CN106719178A - 一种头足类的人工促熟方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种头足类的人工促熟方法，将头足类浸泡在含2.5~3.8%聚氨酯的海水中进行麻醉，在头足类眼窝窦处钻孔，用镊子将GnRH缓释包埋块推入，并使其自由浮动在窦中。有益效果为：在眼睛下放的眼窝窦中植入GnRH缓释包埋块，达到头足类促熟和催产的目的，这种人工催熟的方法能将头足类快速催熟，安全无害；制备的GnRH缓释包埋块释放时间长，释放速度均匀，可生物降解，能完全释放，不会造成环境污染或能源浪费；操作步骤简单，效果明显，海洋头足类的人工繁育不必再依靠其自然繁殖和产卵。
Description
技术领域
本发明涉及人工催熟领域，具体是一种头足类的人工促熟方法。
背景技术
近年来，海洋头足类繁育和增养殖在国内已开始起步，发展势头良好，但至今海洋头足类的人工繁育仍依靠其自然繁殖和产卵，而人工催产和促熟方法还未形成，不利于头足类规模化繁育和养殖产业的发展。现有技术如Wells M J， Wells J. Optic glandimplants and their effects on the gonads of Octopus.[J]. Journal ofExperimental Biology， 1975， 62(3):579-88.表明：二趾头足类动物的视腺能分泌激素来控制性腺及其管道的状态，可通过切除大脑中对视腺的抑制神经，迫使动物早熟。只有在视腺存在条件下，卵巢片段才能进行卵母细胞的分裂。并且视神经腺的提取物能在体外控制软黄蛋白的合成。因此，可通过切除和植入视腺来控制动物的生长状态。
GnRH，也称作LHRH，是负责卵泡刺激激素(FSH) 和促黄体激素(LH) 分泌的十肽激素。关于GnRH缓释剂的制备已有研究，如欧洲专利号1001743 公开了含活性成分和完全包围住核心的鞘。具有完全包围核心的鞘降低了性能，具体在于：由于鞘阻断了释放，施用后短时间内活性成分释放的水平低。这种植入剂还有第二个缺点：其生产工艺相对复杂。美国专利号5，851，547 公开了一种控释药物制剂，其包含溶胀的内层和控制着内层溶胀的不能透水的外层。药物仅通过内层的至少一个开口端释放，且内层是不崩解的，其在药物释放的时间段里保持着原始形状。该制剂的问题是药物的释放仅受一个参数控制：可通过开口端释放的药量。这是内层是不崩解的后果，并且它限制了释放期。中国专利号CN102413835B，公开了一种包含GnRH 类似物的缓释制剂，包含生物可降解聚合物或共聚物的活性物质的控释和缓释的药物组合物。此外，还涉及用于至少一种活性物质例如肽类或激素类及其类似物的控释或缓释的药物组合物和这类药物组合物的制备方法
发明内容
本发明的目的在于提供一种能快速催熟，安全无害的头足类的人工促熟方法。
本发明针对背景技术提到的问题，采取的技术方案为：
一种头足类的人工促熟方法，具体步骤为：将头足类浸泡在含2.5~3.8%聚氨酯的海水中进行麻醉，防止植入GnRH缓释包埋块时喷墨，浸泡时间为60~100s。在头足类眼窝窦处钻孔，用镊子将GnRH缓释包埋块推入，并使其自由浮动在窦中。其中，GnRH缓释包埋块的制备步骤为：
1. PLGA粉末的制备：将LA和LG按摩尔比70 ：30 ~90 ：10加入反应釜中，抽真空，70~80℃减压蒸馏0.8~1.2h，除去原料中10~20%的水，加入催化剂氯化亚锡，对甲基苯磺酸和花生四烯酸，加入量各为原料质量的0.2~0.5%，0.4~0.8%，0.001~0.003%，加热，温度控制在120~130℃，低真空下反应1.8~2.2h，继续升温，温度为165~175℃熔融缩聚，系统压力小于50~100Pa，反应6~8h后出料，研磨成粉。加入催化剂能加快缩聚速度，反应时间大大缩短，还能减少副反应，产物转化率提高；
