CN106727769A - 一球悬铃木树皮提取物和制备方法及医药领域的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一球悬铃木树皮提取物和制备方法及其在医药领域的应用，一球悬铃木树皮提取物包括一球悬铃木树皮三萜类成分提取物及水溶性总黄酮提取物，本发明可有效解决一球悬铃木树皮三萜类成分提取物及水溶性总黄酮提取物的制备问题，其解决的技术方案是，将一球悬铃木树皮加乙醇闪式提取，以乙酸乙酯微波萃取，萃取液回收溶剂，干燥得一球悬铃木树皮三萜类成分提取物；萃取后溶液冷冻干燥，蒸馏水溶解后依次过大孔吸附树脂柱、聚酰胺柱层析，洗脱液冷冻干燥得一球悬铃木树皮水溶性总黄酮提取物。本发明可有效将一球悬铃木树皮三萜类成分提取物用于抗真菌医药的开发及将水溶性总黄酮提取物用于抗肿瘤医药的开发，是医疗领域的重大创新。

Description

一球悬铃木树皮提取物和制备方法及医药领域的应用
技术领域
本发明属于医药领域，涉及一球悬铃木树皮提取物，特别涉及一球悬铃木树皮三萜类成分提取物及水溶性总黄酮提取物，本发明还涉及一球悬铃木树皮提取物的制备方法及医药领域的应用，特别是一球悬铃木树皮三萜类成分及水溶性总黄酮提取物的制备方法及其在医药领域的应用。
背景技术
悬铃木在植物分类学上属悬铃木科(Platanaceae)，科下仅有一个悬铃木属(Platanus)，属下有11种，原产东南欧、印度及美洲。据记载我国晋代即已引种，今陕西户县存有古树，叫祛汗树或鸠摩罗什树。现我国引入栽培的仅3种，有一球悬铃木(Platanusoccidentalis L.)、二球悬铃木(Platanus acerifolia Willd.)及三球悬铃木(Platanusorientalis L.)，南北各地有栽培，许多地方常作为行道树种植，素有“行道树之王”的美称。其中一球悬铃木原产北美洲，亦俗称美国梧桐，现广泛被引种我国北部及中部，树皮有浅沟，呈小块状剥落。目前国内对悬铃木的园林价值及其对环境的影响方面的研究较多，但对其化学成分和药用活性方面研究较少，对悬铃木属二球悬铃木树皮中的三萜类成分有初步的提取分离研究，但对一球悬铃木树皮中三萜类成分的研究未见公开报道，尤其对一球悬铃木树皮中的水溶性总黄酮及其抗肿瘤活性未见有公开报道。
发明内容
针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种一球悬铃木树皮提取物及其制备方法，一球悬铃木树皮提取物包括一球悬铃木树皮三萜类成分提取物及水溶性总黄酮提取物，本发明制备的一球悬铃木树皮提取物可在医药领域中应用，一球悬铃木树皮三萜类成分提取物可用于制备抗菌及抗炎类医药，一球悬铃木树皮水溶性总黄酮提取物可用于制备具有抗肿瘤作用的医药。
本发明解决的技术方案是，取一球悬铃木树皮，加一球悬铃木树皮质量8-20倍量的50％-80％(v/v)的乙醇，置于闪式提取器中室温提取1-5min，过滤，滤液50℃减压回收乙醇，浓缩至比重为1.10-1.20的浸膏，加入与浸膏相同质量的蒸馏水，然后用与浸膏相同质量的乙酸乙酯微波萃取3次，置于间歇微波萃取装置中进行常压萃取，每次萃取微波辐射1-5次，每次辐射时间2-5min，每次间歇时间5-20min，合并3次所得乙酸乙酯层萃取液，50℃减压回收乙酸乙酯，50℃减压干燥，即得一球悬铃木树皮三萜类成分提取物；乙酸乙酯萃取后的溶液60℃挥尽乙酸乙酯，冷冻干燥，加40℃蒸馏水使溶解，过滤，滤液放冷至室温，通过大孔吸附树脂柱，依次以蒸馏水、60％乙醇(v/v)洗脱，60％乙醇(v/v)洗脱液减压回收溶剂，挥尽乙醇，通过聚酰胺柱层析，收集洗脱液，洗脱液冷冻干燥即得一球悬铃木树皮水溶性总黄酮提取物；所述大孔吸附树脂为AB-8型大孔吸附树脂或D-101型大孔吸附树脂。
