入Cell-titer Blue试剂，酶标仪检测各孔的荧光值。
设置不添加化合物和细胞的培养基对照组，以及不添加化合物的DMSO对照组。
分析数据和计算相对细胞活力：应用如下公式计算细胞活性百分比：
％Viability＝(FCOM–FMED)/(FDMSO–FMED)×100％
其中FCOM为化合物组的荧光信号值，FMED为培养基对照组的荧光信号值，FDMSO为DMSO对照组的荧光信号值。
用GraphPad Prism软件计算化合物的50％细胞毒性浓度(CC50)值。部分实验数据见表1。
表1
化合物 化合物
实施例1 1.59 >10 实施例6 2.76 >10
实施例15 1.34 >10 实施例18 3.32 >10
实施例19 13.90 >10 实施例26 5.72 >10
实施例30 0.39 >10 实施例31A 0.82 >10
实施例31B 2.14 >10 实施例33 2.58 >10
实施例39 0.36 >10 实施例40 1.98 >10
GS-7340 1.92 >10 Ia 1.31 >10
实验结果表明，本发明的化合物的EC50为nM水平，部分化合物的EC50值好于对照药GS-7340和Ia，具有非常好的抑制HBV病毒的能力。同时本发明化合物的CC50均大于10μM，具有小的细胞毒性，安全性好。
实验例2 大鼠组织分布的测定
1.实验材料
1.1 动物
雄性SD大鼠，购自上海西普尔必凯实验动物有限公司。实验前给予2-3天适应期。给药前禁食8～12h，给药2h后给水，4h后给食。
1.2 化合物
使用本发明以上实施例中制备的化合物用于大鼠组织分布的测定，其中对照化合物1为GS-7340，对照化合物2为化合物Ia，制备方法同实验例1。
1.3 主要试剂和仪器
本实验中使用的试剂均商购获得。所使用的API 4000型三重四级杆液质联用仪和Analyst QSA01.01色谱工作站购于美国AB SCIEX公司。
2 实验方法
2.1 供试化合物配制
称取本发明以上实施例制备的化合物及对照化合物各60mg(以游离碱计)，分别加入至20mL乙醇-PEG400-生理盐水(10:70:20)中，涡旋2min，超声3min，配制浓度为3mg/mL的供试品溶液，用于口服给药；取供试品溶液100μL用甲醇定容至100μg/mL，同时配制等浓度的对照品，HPLC上进样检测供试品及对照品溶液浓度，计算供试品准确度。
2.2 样品采集
单次口服给予SD大鼠测试化合物15mg-eq/kg，给药体积为5mL/kg，大鼠给药后4h股动脉放血、断颈处死，立即收集肝脏和血液(用肝素钠抗凝)，置于冰上。
2.3 肝脏样品处理和分析
称取0.4g肝脏，剪碎，于2mL 75％甲醇-水中匀浆,将匀浆液离心(离心条件：8000rpm/min，5min，4℃)，转移上清液冻存，进样前复溶、离心，取上清，用LC-MS/MS分析上清样品中替诺福韦(TFV)和替诺福韦二磷酸(TFV-DP)含量。
2.4 血浆样品处理和分析
采集后的全血样品置于冰盒中，于30min以内离心(离心条件：8000rpm/min，5min，4℃)并转移上层血浆。收集的血浆冻存于-80℃冰箱，待最后一个时间点采血结束后，定量转移血浆100μL，加300μL甲醇沉淀，振荡、离心，加入流动相稀释，取上清，用LC-MS/MS分析上清样品中TFV含量。
计算各测试化合物经口服给予大鼠4h后，大鼠肝脏中TFV和TFV-DP含量以及血浆中TFV含量，实验结果如表2和表3所示。
表2
表3
化合物 肝脏TFV‐DP(ng/g)
实施例25 7139.30
实施例26 7288.97
实施例28 1977.57
实施例29 8958.46
实施例30 5125.51
实施例31 3586.67
实施例31A 5007.38
实施例32 3040.00
实施例35 4328.75
实施例38 2276.05
实施例39 6232.55
实施例40 8104.44
GS7340 2660.00
测试化合物均为TFV的酯类前体药物，口服后可被迅速吸收并降解成TFV，TFV在肝脏中可进一步转变为活性代谢产物替诺福韦二磷酸(TFV-DP)，发挥抗HBV作用。TFV是前体药物转变为活性代谢产物TFV-DP途径中的中间代谢产物，其在肝脏中的含量与TFV-DP的生成量呈正相关。肝脏中的TFV和TFV-DP浓度越高，表明测试化合物在靶器官中转化成活性代谢产物TFV-DP的能力越强，化合物的抗HBV活性越好。同时，TFV的肝脏/血浆比值越高，表明测试化合物的靶器官选择性越强，化合物的安全性可能越好。从以上实验结果可以看出，本发明的化合物给药后在肝脏中转变为TFV和TFV-DP的浓度高，肝脏/血浆TFV分配比高，明显优于化合物GS7340和Ia，具有好的抗HBV活性和安全性。
另外，本发明的发明人发现，本发明的化合物具有良好的血浆蛋白结合率，适于成药，具有非常好的临床应用前景。
尽管以上已经对本发明作了详细描述，但是本领域技术人员理解，在不偏离本发明的精神和范围的前提下可以对本发明进行各种修改和改变。本发明的权利范围并不限于上文所作的详细描述，而应归属于权利要求书。

Claims (10)

1.一种通式I所示的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药：
其中：
