CN106822915A

CN106822915A - 一种用于治疗类风湿关节炎的姜黄素透明质酸纳米胶束及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN106822915A
Application number: CN201710021245.6A
Authority: CN
Inventors: 范增杰; 李�杰; 刘斌
Original assignee: Lanzhou University
Current assignee: Lanzhou University
Priority date: 2017-01-12
Filing date: 2017-01-12
Publication date: 2017-06-13
Anticipated expiration: 2037-01-12
Also published as: CN106822915B

Abstract

本发明公开了一种用于治疗类风湿关节炎的姜黄素透明质酸纳米胶束，是将姜黄素和透明质酸溶液通过酯化反应形成复合物，在水溶液中通过亲疏水作用力自组装形成纳米胶束；并提供了其制备方法和应用。本发明的有益效果为：本发明应用纳米技术，制备透明质酸姜黄素纳米胶束，用于治疗类风湿性关节炎，该方法制备简单，无特殊设备要求，且成本低廉；本发明药物具有良好的生物相容性及体内无毒副作用；药物还具有明显的关节润滑及保护、抗炎症、抗水肿的作用，治疗类风湿性关节炎2周后，可完全恢复肿胀关节至原来状态，且关节组织面保持正常，同传统治疗药物相比，该药物能大大缩短愈合周期，提高愈合效果。

Description

一种用于治疗类风湿关节炎的姜黄素透明质酸纳米胶束及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及生物医用材料技术领域，具体涉及一种用于治疗类风湿关节炎的姜黄素透明质酸纳米胶束及其制备方法和应用。

背景技术

类风湿性关节炎是一种以关节病变为主的慢性全身自身免疫性疾病，主要临床表现为关节肿痛，继而导致关节软骨和骨质破坏，最终导致关节僵直、畸形和功能障碍。世界上大约有1%的人患有这种疾病，每年有超过3000000的新病例被诊断。类风湿性关节炎的病因，目前仍不清楚，可能与细胞因子（IL-1、TNF-α、IL-6、IL-8）、细胞粘附分子、基质金属蛋白酶等有关。类风湿性关节炎的治疗主要集中在减轻关节疼痛和肿胀，减少骨畸形，恢复关节的正常生理功能。目前类风湿性关节炎主要通过非特异性缓解对症疗法进行治疗，包括持续使用非甾体类抗炎药（NSAIDs），糖皮质激素，对症治疗的抗风湿药（DMARDs）和生物反应修饰剂。尽管治疗方法越来越多，但多数患者只有部分症状缓解，治疗效果并不充分。而且，长期应用非甾体类抗炎药物、类固醇甾体类药物会产生多种不良反应及副作用，包括胃肠道损害，肝损伤、感染和心力衰竭等。此外，有研究应用如肿瘤坏死因子（TNF-α）阻断剂（英夫利昔单抗和阿达木单抗，依那西普）、IL-1（anakinra）和IL-6（tocilizumab）抑制剂治疗类风湿性关节炎，但昂贵的价格限制了它们的应用。因此，有必要找到一种有效、低成本、安全的抗类风湿性关节炎药物。

姜黄素是从姜科类植物的根中提取的一种多酚类物质，具有抗炎、抗菌及抗肿瘤等诸多特效，然而其在水中的溶解性低且具有光不稳定性，降低了其生物利用率，影响了其临床使用效果。

发明内容

本发明的目的就是针对上述现有技术中治疗类风湿性关节炎药物治疗效果不佳，易引起不良反应及副作用的缺陷，提供了一种低成本、高效率、人性化的用于治疗类风湿关节炎的姜黄素透明质酸纳米胶束及其制备方法和应用，该药物具有良好的生物相容性及无体内毒性，能够较快的促进类风湿关节炎的愈合，同时能够对关节起到润滑、保护的作用。

为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为：一种用于治疗类风湿关节炎的姜黄素透明质酸纳米胶束，是将姜黄素和透明质酸溶液通过酯化反应形成复合物，在水溶液中通过亲疏水作用力自组装形成纳米胶束。

