CN106721529A - 一种蛋白粉及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种蛋白粉及其制备方法与应用，属于饲料用蛋白粉制备技术领域，所述蛋白粉是经过虫卵培养、虫料分离、纯虫磨浆、浆料水解、水解液超滤、干燥、粉碎、过筛制成的。本发明的蛋白粉加入饲料中有利于提高罗非鱼平均日增重量、平均日摄食量，降低饲料系数和死亡率，提高生产效益。
Description
【技术领域】
本发明属于饲料用蛋白粉制备技术领域，具体涉及一种蛋白粉及其制备方法与应用。
【背景技术】
在生物饲料的生产过程中，加入的是普通昆虫蛋白粉，普通昆虫蛋白粉的生产工艺中，是用麸皮、青菜作为培养物对虫卵进行培养，使虫卵长成纯虫后，对纯虫炒干或微波炉烘干，然后粉碎形成虫粉，再将虫粉与培养物或发酵豆粕或普通蛋白原料混合，形成普通昆虫蛋白粉，在该生产工艺中，由于对虫卵进行培养的培养物为麸皮、青菜，故长成的纯虫的成分中不含抗菌肽和酵母菌，故不具有提高免疫力的功效；由于采用对纯虫炒干的干燥方式，容易使蛋白质变性，从而破坏应有的营养成分；由于将纯虫粉碎形成虫粉，没有作水解处理，成分以固有的大分子的蛋白质的形式或以多肽的形式存在，故不容易被吸收。
诱食剂对罗非鱼的饲养具有明显而积极的生物学作用，可改善饲料的诱食性和适口性，提高饲料转化率，进而全面提高罗非鱼的生产性能，如增加采食量、提高日增重、改善肉品质量等。一方面诱食剂可以通过特殊气味掩盖饲料中的不良气味，刺激罗非鱼的感觉器官，以达到促进罗非鱼摄食、加快罗非鱼生长的目的；另一方面，通过诱食剂诱导罗非鱼摄食，缩短了摄食时间，提高饲料的利用率。目前市场上的诱食剂大部分为香味剂或甜味剂，功效较为单一，只能对罗非鱼的嗅觉或视觉或味觉等形成单一的刺激；且有些香味剂或甜味剂的组成成分来自于化学合成产品，易在罗非鱼体内产生药物残留、毒副作用明显。因此，如何将这些单一的诱食物质复合形成效果明显、质量稳定且经济实惠的诱食剂是趋势所在。
链球菌广泛存在于自然界、人及动物，引起各种化脓性炎症、猩红热、丹毒、新生儿败血症、脑膜炎、产褥热以及链球菌变态反应性疾病等。水产养殖动物也可感染链球菌发生链球菌病，造成大规模死亡，每年给世界水产养殖业造成巨额经济损失。我国是水产养殖大国，每年因链球菌病给水产养殖造成的直接经济损失约10亿美元。罗非鱼是重要的热带和亚热带水产养殖动物，也是链球菌感染的主要对象之一。2001年开始，中国罗非鱼养殖陆续出现了链球菌病的感染，并在个别养殖场造成了30％-50％的高死亡率。2009-2013连续5年，链球菌病在中国罗非鱼养殖大面积暴发流行，发病区域逐年扩大、发病率和死亡率逐年递增，易感罗非鱼规格范围逐年扩大。按我国罗非鱼年均产量计算，估计每年链球菌病给我国罗非鱼产业造成的直接经济损失就高达4亿美元。病害的暴发与随之带来的产品安全问题已成为制约罗非鱼产业发展的瓶颈。目前缺乏一套行之有效的方案预防和治疗该病，药物只能在早期起到控制病情的辅助性作用，但随着耐药和抗药性的产生和积累，该病的现状几乎是“无药可治可防”。
随着市场需求量的增大，各种疾病的爆发，给罗非鱼产业造成了巨大的影响，因此如何有效防治罗非鱼疾病，特别是链球菌病的有效预防和治疗，提高产量，加大产业规模，发展罗非鱼健康养殖技术已具有很大的必要性和紧迫性。
【发明内容】
本发明要解决的技术问题是提供一种蛋白粉及其制备方法与应用，以解决现有蛋白虫粉成分以固有的大分子的蛋白质的形式或以多肽的形式存在，而不容易被吸收的问题。本发明的蛋白粉加入饲料中有利于提高罗非鱼平均日增重量、平均日摄食量，降低饲料系数和死亡率，提高生产效益。
为了解决以上技术问题，本发明采用以下技术方案：
一种蛋白粉，是经过虫卵培养、虫料分离、纯虫磨浆、浆料水解、水解液超滤、干燥、粉碎、过筛制成的。
本发明还提供一种蛋白粉的制备方法，包括以下步骤：
(1)虫卵培养：将人工饲养的黄粉虫繁殖的虫卵放入微生物饲料中培养，所述微生物饲料以重量份为单位，包括以下原料：农作物废弃物40-48份、蔬菜渣30-40份、水45-52份、菌种发酵剂8-16份、谷糠12-22份；
(2)虫料分离：步骤(1)的虫卵形成纯虫后，将纯虫与微生物饲料分离；
(3)纯虫磨浆：将步骤(2)的纯虫326-352g，按物料比1:3.5-3.8(W/V)加水研磨，在76-78℃下灭菌24-26min，冷却至34-40℃，制得浆液；