R1选自H和烷基，所述烷基任选被一个或多个烷基、环烷基、杂环烷基、烷氧基、烷基氨基、卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、烷基酰基、氨基酰基、烷氨基酰基、磺酰基、亚磺酰基、巯基、芳基或杂芳基取代；
R2选自H、烷基、环烷基、芳基和杂芳基，所述烷基、环烷基、芳基和杂芳基任选被一个或多个烷基、环烷基、杂环烷基、烷氧基、烷基氨基、卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、烷基酰基、氨基酰基、烷氨基酰基、磺酰基、亚磺酰基、巯基、芳基或杂芳基取代；
Cy1选自芳基和杂芳基，所述的芳基和杂芳基任选被一个或多个卤素、羟基、烷基、环烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、氨基、烷基氨基、烷基酰基氨基、烷基酰基、氨基酰基、烷基氨基酰基、硝基、氰基取代；和
Cy2选自芳基、杂芳基、杂环烷基和杂环烯基，所述的芳基、杂芳基、杂环烷基和杂环烯基任选被一个或多个卤素、羟基、烷基、环烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、氨基、烷基氨基、烷基酰基氨基、烷基酰基、氨基酰基、烷基氨基酰基、氧代、硝基、氰基取代。
2.根据权利要求1所述的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，其中R1选自H和C1-6烷基，所述烷基任选被一个或多个烷基、环烷基、杂环烷基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基、烷基氨基、卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、烷基酰基、氨基酰基、烷氨基酰基、磺酰基、亚磺酰基、巯基、芳基或杂芳基取代。
3.根据权利要求1所述的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，其中R2选自H、C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-12芳基和C6-12杂芳基，所述烷基、环烷基、芳基和杂芳基任选被一个或多个烷基、环烷基、杂环烷基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基、烷基氨基、卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、烷基酰基、氨基酰基、烷氨基酰基、磺酰基、亚磺酰基、巯基、芳基或杂芳基取代。
4.根据权利要求1-3之任一项所述的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，其中Cy1为苯基，Cy2选自苯基、杂芳基、杂环烷基和杂环烯基，所述的苯基、杂芳基、杂环烷基和杂环烯基任选被一个或多个卤素、羟基、C1-6烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-6环烷基、卤代C1-6烷基、羟基C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷氧基、氨基、C1-6烷基氨基、C1-6烷基酰基氨基、C1-6烷基酰基、氨基酰基、C1-6烷基氨基酰基、氧代、硝基、氰基取代。
5.根据权利要求1-4之任一项所述的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，其中Cy1为苯基，Cy2选自至少含有一个N原子的五元或六元杂芳基、杂环烷基和杂环烯基，所述的苯基、五元或六元杂芳基、杂环烷基或杂环烯基任选被一个或多个卤素、羟基、C1-6烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-6环烷基、卤代C1-6烷基、羟基C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷氧基、氨基、C1-6烷基氨基、C1-6烷基酰基氨基、C1-6烷基酰基、氨基酰基、C1-6烷基氨基酰基、氧代、硝基、氰基取代。
6.根据权利要求1-5之任一项所述的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，其中磷原子具有手性，其构型是S-或R-构型，或者是S-构型和R-构型的混合物。
7.根据权利要求1所述的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，其中所述化合物为选自以下的化合物：
8.一种药物组合物，其包含权利要求1至7之任一项所述的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药和可药用载体。
9.权利要求1-7之任一项所述的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或结晶或权利要求8所述的药物组合物在制备治疗病毒感染性疾病的药物中的用途。
10.根据权利要求9的用途，其中所述病毒感染性疾病是人类免疫缺陷病毒和/或乙型肝炎病毒感染引起的疾病。
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