CN106841416A - 一种检测五氯酚钠残留的方法及应用 - Google Patents

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韩肖
周凯
陈雷
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Abstract

本发明公开了一种检测五氯酚钠残留的方法，属于药物检测技术领域。所述检测五氯酚钠残留的方法是利用硫酸和正己烷提取样品中的五氯酚钠残留，之后使用高效液相色谱质谱联用仪检测；所述硫酸溶液的浓度为6％。本发明的有益效果是：本发明方法适用于多种基质五氯酚钠残留的检测，所使用的试剂成本低、毒性小，能够有效的去除杂质，简化操作步骤；采用高效液相色谱‑串联质谱法进行检测，相比于单一的高效液相色谱，具有灵敏度高，重复性好，检测限低的优势。

Description

一种检测五氯酚钠残留的方法及应用
技术领域
本发明属于药物检测技术领域，具体涉及一种五氯酚钠残留的检测方法及应用。
背景技术
五氯酚钠作为一种除草杀虫剂，可经由呼吸、皮肤接触或误食导致人员严重伤害或死亡。目前检测五氯酚钠残留所使用的方法为气相、气质、比色法等，在这些方法中有使用乙酸酐-吡啶溶液衍生剂，4-氨基安替比林作为反应试剂，前处理操作繁琐，检出限高，成本大，目前急需一种高效、准确的方法来进行五氯酚钠的检测。
发明内容
为了解决现有技术中的问题，本发明采取的技术方案是：
一种检测五氯酚钠残留的方法，利用硫酸和正己烷提取样品中的五氯酚钠残留，之后使用高效液相色谱质谱联用仪检测；所述硫酸溶液的浓度为6％。
在上述方案的基础上，所述检测五氯酚钠残留的方法步骤如下：
1)提取纯化
精确称量5.00g样品，加入15mL 6％硫酸水溶液，再加入20mL正己烷，超声20min，加入5gNaCl，振荡1min，4000r/min离心5min，将上清液于梨形瓶中旋蒸至干，再加入10mL8％三乙胺乙腈水溶液复溶；所述三乙胺乙腈为三乙胺和乙腈按7∶3的体积比混合而成；
2)净化柱净化
用2mL甲醇和2mL水活化MAX净化柱，将溶解在三乙胺乙腈水溶液中的样品过MAX净化柱，分别用5mL 5％氨水和5mL甲醇淋洗净化柱，减压抽干，最后用5mL 5％甲酸甲醇溶液洗脱，接收的洗脱液氮吹至干后，用1mL甲醇复溶，过0.22μm尼龙滤膜，待测；
3)高效液相色谱质谱联用仪检测
色谱参数：色谱柱：Agilent EclipsePlus C18 RRHD 1.8μm；2.1mm*100mm；柱温：40℃；流速：0.4mL/min；进样量：2μL；流动相：A：5mM乙酸铵0.1％甲酸水，B：甲醇；
质谱参数：离子源：ESI源；离子源温度：325℃；气体流速：10L/min；喷嘴压力：45psi；辅助加热器温度：350℃；辅助加热器流量：11L/min。
在上述方案的基础上，所述检测五氯酚钠残留的方法应用于检测动物源性食品中五氯酚钠的残留。
在上述方案的基础上，所述动物源性食品为肌肉、蛋类、乳类和肾脏。
本发明的有益效果：
本发明所要检测的五氯酚钠在基体中是以五氯酚离子的状态存在，提取过程中加入6％硫酸水溶液可使基质水溶液呈现酸性，使五氯酚钠由离子状态变成分子状态，成为非极性物质；由于正己烷作为非极性溶剂，根据相似相溶的原理可以作为提取溶剂，文献中有的采用环己烷与乙酸乙酯的混合体作为提取溶剂，以乙酸酐吡啶作为衍生剂，这种方法的成本高，且乙酸酐对质谱损害很大，不利于定量定性分析；旋蒸至干后加入8％三乙胺可使目标物成离子状态，乙腈水溶液可将附着在旋干瓶上的目标物清洗下来，为下一步净化做准备；固相萃取中采用的MAX净化柱为强阴离子交换柱，五氯酚钠在碱性环境中为阴离子，当五氯酚钠通过MAX净化柱时，可与MAX上的氨基结合，杂质从而流下去，达到净化的目的。
相比于其他方法的单一基质，本方法适用于动物源性食品检测；该方法使用正己烷提取，操作简便；使用MAX固相萃取柱净化，选择性强，回收率高，有效去除杂质，相比于其他方法如采用浓硫酸净化及衍生的方法，简化操作步骤，既省时省力，又减少了对环境的污染；使用高效液相色谱质谱联用仪，采用MRM采集方法，相比于其他色谱方法，具有灵敏度高，重复性好，检测限低的优势，并且大大减少杂质干扰。
附图说明
图1五氯酚钠高效液相质谱图，其中纵坐标为响应，横坐标为m/z。