(4)浆料水解：向步骤(3)制得的浆液中加入半胱氨酸蛋白酶0.26-0.3g，调节pH值为5.6-6，在46-50℃下水解37-41h，接着在70-73℃下灭菌25-30min，离心过滤，制得水解液；
(5)水解液超滤：将步骤(4)制得的水解液使用截留分子量为7000-8000的中空纤维膜超滤，制得超滤液；
(6)干燥、粉碎、过筛：将步骤(5)制得的超滤液进行冷冻干燥，粉碎后过200-300目筛，制得蛋白粉。
本发明还提供一种蛋白粉的应用，所述蛋白粉应用于罗非鱼饲料中，所述罗非鱼饲料以重量份为单位，包括以下原料：蛋白粉30-50份、大豆粕10-18份、花生粕6-12份、玉米8-14份、棉籽粕4-7份、菜籽粕5-8份、高筋面粉10-16份、维生素1.8-3份、氨基酸1-2份、微量元素1-1.8份、植物油5-8份、诱食剂1-2份、海豚链球菌病生物制剂0.6-0.9份。
优选地，所述维生素以重量份为单位，由以下组分组成：生素A0.8-1.2份、维生素B10.6-1份、维生素C 0.4-0.8份。
优选地，所述氨基酸以重量份为单位，由以下组分组成：苯丙氨酸0.5-0.8份、谷氨酸0.3-0.7份、丝氨酸0.2-0.5份。
优选地，所述微量元素以重量份为单位，由以下组分组成：铜元素0.05-0.1份、锰元素0.05-0.1份、铬元素0.05-0.1份、铁元素0.2-0.45份、锌元素0.2-0.45份、硒元素0.25-0.3份、碘元素0.2-0.3份。
优选地，所述植物油包括花生油、大豆油、亚麻油、蓖麻油、菜子油中的一种或多种。
优选地，所述诱食剂，以重量份为单位，包括以下原料：大茴香6-18份、枸杞5-15份、茯苓4-12份、薄荷3-10份、山楂4-8份、马齿苋2-6份、大蒜4-6份、肉桂2-4份、二甲基-β-丙酸噻亭20-30份、甜菜碱15-23份、核苷酸5-10份、甜味剂0.6-1份、香味剂0.2-0.5份、酸味剂1-3份、辣味剂0.4-0.8份、鲜味剂0.3-0.6份；
所述甜味剂为甘草酸三钾；
所述香味剂为3-甲基环十五酮；
所述酸味剂为柠檬酸；
所述辣味剂为辣椒精；
所述鲜味剂为鸟苷酸钠。
优选地，所述诱食剂的制备方法，包括以下步骤：
(a)将大茴香、枸杞、茯苓、薄荷、山楂、马齿苋、大蒜、肉桂去除水分至≤8％；
(b)将步骤(a)去除水分的大茴香、枸杞、茯苓、薄荷、山楂、马齿苋、大蒜、肉桂进行粉碎混合，加入150-300份水，在料液比为1:12-14(W/V)，微波功率为170-200W，提取温度为89-94℃，提取时间为1.2-1.5h，接着滤渣、浓缩、干燥至含水量≤3％，制得药粉；
(c)将步骤(b)制得的药粉中加入二甲基-β-丙酸噻亭、甜菜碱、核苷酸、甜味剂、香味剂、酸味剂、辣味剂、鲜味剂，然后混合均匀，制得诱食剂。
优选地，所述罗非鱼饲料的制备方法，包括以下步骤：
S1：分别将大豆粕、花生粕、玉米、棉籽粕、菜籽粕晒干并粉碎，过100-300目的筛子后混合均匀，制得均匀混合物；
S2：向步骤S1制得的均匀混合物中添加蛋白粉、高筋面粉、维生素、氨基酸、微量元素、植物油、诱食剂、海豚链球菌病生物制剂，以及100-160份水，再次混合均匀，制得湿饲料；
所述海豚链球菌病生物制剂的制备方法，包括以下步骤：
(A)在生物发酵罐上罐空消，所述空消是在温度为130℃、压力为1.5公斤下消毒30min进行的；
(B)向步骤(A)的生物发酵罐中加入培养基，所述培养基以重量份为单位，包括以下原料：蛋白胨180-220份、酵母浸出汁粉130-150份、牛肉膏45-65份、微量元素2-4份、水1000-2000份，所述微量元素以重量份为单位，包括以下原料：锌元素4-9份、硒元素3-6份、碘元素2-4份；
(C)对步骤(B)的培养基进行实消，所述实消是在温度为121℃、压力为1.5公斤下消毒3min进行的；
(D)向步骤(C)已消毒的培养基中接入红色诺卡氏菌ATCC11653、珊瑚色诺卡氏菌ACCC40100、芽孢菌、硝化菌、放线菌、光合菌，在温度为32-36℃，转速为200-220r/min下进行菌种发酵50-80h，所述红色诺卡氏菌ATCC11653、珊瑚色诺卡氏菌ACCC40100、芽孢菌、硝化菌、放线菌、光合菌的重量比为5-7:3-4:2-4:2-3:1-3:1-2；