进一步的，上述的一种用于治疗类风湿关节炎的姜黄素透明质酸纳米胶束，所述姜黄素透明质酸纳米胶束中，姜黄素与透明质酸溶液的重量比为（0.18-0.72）:1。

进一步的，上述的一种用于治疗类风湿关节炎的姜黄素透明质酸纳米胶束，是将4-二甲基氨基吡啶DMAP作为催化剂，二环己基碳二亚胺作为脱水剂，促使姜黄素和透明质酸发生酯化反应将姜黄素接枝到透明质酸的表面，反应时间为24小时到48小时。

进一步的，上述的一种用于治疗类风湿关节炎的姜黄素透明质酸纳米胶束，所述4-二甲基氨基吡啶DMAP的用量为：4-二甲基氨基吡啶DMAP与姜黄素的摩尔比为（1-8）:1；所述二环己基碳二亚胺的用量为：二环己基碳二亚胺与4-二甲基氨基吡啶DMAP的质量比为1:2。

进一步的，上述的一种用于治疗类风湿关节炎的姜黄素透明质酸纳米胶束，所述透明质酸溶液的溶剂为强极性溶剂甲酰胺、丙酮、二甲基甲酰胺或二甲基亚砜，溶解温度为30-60℃，时间为24 h到48 h，透明质酸溶液的终浓度为1-3mg/mL。

进一步的，上述的一种用于治疗类风湿关节炎的姜黄素透明质酸纳米胶束，所述姜黄素透明质酸纳米胶束为淡黄色透明溶液，粒径分布为141-220 nm，Zeta电位为-15～-30mV，包封率为90-95%，药物释放量为65-85%。

本发明的第二个目的是提供了上述一种用于治疗类风湿关节炎的姜黄素透明质酸纳米胶束的制备方法，包括以下步骤：

1）将透明质酸溶解于除水的强极性溶剂甲酰胺、丙酮、二甲基甲酰胺或二甲基亚砜溶液中，配成1-3mg/mL的透明质酸溶液，然后加入10-25 mL二甲基亚砜溶液，在磁力搅拌下充分溶解，30-60℃恒温水浴24-48 h；

2）将步骤1）得到的透明质酸溶液在氮气下纯化30分钟，以去除溶液中氧气；

3）将4-二甲基氨基吡啶DMAP和二环己基碳二亚胺，分别加入步骤2）得到的透明质酸溶液中充分溶解；4-二甲基氨基吡啶DMAP的用量为：4-二甲基氨基吡啶DMAP与姜黄素的摩尔比为（1-8）:1；二环己基碳二亚胺的用量为：二环己基碳二亚胺与4-二甲基氨基吡啶DMAP的质量比为1:2；

4）将18-72 mg姜黄素溶解于10 mL 二甲基亚砜溶液中，制备姜黄素溶液；

5）将步骤4）制备得到的姜黄素溶液在氮气保护下，逐滴加入步骤3）得到的透明质酸溶液中，搅拌24 h，得到含有接枝姜黄素的透明质酸溶液；

6）应用透析膜对步骤5）得到的含有接枝姜黄素的透明质酸溶液进行水透析，每天更换水溶液，并实时观察溶液颜色的变化，当溶液颜色由红色（二甲基亚砜、甲酰胺为碱性溶剂,引起姜黄素颜色变为红色）变为淡黄色（中性）时，表明未反应的化合物和有机试剂完全去除；

7）将步骤6）制备出的姜黄素透明质酸纳米胶束溶液进行冷冻干燥，得到姜黄素透明质酸纳米胶束粉末。

本发明的第三个目的是提供了上述一种用于治疗类风湿关节炎的姜黄素透明质酸纳米胶束在制备用于治疗类风湿关节炎的药物中的应用。

进一步的，上述的应用，所述姜黄素透明质酸纳米胶束的有效浓度为21μg-336μg/mL，疗程为2周。

1. 制备透明质酸姜黄素纳米胶束的具体方案为：

（1）将一定量的透明质酸溶解于除水的甲酰胺溶液中，配成1-3mg/mL的透明质酸，然后加入10-25 mLDMSO溶液，在磁力搅拌下充分溶解，30-60℃恒温水浴24-48 h。