本发明制备的一球悬铃木树皮三萜类成分提取物具有抗菌及抗炎的生物活性，可用于抗菌及抗炎类医药的开发；本发明制备的一球悬铃木树皮水溶性总黄酮提取物具有抗肿瘤的生物活性，可用于抗肿瘤医药的开发。
本发明方法简单，科学有效，资源丰富，易于操作，可有效从一球悬铃木树皮中制备三萜类成分提取物及水溶性总黄酮提取物，一球悬铃木树皮三萜类成分提取物可有效用于制备抗菌及抗炎类药物，一球悬铃木树皮水溶性总黄酮提取物可有效用于制备抗肿瘤药物，开拓了一球悬铃木树皮三萜类成分及水溶性总黄酮的应用价值，具有良好的经济和社会效益。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的具体实施方式作详细说明。
本发明在具体实施中，可由以下实施例给出。
实施例1
本发明在具体实施中，其特征在于，取一球悬铃木树皮1kg，加50％乙醇(v/v)8kg，置于闪式提取器中室温提取1min，过滤，滤液50℃减压回收乙醇，浓缩至比重为1.10的浸膏，加入与浸膏相同质量的蒸馏水，然后用与浸膏相同质量的乙酸乙酯微波萃取3次，置于间歇微波萃取装置中进行常压萃取，每次萃取微波辐射1次，每次辐射时间2min，每次间歇时间5min，合并3次所得乙酸乙酯层萃取液，50℃减压回收乙酸乙酯，50℃减压干燥，即得一球悬铃木树皮三萜类成分提取物；乙酸乙酯萃取后的溶液60℃挥尽乙酸乙酯，冷冻干燥，加40℃蒸馏水使溶解，过滤，滤液放冷至室温，通过AB-8型大孔吸附树脂柱，依次以蒸馏水、60％乙醇(v/v)洗脱，60％乙醇(v/v)洗脱液减压回收溶剂，挥尽乙醇，通过聚酰胺柱层析，收集洗脱液，洗脱液冷冻干燥即得一球悬铃木树皮水溶性总黄酮提取物。
实施例2
本发明还可是，取一球悬铃木树皮5kg，加80％乙醇(v/v)100kg，置于闪式提取器中室温提取5min，过滤，滤液50℃减压回收乙醇，浓缩至比重为1.20的浸膏，加入与浸膏相同质量的蒸馏水，然后用与浸膏相同质量的乙酸乙酯微波萃取3次，置于间歇微波萃取装置中进行常压萃取，每次萃取微波辐射5次，每次辐射时间5min，每次间歇时间20min，合并3次所得乙酸乙酯层萃取液，50℃减压回收乙酸乙酯，50℃减压干燥，即得一球悬铃木树皮三萜类成分提取物；乙酸乙酯萃取后的溶液60℃挥尽乙酸乙酯，冷冻干燥，加40℃蒸馏水使溶解，过滤，滤液放冷至室温，通过D-101型大孔吸附树脂柱，依次以蒸馏水、60％乙醇(v/v)洗脱，60％乙醇(v/v)洗脱液减压回收溶剂，挥尽乙醇，通过聚酰胺柱层析，收集洗脱液，洗脱液冷冻干燥即得一球悬铃木树皮水溶性总黄酮提取物。
实施例3
取一球悬铃木树皮7kg，加65％乙醇(v/v)98kg，置于闪式提取器中室温提取2.5min，过滤，滤液50℃减压回收乙醇，浓缩至比重为1.15的浸膏，加入与浸膏相同质量的蒸馏水，然后用与浸膏相同质量的乙酸乙酯微波萃取3次，置于间歇微波萃取装置中进行常压萃取，每次萃取微波辐射3次，每次辐射时间2.5min，每次间歇时间12min，合并3次所得乙酸乙酯层萃取液，50℃减压回收乙酸乙酯，50℃减压干燥，即得一球悬铃木树皮三萜类成分提取物；乙酸乙酯萃取后的溶液60℃挥尽乙酸乙酯，冷冻干燥，加40℃蒸馏水使溶解，过滤，滤液放冷至室温，通过AB-8型大孔吸附树脂柱，依次以蒸馏水、60％乙醇(v/v)洗脱，60％乙醇(v/v)洗脱液减压回收溶剂，挥尽乙醇，通过聚酰胺柱层析，收集洗脱液，洗脱液冷冻干燥即得一球悬铃木树皮水溶性总黄酮提取物。
