CN106866652A

CN106866652A - 具有胰岛素增敏活性的小檗碱12‑位衍生物及其制备方法

Info

Publication number: CN106866652A
Application number: CN201611190059.7A
Authority: CN
Inventors: 吴勇; 海俐; 李仁俊; 王鸿; 王一鸿; 周燕
Original assignee: Sichuan University
Current assignee: Sichuan University
Priority date: 2016-12-21
Filing date: 2016-12-21
Publication date: 2017-06-20
Anticipated expiration: 2036-12-21
Also published as: CN106866652B

Description

具有胰岛素增敏活性的小檗碱12-位衍生物及其制备方法

技术领域

本发明涉及药物化学和药物治疗性领域，具体涉及可作为胰岛素增敏剂的小檗碱12-位衍生物及其药物组合物和医药用途。

背景技术

糖尿病是一组由遗传和环境因素相互作用而引起的临床代谢性疾病，因胰岛素分泌绝对或相对不足以及靶组织细胞对胰岛素敏感性降低，引起糖、蛋白、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱。临床以高血糖为主要共同标志。胰岛素是由胰腺产生的一种激素，能够使血液中的葡萄糖进入细胞并转化为机体活动所需的能量。糖尿病患者体内胰岛素的缺乏或作用缺陷使体内的葡萄糖持续存留在循环血液中。与非糖尿病人群相比，糖尿病患者出现一系列致残或致命性疾病的风险更高。持续的高血糖状态会导致严重的心血管、眼、肾及神经系统病变，发生感染的几率也会增高。在众多高收入国家中，糖尿病是导致心血管疾病、失明、肾衰竭和下肢截肢术的主要原因。II型糖尿病在中低收入国家的患病率不断升高，这意味着，如果缺乏糖尿病管理的有效措施，这些并发症的发生率也将大幅增加。因此，糖尿病及其并发症已成为严重威胁人类健康的世界性公共卫生问题。随着生活水平的提高，人口老龄化、肥胖、不健康饮食及缺乏运动的生活方式，使糖尿病发病率越来越高，据统计，国际糖尿病联盟（The International Diabetes Federation, IDF）于2015年12月1日在“2015年世界糖尿病大会”上最新发布的第7版糖尿病概览，世界范围内共有4.15亿成年人患有糖尿病，即每11人中便有1人患有糖尿病。该最新版结合了糖尿病类型，显示自从2013年发布的上版概览以来，全世界共增加了3100万的成年糖尿病患者。到2040年，将有6.42亿人患有糖尿病，即每10人中便有1人患有糖尿病，与目前的数据相比增加超过50%。而且，IDF估计2015年有5百万人因糖尿病而死亡。

糖尿病主要有三种类型：I型糖尿病，II型糖尿病和妊娠期糖尿病。在高收入国家，有几项研究大致估计，II型糖尿病约占糖尿病人群的87%-91%，I型糖尿病约占7%-12%，还有1%-3%是其他类型的糖尿病。I型糖尿病又称胰岛素依赖型糖尿病，具有明显的遗传和早发倾向。II型糖尿病为非胰岛素依赖型糖尿病也有很强的遗传性和环境因素，并呈显著地异质性，发病机制多样且复杂，个体差异较大。总的来说可概括为胰岛素分泌的相对不足和胰岛素抵抗。研究证实，II型糖尿病的发病原因主要是胰岛素受体或与胰岛素作用相关的受体功能低下，造成胰岛素抵抗状态。研究HepG2细胞内胰岛素信号传导途径的基础上，设计开发胰岛素增敏剂，改善胰岛素抵抗状态，是目前Ⅱ型糖尿病新药研究的重点，也是其主要方向之一。