（2）将得到的溶液在氮气下纯化30分钟，以去除溶液中氧气。

（3）将一定量的4-二甲基氨基吡啶(DMAP)（DMAP/姜黄素摩尔比为1-8:1）和二环己基碳二亚胺（二环己基碳二亚胺与DMAP的质量比为1:2），分别加入上述溶液中充分溶解。

（4）将18-72 mg姜黄素溶解于10 mL DMSO中，制备姜黄素溶液。

（5）将制备成的姜黄素溶液在氮气保护下，逐滴加入上述溶液中，搅拌24 h，得到含有接枝姜黄素的透明质酸溶液。

（6）应用透析膜对上述（5）中得到的溶液进行水透析，每天更换水溶液直到未反应的化合物和有机试剂完全去除。

（7）制备出透明质酸姜黄素纳米胶束溶液进行冷冻干燥，得到纳米胶束粉末。

2. 姜黄素透明质酸纳米胶束用于细胞毒性测试的具体方案：

（1）受试对象：

用酶消化法分离获得的牛关节软骨细胞。

（2）试验方法：

将获得的牛软骨细胞接种于含DMEM/F-12添加10%胎牛血清进行细胞培养。将培养的细胞稀释成浓度为5×10³个/毫升，将100μL加入到96孔板，培养24 h。取100μL 的浓度分别为21μg/mL、42μg/mL、84μg/mL、168μg/mL、336μg/mL的透明质酸姜黄素纳米胶束加入到96孔板，对照组只加培养液。分别培养24h、48h、72h后，将20μL MTT溶液加入到96孔板的孔内，再培养4 h，丢弃上层溶液，加入20μL DMSO溶解。用酶标仪记录该溶液的吸光度。进行三个平行实验，将数据进行统计分析。

3. 姜黄素透明质酸纳米胶束用于以下药效学试验的具体方案：

（1）受试对象：

雌性近交系Wistar大鼠，6至8周龄，体重150至180g，购于兰州大学生物医学实验中心。应用完全弗氏佐剂和Ⅱ型胶原诱导建立类风湿性关节炎大鼠动物模型。

（2）试验方法：

将Wistar大鼠分组为正常对照组(8只)，将建立的的类风湿性关节炎大鼠按治疗方式分为姜黄素组(8只)、透明质酸组(8只)、透明质酸姜黄素纳米胶束组(8只)、生理盐水组(8只)，其中姜黄素组、透明质酸组、透明质酸姜黄素纳米胶束组药物浓度均为21-336μg/mL，治疗两周。

针对姜黄素生物利用率低的问题，本发明采用纳米胶束技术，利用纳米胶束小的粒径及高的载药量的特性，以改善姜黄素存在的生物利用率低的问题。本发明选用细胞外基质的主要成分—透明质酸，作为姜黄素的药物载体，构建新型的抗类风湿关节炎的纳米胶束。透明质酸具有非常好的亲水性和溶解率，作为药物载体可以提高姜黄素的溶解率。除此之外，研究证实透明质酸具有很好的润滑特性，能有效缓解由于软骨破坏引起的摩擦力升高而造成的软骨磨损问题。

本发明开发的治疗类风湿关节炎的纳米胶束，利用亲疏水性自组装成纳米胶束，其制备方法简单，无需特殊设备，成本低。该胶束具有很好的生物相容性，且能促进软骨细胞的增殖，对损伤软骨具有一定的修复作用。该胶束对于类风湿关节炎的治疗不同于传统的抗炎方法，不仅具有抗炎作用，对关节还具有一定的润滑保护作用，因此该药克服了传统类风湿治疗药物存在的不足。