实施例4
取一球悬铃木树皮11kg，加65％乙醇(v/v)88kg，置于闪式提取器中室温提取1min，过滤，滤液50℃减压回收乙醇，浓缩至比重为1.15的浸膏，加入与浸膏相同质量的蒸馏水，然后用与浸膏相同质量的乙酸乙酯于微波萃取装置中萃取3次，置于间歇微波萃取装置中进行常压萃取，每次萃取微波辐射5次，每次微波辐射5min，间隔时间12min，合并3次所得乙酸乙酯层萃取液，50℃减压回收乙酸乙酯，50℃减压干燥，即得一球悬铃木树皮三萜类成分提取物；乙酸乙酯萃取后的溶液60℃挥尽乙酸乙酯，冷冻干燥，加40℃蒸馏水使溶解，过滤，滤液放冷至室温，通过D-101型大孔吸附树脂柱，依次以蒸馏水、60％乙醇(v/v)洗脱，60％乙醇(v/v)洗脱液减压回收溶剂，挥尽乙醇，通过聚酰胺柱层析，收集洗脱液，洗脱液冷冻干燥即得一球悬铃木树皮水溶性总黄酮提取物。
上述制备的一球悬铃木树皮三萜类成分提取物的总三萜含量均不低于60％(质量分数，比色法，常规测定方法，公知技术)，三萜类总成分的转移率均不低于85％；一球悬铃木树皮水溶性总黄酮提取物中总黄酮含量均不低于82％(质量分数，紫外可见分光光度法，常规测定方法，公知技术)。
上述仅是给出的几个实施例，在研制中，发明人反复多次实验，均取得了相同或相近的结果，方法可行有效，原料丰富，产品应用前景广泛，具有较高的实际应用价值，对一球悬铃木树皮三萜类成分提取物及水溶性总黄酮提取物进行反复试验均取得了满意的技术效果，相关试验资料如下：
一球悬铃木树皮三萜类成分提取物抗菌、抗炎活性实验
1.实验材料
1.1细胞和实验用菌种：肺泡上皮细胞株(A549)购于中国上海中科院细胞所；实验用菌株肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaurues)和大肠杆菌(Escherichia coli)均购于中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)。
1.2试药：一球悬铃木树皮三萜类成分提取物(本发明方法制备，总三萜含量为71.4％)，1640培养基(索莱宝公司)，胎牛血清(四季青公司)，MTT、台盼蓝、LPS(Sigma公司)，DMSO、PMA(Amresco公司)，IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-αELISA试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)，IL-23ELISA试剂盒(Elabscience)，LPS(Sigma公司，美国)。
1.3仪器设备：CO2细胞培养箱(Thermo)，倒置显微镜(ZEISS)，HS-1300-U型超净工作台(苏州安泰)、紫外分光光度计(BioMate)，SG-603生物安全柜(Baker)，酶标仪(Thermo)、超净纯水机(Milli-Q Synthesis)，洗板机(Thermo)，超低温冰箱(SANYO)。
2.研究方法
2.1抗炎研究方法
2.1.1细胞培养:肺泡上皮细胞A549培养于含10％胎牛血清，100U·mL-1青霉素，100U·mL-1链霉素，置于37℃，5％CO2培养箱中培养，每2d更换一次培养液，约每3d按1:3比例传代一次。