目前临床上用于治疗糖尿病的口服药物主要有胰岛素分泌促进剂、胰岛素增敏剂和减少碳水化合物吸收的药物这三大类。其中胰岛素分泌促进剂分为磺酰脲类和非磺酰脲类，磺酰脲类胰岛素分泌促进剂存在引发低血糖的危险，而非磺酰脲类主要作为膳食调节剂用于控制餐后高血糖，并不能改善胰岛素抵抗，并有短时的过敏反应。胰岛素增敏剂分为噻唑烷二酮类和双胍类。其中噻唑烷二酮类胰岛素是一类高选择性的PPARγ激动剂，其作用机理为通过增加敏感性从而有效的控制人体血糖水平，但是其仍然存在体重增加和水肿等不良反应。双胍类胰岛素增敏剂是目前肥胖糖尿病病人的一线用药，为达到改善胰岛素敏感性的效果，往往需要雇佣较大剂量的此类药物，并伴随有消化道症状的不良反应且心肾功能障碍的老人服用该药有引发乳酸中毒的危险。最后一类减少碳水化合物吸收的药物主要包括α-葡萄糖苷酶抑制剂和醛糖还原酶抑制剂。α-葡萄糖苷酶抑制剂能通过竞争抑制小肠绒毛中参与碳水化合物降解的α-葡萄糖苷酶活性，抑制碳水化合物和双糖的分解和消化，延迟并减少在小肠上段葡萄糖的吸收从而控制餐后血糖的升高，其主要的不良反应为腹部不适、胀气、排气等消化道反应。而醛糖还原酶则会引起视觉损害和肾衰竭。

现临床上使用的治疗Ⅱ型糖尿病药物不能完全控制血糖，且不是对所有的糖尿病人有效，每类药物都存在或多或少的副反应。对于胰岛素病人，提高胰岛素受体及相关受体的表达，将有助于胰岛素（内源和外源的）发挥作用，从而产生降低病人血糖的效果。因此设计开发胰岛素增敏剂，是目前II型糖尿病新药研究的重点和方向之一。

小檗碱（berberine）是存在于黄连中的主要生物碱类药效成分，所以又称黄连素。小檗碱属季铵型生物碱，为两个异喹啉环稠合而成，分子式为[C₂₀H₁₈NO₄]⁺，为黄色针晶或核晶，其盐酸盐为黄色结晶性粉末、无臭、味极苦。1826年M.-E.夏瓦利埃和G.佩尔坦首次从Xanthoxylonclava树皮中首次获得。小檗碱具有多种药理作用，在临床上主要用于治疗细菌性痢疾和胃肠炎等肠道感染，对于眼结膜炎、化脓性中耳炎等有效。其最大特点是副作用极为少见。小檗碱作为抗菌药在临床上已应用多年，是一种广谱抗菌药物。近年来临床用于治疗Ⅱ型糖尿病取得了较好的效果。小檗碱在治疗Ⅱ型糖尿病方面虽有一定的优势，但多数是与西药合用辅助治疗，且剂型单一，因此深入研究其作用机制对治疗Ⅱ型糖尿病具有重要的意义。我们课题组在CN102850346中报道了一类小檗红碱12-位曼尼希碱衍生物对脂肪细胞和肌肉细胞有促进葡萄糖吸收的作用，具有改善糖耐量和胰岛素抵抗的作用；蒋建东在WO2004032924中报道了小檗碱作为胰岛素受体或其相关受体增敏剂的用途，黄连素和胰岛素的联用使胰岛素的用量大大的降低，通式显示了与单独使用相同或更好的降糖效果；李学刚等人在CN101104618中报道了一类长链烷基小檗碱盐衍生物具有明显的降血脂和降血糖活性，其降血脂和降血糖活性明显高于小檗碱盐；汤磊等人在CN102086197中报道了一种具有胰岛素增敏活性的原小檗碱衍生物；袁吕江等人在CN102079765中报道了一类9-O-糖苷-小檗碱盐酸盐，其降糖活性明显优于小檗碱盐酸盐；徐丽君等人在CN1872852中报道的一类小檗碱8-位衍生物对大鼠具有明显的降糖调脂作用；胡立宏等人在CN101153039中报道了一系列的13,13α-二氢小檗碱衍生物，该类化合物对肌肉细胞有促进葡萄糖吸收的作用，整体动物实验表明该类化合物具有改善耐糖量和胰岛素抵抗、减轻肥胖、环节脂肪肝等功效，霍丽妮等人在CN103159755中报道了2,3,4-三羟基苯甲醛-9’-O-小檗碱酰腙具有很强的α-葡萄糖苷酶抑制活性，其抑制性比阿卡波糖高1.2倍。但到目前为止，国内外尚未见有关12-位取代苯基小檗碱衍生物及其在降血糖方面药理活性的研究报道。以自然资源丰富的小檗碱为原料，可以通过溴代，Suzuki反应在小檗碱及其衍生物的12位引入不同的取代基团，因此有必要深入研究该类化合物结构与活性的关系，以寻找体内活性更好的小檗碱衍生物。

