CN106620845A - 可注射骨材料及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种可注射骨材料，包括温敏性高分子、多肽纳米纤维、羟基磷灰石、无机盐和水，所述温敏性高分子为海藻酸钠(多巴胺)‑g‑聚N‑异丙基丙烯酰胺，所述海藻酸钠(多巴胺)‑g‑聚N‑异丙基丙烯酰胺为海藻酸钠接枝聚N‑异丙基丙烯酰胺和多巴胺，所述聚N‑异丙基丙烯酰胺的接枝率为20％‑50％，所述多巴胺的接枝率为5％‑30％，所述温敏高分子在所述可注射骨材料中的质量浓度为2％‑5％；所述多肽纳米纤维在所述可注射骨材料中的质量浓度为0.5％‑3％。本发明还提供上述可注射骨材料的制备方法。本发明提高了骨材料的黏性，并复合仿细胞外基质结构和生物学功能，适应人体温度快速固化粘结，具有增强的生物和力学性能，促进骨组织的再生修复。

Description

可注射骨材料及其制备方法
技术领域
本发明属于生物医用材料与生物医学工程领域。更确切的说，本发明涉及一种温敏可注射骨材料及其制备方法。
技术背景
可注射型骨填充材料由于其便携的操作性和可塑形性可以适用于各种形状的缺损部位而备受医生推崇，但是现有可注射型材料如聚甲基丙烯酸甲酯、磷酸钙、硫酸钙等都欠缺优异的生物学性能，而注射型水凝胶强度存在着力学性能不足及固化时间难于控制，并且黏性不足的问题。
发明内容
有鉴于如此，提供一种温敏可注射骨材料及其制备方法。
一种可注射骨材料，包括温敏性高分子、多肽纳米纤维、羟基磷灰石、无机盐和水，所述温敏性高分子为海藻酸钠(多巴胺)-g-聚N-异丙基丙烯酰胺(AAlg(DOAP)-g-PNIPAAm)，所述海藻酸钠(多巴胺)-g-聚N-异丙基丙烯酰胺(AAlg(DOAP)-g-PNIPAAm)为海藻酸钠(Alg)接枝聚N-异丙基丙烯酰胺(PNIPAAm)和多巴胺(DOPA)，所述聚N-异丙基丙烯酰胺(PNIPAAm)的接枝率为20％-50％，所述多巴胺(DOPA)的接枝率为5％-30％，所述温敏高分子在所述可注射骨材料中的质量浓度为2％-5％；所述多肽纳米纤维在所述可注射骨材料中的质量浓度为0.5％-3％。
进一步地，所述多肽纳米纤维的直径为20-500nm，长度为0.5-10mm。
进一步地，所述羟基磷灰石为纳米羟基磷灰石，所述纳米羟基磷灰石呈短棒状或针状结构，长度范围为50-200nm，宽度范围为5-30nm，所述纳米羟基磷灰石在所述可注射骨材料中的浓度范围为0.02-0.2g/mL。
进一步地，所述无机盐选自磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、硫酸钙、碳酸钙中的一种或几种，所述无机盐在所述可注射骨材料中的浓度范围为0.005-0.1mol/L。
进一步地，所述可注射骨材料的孔隙率为70％-95％，压缩强度大于10MPa。
一种可注射骨材料的制备方法，其特征在于，包括：
将多巴胺(DOPA)水溶液与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)进行反应，然后加入海藻酸钠-g-聚N-异丙基丙酰胺(AAlg-g-PNIPAAm)溶液，控制PH为5.0，反应4-8小时后，透析冷冻干燥得到海藻酸钠(多巴胺)-g-聚N-异丙基丙烯酰胺(AAlg(DOAP)-g-PNIPAAm)反应产物；
将所述海藻酸钠(多巴胺)-g-聚N-异丙基丙烯酰胺(AAlg(DOAP)-g-PNIPAAm)、多肽纳米纤维与纳米羟基磷灰石、无机盐与水复合，配制成温敏性可注射骨材料，在体温条件下自固化成型。
进一步地，所述可注射骨材料的固化时间为5-10分钟。
进一步地，所述温敏性可注射骨材料中所述海藻酸钠(多巴胺)-g-聚N-异丙基丙烯酰胺(AAlg(DOAP)-g-PNIPAAm)的质量浓度为2％-5％，所述多肽纳米纤维的质量浓度为0.5％-3％，所述纳米羟基磷灰石的浓度范围为0.02-0.2g/mL，所述无机盐的浓度为0.005-0.1mol/L。
进一步地，所述多肽纳米纤维是由多肽在水环境下静置0.5小时以上自发组装而成，所述自组装多肽包括疏水多肽片段，促细胞粘附多肽片段和阴离子多肽片段。