2.1.2 ELISA法检测细胞因子：以每孔1×104肺泡上皮细胞A549，接种培养24小时后，以孔为单位，分为正常组(加入完全培养基)、模型组(加入LPS 2μg·mL-1)，加药组(加入LPS2μg·mL-1，加一球悬铃木树皮三萜类成分提取物5μg·mL-1、10μg·mL-1、20μg·mL-1)每组设6个复孔，37℃，5％CO2培养，分别于刺激后48h后收集细胞上清，3000rpm离心10分钟，分装，-80℃保存备用。实验重复3次。利用ELISA法检测肺泡上皮细胞培养基上清中TNF-α、IL-lβ、IL-8、IL-23分泌量。
2.1.3统计学方法：采用SPSS 18.0进行统计分析。组间比较采用单因素方差分析的最小显著差法，结果以均数±标准差(s)表示。显著性水准取α＝0.05。
2.2抗菌活性试验方法
2.2.1菌悬液的制备
将肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia)、金黄色葡萄球菌(Staphyloccocusaureus)、和大肠杆菌(Escherichia coli)菌种接种于含无菌牛肉膏蛋白胨培养基的培养皿中，37℃孵育培养24h；然后取该增菌培养物，再接种于牛肉膏蛋白胨培养基中，37℃孵箱培养6h。抽取一定量培养物用无菌生理盐水调配成含菌量约为107cfu/mL的菌悬液，用显微镜进行菌落计数。
2.2.2抑菌实验
用纸片扩散法测定提取物对肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaurues)和大肠杆菌(Escherichia coli)的抗菌活性。细菌培养采用灭菌牛肉膏蛋白胨培养基和营养琼脂培养基。将一球悬铃木树皮三萜类成分提取物样品按浓度分为6组(0μg、100μg、200μg、300μg、400μg、500μg)，用CHCl3溶解，将每组样品分别注射到直径为5mm圆形滤纸上，等溶剂挥发完，将滤纸放入已接种好菌种的培养皿中进行培养，10h后观察抑菌圈情况，根据是否有抑菌圈及抑菌圈大小来判断提取物抑菌活性。试验重复3次。
3.结果
3.1抗炎实验研究结果
与正常对照组比较，2μg/mL LPS刺激A549细胞的模型组，IL-1β、IL-6、IL-8、IL-23TNF-α分泌显著增加(p<0.01)；与模型组比较，5μg组IL-1β分泌量降低模型组(p<0.05)，10μg和20μg组IL-1β分泌量显著降低(p<0.01)；5μg和10μg组IL-6分泌量降低模型组(p<0.05)，20μg组IL-6分泌量显著降低(p<0.01)；5μg组IL-1β分泌量降低模型组(p<0.05)，10μg和20μg组IL-1β分泌量显著降低(p<0.01)；5μg、10μg和20μg组IL-8分泌量显著降低(p<0.01)；5μg、10μg和20μg组IL-23分泌量显著降低(p<0.01)；5μg、10μg和20μg组TNF-α分泌量显著降低(p<0.01)。如表1。
表1一球悬铃木树皮三萜类成分提取物抗炎指标结果
注：*p＜0.05，**p＜0.01
3.2抑菌实验结果
抑菌试验结果显示(如表2)，在没有加一球悬铃木树皮三萜类成分提取物时，三组均无抑菌圈；一球悬铃木树皮三萜类成分提取物对3种细菌均有一定的抑制作用。其中，对肺炎链球菌的抑制性最强，当一球悬铃木树皮三萜类成分提取物200μg时已经显示出较强的抑菌性，且随着提取物浓度增加抑菌性增强；同样对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌有较强的抑制性，而且随着药物浓度增加抑菌性增强。