发明内容

本发明的一个目的是提供如式I所示的12-芳基取代的小檗碱衍生物或其生理上可接受的盐。

其中R¹为氢， C_1~10的烷烃或不饱和烃基。

R²为无取代基团的芳基或取代芳基。

R²为取代芳基时，所述R²为1-3个取代基的芳基，所述取代基是C_1~4烃基、C_1~4烷氧基、C_1~4烷酰基、C_1~4烷酰氧基、C_1~4烷磺酰基、C_1~4酰胺、C_1~4磺酰胺、卤素、三氟甲基、硝基、氰基、烷氨基、氨基、羟基、羧基。

X^-为生理上可接受盐的酸根形式。

本发明的一目的是提供包括治疗有效剂量的权利要求1-9所述的12-取代苯基小檗碱衍生物或其生理上可接受的盐的药物组合。

本发明的另一目的是提供上述小檗碱12-位衍生物或其生理上可接受的盐在制备用于治疗由胰岛素抵抗引起的糖尿病、肥胖症、脂肪肝及其并发症的药物中的用途。

本发明的再一目的是提供包括治疗有效剂量的小檗碱12-位衍生物或其生理上可接受的盐的药物组合物在制备用于治疗由胰岛素抵抗引起的糖尿病、肥胖症、脂肪肝及其并发症的药物中的用途。

本发明的小檗碱12-位衍生物或其生理上可接受的盐可通过如下的方法合成：

试剂和反应条件:(a)Br₂,CH₃COOH,100℃,8h；(b)Na₂CO₃,Pd(PPh₃)₄,tol,EtOH,H₂O,80℃,12h；(c)180℃in a vacuum,2h。

试剂和反应条件: (a) 180℃ in a vacuum, 2 h; (b) RX, CH₃CN, 85 ℃, 24 h;(c) Br₂, CH₃COOH, 100 ℃, 8 h; (d) Na₂CO₃, Pd(PPh₃)₄, tol, EtOH, H₂O, 80 ℃, 12h。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实例，凡从本发明扩展到任何在本说明书中披露的新特征或任何新的组合均属于本发明的范围。

制备实施例

实施例1

12-溴代小檗碱氢溴酸盐的制备

在圆底烧瓶中加入盐酸小檗碱（371.8 mg，1 mmol），10 mL冰乙酸，溴素（1.60 g，10mmol）。反应液在100 ℃下冷凝回流反应8小时。TLC监测反应完毕，待反应液冷却至室温后，过滤，用10% 硫代硫酸钠溶液和水洗涤滤饼得到粗品，该粗品用甲醇重结晶得到420.9 mg黄色固体化合物，收率85%，mp ℃; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 10.00 (s, 1H), 8.53(s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.11 (s, 1H), 6.18 (s, 2H), 4.96 (brs,2H), 4.10 (s, 6H), 3.21 (brs, 2H); HRMS (ESI): m/z [M⁺] calcd. for C₂₀H₁₇BrNO₄ ⁺: 414.0335; found: 414.0338。