本发明提供的一种用于治疗类风湿关节炎的姜黄素透明质酸纳米胶束及其制备方法和应用，其有益效果如下：

1、本发明应用酯化反应将透明质酸和姜黄素进行交联，在水溶液中自组装形成透明质酸姜黄素纳米胶束，解决了姜黄素在水溶液中溶解度低，光不稳定的问题，提高了姜黄素的生物利用率；

2、本发明制备的纳米胶束用于治疗类风湿性关节炎大鼠动物模型，给药1周后即有治疗效果，经过2周的治疗，便有效的降低了关节肿胀，缓解了关节功能障碍，治疗周期短，采用本发明含有姜黄素的化合物用于治疗类风湿性关节炎无毒副作用；

3、本发明的纳米胶束中含有透明质酸，是一种高分子粘多糖，结构简单，性质稳定，具有润滑、抗摩擦及缓冲吸震的良好的作用，其润滑作用能减小关节间的摩擦，从而减轻类风湿性关节的骨质破坏，亦可调节血管壁的通透性，减轻关节水肿，具有治疗类风湿性关节炎的作用；

4、本发明的纳米胶束中含有姜黄素，具有良好的抗炎，抗水肿作用，并通过调节降低血清中TNF-α、IL-1和VEGF的表达，降低与类风湿性关节炎发病进展有关的激活核因子B(NF-κB)的基因转录活性，抑制前列腺素E2 (PGE2)、COX-2和MMP的表达，从而抑制炎症反应，减轻组织水肿，具有治疗类风湿性关节炎的作用；

5、本发明中的姜黄素和透明质酸成分对于治疗类风湿性关节炎具有协同治疗作用，能够同时起到抗炎消肿和关节润滑保护的双重作用。

附图说明

图1为透明质酸姜黄素纳米胶束制备的化学反应方程式。

图2为透明质酸（HA)、姜黄素（Cur）、透明质酸姜黄素纳米胶束（HA/Cur）的红外光谱（图2a)及透明质酸姜黄素纳米胶束（HA/Cur)的紫外-可见吸收光谱（图2b）。

图3为透明质酸姜黄素纳米胶束（HA/Cur）的透射电镜照片（图3a、图3b)，图3b插图为局部放大的透明质酸姜黄素纳米胶束（HA/Cur），图3c为透明质酸姜黄素纳米胶束（HA/Cur）水溶液粒径和粒径分布的动态光散射测量图，图3d为通过透射电镜测量的透明质酸姜黄素纳米胶束（HA/Cur）的粒径分布图。

图4为透明质酸姜黄素纳米胶束的MTT测试。

图5为大鼠踝关节能谱CT平扫VR重建。a为正常对照组，b为类风湿性关节炎动物模型组，c为透明质酸姜黄素纳米胶束组，d为透明质酸组，e为姜黄素组，f为生理盐水组。

图6为应用不同浓度的透明质酸姜黄素纳米胶束（HA/Cur）治疗前后，类风湿性关节炎大鼠动物模型大鼠踝关节的肿胀率。

图7为药物治疗前和治疗后姜黄素组（Cur）、透明质酸组（HA)、透明质酸姜黄素纳米胶束组（HA/Cur）和生理盐水组（Normal Saline)大鼠踝关节关节肿胀率图表。

图8为大鼠踝关节能谱CT平扫MPR重建图。a正常对照组，b类风湿性关节炎动物模型组，c透明质酸姜黄素纳米胶束组，d姜黄素组，e透明质酸组，f生理盐水组。

图9为大鼠踝关节病理图片 (H&E×40)。a正常对照组，b类风湿性关节炎动物模型组，c透明质酸姜黄素纳米胶束组，d姜黄素组，e透明质酸组，f生理盐水组。

图10a为正常组（Normal）、类风湿性关节炎动物模型组（RA）和透明质酸姜黄素纳米胶束组(HA/Cur)的大鼠血清中的丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶（ALP）的活性(U/L)。图10b，10c，10d为大鼠血清中TNF-α，IL-1，VEGF的测量值。