表2一球悬铃木树皮三萜类成分提取物抗菌活性指标结果
4结论
本次研究发现LPS刺激A549细胞，能够使A549分泌IL-1β、IL-6、IL-8、IL-23和TNF-α增加，使细胞出现炎症反应，一球悬铃木树皮三萜类提取物能够较好的抑制该模型IL-1β、IL-6、IL-8、IL-23和TNF-α的分泌，具有一定的抗炎作用。细胞因子具有介导或促进疾病发生发展的病理学作用。机体组织感染时，均可产生炎性因子，一些细胞因子促进炎症发展，加重炎症症状。IL-1β过度分泌会加重炎症反应及其炎症介质造成的组织损伤。IL-8是炎症性疾病的重要介质，在感染的情况下，炎症局部、血清和体液中IL-8水平均有显著增加。IL-23能够诱导幼稚CD4+T细胞分化成高致病性的Th17细胞并产生生成IL-17、IL-6和TNF-α，并引起炎症。TNF-α是机体免疫反应和炎症反应中的重要介质。
本研究通过对一球悬铃木树皮三萜类成分提取物抗菌试验发现，该提取物对肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌有较强的抑菌活性，且随着提取物浓度增加抑菌性增强。
综上所述，一球悬铃木树皮三萜类成分提取物能够较好的抑制炎症细胞炎症因子的分泌，减轻细胞炎症反应；通过抑菌实验发现一球悬铃木树皮三萜类成分提取物对肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌有很好的抑菌活性。一球悬铃木树皮三萜类成分提取物均有抗炎和抗菌活性，具有较高的实际应用价值，可作为抗炎及抗菌药物进行开发。
一球悬铃木树皮水溶性总黄酮提取物抗肿瘤活性实验
1.实验材料
1.1细胞和实验用菌种：人乳腺癌细胞(MCF-7)、结肠腺癌细胞(HCT-15)、子宫颈癌细胞(HeLa)购于中国上海中科院细胞所。
1.2试药：一球悬铃木树皮水溶性总黄酮提取物(本发明方法制备，总黄酮含量84.6％)，1640培养基(索莱宝公司)，胎牛血清(四季青公司)，MTT、台盼蓝、DMSO、PMA(Amresco公司)。
1.3仪器设备：CO2细胞培养箱(Thermo)，倒置显微镜(ZEISS)，HS-1300-U型超净工作台(苏州安泰)、紫外分光光度计(BioMate)，SG-603生物安全柜(Baker)，酶标仪(Thermo)、超净纯水机(Milli-Q Synthesis)，超低温冰箱(SANYO)。
2.研究方法
2.1细胞培养:人乳腺癌细胞(MCF-7)、结肠腺癌细胞(HCT-15)、子宫颈癌细胞(HeLa)培养于含10％胎牛血清，100U·mL-1青霉素，100U·mL-1链霉素，置于37℃，5％CO2培养箱中培养，每2d更换一次培养液，约每3d按1:3比例传代一次。
2.2肿瘤细胞抑制率实验：采用MTT法测定一球悬铃木树皮水溶性总黄酮提取物对肿瘤细胞的抑制率。选取人乳腺癌细胞(MCF-7)、结肠腺癌细胞(HCT-15)、子宫颈癌细胞(HeLa)三种肿瘤细胞，提取物浓度设置为10μg·mL-1、20μg·mL-1、40μg·mL-1、60μg·mL-1(以超纯水为溶剂)。
将对数生长期的三种肿瘤细胞以每孔1×104个细胞分别接种于96孔板，培养24小时后，以每两列为一组设置为4组，分别为正常对照组、加药组(加一球悬铃木树皮水溶性总黄酮提取物使终浓度为(10μg·mL-1、20μg·mL-1、40μg·mL-1、60μg·mL-1)继续培养48小时。每孔加入100μlMTT工作液(0.5mg/ml，即0.5％MTT)，37℃、5％CO2培养箱继续培养2-4h，轻轻抽走培养板孔内上清，每孔加入100μL DMSO，轻轻振荡10分钟，使蓝紫色沉淀充分溶解。用酶标仪在570nm波长处测定吸光值，计算细胞生长抑制率。