(E)将步骤(D)完成菌种发酵的发酵液浓缩、干燥至含水量≤3％，经粉碎过100-300目筛子，制得海豚链球菌病生物制剂；
S3：把步骤S2制得的湿饲料制成直径0.1-0.3cm的颗粒并在温度为90-105℃下烘干至水分含量≤3.6％，最后冷却至25-30℃，制得罗非鱼饲料。
本发明具有以下有益效果：
本发明的蛋白粉加入饲料中有利于提高罗非鱼平均日增重量、平均日摄食量，降低饲料系数和死亡率，提高生产效益。
【具体实施方式】
为便于更好地理解本发明，通过以下实施例加以说明，这些实施例属于本发明的保护范围，但不限制本发明的保护范围。
在实施例中，所述罗非鱼饲料，以重量份为单位，包括以下原料：蛋白粉30-50份、大豆粕10-18份、花生粕6-12份、玉米8-14份、棉籽粕4-7份、菜籽粕5-8份、高筋面粉10-16份、维生素1.8-3份、氨基酸1-2份、微量元素1-1.8份、植物油5-8份、诱食剂1-2份、海豚链球菌病生物制剂0.6-0.9份。
所述维生素以重量份为单位，由以下组分组成：生素A0.8-1.2份、维生素B10.6-1份、维生素C 0.4-0.8份。
所述氨基酸以重量份为单位，由以下组分组成：苯丙氨酸0.5-0.8份、谷氨酸0.3-0.7份、丝氨酸0.2-0.5份。
所述微量元素以重量份为单位，由以下组分组成：铜元素0.05-0.1份、锰元素0.05-0.1份、铬元素0.05-0.1份、铁元素0.2-0.45份、锌元素0.2-0.45份、硒元素0.25-0.3份、碘元素0.2-0.3份。
所述植物油包括花生油、大豆油、亚麻油、蓖麻油、菜子油中的一种或多种。
所述诱食剂，以重量份为单位，包括以下原料：大茴香6-18份、枸杞5-15份、茯苓4-12份、薄荷3-10份、山楂4-8份、马齿苋2-6份、大蒜4-6份、肉桂2-4份、二甲基-β-丙酸噻亭20-30份、甜菜碱15-23份、核苷酸5-10份、甜味剂0.6-1份、香味剂0.2-0.5份、酸味剂1-3份、辣味剂0.4-0.8份、鲜味剂0.3-0.6份；
所述甜味剂为甘草酸三钾；
所述香味剂为3-甲基环十五酮；
所述酸味剂为柠檬酸；
所述辣味剂为辣椒精；
所述鲜味剂为鸟苷酸钠。
所述罗非鱼饲料的制备方法，包括以下步骤：
S1：分别将大豆粕、花生粕、玉米、棉籽粕、菜籽粕晒干并粉碎，过100-300目的筛子后混合均匀，制得均匀混合物；
S2：向步骤S1制得的均匀混合物中添加蛋白粉、高筋面粉、维生素、氨基酸、微量元素、植物油、诱食剂、海豚链球菌病生物制剂，以及100-160份水，再次混合均匀，制得湿饲料；
所述蛋白粉的制备方法，包括以下步骤：
(1)虫卵培养：将人工饲养的黄粉虫繁殖的虫卵放入微生物饲料中培养，所述微生物饲料以重量份为单位，包括以下原料：农作物废弃物40-48份、蔬菜渣30-40份、水45-52份、菌种发酵剂8-16份、谷糠12-22份；
(2)虫料分离：步骤(1)的虫卵形成纯虫后，将纯虫与微生物饲料分离；
(3)纯虫磨浆：将步骤(2)的纯虫326-352g，按物料比1:3.5-3.8(W/V)加水研磨，在76-78℃下灭菌24-26min，冷却至34-40℃，制得浆液；
(4)浆料水解：向步骤(3)制得的浆液中加入半胱氨酸蛋白酶0.26-0.3g，调节pH值为5.6-6，在46-50℃下水解37-41h，接着在70-73℃下灭菌25-30min，离心过滤，制得水解液；
(5)水解液超滤：将步骤(4)制得的水解液使用截留分子量为7000-8000的中空纤维膜超滤，制得超滤液；
(6)干燥、粉碎、过筛：将步骤(5)制得的超滤液进行冷冻干燥，粉碎后过200-300目筛，制得蛋白粉；
步骤S2中所述诱食剂的制备方法，包括以下步骤：
(a)将大茴香、枸杞、茯苓、薄荷、山楂、马齿苋、大蒜、肉桂去除水分至≤8％；
(b)将步骤(a)去除水分的大茴香、枸杞、茯苓、薄荷、山楂、马齿苋、大蒜、肉桂进行粉碎混合，加入150-300份水，在料液比为1:12-14(W/V)，微波功率为170-200W，提取温度为89-94℃，提取时间为1.2-1.5h，接着滤渣、浓缩、干燥至含水量≤3％，制得药粉；
(c)将步骤(b)制得的药粉中加入二甲基-β-丙酸噻亭、甜菜碱、核苷酸、甜味剂、香味剂、酸味剂、辣味剂、鲜味剂，然后混合均匀，制得诱食剂；
所述海豚链球菌病生物制剂的制备方法，包括以下步骤：
(A)在生物发酵罐上罐空消，所述空消是在温度为130℃、压力为1.5公斤下消毒30min进行的；