实施例2

12-苯基-小檗碱氢溴酸盐的制备

在50 mL两颈圆底烧瓶中加入12-溴代小檗碱氢溴酸盐（500 mg，1.01 mmol），苯硼酸（136 mg，1.11 mmol），碳酸钠（214 mg，2.02 mmol），四三苯基膦钯（58 mg，0.05 mmol）。用氩气置换瓶内气体四次后，用针筒分别抽取20mL甲苯，5 mL乙醇和10 mL水加入反应瓶中。加毕，在80 °C下冷凝回流反应12小时。TLC监测反应完毕，待反应液冷却至室温后，硅藻土助滤，用20 mL二氯甲烷洗涤滤饼四次。滤液用饱和食盐水反洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗品。快速柱层析（二氯甲烷/丙酮/甲醇 = 20:4:1）纯化得397.8 mg深黄色固体，收率80%，mpdecomposed 126 ℃; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 9.99 (s, 1H), 8.27 (s, 1H),8.08 (s, 1H), 7.66-7.63 (m, 4H), 7.60-7.58 (m, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.09 (s,1H), 6.13 (s, 2H), 4.95 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.14 (s, 3H), 4.13 (s, 3H), 3.19(t, J = 5.6 Hz, 2H); HRMS (ESI): m/z [M⁺] calcd. for C₂₆H₂₂NO₄ ⁺: 412.1543;found: 412.1544。

实施例3

12-(4-氯苯基)-小檗碱氢溴酸盐的制备

在50 mL两颈圆底烧瓶中加入12-溴代小檗碱氢溴酸盐（500 mg，1.01 mmol），（174 mg,1.11 mmol）4-氯苯硼酸，碳酸钠（214 mg，2.02 mmol），四三苯基膦钯（58 mg，0.05 mmol）。用氩气置换瓶内气体四次后，用针筒分别抽取20mL甲苯，5 mL乙醇和10 mL水加入反应瓶中。加毕，在80 ℃下冷凝回流反应12小时。TLC监测反应完毕，待反应液冷却至室温后，硅藻土助滤，用20 mL二氯甲烷洗涤滤饼四次。滤液用饱和食盐水反洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗品。快速柱层析（二氯甲烷/丙酮/甲醇 = 20:4:1）纯化得浅棕色固体，mp 140 ℃(decomposed); ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 10.01 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.09(s, 1H), 7.72-7.67 (m, 4H), 7.63 (s, 1H), 7.09 (s, 1H), 6.14 (s, 2H), 4.96(brs, 2H), 4.15 (s, 3H), 4.13 (s, 3H), 3.20 (brs, 2H); HRMS (ESI): m/z [M⁺]calcd. for C₂₆H₂₁ClNO₄ ⁺: 446.1154; found: 446.1150。

实施例4

12-(4-氟苯基)-小檗碱氢溴酸盐的制备

在50 mL两颈圆底烧瓶中加入12-溴代小檗碱氢溴酸盐（500 mg，1.01 mmol），4-氟苯硼酸（155 mg，1.11 mmol），碳酸钠（214 mg，2.02 mmol），四三苯基膦钯（58 mg，0.05 mmol）。用氩气置换瓶内气体四次后，用针筒分别抽取20mL甲苯，5 mL乙醇和10 mL水加入反应瓶中。加毕，在80 °C下冷凝回流反应12小时。TLC监测反应完毕，待反应液冷却至室温后，硅藻土助滤，用20 mL二氯甲烷洗涤滤饼四次。滤液用饱和食盐水反洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗品。快速柱层析（二氯甲烷/丙酮/甲醇 = 20:4:1）纯化得浅棕色固体，mp 172 ℃(decomposed); ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ9.98 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.07 (s,1H), 7.72-7.68 (m, 2H), 7.58 (s, 1H), 7.47 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 7.09 (s, 1H),6.14 (s, 2H), 4.95 (brs, 2H), 4.14 (s, 3H), 4.12 (s, 3H), 3.19 (brs, 2H); ¹³CNMR (150 MHz, DMSO-d ₆): δ 163.4, 161.8, 150.1, 147.9, 146.3, 143.6, 137.9,134.9, 133.2, 132.4, 131.2, 130.6, 127.2, 122.0, 120.6, 118.1, 116.3, 116.2,108.6, 105.9, 102.3, 62.3, 57.4, 55.3, 26.6; HRMS (ESI): m/z [M⁺] calcd. forC₂₆H₂₁FNO₄ ⁺: 430.1449; found: 430.1447。