细胞生长抑制率＝(A0-Ax)/A0×100％
以上公式中：A0为正常对照组的吸光值，Ax为实验组的吸光值。
3.抗肿瘤实验结果
由表3可以看出，不同浓度的一球悬铃木树皮水溶性总黄酮提取物对MCF-7、HCT-15、HeLa三种肿瘤细胞均有一定的抑制作用，且随着浓度的增加，抑制作用增强。对HCT-15、HeLa的抑制作用更为明显，当提取物浓度达到20μg/ml时对HCT-15抑制率已经达到48.81％，对HeLa的抑制率已经达到51.48％已经接近半数抑制率。
表3不同浓度一球悬铃木树皮水溶性总黄酮提取物对三种肿瘤细胞抑制率
4结论
本次研究发现一球悬铃木树皮水溶性总黄酮提取物能够很好的抑制MCF-7、HCT-15、HeLa三种肿瘤细胞的增殖，抗肿瘤作用明显，且随着浓度增加抑制肿瘤细胞增殖作用增强。
综上所述，一球悬铃木树皮水溶性总黄酮提取物能够较好的抑制MCF-7、HCT-15、HeLa三种肿瘤细胞的增殖，抗肿瘤作用明显。一球悬铃木树皮水溶性总黄酮提取物有较好的抗肿瘤活性，具有较高的实际应用价值，可作为抗肿瘤药物进行开发。

Claims (8)

1.一球悬铃木树皮提取物，其特征在于，所述提取物包括一球悬铃木树皮三萜类成分提取物及一球悬铃木树皮水溶性总黄酮提取物。
2.一球悬铃木树皮提取物的制备方法，其特征在于，取一球悬铃木树皮，加一球悬铃木树皮质量8-20倍量的50％-80％(v/v)的乙醇，置于闪式提取器中室温提取1-5min，过滤，滤液50℃减压回收乙醇，浓缩至比重为1.10-1.20的浸膏，加入与浸膏相同质量的蒸馏水，然后用与浸膏相同质量的乙酸乙酯微波萃取3次，置于间歇微波萃取装置中进行常压萃取，每次萃取微波辐射1-5次，每次辐射时间2-5min，每次间歇时间5-20min，合并3次所得乙酸乙酯层萃取液，50℃减压回收乙酸乙酯，50℃减压干燥，即得一球悬铃木树皮三萜类成分提取物；乙酸乙酯萃取后的溶液60℃挥尽乙酸乙酯，冷冻干燥，加40℃蒸馏水使溶解，过滤，滤液放冷至室温，通过大孔吸附树脂柱，依次以蒸馏水、60％乙醇(v/v)洗脱，60％乙醇(v/v)洗脱液减压回收溶剂，挥尽乙醇，通过聚酰胺柱层析，收集洗脱液，洗脱液冷冻干燥即得一球悬铃木树皮水溶性总黄酮提取物；所述大孔吸附树脂为AB-8型大孔吸附树脂或D-101型大孔吸附树脂。
3.根据权利要求2所述的一球悬铃木树皮提取物的制备方法，其特征在于，取一球悬铃木树皮1kg，加50％乙醇(v/v)8kg，置于闪式提取器中室温提取1min，过滤，滤液50℃减压回收乙醇，浓缩至比重为1.10的浸膏，加入与浸膏相同质量的蒸馏水，然后用与浸膏相同质量的乙酸乙酯微波萃取3次，置于间歇微波萃取装置中进行常压萃取，每次萃取微波辐射1次，每次辐射时间2min，每次间歇时间5min，合并3次所得乙酸乙酯层萃取液，50℃减压回收乙酸乙酯，50℃减压干燥，即得一球悬铃木树皮三萜类成分提取物；乙酸乙酯萃取后的溶液60℃挥尽乙酸乙酯，冷冻干燥，加40℃蒸馏水使溶解，过滤，滤液放冷至室温，通过AB-8型大孔吸附树脂柱，依次以蒸馏水、60％乙醇(v/v)洗脱，60％乙醇(v/v)洗脱液减压回收溶剂，挥尽乙醇，通过聚酰胺柱层析，收集洗脱液，洗脱液冷冻干燥即得一球悬铃木树皮水溶性总黄酮提取物。