图11a为四种摩擦介质（透明质酸姜黄素纳米胶束（HA/Cur）、透明质酸（HA)、生理盐水（Normal Saline)和姜黄素（Cur））的摩擦曲线和相应的平均摩擦系数（图11b)。

图12为不同摩擦介质下，摩擦表面磨痕的电镜图片（a）摩擦介质为生理盐水，（b）为透明质酸，（c）为姜黄素，（d）透明质酸姜黄素纳米胶束。

具体实施方式

实施例1：制备透明质酸姜黄素纳米胶束：

（1）将100mg透明质酸溶解于50mL甲酰胺溶液，然后加入25 mLDMSO溶液，在磁力搅拌下充分溶解，60℃恒温水浴24 h。

（3）将203mg4-二甲基氨基吡啶(DMAP)和101.5 mg二环己基碳二亚胺，分别加入上述溶液中充分溶解。

（4）将72 mg姜黄素溶解于10 mL DMSO中，制备姜黄素溶液。

实施例2：制备透明质酸姜黄素纳米胶束：

（1）将100 mg透明质酸溶解于50 mL甲酰胺溶液，然后加入25mL DMSO溶液，在磁力搅拌下充分溶解，60℃恒温水浴24 h。

（3）将101.5mg4-二甲基氨基吡啶(DMAP)和50.75mg二环己基碳二亚胺，分别加入上述溶液中充分溶解。

（4）将36 mg姜黄素溶解于5 mL DMSO中，制备姜黄素溶液。

实施例3：制备透明质酸姜黄素纳米胶束：

（1）将100mg透明质酸溶解于50 mL甲酰胺溶液，然后加入25 mLDMSO溶液，在磁力搅拌下充分溶解，60℃恒温水浴24 h。

（3）将50.75mg4-二甲基氨基吡啶(DMAP)和25.38mg二环己基碳二亚胺，分别加入上述溶液中充分溶解。

（4）将18 mg姜黄素溶解于2.5 mL DMSO中，制备姜黄素溶液。

实施例4：制备透明质酸姜黄素纳米胶束：

（1）将100 mg透明质酸溶解于100 mL甲酰胺溶液，然后加入25 mL DMSO溶液，在磁力搅拌下充分溶解，60℃恒温水浴24 h。

（3）将203 mg 4-二甲基氨基吡啶(DMAP)和101.5 mg二环己基碳二亚胺，分别加入上述溶液中充分溶解。

（4）将72 mg姜黄素溶解于10 mL DMSO中，制备姜黄素溶液。

实施例5：制备透明质酸姜黄素纳米胶束：

（1）将100 mg透明质酸溶解于30 mL甲酰胺溶液，然后加入25 mL DMSO溶液，在磁力搅拌下充分溶解，60℃恒温水浴24 h。

（4）将72 mg姜黄素溶解于10 mL DMSO中，制备姜黄素溶液。

结果：

1.由图1可明确透明质酸姜黄素纳米胶束化学反应方程式。姜黄素上的羟基在反应条件下与透明质酸上的羧基可形成酯键。

2.图2为透明质酸（HA)、姜黄素（Cur）、透明质酸姜黄素纳米胶束（HA/Cur）的红外光谱。透明质酸在1412 cm^-1的羧基峰消失，在1735 cm^-1处出现一个新的酯键的峰（图2a)。透明质酸姜黄素纳米胶束（HA/Cur)的紫外-可见吸收光谱，同姜黄素的吸收峰相比，复合物的峰发生了明显的蓝移。由图2可知成功合成了透明质酸姜黄素纳米胶束。

3.图3为透明质酸姜黄素纳米胶束（HA/Cur）的透射电镜照片（图3a、图3b)，图3b插图为局部放大的透明质酸姜黄素纳米胶束（HA/Cur）。图3c为透明质酸姜黄素纳米胶束（HA/Cur）水溶液粒径和粒径分布的动态光散射测量图，图3d为通过透射电镜测量的透明质酸姜黄素纳米胶束（HA/Cur）的粒径分布图。表明合成的复合物为纳米胶束，其粒径为164 nm。