进一步地，所述疏水多肽片段选自缬氨酸-丙氨酸-缬氨酸-丙氨酸-缬氨酸-丙氨酸(VAVAVA)、缬氨酸-苯丙氨酸-缬氨酸-苯丙氨酸-缬氨酸-苯丙氨酸(VFVFVF)、丙氨酸-苯丙氨酸-丙氨酸-苯丙氨酸-丙氨酸-苯丙氨酸(AFAFAF)、丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸(AAAAAA)、缬氨酸-缬氨酸-缬氨酸-缬氨酸-缬氨酸-缬氨酸(VVVVVV)、苯丙氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸(FFFF)中的一种；所述促细胞粘附多肽片段选自精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)、酪氨酸-异亮氨酸-甘氨酸-丝氨酸-精氨酸(YIGSR)，异亮氨酸-赖氨酸-缬氨酸-丙氨酸-缬氨酸(IKVAV)、精氨酸-谷氨酸-天冬氨酸-缬氨酸(REDV)、脯氨酸-组氨酸-丝氨酸-精氨酸-天冬酰胺(PHSRN)中的一种；所述阴离子多肽片段选自谷氨酸-谷氨酸-谷氨酸(EEE)、天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸(DDD)、谷氨酸-天冬氨酸-谷氨酸(EDE)、天冬氨酸-谷氨酸-天冬氨酸(DED)中的一种。
本发明由于通过制备在体温环境下快速固化的海藻酸钠(多巴胺)-g-聚N-异丙基丙烯酰胺(AAlg(DOAP)-g-PNIPAAm)温敏性高分子，其中多巴胺(dopamine,DOAP)来增加了骨材料的黏性，并复合仿细胞外基质结构和生物学功能的自组装多肽纤维和天然骨结构中固有的纳米羟基磷灰石成分，制备适应人体温度快速固化粘结的骨材料，具有增强的生物和力学性能，促进骨组织的再生修复。
附图说明
图1为在本发明实施例中的可注射骨材料的制备方法流程图。如下具体实施方式将结合上述附图进一步说明本发明。
具体实施方式
以下以具体实施例来说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围不限于此：
在本发明实施例中，如图1所示，一种可注射骨材料的制备方法，包括以下步骤：
步骤S101：将多巴胺(dopamine,DOAP)水溶液与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)进行反应，然后加入海藻酸钠-g-聚N-异丙基丙酰胺(AAlg-g-PNIPAAm)溶液，控制PH为5.0，反应4-8小时后，透析冷冻干燥得到海藻酸钠(多巴胺)-g-聚N-异丙基丙烯酰胺(AAlg(DOAP)-g-PNIPAAm)反应产物；
步骤S102：将所述海藻酸钠(多巴胺)-g-聚N-异丙基丙烯酰胺(AAlg(DOAP)-g-PNIPAAm)、多肽纳米纤维与纳米羟基磷灰石、无机盐与水复合，配制成温敏性可注射骨材料，在体温(通常为36-38℃)条件下自固化成型。
在本发明的实施例中，所述可注射骨材料的固化时间为5-10分钟。
在本发明的实施例中，所述海藻酸钠-g-聚N-异丙基丙酰胺(AAlg-g-PNIPAAm)的制备方法包括：
(1)氨基化海藻酸的合成：海藻酸钠溶解于去离子水中，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)冰浴下反应一段时间，加入己二酸二酰肼(ADH)，用HCL调节PH值至5.0，冰浴反应后升温常温反应一段时间，反应结束后加入一定浓度氯化钠，用无水乙醇沉淀、洗涤，再溶于去离子水中透析数天，冻干后既得到氨基化海藻酸。
(2)聚N-异丙基丙烯酰胺的合成：N-异丙基丙烯酰胺(NIPAm)和偶氮二氰基戊酸(ACVA)溶解于甲醇中，氮气鼓泡下升温反应一段时间，反应结束后将溶液倒入热水中，沉淀、洗涤数次，溶于水中冷冻干燥后得到聚N-异丙基丙烯酰胺(PNIPAAm)。