实施例5

12-(3-氯苯基)-小檗碱氢溴酸盐的制备

在50 mL两颈圆底烧瓶中加入12-溴代小檗碱氢溴酸盐（500 mg，1.01 mmol），3-氯苯硼酸（174 mg, 1.11 mmol），碳酸钠（214 mg，2.02 mmol），四三苯基膦钯（58 mg，0.05 mmol）。用氩气置换瓶内气体四次后，用针筒分别抽取20mL甲苯，5 mL乙醇和10 mL水加入反应瓶中。加毕，在80 °C下冷凝回流反应12小时。TLC监测反应完毕，待反应液冷却至室温后，硅藻土助滤，用 20 mL 二氯甲烷洗涤滤饼四次。滤液用饱和食盐水反洗，无水硫酸钠干燥,浓缩得粗品。快速柱层析（二氯甲烷/丙酮/甲醇 = 20:4:1）纯化得深黄色固体，mp 144 °C(decomposed); ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 10.01 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.12(s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.66-7.64 (m, 2H), 7.61-7.59 (m, 2H), 7.09 (s, 1H),6.14 (s, 2H), 4.96 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.14 (s, 3H), 4.13 (s, 3H), 3.19 (t,J = 5.6 Hz, 2H); HRMS (ESI): m/z [M⁺] calcd. for C₂₆H₂₁ClNO₄ ⁺: 446.1154; found:446.1157。

实施例6

12-(3，5-二氯苯基)-小檗碱氢溴酸盐的制备

在50 mL两颈圆底烧瓶中加入12-溴代小檗碱氢溴酸盐（500 mg, 1.01 mmol），3,5-二氯苯硼酸（212 mg, 1.11 mmol），碳酸钠（214 mg，2.02 mmol），四三苯基膦钯（58 mg, 0.05mmol）。用氩气置换瓶内气体四次后，用针筒分别抽取20mL甲苯，5 mL乙醇和10 mL水加入反应瓶中。加毕，在80 °C下冷凝回流反应12小时。TLC监测反应完毕，待反应液冷却至室温后，硅藻土助滤，用20 mL二氯甲烷洗涤滤饼四次。滤液用饱和食盐水反洗，无水硫酸钠干燥,浓缩得粗品。快速柱层析（二氯甲烷/丙酮/甲醇 = 20:4:1）纯化得浅棕色固体, mp 142 °C(decomposed); ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 10.01 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.13(s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.71 (s, 3H), 7.09 (s, 1H), 6.14 (s, 2H), 4.96 (brs,2H), 4.14 (s, 3H), 4.12 (s, 3H), 3.19 (brs, 2H); HRMS (ESI): m/z [M⁺] calcd.for C₂₆H₂₀Cl₂NO₄ ⁺: 480.0764; found: 480.0761。

实施例7

12-苯基-小檗红碱的制备

将12-苯基-小檗红碱氢溴酸盐（492.4 mg，1mmol）置于圆底烧瓶中，抽真空至压力为10mmHg，180 °C下反应2h至原料完全由黄色转变为暗红色。得到的粗品用快速柱层析（二氯甲烷/甲醇=20:1）纯化，得到381.5mg暗红色固体，收率96%， mp > 250 °C; ¹H NMR (400MHz, DMSO-d ₆): δ 9.17 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.50-7.45 (m, 4H), 7.34-7.32 (m,1H), 7.21 (s, 1H), 7.16 (s, 1H), 6.97 (s, 1H), 6.07 (s, 2H), 4.49 (t, J = 5.6Hz, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.04 (t, J = 5.6 Hz, 2H); ¹³C NMR (150 MHz, DMSO-d ₆): δ150.2, 150.1, 149.9, 148.7, 147.9, 147.5, 146.6, 146.3, 143.5, 140.1, 137.8,136.8, 135.9, 134.0, 131.2, 130.5, 130.2, 129.9, 129.5, 129.3, 129.0, 128.9,128.6, 127.7, 127.1, 126.3, 122.6, 122.0, 121.9, 120.6, 119.8, 118.1, 114.2,113.5, 108.7, 108.6, 105.6, 104.4, 102.3, 101.9, 62.2, 57.4, 55.8, 55.3,55.1, 52.4, 48.8, 27.7, 26.6; HRMS (ESI): m/z [M + H⁺] calcd. for C₂₅H₂₀NO₄ ⁺:398.1387; found: 398.1388。