2. 聚合物核心制备：将GnRH粉末和步骤1制备的10~30%PLGA粉末过筛，，以避免团块存在于混合物中，混合20~30min，加入原料质量0.1~0.4%的碳酸二甲酯，加热搅拌挤压，温度为135~140℃，搅拌速率为8~12rpm，降温制成直径为0.6~1.2mm的小丸。小丸中GnRH结构没有被破坏，活性高，并且小丸中其他成分对GnRH有保护作用，缓释时与GnRH一起流出，有助于GnRH融入到血液；
3. 聚合物套制备：往步骤1中制备的剩余PLGA粉末中加入三乙醇胺和尼泊金乙酯，加入量各为原料的0.1~0.3%和0.2~0.5%，加热搅拌挤压，温度为140~150℃，搅拌速率为2~6rpm，切割挤成空心开口方形；上述成分结合可形成快速催熟的稳定产物，具有缓释时间长、对生物刺激小的特点。
4. GnRH缓释包埋块制备：将步骤2制备的核心置于步骤3制备的空心开口方形套中，在25kGy 以上进行γ- 照射，得到GnRH缓释包埋块。上述制备的GnRH缓释包埋块的释放时间长，释放速度均匀，能完全释放。
与现有技术相比，本发明的优点在于：在眼睛下放的眼窝窦中植入GnRH缓释包埋块，达到头足类促熟和催产的目的，这种人工催熟的方法能将头足类快速催熟，安全无害；制备的GnRH缓释包埋块释放时间长，释放速度均匀，可生物降解，能完全释放，不会造成环境污染或能源浪费；操作步骤简单，效果明显，海洋头足类的人工繁育不必再依靠其自然繁殖和产卵。
具体实施案例
下面通过实施例对本发明内容作进一步说明：
实施例1：
一种头足类的人工促熟方法，具体步骤为：将头足类浸泡在含2.5~3.8%聚氨酯的海水中进行麻醉，防止植入GnRH缓释包埋块时喷墨，浸泡时间为60~100s。在头足类眼窝窦处钻孔，用镊子将GnRH缓释包埋块推入，并使其自由浮动在窦中。其中，GnRH缓释包埋块的制备步骤为：
1. PLGA粉末的制备：将LA和LG按摩尔比70 ：30 ~90 ：10加入反应釜中，抽真空，70~80℃减压蒸馏0.8~1.2h，除去原料中10~20%的水，加入催化剂氯化亚锡，对甲基苯磺酸和花生四烯酸，加入量各为原料质量的0.2~0.5%，0.4~0.8%，0.001~0.003%，加热，温度控制在120~130℃，低真空下反应1.8~2.2h，继续升温，温度为165~175℃熔融缩聚，系统压力小于50~100Pa，反应6~8h后出料，研磨成粉。加入催化剂能加快缩聚速度，反应时间大大缩短，还能减少副反应，产物转化率提高；
2. 聚合物核心制备：将GnRH粉末和步骤1制备的10~30%PLGA粉末过筛，，以避免团块存在于混合物中，混合20~30min，加入原料质量0.1~0.4%的碳酸二甲酯，加热搅拌挤压，温度为135~140℃，搅拌速率为8~12rpm，降温制成直径为0.6~1.2mm的小丸。小丸中GnRH结构没有被破坏，活性高，并且小丸中其他成分对GnRH有保护作用，缓释时与GnRH一起流出，有助于GnRH融入到血液；
3. 聚合物套制备：往步骤1中制备的剩余PLGA粉末中加入三乙醇胺和尼泊金乙酯，加入量各为原料的0.1~0.3%和0.2~0.5%，加热搅拌挤压，温度为140~150℃，搅拌速率为2~6rpm，切割挤成空心开口方形；
4.GnRH缓释包埋块制备：将步骤2制备的核心置于步骤3制备的空心开口方形套中，在25kGy 以上进行γ- 照射，得到GnRH缓释包埋块。上述制备的GnRH缓释包埋块的释放时间长，释放速度均匀，可生物降解，能完全释放。
实施例2：