(B)向步骤(A)的生物发酵罐中加入培养基，所述培养基以重量份为单位，包括以下原料：蛋白胨180-220份、酵母浸出汁粉130-150份、牛肉膏45-65份、微量元素2-4份、水1000-2000份，所述微量元素以重量份为单位，包括以下原料：锌元素4-9份、硒元素3-6份、碘元素2-4份；
(C)对步骤(B)的培养基进行实消，所述实消是在温度为121℃、压力为1.5公斤下消毒3min进行的；
(D)向步骤(C)已消毒的培养基中接入红色诺卡氏菌ATCC11653、珊瑚色诺卡氏菌ACCC40100、芽孢菌、硝化菌、放线菌、光合菌，在温度为32-36℃，转速为200-220r/min下进行菌种发酵50-80h，所述红色诺卡氏菌ATCC11653、珊瑚色诺卡氏菌ACCC40100、芽孢菌、硝化菌、放线菌、光合菌的重量比为5-7:3-4:2-4:2-3:1-3:1-2；
(E)将步骤(D)完成菌种发酵的发酵液浓缩、干燥至含水量≤3％，经粉碎过100-300目筛子，制得海豚链球菌病生物制剂；
S3：把步骤S2制得的湿饲料制成直径0.1-0.3cm的颗粒并在温度为90-105℃下烘干至水分含量≤3.6％，最后冷却至25-30℃，制得罗非鱼饲料。
下面通过更具体的实施例加以说明。
实施例1
一种罗非鱼饲料，以重量份为单位，包括以下原料：蛋白粉40份、大豆粕15份、花生粕9份、玉米12份、棉籽粕6份、菜籽粕7份、高筋面粉13份、维生素2.5份、氨基酸1.5份、微量元素1.4份、植物油7份、诱食剂1.6份、海豚链球菌病生物制剂0.7份。
所述维生素以重量份为单位，由以下组分组成：生素A 1份、维生素B10.8份、维生素C 0.7份。
所述氨基酸以重量份为单位，由以下组分组成：苯丙氨酸0.7份、谷氨酸0.5份、丝氨酸0.3份。
所述微量元素以重量份为单位，由以下组分组成：铜元素0.075份、锰元素0.075份、铬元素1份、铁元素0.3份、锌元素0.3份、硒元素0.3份、碘元素0.25份。
所述植物油为花生油。
所述诱食剂，以重量份为单位，包括以下原料：大茴香12份、枸杞10份、茯苓8份、薄荷7份、山楂6份、马齿苋4份、大蒜10份、肉桂3份、二甲基-β-丙酸噻亭25份、甜菜碱20份、核苷酸7份、甜味剂0.8份、香味剂0.4份、酸味剂2份、辣味剂0.6份、鲜味剂0.5份；
所述甜味剂为甘草酸三钾；
所述香味剂为3-甲基环十五酮；
所述酸味剂为柠檬酸；
所述辣味剂为辣椒精；
所述鲜味剂为鸟苷酸钠。
所述罗非鱼饲料的制备方法，包括以下步骤：
S1：分别将大豆粕、花生粕、玉米、棉籽粕、菜籽粕晒干并粉碎，过200目的筛子后混合均匀，制得均匀混合物；
S2：向步骤S1制得的均匀混合物中添加蛋白粉、高筋面粉、维生素、氨基酸、微量元素、植物油、诱食剂、海豚链球菌病生物制剂，以及140份水，再次混合均匀，制得湿饲料；
所述蛋白粉的制备方法，包括以下步骤：
(1)虫卵培养：将人工饲养的黄粉虫繁殖的虫卵放入微生物饲料中培养，所述微生物饲料以重量份为单位，包括以下原料：农作物废弃物45份、蔬菜渣35份、水50份、菌种发酵剂13份、谷糠18份；
(2)虫料分离：步骤(1)的虫卵形成纯虫后，将纯虫与微生物饲料分离；
(3)纯虫磨浆：将步骤(2)的纯虫340g，按物料比1:3.6(W/V)加水研磨，在77℃下灭菌25min，冷却至38℃，制得浆液；
(4)浆料水解：向步骤(3)制得的浆液中加入半胱氨酸蛋白酶0.28g，调节pH值为5.8，在48℃下水解39h，接着在72℃下灭菌27min，离心过滤，制得水解液；
(5)水解液超滤：将步骤(4)制得的水解液使用截留分子量为7500的中空纤维膜超滤，制得超滤液；
(6)干燥、粉碎、过筛：将步骤(5)制得的超滤液进行冷冻干燥，粉碎后过250目筛，制得蛋白粉；
步骤S2中所述诱食剂的制备方法，包括以下步骤：
(a)将大茴香、枸杞、茯苓、薄荷、山楂、马齿苋、大蒜、肉桂去除水分至8％；
(b)将步骤(a)去除水分的大茴香、枸杞、茯苓、薄荷、山楂、马齿苋、大蒜、肉桂进行粉碎混合，加入250份水，在料液比为1:13(W/V)，微波功率为185W，提取温度为92℃，提取时间为1.4h，接着滤渣、浓缩、干燥至含水量为3％，制得药粉；
(c)将步骤(b)制得的药粉中加入二甲基-β-丙酸噻亭、甜菜碱、核苷酸、甜味剂、香味剂、酸味剂、辣味剂、鲜味剂，然后混合均匀，制得诱食剂；