(3)海藻酸钠-聚N-异丙基丙烯酰胺的合成：分别将氨基化海藻酸、聚N-异丙基丙烯酰胺(PNIPAAm)溶解于去离子水中，按照一定比例在聚N-异丙基丙烯酰胺(PNIPAAm)溶液中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)4℃条件下反应一段时间，反应结束后将两种溶液混合调节pH值为5.0室温(通常为18-25℃)下反应一段时间，之后室温透析冷冻干燥既得到海藻酸钠-聚N-异丙基丙烯酰胺(AAlg-g-PNIPAAm)。
在本发明实施例中，所述多肽纳米纤维是由多肽在水环境下静置0.5小时以上自发组装而成，所述自组装多肽包括疏水多肽片段，促细胞粘附多肽片段和阴离子多肽片段。
在本发明实施例中，所述疏水多肽片段选自缬氨酸-丙氨酸-缬氨酸-丙氨酸-缬氨酸-丙氨酸(VAVAVA)、缬氨酸-苯丙氨酸-缬氨酸-苯丙氨酸-缬氨酸-苯丙氨酸(VFVFVF)、丙氨酸-苯丙氨酸-丙氨酸-苯丙氨酸-丙氨酸-苯丙氨酸(AFAFAF)、丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸(AAAAAA)、缬氨酸-缬氨酸-缬氨酸-缬氨酸-缬氨酸-缬氨酸(VVVVVV)、苯丙氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸(FFFF)中的一种；所述促细胞粘附多肽片段选自精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)、酪氨酸-异亮氨酸-甘氨酸-丝氨酸-精氨酸(YIGSR)，异亮氨酸-赖氨酸-缬氨酸-丙氨酸-缬氨酸(IKVAV)、精氨酸-谷氨酸-天冬氨酸-缬氨酸(REDV)、脯氨酸-组氨酸-丝氨酸-精氨酸-天冬酰胺(PHSRN)中的一种；所述阴离子多肽片段选自谷氨酸-谷氨酸-谷氨酸(EEE)、天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸(DDD)、谷氨酸-天冬氨酸-谷氨酸(EDE)、天冬氨酸-谷氨酸-天冬氨酸(DED)中的一种。
在本发明的实施例中，所述多肽纳米纤维的制备方法的主要步骤包括：首先将多肽碳端的氨基酸连接到固相树脂上，再将碳端至氮端的含有保护基团的氨基酸依次连接在固相树脂的碳端氨基酸上，加入氨基酸的保护基团FMOC的脱除剂、缩合剂和加速剂，偶联循环至多肽链缩合完成，用切落剂将多肽从树脂上切割下来，用合适的溶剂进行沉淀，得到多肽粗产品，将多肽粗产品分离纯化，得到目标多肽，目标多肽在水溶液环境下自组装形成多肽纳米纤维。
在本发明实施例中，上述方法制备的可注射骨材料，包括温敏性高分子、多肽纳米纤维、羟基磷灰石、无机盐和水，所述温敏性高分子为海藻酸钠(多巴胺)-g-聚N-异丙基丙烯酰胺(AAlg(DOAP)-g-PNIPAAm)，所述海藻酸钠(多巴胺)-g-聚N-异丙基丙烯酰胺(AAlg(DOAP)-g-PNIPAAm)为海藻酸钠(Alg)接枝聚N-异丙基丙烯酰胺(PNIPAAm)和多巴胺(DOPA)，所述聚N-异丙基丙烯酰胺(PNIPAAm)的接枝率为20％-50％，所述多巴胺(DOPA)的接枝率为5％-30％，所述温敏高分子在所述可注射骨材料中的质量浓度为2％-5％；所述多肽纳米纤维在所述可注射骨材料中的质量浓度为0.5％-3％。
在本发明的实施例中，所述海藻酸钠(Alg)接枝聚N-异丙基丙烯酰胺(PNIPAAm)和多巴胺(DOPA)，所述聚N-异丙基丙烯酰胺(PNIPAAm)具有温度敏感性，而多巴胺(DOPA)为黏性材料，因此能提供骨材料较好的黏性，并且能适应人体温度快速固化。
在本发明实施例中所述多肽纳米纤维的直径为20-500nm，长度为0.5-10mm。
在本发明实施例中，所述羟基磷灰石为纳米羟基磷灰石，所述纳米羟基磷灰石呈短棒状或针状结构，长度范围为50-200nm，宽度范围为5-30nm，所述纳米羟基磷灰石在所述可注射骨材料中的浓度范围为0.02-0.2g/mL。在微观的角度上，所述纳米级别的羟基磷灰石的粒子相较于普通的羟基磷灰石粒子，尺寸小、溶解度高，比表面积大，表面能较大，因而生物活性和生物相容性更好，并且纳米状分散的羟基磷灰石对基体起到弥散增强作用，具有优异的力学性能。
