CN106754628A - 一种诱导长春花细胞分泌长春质碱的合成培养基 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种诱导长春花细胞分泌长春质碱的合成培养基，该培养基含有MS培养基的成分，同时还含有植物激素2.4‑D 2mg/L，植物激素KT 1mg/L，色氨酸50mg/L，辅酶A 3mg/L，萘普生8.4mg/L、阿司匹林0.3mg/L、布洛芬5.0mg/L。在此基础上，本发明尝试通过添加植物提取的方式以提升培养效果，具体来看，以物理压榨的方式获取玳玳花、灯盏细辛、丁香罗勒、独定子等新鲜中草药中的液体成分，直接加入至上述配方的培养基中，取得了良好的培养效果，细胞生长速度和终密度得到显著提升，同时长春质碱的分泌量也明显增长。本发明以创新性的技术改进实现了良好的技术效果，同时其成本较低、易于实现。

Description

一种诱导长春花细胞分泌长春质碱的合成培养基
技术领域
本发明涉及植物细胞培养技术，进一步涉及植物细胞的营养条件设计，具体涉及一种诱导长春花细胞分泌长春质碱的合成培养基。
背景技术
植物细胞培养技术是以离体植物细胞或原生质体为对象，以细胞量扩增和目标代谢产物累积为目的的培养工艺。对于以获得特定代谢产物为目的的细胞培养而言，其主要工艺环节不仅在于细胞量的扩增，同时，目标代谢产物的诱导合成对培养效益更为重要。在植物细胞的培养过程中，培养条件和营养条件是影响产量的最重要因素，其中培养条件是指温度、溶氧、光照、pH等环境条件的控制，而营养条件主要指植物细胞的培养基。由于在封闭培养环境中培养基是植物细胞的唯一营养来源，因此培养基的成分对植物细胞的生长水平、代谢产物类别具有极其重要的影响，尤其对于以获得特定代谢产物为目的的细胞培养而言，培养基往往是影响培养效率的关键因素。
长春花细胞的次生代谢产物中含有一百多种吲哚生物碱，20世纪50年代以来，人们发现长春花的多种次生代谢产物对急性白血病、恶性淋巴肿瘤、绒毛膜上皮癌、乳腺癌、卵巢癌、睾丸癌、淋巴肉癌、恶性黑色素癌都有很好的疗效。其中长春碱和长春新碱是目前应用最广泛的天然植物抗肿瘤药物，可用于治疗何杰金氏病、恶性淋巴肿瘤、急性白血病、绒毛上皮细胞癌等疾病，其硫酸盐已广泛应用于临床。长春质碱不仅具有抗菌止血、利尿、降血糖等作用，而且它还是抗癌药物长春碱、长春新碱等的合成前体，因此长春花具有很高的药用开发价值。目前，细胞培养技术被认为是生产长春花药用成分最有效的途径，但细胞培养中有效成分含量很低，为了更有效的生产长春花生物碱，如何提高长春花药用成分的产量已成为近年来国内外研究的热点。
发明内容
本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种诱导长春花细胞分泌长春质碱的合成培养基，以解决现有技术中长春花细胞离体培养时细胞生长缓慢的技术问题。
本发明要解决的另一技术问题是现有技术中长春花细胞离体培养时长春质碱产率较低。
为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：
一种诱导长春花细胞分泌长春质碱的合成培养基，该培养基含有MS培养基的成分，同时还含有植物激素2.4-D 2mg/L，植物激素KT 1mg/L，色氨酸50mg/L，辅酶A 3mg/L，萘普生8.4mg/L、阿司匹林0.3mg/L、布洛芬5.0mg/L。
作为优选，该培养基还含有1g/L的玳玳花压榨汁。
作为优选，该培养基还含有1g/L的灯盏细辛压榨汁。
作为优选，该培养基还含有1g/L的丁香罗勒压榨汁。
作为优选，该培养基还含有1g/L的独定子压榨汁。
作为优选，该培养基含有MS培养基的成分，同时还含有植物激素2.4-D 2mg/L，植物激素KT 1mg/L，色氨酸50mg/L，辅酶A 3mg/L，萘普生8.4mg/L、阿司匹林0.3mg/L、布洛芬5.0mg/L，玳玳花压榨汁1g/L，灯盏细辛压榨汁1g/L，丁香罗勒压榨汁1g/L，独定子压榨汁1g/L。
在以上技术方案中，所述MS培养基可以依据本领域的一般技术常识进行配制，当然也可以采用以下具体配方的MS培养基：NH4NO3 1650mg/L，KNO3 1900mg/L，CaCl2·2H2O440mg/L，MgSO4·7H2O 370mg/L，KH2PO4 170mg/L，KI 0.83mg/L，H3BO3 6.2mg/L，MnSO4·4H2O22.3mg/L，ZnSO4·7H2O 8.6mg/L，Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L，CuSO4·5H2O 0.025mg/L，CoCl2·6H2O 0.025mg/L，FeSO4·7H2O 27.8mg/L，Na2-EDTA·2H2O 37.3mg/L，肌醇100mg/L，烟酸0.5mg/L，维生素B6 0.5mg/L，维生素B1 0.1mg/L，甘氨酸2mg/L，水余量。
在以上技术方案中，玳玳花、灯盏细辛、丁香罗勒、独定子分别指其新鲜全草。本发明中所述的压榨汁，是指利用物理方法获取的各原料的新鲜汁液，包括但不限于压榨、粉碎离心等常规方法。