所述海豚链球菌病生物制剂的制备方法，包括以下步骤：
(A)在生物发酵罐上罐空消，所述空消是在温度为130℃、压力为1.5公斤下消毒30min进行的；
(B)向步骤(A)的生物发酵罐中加入培养基，所述培养基以重量份为单位，包括以下原料：蛋白胨200份、酵母浸出汁粉140份、牛肉膏55份、微量元素3份、水1500份，所述微量元素以重量份为单位，包括以下原料：锌元素8份、硒元素5份、碘元素3份；
(C)对步骤(B)的培养基进行实消，所述实消是在温度为121℃、压力为1.5公斤下消毒3min进行的；
(D)向步骤(C)已消毒的培养基中接入红色诺卡氏菌ATCC11653、珊瑚色诺卡氏菌ACCC40100、芽孢菌、硝化菌、放线菌、光合菌，在温度为35℃，转速为210r/min下进行菌种发酵65h，所述红色诺卡氏菌ATCC11653、珊瑚色诺卡氏菌ACCC40100、芽孢菌、硝化菌、放线菌、光合菌的重量比为6:3.5:3:2.5:2:1.5；
(E)将步骤(D)完成菌种发酵的发酵液浓缩、干燥至含水量为3％，经粉碎过200目筛子，制得海豚链球菌病生物制剂；
S3：把步骤S2制得的湿饲料制成直径0.1-0.3cm的颗粒并在温度为100℃下烘干至水分含量为3.6％，最后冷却至28℃，制得罗非鱼饲料。
实施例2
一种罗非鱼饲料，以重量份为单位，包括以下原料：蛋白粉30份、大豆粕10份、花生粕6份、玉米8份、棉籽粕4份、菜籽粕5份、高筋面粉10份、维生素1.8份、氨基酸1份、微量元素1份、植物油5份、诱食剂1份、海豚链球菌病生物制剂0.6份。
所述维生素以重量份为单位，由以下组分组成：生素A 0.8份、维生素B10.6份、维生素C 0.4份。
所述氨基酸以重量份为单位，由以下组分组成：苯丙氨酸0.5份、谷氨酸0.3份、丝氨酸0.2份。
所述微量元素以重量份为单位，由以下组分组成：铜元素0.05份、锰元素0.05份、铬元素0.05份、铁元素0.2份、锌元素0.2份、硒元素0.25份、碘元素0.2份。
所述植物油为大豆油。
所述诱食剂，以重量份为单位，包括以下原料：大茴香6份、枸杞5份、茯苓4份、薄荷3份、山楂4份、马齿苋2份、大蒜4份、肉桂2份、二甲基-β-丙酸噻亭20份、甜菜碱15份、核苷酸5份、甜味剂0.6份、香味剂0.2份、酸味剂1份、辣味剂0.4份、鲜味剂0.3份；
所述甜味剂为甘草酸三钾；
所述香味剂为3-甲基环十五酮；
所述酸味剂为柠檬酸；
所述辣味剂为辣椒精；
所述鲜味剂为鸟苷酸钠。
所述罗非鱼饲料的制备方法，包括以下步骤：
S1：分别将大豆粕、花生粕、玉米、棉籽粕、菜籽粕晒干并粉碎，过100目的筛子后混合均匀，制得均匀混合物；
S2：向步骤S1制得的均匀混合物中添加蛋白粉、高筋面粉、维生素、氨基酸、微量元素、植物油、诱食剂、海豚链球菌病生物制剂，以及100份水，再次混合均匀，制得湿饲料；
所述蛋白粉的制备方法，包括以下步骤：
(1)虫卵培养：将人工饲养的黄粉虫繁殖的虫卵放入微生物饲料中培养，所述微生物饲料以重量份为单位，包括以下原料：农作物废弃物40份、蔬菜渣30份、水45份、菌种发酵剂8份、谷糠12份；
(2)虫料分离：步骤(1)的虫卵形成纯虫后，将纯虫与微生物饲料分离；
(3)纯虫磨浆：将步骤(2)的纯虫326g，按物料比1:3.5(W/V)加水研磨，在76℃下灭菌26min，冷却至34℃，制得浆液；
(4)浆料水解：向步骤(3)制得的浆液中加入半胱氨酸蛋白酶0.26g，调节pH值为5.6，在46℃下水解41h，接着在70℃下灭菌30min，离心过滤，制得水解液；
(5)水解液超滤：将步骤(4)制得的水解液使用截留分子量为7000的中空纤维膜超滤，制得超滤液；
(6)干燥、粉碎、过筛：将步骤(5)制得的超滤液进行冷冻干燥，粉碎后过200目筛，制得蛋白粉；
步骤S2中所述诱食剂的制备方法，包括以下步骤：
(a)将大茴香、枸杞、茯苓、薄荷、山楂、马齿苋、大蒜、肉桂去除水分至为7.4％；
(b)将步骤(a)去除水分的大茴香、枸杞、茯苓、薄荷、山楂、马齿苋、大蒜、肉桂进行粉碎混合，加入150份水，在料液比为1:12(W/V)，微波功率为170W，提取温度为89℃，提取时间为1.5h，接着滤渣、浓缩、干燥至含水量为2.6％，制得药粉；
(c)将步骤(b)制得的药粉中加入二甲基-β-丙酸噻亭、甜菜碱、核苷酸、甜味剂、香味剂、酸味剂、辣味剂、鲜味剂，然后混合均匀，制得诱食剂；