4.根据权利要求2所述的一球悬铃木树皮提取物的制备方法，其特征在于，取一球悬铃木树皮5kg，加80％乙醇(v/v)100kg，置于闪式提取器中室温提取5min，过滤，滤液50℃减压回收乙醇，浓缩至比重为1.20的浸膏，加入与浸膏相同质量的蒸馏水，然后用与浸膏相同质量的乙酸乙酯微波萃取3次，置于间歇微波萃取装置中进行常压萃取，每次萃取微波辐射5次，每次辐射时间5min，每次间歇时间20min，合并3次所得乙酸乙酯层萃取液，50℃减压回收乙酸乙酯，50℃减压干燥，即得一球悬铃木树皮三萜类成分提取物；乙酸乙酯萃取后的溶液60℃挥尽乙酸乙酯，冷冻干燥，加40℃蒸馏水使溶解，过滤，滤液放冷至室温，通过D-101型大孔吸附树脂柱，依次以蒸馏水、60％乙醇(v/v)洗脱，60％乙醇(v/v)洗脱液减压回收溶剂，挥尽乙醇，通过聚酰胺柱层析，收集洗脱液，洗脱液冷冻干燥即得一球悬铃木树皮水溶性总黄酮提取物。
5.根据权利要求2所述的一球悬铃木树皮提取物的制备方法，其特征在于，取一球悬铃木树皮7kg，加65％乙醇(v/v)98kg，置于闪式提取器中室温提取2.5min，过滤，滤液50℃减压回收乙醇，浓缩至比重为1.15的浸膏，加入与浸膏相同质量的蒸馏水，然后用与浸膏相同质量的乙酸乙酯微波萃取3次，置于间歇微波萃取装置中进行常压萃取，每次萃取微波辐射3次，每次辐射时间2.5min，每次间歇时间12min，合并3次所得乙酸乙酯层萃取液，50℃减压回收乙酸乙酯，50℃减压干燥，即得一球悬铃木树皮三萜类成分提取物；乙酸乙酯萃取后的溶液60℃挥尽乙酸乙酯，冷冻干燥，加40℃蒸馏水使溶解，过滤，滤液放冷至室温，通过AB-8型大孔吸附树脂柱，依次以蒸馏水、60％乙醇(v/v)洗脱，60％乙醇(v/v)洗脱液减压回收溶剂，挥尽乙醇，通过聚酰胺柱层析，收集洗脱液，洗脱液冷冻干燥即得一球悬铃木树皮水溶性总黄酮提取物。
6.根据权利要求2所述的一球悬铃木树皮提取物的制备方法，其特征在于，取一球悬铃木树皮11kg，加65％乙醇(v/v)88kg，置于闪式提取器中室温提取1min，过滤，滤液50℃减压回收乙醇，浓缩至比重为1.15的浸膏，加入与浸膏相同质量的蒸馏水，然后用与浸膏相同质量的乙酸乙酯于微波萃取装置中萃取3次，置于间歇微波萃取装置中进行常压萃取，每次萃取微波辐射5次，每次微波辐射5min，间隔时间12min，合并3次所得乙酸乙酯层萃取液，50℃减压回收乙酸乙酯，50℃减压干燥，即得一球悬铃木树皮三萜类成分提取物；乙酸乙酯萃取后的溶液60℃挥尽乙酸乙酯，冷冻干燥，加40℃蒸馏水使溶解，过滤，滤液放冷至室温，通过D-101型大孔吸附树脂柱，依次以蒸馏水、60％乙醇(v/v)洗脱，60％乙醇(v/v)洗脱液减压回收溶剂，挥尽乙醇，通过聚酰胺柱层析，收集洗脱液，洗脱液冷冻干燥即得一球悬铃木树皮水溶性总黄酮提取物。
7.根据权利要求2-6中所述的一球悬铃木树皮提取物的制备方法，其特征在于，本方法所制备的一球悬铃木树皮三萜类成分提取物的总三萜含量不低于60％，三萜类总成分的转移率不低于85％，一球悬铃木树皮水溶性总黄酮提取物中总黄酮含量不低于82％。
8.根据权利要求1所述的一球悬铃木树皮提取物，其特征在于，所述一球悬铃木树皮三萜类成分提取物具有抗菌及抗炎的生物活性，可用于抗菌及抗炎类医药的开发；所述一球悬铃木树皮水溶性总黄酮提取物具有抗肿瘤的生物活性，可用于抗肿瘤医药的开发。
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