实施例8

12-(4-氯苯基)-小檗红碱的制备

将12-(4-氯苯基)-小檗红碱氢溴酸盐（526.8 mg, 1 mmol）置于圆底烧瓶中，抽真空至压力为10 mmHg，180 °C下反应2h至原料完全由黄色转变为暗红色。得到的粗品用快速柱层析（二氯甲烷/甲醇=20:1）纯化，得到406.0 mg暗红色固体，收率94%，mp >250 °C; ¹H NMR(400 MHz, DMSO-d ₆): δ9.19 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.53 (s, 4H), 7.31 (s, 1H),7.21 (s, 1H), 6.97 (s, 1H), 6.08 (s, 2H), 4.50 (brs, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.04(brs, 2H); HRMS (ESI): m/z [M + H⁺] calcd. for C₂₅H₁₉ClNO₄ ⁺: 432.0997; found:432.0999。

实施例9

12-(4-氟苯基)-小檗红碱的制备

将12-(4-氟苯基)-小檗碱氢溴酸盐（510.4 mg，1 mmol）置于圆底烧瓶中，抽真空至压力为10mmHg，180 °C下反应2h至原料完全由黄色转变为暗红色。得到的粗品用快速柱层析（二氯甲烷/甲醇=20:1）纯化，得到390.5 mg暗红色固体，收率94%，mp >250 °C; ¹H NMR(400 MHz, DMSO-d ₆): δ 9.18 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.55-7.51 (m, 2H), 7.30 (t,J = 8.8 Hz, 2H), 7.26 (s, 1H), 7.19 (s, 1H), 6.97 (s, 1H), 6.07 (s, 2H), 4.50(t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.04 (t, J = 6.4 Hz, 2H); HRMS (ESI): m/z[M + H⁺] calcd. for C₂₅H₁₉FNO₄ ⁺: 416.1293; found: 416.1291。

实施例10

12-(3-氯苯基)-小檗红碱的制备

将12-(3-氯苯基)-小檗碱氢溴酸盐（526.8 mg，1 mmol）置于圆底烧瓶中，抽真空至压力为10mmHg，180 °C下反应2h至原料完全由黄色转变为暗红色。得到的粗品用快速柱层析（二氯甲烷/甲醇=20:1）纯化，得到406.0 mg暗红色固体，收率94%，mp 209-210 °C; ¹H NMR(400 MHz, DMSO-d ₆): δ 9.21 (brs, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.53-7.49 (m, 3H), 7.38-7.37 (m, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.08 (s, 2H), 4.52(brs, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.05 (brs, 2H); HRMS (ESI): m/z [M + H⁺] calcd. forC₂₅H₁₉ClNO₄ ⁺: 432.0997; found: 432.0995。

实施例11

9-乙氧基-12-溴代小檗碱氢溴酸盐的制备

在圆底烧瓶中加入9-乙氧基小檗碱氢溴酸盐（430.3 mg，1 mmol），10mL冰乙酸，溴素（1.60 g，10 mmol）。反应液在100 °C下冷凝回流反应8小时。TLC监测反应完毕，待反应液冷却至室温后，过滤，用10% 硫代硫酸钠溶液和水洗涤滤饼得到黄色固体化合物，该粗品用甲醇重结晶得到407.4 mg黄色固体，收率80%，mp decomposed >220 °C; ¹H NMR (400 MHz,DMSO-d ₆): δ 9.92 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.11 (s,1H), 6.19 (s, 2H), 4.99 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 4.37 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.09(s, 3H), 3.21 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.45 (t, J = 7.2 Hz, 3H); HRMS (ESI): m/z[M⁺] calcd. for C₂₁H₁₉BrNO₄ ⁺: 428.0492; found: 428.0495。