图2五氯酚钠定量定性离子明细，其中纵坐标为响应，横坐标为保留时间。
图3五氯酚钠保留时间的测定，其中纵坐标为响应，横坐标为保留时间。
图4五氯酚钠的定量限测定，其中纵坐标为响应，横坐标为保留时间，图上四部分分别代表4个子离子的S/N。
图5五氯酚钠的标准曲线，其中纵坐标为峰面积响应，横坐标为五氯酚钠浓度。
具体实施方式
在本发明中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。
下面结合具体实施例，并参照数据进一步详细的描述本发明。以下实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。
实施例
1.标准溶液的配制
1.1储备液的配制
准确称量10.00mg五氯酚钠，溶解到甲醇中，定容到10mL，作为1000μg/mL的储备液(实际浓度应乘以五氯酚钠的纯度)，置于4℃冷藏保存；
1.2标准中间液的配制
准确量取1mL五氯酚钠储备液，溶解到甲醇中，定容到10mL，作为100μg/mL的标准中间液，置于4℃冷藏保存；
1.3标准工作曲线的配制
用标准中间液配制成1、2、5、10、20ng/mL的标液作为工作曲线用的标准溶液。
2.样品处理
2.1提取纯化
精确称量5.00g样品，加入15mL 6％硫酸水溶液，再加入20mL正己烷，超声20min，加入5gNaCl，振荡1min，4000r/min离心5min，将上清液于梨形瓶中旋蒸至干，再加入10mL8％三乙胺乙腈水溶液复溶；所述三乙胺乙腈为三乙胺和乙腈按7∶3的体积比混合而成；
2.2净化柱净化
用2mL甲醇和2mL水活化MAX净化柱，将溶解在三乙胺乙腈水溶液中的样品过MAX净化柱，分别用5mL 5％氨水和5mL甲醇淋洗净化柱，减压抽干，最后用5mL 5％甲酸甲醇溶液洗脱，接收的洗脱液氮吹至干后，用1mL甲醇复溶，过0.22μm尼龙滤膜，待测；
3.高效液相色谱质谱联用仪检测
使用的高效液相色谱质谱联用仪为Agilent LC-MSMS 1290/6460。
色谱参数：色谱柱：Agilent EclipsePlus C18 RRHD 1.8μm；2.1mm*100mm；柱温：40℃；流速：0.4mL/min；进样量：2μL；流动相：A：5mM乙酸铵0.1％甲酸水，B：甲醇；流动相的梯度如表1所示：
表1流动相的梯度
时间 甲醇浓度％
0.00 40
1.00 40
3.00 100
5.00 100
5.01 40
6.00 40
质谱参数：离子源：ESI源；离子源温度：325℃；气体流速：10L/min；喷嘴压力：45psi；辅助加热器温度：350℃；辅助加热器流量：11L/min。
4.结果及分析
4.1专属性
如图1所示，1ppm五氯酚钠上机，通过质谱优化各得到4个离子对，纵坐标为响应，横坐标为m/z。
五氯酚钠定量定性离子明细如图2所示，其中纵坐标为响应，横坐标为保留时间。
五氯酚钠的质谱结果如表2所示：
表2质谱结果
4.2保留时间
20ppb五氯酚钠通过C18色谱柱分离，确定保留时间，如图3所示，保留时间约为3.942min，且色谱的峰形较佳，无干扰峰出现。
4.3检出限
在基质中添加相当于样品含有1.0μg/kg的标准品，经前处理上机检测，计算其信噪比(S/N)＞10，如图4所示。该方法测得的检出限为1.0μg/kg。
4.4标准曲线
精密吸取五氯酚钠标准品，用50％甲醇溶液稀释成系列浓度为1，2，5，10，20μg/L标准溶液，分别进样测定，以峰面积响应为纵坐标，氟苯尼考胺浓度为横坐标，绘制标准曲线如图5所示，得到五氯酚钠的回归方程为Y＝8362.689X-1330.1913，R2＝0.9996，由相关系数可见，在1ng/mL～20ng/mL标准曲线线性范围内，UPLC-MSMS法测定线性关系良好，此标准曲线可以用于准确定量。
4.5空白样品添加回收
空白样品添加回收如表3所示：
表3空白样品的添加回收
添加回收选取市场上牛肉、猪肉、猪肝、猪肾、鸡蛋、牛奶、虾做质控实验，回收均在70％-90％之间，方法稳定性良好。
5.结论
通过运用UPLC-LCMSMS法对动物源基体中的五氯酚钠进行测定，确定用6％硫酸水溶液和正己烷进行提取，MAX小柱进行净化，该方法使五氯酚钠色谱峰达到基线分离，峰形良好，检测限低，灵敏度高，方法回收稳定，本研究为动物源基质中的五氯酚钠残留量的测定建立了一种可靠地分析方法。