一种头足类的人工促熟方法，以海螵蛸为例进行试验，将海螵蛸麻醉，在眼睛下方的眼窝窦中植入视腺或GnRH缓释包埋块，达到海螵蛸促熟和催产的目的。由于海螵蛸是石灰质的内骨骼，植入后应该是无损伤的；同时由于其疏松多孔，也容易让激素释放到体内发挥作用。
具体步骤为：将海螵蛸浸泡在含3%聚氨酯的海水中进行麻醉，防止植入GnRH缓释包埋块时喷墨，浸泡时间为70s。在海螵蛸眼窝窦处钻孔，用镊子将GnRH缓释包埋块推入，并使其自由浮动在窦中。其中，GnRH缓释包埋块的制备步骤为：
1. PLGA粉末的制备：将LA和LG按摩尔比7:1加入反应釜中，抽真空，75℃减压蒸馏1h，除去原料中18%的水，加入催化剂氯化亚锡，对甲基苯磺酸和花生四烯酸，加入量各为原料质量的0.3%，0.6%，0.001%，加热，温度控制在125℃，低真空下反应2h，继续升温，温度为170℃熔融缩聚，系统压力小于70Pa，反应7h后出料，研磨成粉。加入催化剂能加快缩聚速度，反应时间大大缩短，还能减少副反应，产物转化率提高；
2. 聚合物核心制备：将GnRH粉末和步骤1制备的20%PLGA粉末过筛，，以避免团块存在于混合物中，混合20min，加入原料质量0.2%的碳酸二甲酯，加热搅拌挤压，温度为138℃，搅拌速率为10rpm，降温制成直径为0.8mm的小丸。小丸中GnRH结构没有被破坏，活性高，并且小丸中其他成分对GnRH有保护作用，缓释时与GnRH一起流出，有助于GnRH融入到血液；
3. 聚合物套制备：往步骤1中制备的剩余PLGA粉末中加入三乙醇胺和尼泊金乙酯，加入量各为原料的0.2%和0.3%，加热搅拌挤压，温度为145℃，搅拌速率为4rpm，切割挤成空心开口方形；
4. GnRH缓释包埋块制备：将步骤2制备的核心置于步骤3制备的空心开口方形套中，在30kGy进行γ- 照射，得到GnRH缓释包埋块。上述制备的GnRH缓释包埋块的释放时间长，释放速度均匀，可生物降解，能完全释放。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种头足类的人工促熟方法，其特征在于：所述的人工催熟方法为将头足类麻醉，将GnRH缓释包埋块植入到眼窝窦中。
2.根据权利要求1所述的一种头足类的人工促熟方法，其特征在于：所述的GnRH缓释包埋块的制备步骤为：
PLGA粉末的制备：先将LA和LG进行脱水，加入催化剂，加热，低真空下反应，继续升温，熔融缩聚，研磨成粉；
聚合物核心制备：将GnRH粉末和步骤1制备的10~30%PLGA粉末过筛，混合均匀，加入碳酸二甲酯，加热搅拌挤压，降温制成小丸；
聚合物套制备：往步骤1中制备的剩余PLGA粉末中加入三乙醇胺和尼泊金乙酯，加热搅拌挤压，并切割挤成空心开口方形；
GnRH缓释包埋块制备：将步骤2制备的核心置于步骤3制备的空心开口方形套中，在25kGy 以上进行γ- 照射。
3.根据权利要求2所述的GnRH缓释包埋块制备方法，其特征在于，所述的催化剂为：氯化亚锡，对甲基苯磺酸和花生四烯酸。
4.根据权利要求2所述的GnRH缓释包埋块制备方法，其特征在于，所述的步骤1中LA和LG按摩尔比70 ：30 ~90 ：10加入。
5.根据权利要求2所述的GnRH缓释包埋块制备方法，其特征在于，所述的步骤1中熔融缩聚反应温度为165~175℃，反应时间为6~8h。
6.根据权利要求1所述的一种头足类的人工促熟方法，其特征在于：所述的麻醉方法为：将头足类浸泡在含2.5~3.8%聚氨酯的海水中，浸泡时间为60~100s。
7.根据权利要求1所述的一种头足类的人工促熟方法，其特征在于：所述的植入方法为：在头足类眼窝窦处钻孔，用镊子将GnRH缓释包埋块推入。
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