实施例12

9-乙氧基-12-苯基小檗碱氢溴酸盐的制备

在50 mL两颈圆底烧瓶中加入9-乙氧基-12-溴代小檗碱氢溴酸盐（509.2 mg，1 mmol），苯硼酸（134 mg，1.10 mmol），碳酸钠（212 mg，2 mmol），四三苯基膦钯（58 mg，0.05 mmol）。用氩气置换瓶内气体四次后，用针筒分别抽取20mL甲苯，5 mL乙醇和10 mL水加入反应瓶中。加毕，在80 °C下冷凝回流反应12小时。TLC监测反应完毕，待反应液冷却至室温后，硅藻土助滤，用20 mL二氯甲烷洗涤滤饼四次。滤液用饱和食盐水反洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗品。快速柱层析（二氯甲烷/丙酮/甲醇 = 20:4:1）纯化得384.9 mg黄色固体，收率76%，mp134-135 °C; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 9.92 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.08 (s,1H), 7.67-7.47 (m, 4H), 7.45 (s, 1H), 7.25-7.24 (m, 1H), 7.09 (s, 1H), 6.14(s, 2H), 4.98 (t, J =6.4 Hz, 2H), 4.42 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.12 (s, 3H),3.20 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.50 (t, J = 7.2 Hz, 3H); HRMS (ESI): m/z [M⁺]calcd. for C₂₇H₂₄NO₄ ⁺: 426.1700; found: 426.1702。

试验实施例

实施例1

用Ins诱导分化了的HepG2细胞，建立体外胰岛素抵抗模型。以试剂盒法（南京建成生物工程研究所）检测胰岛素抵抗的HepG2细胞培养上清液葡萄糖水平，观察样品对细胞葡萄糖摄取量的影响，初步评价本发明部分化合物逆转胰岛素抵抗的效果。

试验方法

胰岛素抵抗模型的建立

取对数生长期的细胞，制成50000个/mL的细胞悬液，铺于96孔板，每孔5000个细胞。12小时后，弃去原高糖有酚红DMEM 培养基，分别加入含5×10^-7和1×10^-6胰岛素的高糖有酚红DMEM 培养基200 uL/孔。12h、24h、36h和48h后吸取上清液用葡萄糖检测试剂盒于505 nm处用酶标仪测OD值（2 uL上清液+200 uL工作液），计算上清液中的葡萄糖含量。

样品中葡萄糖的含量=OD样品/OD标准品×5.55 mmol/L

以空白培养基中的葡萄糖含量为空白对照，葡萄糖的消耗量=培养基的葡萄糖含量-样品中的葡萄糖含量与未加诱导剂组相比，葡萄糖消耗量减少的（>20%），则视为产生了胰岛素抵抗。

然后弃去加了诱导剂的高糖有酚红DMEM培养基，用PBS 100 uL/孔洗涤两次，换正常高糖有酚红DMEM培养基继续培养，于12h、24h、36h、48h吸取上清液用葡萄糖检测试剂盒检测上清液中的葡萄糖含量。与未诱导组相比，其胰岛素抵抗状态持续24h以上视为建模成功。

胰岛素增敏剂的筛选

分组：实验组、阳性对照组、阴性对照组、空白组

向建模成功的HepG2细胞中加入含10 umol/L样品的高糖有酚红DMEM 培养基作为实验组，阳性对照组（诱导分化后的胰岛素抗性细胞加10 umol/L阳性对照药）加正常高糖有酚红DMEM 培养基，阴性对照组（诱导分化后的胰岛素抗性细胞不加样品）加正常高糖有酚红DMEM 培养基，以不铺细胞的正常高糖有酚红DMEM培养基为空白组，设3复孔，重复2次。培养24h后测量上清液中的葡萄糖含量。