所述海豚链球菌病生物制剂的制备方法，包括以下步骤：
(A)在生物发酵罐上罐空消，所述空消是在温度为130℃、压力为1.5公斤下消毒30min进行的；
(B)向步骤(A)的生物发酵罐中加入培养基，所述培养基以重量份为单位，包括以下原料：蛋白胨180份、酵母浸出汁粉130份、牛肉膏45份、微量元素2份、水1000份，所述微量元素以重量份为单位，包括以下原料：锌元素4份、硒元素3份、碘元素2份；
(C)对步骤(B)的培养基进行实消，所述实消是在温度为121℃、压力为1.5公斤下消毒3min进行的；
(D)向步骤(C)已消毒的培养基中接入红色诺卡氏菌ATCC11653、珊瑚色诺卡氏菌ACCC40100、芽孢菌、硝化菌、放线菌、光合菌，在温度为32℃，转速为200r/min下进行菌种发酵80h，所述红色诺卡氏菌ATCC11653、珊瑚色诺卡氏菌ACCC40100、芽孢菌、硝化菌、放线菌、光合菌的重量比为5:3:2:2:1:1；
(E)将步骤(D)完成菌种发酵的发酵液浓缩、干燥至含水量为2.5％，经粉碎过100目筛子，制得海豚链球菌病生物制剂；
S3：把步骤S2制得的湿饲料制成直径0.1cm的颗粒并在温度为90℃下烘干至水分含量为3.2％，最后冷却至25℃，制得罗非鱼饲料。
实施例3
一种罗非鱼饲料，以重量份为单位，包括以下原料：蛋白粉50份、大豆粕18份、花生粕12份、玉米14份、棉籽粕7份、菜籽粕8份、高筋面粉16份、维生素3份、氨基酸2份、微量元素1.6份、植物油8份、诱食剂2份、海豚链球菌病生物制剂0.9份。
所述维生素以重量份为单位，由以下组分组成：生素A 1.2份、维生素B11份、维生素C 0.8份。
所述氨基酸以重量份为单位，由以下组分组成：苯丙氨酸0.8份、谷氨酸0.7份、丝氨酸0.5份。
所述微量元素以重量份为单位，由以下组分组成：铜元素0.1份、锰元素0.1份、铬元素0.1份、铁元素0.45份、锌元素0.45份、硒元素0.4份、碘元素0.4份。
所述植物油为花生油2份、大豆油2份、蓖麻油2份、菜子油2份。
所述诱食剂，以重量份为单位，包括以下原料：大茴香18份、枸杞15份、茯苓12份、薄荷10份、山楂8份、马齿苋6份、大蒜6份、肉桂4份、二甲基-β-丙酸噻亭30份、甜菜碱23份、核苷酸10份、甜味剂1份、香味剂0.5份、酸味剂3份、辣味剂0.8份、鲜味剂0.6份；
所述甜味剂为甘草酸三钾；
所述香味剂为3-甲基环十五酮；
所述酸味剂为柠檬酸；
所述辣味剂为辣椒精；
所述鲜味剂为鸟苷酸钠。
所述罗非鱼饲料的制备方法，包括以下步骤：
S1：分别将大豆粕、花生粕、玉米、棉籽粕、菜籽粕晒干并粉碎，过300目的筛子后混合均匀，制得均匀混合物；
S2：向步骤S1制得的均匀混合物中添加蛋白粉、高筋面粉、维生素、氨基酸、微量元素、植物油、诱食剂、海豚链球菌病生物制剂，以及160份水，再次混合均匀，制得湿饲料；
所述蛋白粉的制备方法，包括以下步骤：
(1)虫卵培养：将人工饲养的黄粉虫繁殖的虫卵放入微生物饲料中培养，所述微生物饲料以重量份为单位，包括以下原料：农作物废弃物48份、蔬菜渣40份、水52份、菌种发酵剂16份、谷糠22份；
(2)虫料分离：步骤(1)的虫卵形成纯虫后，将纯虫与微生物饲料分离；
(3)纯虫磨浆：将步骤(2)的纯虫352g，按物料比1:3.8(W/V)加水研磨，在78℃下灭菌24min，冷却至40℃，制得浆液；
(4)浆料水解：向步骤(3)制得的浆液中加入半胱氨酸蛋白酶0.3g，调节pH值为6，在50℃下水解37h，接着在73℃下灭菌25min，离心过滤，制得水解液；
(5)水解液超滤：将步骤(4)制得的水解液使用截留分子量为8000的中空纤维膜超滤，制得超滤液；
(6)干燥、粉碎、过筛：将步骤(5)制得的超滤液进行冷冻干燥，粉碎后过300目筛，制得蛋白粉；
步骤S2中所述诱食剂的制备方法，包括以下步骤：
(a)将大茴香、枸杞、茯苓、薄荷、山楂、马齿苋、大蒜、肉桂去除水分至为6.5％；
(b)将步骤(a)去除水分的大茴香、枸杞、茯苓、薄荷、山楂、马齿苋、大蒜、肉桂进行粉碎混合，加入300份水，在料液比为1:14(W/V)，微波功率为200W，提取温度为94℃，提取时间为1.2h，接着滤渣、浓缩、干燥至含水量为2.5％，制得药粉；