Claims (4)

1.一种检测五氯酚钠残留的方法，其特征在于：利用硫酸和正己烷提取样品中的五氯酚钠残留，之后使用高效液相色谱质谱联用仪检测；所述硫酸溶液的浓度为6％。
2.根据权利要求1所述检测五氯酚钠残留的方法，其特征在于：步骤如下：
1)提取纯化
精确称量5.00g样品，加入15mL 6％硫酸水溶液，再加入20mL正己烷，超声20min，加入5gNaCl，振荡1min，4000r/min离心5min，将上清液于梨形瓶中旋蒸至干，再加入10mL 8％三乙胺乙腈水溶液复溶；所述三乙胺乙腈为三乙胺和乙腈按7∶3的体积比混合而成；
2)净化柱净化
用2mL甲醇和2mL水活化MAX净化柱，将溶解在三乙胺乙腈水溶液中的样品过MAX净化柱，分别用5mL 5％氨水和5mL甲醇淋洗净化柱，减压抽干，最后用5mL 5％甲酸甲醇溶液洗脱，接收的洗脱液氮吹至干后，用1mL甲醇复溶，过0.22μm尼龙滤膜，待测；
3)高效液相色谱质谱联用仪检测
色谱参数：色谱柱：Agilent EclipsePlus C18 RRHD 1.8μm；2.1mm*100mm；柱温：40℃；流速：0.4mL/min；进样量：2μL；流动相：A：5mM乙酸铵0.1％甲酸水，B：甲醇；
质谱参数：离子源：ESI源；离子源温度：325℃；气体流速：10L/min；喷嘴压力：45psi；辅助加热器温度：350℃；辅助加热器流量：11L/min。
3.根据权利要求1或2所述检测五氯酚钠残留方法的应用，其特征在于：用于检测动物源性食品中五氯酚钠的残留。
4.根据权利要求3所述检测五氯酚钠残留方法的应用，其特征在于：所述动物源性食品为肌肉、蛋类、乳类和肾脏。
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