本发明提供了一种诱导长春花细胞分泌长春质碱的合成培养基，该培养基含有MS培养基的成分，同时还含有植物激素2.4-D 2mg/L，植物激素KT 1mg/L，色氨酸50mg/L，辅酶A 3mg/L，萘普生8.4mg/L、阿司匹林0.3mg/L、布洛芬5.0mg/L。在此基础上，本发明尝试通过添加植物提取的方式以提升培养效果，具体来看，以物理压榨的方式获取玳玳花、灯盏细辛、丁香罗勒、独定子等新鲜中草药中的液体成分，直接加入至上述配方的培养基中，取得了良好的培养效果，细胞生长速度和终密度得到显著提升，同时长春质碱的分泌量也明显增长。本发明以创新性的技术改进实现了良好的技术效果，同时其成本较低、易于实现，因此具有良好的推广前景。
具体实施方式
以下将对本发明的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。
实施例1
一种诱导长春花细胞分泌长春质碱的合成培养基，该培养基含有MS培养基的成分，同时还含有植物激素2.4-D 2mg/L，植物激素KT 1mg/L，色氨酸50mg/L，辅酶A 3mg/L，萘普生8.4mg/L、阿司匹林0.3mg/L、布洛芬5.0mg/L。
实施例2
一种诱导长春花细胞分泌长春质碱的合成培养基，该培养基含有MS培养基的成分，同时还含有植物激素2.4-D 2mg/L，植物激素KT 1mg/L，色氨酸50mg/L，辅酶A 3mg/L，萘普生8.4mg/L、阿司匹林0.3mg/L、布洛芬5.0mg/L，玳玳花压榨汁1g/L。
实施例3
一种诱导长春花细胞分泌长春质碱的合成培养基，该培养基含有MS培养基的成分，同时还含有植物激素2.4-D 2mg/L，植物激素KT 1mg/L，色氨酸50mg/L，辅酶A 3mg/L，萘普生8.4mg/L、阿司匹林0.3mg/L、布洛芬5.0mg/L，灯盏细辛压榨汁1g/L。
实施例4
一种诱导长春花细胞分泌长春质碱的合成培养基，该培养基含有MS培养基的成分，同时还含有植物激素2.4-D 2mg/L，植物激素KT 1mg/L，色氨酸50mg/L，辅酶A 3mg/L，萘普生8.4mg/L、阿司匹林0.3mg/L、布洛芬5.0mg/L，丁香罗勒压榨汁1g/L。
实施例5
一种诱导长春花细胞分泌长春质碱的合成培养基，该培养基含有MS培养基的成分，同时还含有植物激素2.4-D 2mg/L，植物激素KT 1mg/L，色氨酸50mg/L，辅酶A 3mg/L，萘普生8.4mg/L、阿司匹林0.3mg/L、布洛芬5.0mg/L，独定子压榨汁1g/L。
实施例6
一种诱导长春花细胞分泌长春质碱的合成培养基，其特征在于该培养基含有MS培养基的成分，同时还含有植物激素2.4-D 2mg/L，植物激素KT 1mg/L，色氨酸50mg/L，辅酶A3mg/L，萘普生8.4mg/L、阿司匹林0.3mg/L、布洛芬5.0mg/L，玳玳花压榨汁1g/L，灯盏细辛压榨汁1g/L，丁香罗勒压榨汁1g/L，独定子压榨汁1g/L。
实施例7
本实施例用于评价以上实施例1～6所提供的培养基作为合成培养基时对长春花细胞长春质碱产量的影响，实验结果如表1所示。
表1不同培养基作为合成培养基时对长春花细胞长春质碱产量的影响
由此可见，利用本发明所提供的培养基作为合成培养基培养长春花细胞时，对其长春质碱产量具有确切的促进作用。
以上对本发明的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明。凡在本发明的申请范围内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种诱导长春花细胞分泌长春质碱的合成培养基，其特征在于该培养基含有MS培养基的成分，同时还含有植物激素2.4-D 2mg/L，植物激素KT 1mg/L，色氨酸50mg/L，辅酶A3mg/L，萘普生8.4mg/L、阿司匹林0.3mg/L、布洛芬5.0mg/L。
2.根据权利要求1所述的一种诱导长春花细胞分泌长春质碱的合成培养基，其特征在于该培养基还含有1g/L的玳玳花压榨汁。
3.根据权利要求1所述的一种诱导长春花细胞分泌长春质碱的合成培养基，其特征在于该培养基还含有1g/L的灯盏细辛压榨汁。
4.根据权利要求1所述的一种诱导长春花细胞分泌长春质碱的合成培养基，其特征在于该培养基还含有1g/L的丁香罗勒压榨汁。
5.根据权利要求1所述的一种诱导长春花细胞分泌长春质碱的合成培养基，其特征在于该培养基还含有1g/L的独定子压榨汁。
6.根据权利要求1所述的一种诱导长春花细胞分泌长春质碱的合成培养基，其特征在于该培养基含有MS培养基的成分，同时还含有植物激素2.4-D 2mg/L，植物激素KT 1mg/L，色氨酸50mg/L，辅酶A 3mg/L，萘普生8.4mg/L、阿司匹林0.3mg/L、布洛芬5.0mg/L，玳玳花压榨汁1g/L，灯盏细辛压榨汁1g/L，丁香罗勒压榨汁1g/L，独定子压榨汁1g/L。
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