(c)将步骤(b)制得的药粉中加入二甲基-β-丙酸噻亭、甜菜碱、核苷酸、甜味剂、香味剂、酸味剂、辣味剂、鲜味剂，然后混合均匀，制得诱食剂；
所述海豚链球菌病生物制剂的制备方法，包括以下步骤：
(A)在生物发酵罐上罐空消，所述空消是在温度为130℃、压力为1.5公斤下消毒30min进行的；
(B)向步骤(A)的生物发酵罐中加入培养基，所述培养基以重量份为单位，包括以下原料：蛋白胨220份、酵母浸出汁粉150份、牛肉膏65份、微量元素4份、水2000份，所述微量元素以重量份为单位，包括以下原料：锌元素9份、硒元素6份、碘元素4份；
(C)对步骤(B)的培养基进行实消，所述实消是在温度为121℃、压力为1.5公斤下消毒5min进行的；
(D)向步骤(C)已消毒的培养基中接入红色诺卡氏菌ATCC11653、珊瑚色诺卡氏菌ACCC40100、芽孢菌、硝化菌、放线菌、光合菌，在温度为36℃，转速为220r/min下进行菌种发酵50h，所述红色诺卡氏菌ATCC11653、珊瑚色诺卡氏菌ACCC40100、芽孢菌、硝化菌、放线菌、光合菌的重量比为7:4:4:3:3:2；
(E)将步骤(D)完成菌种发酵的发酵液浓缩、干燥至含水量为2.4％，经粉碎过300目筛子，制得海豚链球菌病生物制剂；
S3：把步骤S2制得的湿饲料制成直径0.1-0.3cm的颗粒并在温度为105℃下烘干至水分含量为3.2％，最后冷却至30℃，制得罗非鱼饲料。
为验证本发明罗非鱼饲料的效果，通过以下实验验证。
选用0.1-12kg、规格几乎一致的且确诊患海豚链球菌病的罗非鱼450条，随机分成四组，即对照组1、对照组2、试验组1、试验组2、试验组3，每组做3次平行实验，每组罗非鱼30条。对照组1罗非鱼饲喂以大豆粕、花生粕、玉米、棉籽粕、菜籽粕、高筋面粉、维生素、氨基酸、微量元素、植物油、诱食剂配制成的基本饲料，对照组2罗非鱼饲喂以蛋白粉、大豆粕、花生粕、玉米、棉籽粕、菜籽粕、高筋面粉、维生素、氨基酸、微量元素、植物油、诱食剂配制成的基本饲料，试验组1-3的罗非鱼分别饲喂本发明实施例1-3的饲料。连续饲喂10天，每天投料2次，实验时间10天，结束后计算罗非鱼的平均日增重量、平均日摄食量、饲料系数、死亡率和治愈率，结果见下表。
由上表可知，试验组与对照组对比，本发明的饲料可以提高患海豚链球菌病罗非鱼的采食量和生长速度，增强罗非鱼的免疫力和抗应激能力，降低罗非鱼患海豚链球菌病的死亡率，提高治愈率。蛋白粉加入饲料中有利于提高罗非鱼平均日增重量、平均日摄食量，降低饲料系数和死亡率。
以上内容不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明，对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明由所提交的权利要求书确定的专利保护范围。
Claims (10)
1.一种蛋白粉，其特征在于，是经过虫卵培养、虫料分离、纯虫磨浆、浆料水解、水解液超滤、干燥、粉碎、过筛制成的。
2.一种根据权利要求1所述的蛋白粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)虫卵培养：将人工饲养的黄粉虫繁殖的虫卵放入微生物饲料中培养，所述微生物饲料以重量份为单位，包括以下原料：农作物废弃物40-48份、蔬菜渣30-40份、水45-52份、菌种发酵剂8-16份、谷糠12-22份；
(2)虫料分离：步骤(1)的虫卵形成纯虫后，将纯虫与微生物饲料分离；
(3)纯虫磨浆：将步骤(2)的纯虫326-352g，按物料比1:3.5-3.8(W/V)加水研磨，在76-78℃下灭菌24-26min，冷却至34-40℃，制得浆液；
(4)浆料水解：向步骤(3)制得的浆液中加入半胱氨酸蛋白酶0.26-0.3g，调节pH值为5.6-6，在46-50℃下水解37-41h，接着在70-73℃下灭菌25-30min，离心过滤，制得水解液；
(5)水解液超滤：将步骤(4)制得的水解液使用截留分子量为7000-8000的中空纤维膜超滤，制得超滤液；
(6)干燥、粉碎、过筛：将步骤(5)制得的超滤液进行冷冻干燥，粉碎后过200-300目筛，制得蛋白粉。