实施例6：

本实施方式将姜黄素透明质酸纳米胶束用于细胞毒性测试：

（1）受试对象：

用酶消化法分离获得的牛关节软骨细胞。

（2）试验方法：

将获得的牛软骨细胞接种于含DMEM/F-12添加10%胎牛血清进行细胞培养。将培养的细胞稀释成浓度为5×10³个/毫升，将100μL加入到96孔板，培养24 h。取100μL的浓度分别为21μg/mL、42μg/mL、84μg/mL、168μg/mL、336μg/mL的透明质酸姜黄素纳米胶束加入到96孔板，对照组只加培养液。分别培养24h、48h、72h后，将20μL MTT溶液加入到96孔板的孔内，再培养4 h，丢弃上层溶液，加入20μL DMSO溶解。用酶标仪记录该溶液的吸光度。进行三个平行实验，将数据进行统计分析。

结果：

由图4可知，21μg/mL、42μg/mL、84μg/mL、168μg/mL、336μg/mL的透明质酸姜黄素纳米胶束在第24h、48h、72h均可促进牛软骨细胞增殖生长，表明透明质酸姜黄素纳米胶束对牛软骨细胞无细胞毒性且具有一定的软骨修复功能。

实施例7：

本实施方式将姜黄素透明质酸纳米胶束用于以下药效学试验：

（1）受试对象：

（2）试验方法：

将Wistar大鼠分组为正常对照组(8只)，将建立的的类风湿性关节炎大鼠按治疗方式分为姜黄素组(8只)、透明质酸组(8只)、透明质酸姜黄素纳米胶束组(8只)、生理盐水组组(8只)，其中姜黄素组、透明质酸组、透明质酸姜黄素纳米胶束组药物浓度均为336μg/mL，治疗两周。

实施例8：

（1）受试对象：

雌性近交系Wistar大鼠，6至8周龄，体重150至180 g，购于兰州大学生物医学实验中心。应用完全弗氏佐剂和Ⅱ型胶原诱导建立类风湿性关节炎大鼠动物模型。

（2）试验方法：

将Wistar大鼠分组为正常对照组(8只)，将建立的的类风湿性关节炎大鼠按治疗方式分为姜黄素组(8只)、透明质酸组(8只)、透明质酸姜黄素纳米胶束组(8只)、生理盐水组组(8只)，其中姜黄素组、透明质酸组、透明质酸姜黄素纳米胶束组药物浓度均为64μg/mL，治疗两周。

结果：

1.透明质酸姜黄素纳米胶束具有抗水肿作用：

由图5可知透明质酸姜黄素纳米胶束治疗两周后，大鼠关节肿胀明显减轻，与正常对照组相似。

由图6、图7可知透明质酸姜黄素纳米胶束治疗两周后，大鼠关节肿胀率减小，约为30%。表明透明质酸姜黄素纳米胶束具有较好的抗水肿作用。

由图8可知透明质酸姜黄素纳米胶束治疗两周后，大鼠关节肿胀减轻，关节间隙变小，表明透明质酸姜黄素纳米胶束具有较好的抗水肿作用。

2.透明质酸姜黄素纳米胶束有抗炎症的作用：

由图9可知a正常对照组，显示滑膜组织无炎性细胞浸润，无纤维组织增生，关节软骨表面光滑，骨纤维整齐排列，关节间隙正常；b类风湿性关节炎动物模型组，可见滑膜组织大量炎性细胞浸润，字母“S”下方为典型的血管翳，软骨及骨破坏程度较重（箭头）；c透明质酸姜黄素纳米胶束组，滑膜组织少量炎性细胞浸润，无纤维组织增生，关节软骨表面光滑，关节间隙与正常组相似；关节囊无明显肿胀，关节面略模糊；d姜黄素组、e透明质酸组、f生理盐水组，病理表现类似，可见滑膜组织中淋巴细胞严重浸润，关节明显肿胀，关节间隙增宽，关节表面毛糙，软骨及骨破坏程度较重。病理切片表明，经过透明质酸姜黄素纳米胶束治疗两周后，大鼠踝关节中性粒细胞及炎性浸润细胞明显减少，表明透明质酸姜黄素纳米胶束有抗炎作用。