本试验采用罗格列酮钠（Rosiglitazone sodium，购自太极集团）为阳性对照药，根据OD值计算效应率，增敏率=[1-（OD样品-OD空白）/（OD阴性-OD空白）]×100%，相对增敏率=样品增敏率/罗格列酮钠增敏率×100%。

试验结果

试验结果见表1

表1. 12-苯基-小檗碱衍生物相对胰岛素抵抗的HepG2细胞的增敏作用

表1 显示了在HepG2细胞胰岛素抵抗模型当中，本发明的部分化合物与阳性对照罗格列酮钠对葡萄糖转运的促进效果对比。细胞水平上的筛选发现，在药物浓度10 μm/ml的浓度下，试验的所有化合物均有一定程度的胰岛素抵抗逆转活性，且比阳性对照罗格列酮更好。其中化合物12-(4-氟苯基)-小檗红碱表现出得活性最好，达到罗格列酮的3.87倍。说明本发明具有逆转脂肪细胞抵抗胰岛素，促进其葡萄糖吸收的作用。

实验结论

在HepG2细胞胰岛素抵抗模型中，本发明的小檗碱12-位衍生物，对抵抗胰岛素的HepG2细胞的葡萄糖吸收均有不同程度的促进作用。表明该类化合物可用于治疗由胰岛素低糖引起的糖尿病、肥胖症、脂肪肝及其并发症。

Claims

1.结构如下通式（I）所示的小檗碱12-衍生物或其生理上可接受的盐，其中R¹为氢，C_1~10的烷烃或不饱和烃基；R²为无取代基团的芳基或取代芳基

。

2.根据权利要求1所述的一种通式（I）的12-取代苯基小檗碱衍生物或其生理上可接受的盐，其特征在于：所述其中R¹为链长为C_1~10的饱和直链烷烃或主链长为C_1~10的饱和支链烷烃。

3.根据权利要求1所述的一种通式（I）的12-取代苯基小檗碱衍生物或其生理上可接受的盐，其特征在于：所述其中R¹为链长为C_1~10的不饱和直链烷烃或支链烷烃，其中包括烯烃和炔烃。

4.根据权利要求1所述的一种通式（I）的12-取代苯基小檗碱衍生物或其生理上可接受的盐，其特征在于：所述R²为无取代基团的芳基或被官能团取代的芳基。

5.根据权利要求4所述的一种通式（I）的12-取代苯基小檗碱衍生物或其生理上可接受的盐，其特征在于：所述的芳基为苯环或者其他芳杂环。

6.根据权利要求4所述的一种通式（I）的12-取代苯基小檗碱衍生物或其生理上可接受的盐，其特征在于：所述的芳环取代基为1-3个。

7.根据权利要求6所述的一种通式（I）的12-取代苯基小檗碱衍生物或其生理上可接受的盐，其特征在于：所述的芳环取代基选自C_1~4烃基、C_1~4烷氧基、C_1~4烷酰基、C_1~4烷酰氧基、C_1~4烷磺酰基、C_1~4酰胺、C_1~4磺酰胺、卤素、三氟甲基、硝基、氰基、烷氨基、氨基、羟基、羧基中的1个或者多个。

8.本发明的另一目的是提供包括治疗有效剂量的权利要求1-7所述的12-取代苯基小檗碱衍生物或其生理上可接受的盐的药物组合。

9.本发明的一目的是提供上述小檗碱12-位衍生物或其生理上可接受的盐在制备用于治疗由胰岛素抵抗引起的糖尿病、肥胖症、脂肪肝及其并发症的药物中的用途。

10.本发明的再一目的是提供包括治疗有效剂量的小檗碱12-位衍生物或其生理上可接受的盐的药物组合物在制备用于治疗由胰岛素低糖引起的糖尿病、肥胖症、脂肪肝及其并发症的药物中的用途。