3.一种根据权利要求1所述蛋白粉的应用，其特征在于，所述蛋白粉应用于罗非鱼饲料中，所述罗非鱼饲料以重量份为单位，包括以下原料：蛋白粉30-50份、大豆粕10-18份、花生粕6-12份、玉米8-14份、棉籽粕4-7份、菜籽粕5-8份、高筋面粉10-16份、维生素1.8-3份、氨基酸1-2份、微量元素1-1.8份、植物油5-8份、诱食剂1-2份、海豚链球菌病生物制剂0.6-0.9份。
4.根据权利要求3所述蛋白粉的应用，其特征在于，所述维生素以重量份为单位，由以下组分组成：生素A 0.8-1.2份、维生素B10.6-1份、维生素C 0.4-0.8份。
5.根据权利要求3所述蛋白粉的应用，其特征在于，所述氨基酸以重量份为单位，由以下组分组成：苯丙氨酸0.5-0.8份、谷氨酸0.3-0.7份、丝氨酸0.2-0.5份。
6.根据权利要求3所述蛋白粉的应用，其特征在于，所述微量元素以重量份为单位，由以下组分组成：铜元素0.05-0.1份、锰元素0.05-0.1份、铬元素0.05-0.1份、铁元素0.2-0.45份、锌元素0.2-0.45份、硒元素0.25-0.3份、碘元素0.2-0.3份。
7.根据权利要求3所述蛋白粉的应用，其特征在于，所述植物油包括花生油、大豆油、亚麻油、蓖麻油、菜子油中的一种或多种。
8.根据权利要求3所述蛋白粉的应用，其特征在于，所述诱食剂，以重量份为单位，包括以下原料：大茴香6-18份、枸杞5-15份、茯苓4-12份、薄荷3-10份、山楂4-8份、马齿苋2-6份、大蒜4-6份、肉桂2-4份、二甲基-β-丙酸噻亭20-30份、甜菜碱15-23份、核苷酸5-10份、甜味剂0.6-1份、香味剂0.2-0.5份、酸味剂1-3份、辣味剂0.4-0.8份、鲜味剂0.3-0.6份；
所述甜味剂为甘草酸三钾；
所述香味剂为3-甲基环十五酮；
所述酸味剂为柠檬酸；
所述辣味剂为辣椒精；
所述鲜味剂为鸟苷酸钠。
9.根据权利要求8所述蛋白粉的应用，其特征在于，所述诱食剂的制备方法，包括以下步骤：
(a)将大茴香、枸杞、茯苓、薄荷、山楂、马齿苋、大蒜、肉桂去除水分至≤8％；
(b)将步骤(a)去除水分的大茴香、枸杞、茯苓、薄荷、山楂、马齿苋、大蒜、肉桂进行粉碎混合，加入150-300份水，在料液比为1:12-14(W/V)，微波功率为170-200W，提取温度为89-94℃，提取时间为1.2-1.5h，接着滤渣、浓缩、干燥至含水量≤3％，制得药粉；
(c)将步骤(b)制得的药粉中加入二甲基-β-丙酸噻亭、甜菜碱、核苷酸、甜味剂、香味剂、酸味剂、辣味剂、鲜味剂，然后混合均匀，制得诱食剂。
10.根据权利要求3所述蛋白粉的应用，其特征在于，所述罗非鱼饲料的制备方法，包括以下步骤：
S1：分别将大豆粕、花生粕、玉米、棉籽粕、菜籽粕晒干并粉碎，过100-300目的筛子后混合均匀，制得均匀混合物；
S2：向步骤S1制得的均匀混合物中添加蛋白粉、高筋面粉、维生素、氨基酸、微量元素、植物油、诱食剂、海豚链球菌病生物制剂，以及100-160份水，再次混合均匀，制得湿饲料；
所述海豚链球菌病生物制剂的制备方法，包括以下步骤：
(A)在生物发酵罐上罐空消，所述空消是在温度为130℃、压力为1.5公斤下消毒30min进行的；
(B)向步骤(A)的生物发酵罐中加入培养基，所述培养基以重量份为单位，包括以下原料：蛋白胨180-220份、酵母浸出汁粉130-150份、牛肉膏45-65份、微量元素2-4份、水1000-2000份，所述微量元素以重量份为单位，包括以下原料：锌元素4-9份、硒元素3-6份、碘元素2-4份；
(C)对步骤(B)的培养基进行实消，所述实消是在温度为121℃、压力为1.5公斤下消毒3min进行的；
(D)向步骤(C)已消毒的培养基中接入红色诺卡氏菌ATCC11653、珊瑚色诺卡氏菌ACCC40100、芽孢菌、硝化菌、放线菌、光合菌，在温度为32-36℃，转速为200-220r/min下进行菌种发酵50-80h，所述红色诺卡氏菌ATCC11653、珊瑚色诺卡氏菌ACCC40100、芽孢菌、硝化菌、放线菌、光合菌的重量比为5-7:3-4:2-4:2-3:1-3:1-2；
(E)将步骤(D)完成菌种发酵的发酵液浓缩、干燥至含水量≤3％，经粉碎过100-300目筛子，制得海豚链球菌病生物制剂；
S3：把步骤S2制得的湿饲料制成直径0.1-0.3cm的颗粒并在温度为90-105℃下烘干至水分含量≤3.6％，最后冷却至25-30℃，制得罗非鱼饲料。
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