3. 透明质酸姜黄素纳米胶束可降低血清中TNF-α、IL-1、VEGF含量。

由图10可知，相比于姜黄素组、透明质酸组、生理盐水组，透明质酸姜黄素纳米胶束组血清中TNF-α、IL-1和VEGF含量明显降低。通过调节降低血清中TNF-α、IL-1和VEGF的表达，降低与类风湿性关节炎发病进展有关的激活核因子B(NF-κB)的基因转录活性，抑制前列腺素E2 (PGE2)、COX-2和MMP的表达，从而抑制炎症反应，减轻组织水肿，表明透明质酸姜黄素纳米胶束具有治疗类风湿性关节炎的作用。

4. 透明质酸姜黄素纳米胶束具有减小关节摩擦的作用。

由图11、12的结果可知，透明质酸姜黄素纳米胶束有较低的摩擦系数，在关节界面间有很好的润滑作用。同其它组相比，透明质酸姜黄素纳米胶束产生细小的磨痕及细小的颗粒状的磨屑。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种用于治疗类风湿关节炎的姜黄素透明质酸纳米胶束，其特征在于，是将姜黄素和透明质酸溶液通过酯化反应形成复合物，在水溶液中通过亲疏水作用力自组装形成纳米胶束。

2.根据权利要求1所述的一种用于治疗类风湿关节炎的姜黄素透明质酸纳米胶束，其特征在于，所述姜黄素透明质酸纳米胶束中，姜黄素与透明质酸溶液的重量比为（0.18-0.72）:1。

3.根据权利要求2所述的一种用于治疗类风湿关节炎的姜黄素透明质酸纳米胶束，其特征在于，是将4-二甲基氨基吡啶DMAP作为催化剂，二环己基碳二亚胺作为脱水剂，促使姜黄素和透明质酸发生酯化反应将姜黄素接枝到透明质酸的表面，反应时间为24小时到48小时。

4.根据权利要求3所述的一种用于治疗类风湿关节炎的姜黄素透明质酸纳米胶束，其特征在于，所述4-二甲基氨基吡啶DMAP的用量为：4-二甲基氨基吡啶DMAP与姜黄素的摩尔比为（1-8）:1；所述二环己基碳二亚胺的用量为：二环己基碳二亚胺与4-二甲基氨基吡啶DMAP的质量比为1:2。

5.根据权利要求4所述的一种用于治疗类风湿关节炎的姜黄素透明质酸纳米胶束，其特征在于，所述透明质酸溶液的溶剂为强极性溶剂甲酰胺、丙酮、二甲基甲酰胺或二甲基亚砜，溶解温度为30-60℃，时间为24 h到48 h，透明质酸溶液的终浓度为1-3mg/mL。

6.根据权利要求5所述的一种用于治疗类风湿关节炎的姜黄素透明质酸纳米胶束，其特征在于，所述姜黄素透明质酸纳米胶束为淡黄色透明溶液，粒径分布为141-220 nm，Zeta电位为-15～-30mV，包封率为90-95%，药物释放量为65-85%。

7.根据权利要求1-6任一所述的一种用于治疗类风湿关节炎的姜黄素透明质酸纳米胶束的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

6）应用透析膜对步骤5）得到的含有接枝姜黄素的透明质酸溶液进行水透析，每天更换水溶液，并实时观察溶液颜色的变化，当溶液颜色由红色变为淡黄色时，表明未反应的化合物和有机试剂完全去除；

8.根据权利要求1-6任一所述的一种用于治疗类风湿关节炎的姜黄素透明质酸纳米胶束在制备用于治疗类风湿关节炎的药物中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述姜黄素透明质酸纳米胶束的有效浓度为21μg-336μg/mL，疗程为2周。