所述可注射骨材料还包括无机盐，所述无机盐选自磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、硫酸钙、碳酸钙中的一种或几种，所述无机盐在所述可注射骨材料中的浓度范围为0.005-0.1mol/L。所述无机盐可作为交联剂，并且起到缓冲液的作用。
在本发明的实施例中，所述多肽纳米纤维表面富集的阴离子可以被钙离子交联，也可以与海藻酸分子上残留的羧基一起被钙离子交联，增强复合物凝胶的力学性能，提高复合物凝胶的降解周期。
在本发明的实施例中，所述可注射骨材料的孔隙率为70％-95％，压缩强度大于10MPa。
实施例1
配置5mg/mL的多巴胺(DOPA)水溶液，加入1mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)在4℃的条件下反应，反应结束后加入10mg/mL海藻酸钠-聚N-异丙基丙酰胺(AAlg-g-PNIPAAm)溶液，控制pH为5.0，室温(通常为18-25℃)反应4-8小时，之后室温透析4天，冷冻干燥后得到海藻酸钠(多巴胺)-g-聚N-异丙基丙烯酰胺(AAlg(DOAP)-g-PNIPAAm)反应产物；
将多肽VAVAVARGDEEE溶解去离子水，制成质量百分比浓度为2％的溶液，超声分散，室温(通常为18-25℃)下静置0.5小时，即得到多肽自组装纳米纤维溶液，向上述自组装纳米纤维溶液中加入10mL0.2mol/L的磷酸氢二钠，再加入40mL0.2mol/L的硫酸钙悬浊液，搅拌反应1分钟，即得到交联的自组装多肽纳米纤维，能增强复合物凝胶的力学性能，提高复合物凝胶的降解周期；
将海藻酸钠(多巴胺)-g-聚N-异丙基丙烯酰胺(AAlg(DOAP)-g-PNIPAAm)溶于去离子水中，配制成溶液(S1)；用上述方法制备的多肽自组装纳米纤维溶液(S2)；将纳米羟基磷灰石分散于去离子水中，配制成悬浊液(S3)；配制磷酸二氢钠溶液(S4)；将硫酸钙分散于去离子水中，配制成悬浊液(S5)。在本实施例中，S1的质量浓度为8％，S2的质量浓度为2％，S3的浓度为0.2g/mL，S4的浓度为0.2mol/L，S5的浓度为0.2mol/L，在其它实施例中，不限于此浓度；
分别取50份S1，20份S2，25份S3和1份S4，搅拌混合均匀，再加入4份S5搅拌复合均匀，即得到粘稠的可注射骨材料。进一步将该可注射骨材料置于37度恒温箱中孵化，约5分钟即得到成型的骨材料。
实施例2
配置5mg/mL的多巴胺(DOPA)水溶液，加入1mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)在4℃的条件下反应，反应结束后加入8mg/mL海藻酸钠-聚N-异丙基丙酰胺(AAlg-g-PNIPAAm)溶液，控制pH为5.0，室温(通常为18-25℃)反应4-8小时，之后室温(通常为18-25℃)透析4天，冷冻干燥后得到海藻酸钠(多巴胺)-g-聚N-异丙基丙烯酰胺(AAlg(DOAP)-g-PNIPAAm)反应产物；
制备可生物降解多肽VFVFVFIKVAVEDE，方法参照实施例1；
将海藻酸钠(多巴胺)-g-聚N-异丙基丙烯酰胺溶于去离子水中，配制成溶液(S1)；用上述方法制备的多肽自组装纳米纤维溶液(S2)；将纳米羟基磷灰石分散于去离子水中，配制成悬浊液(S3)；配制磷酸氢二钠溶液(S4)；将碳酸钙分散于去离子水中，配制悬浊液(S5)。在本实施例中，S1的质量浓度为10％，S2的质量浓度为4％，S3的浓度为0.5g/mL，S4的浓度为0.1mol/L，S5的浓度为0.1mol/L，在其它实施例中，不限于此浓度；
分别取50份S1，25份S2，20份S3和2份S4，搅拌混合均匀，再加入3份S5搅拌复合均匀，即得到粘稠的可注射骨材料。进一步将该可注射骨材料置于37度恒温箱中孵化，约5分钟即得到成型的骨材料。
实施例3
配置6mg/mL的多巴胺(DOPA)水溶液，加入0.8mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)在4℃的条件下反应，反应结束后加入8mg/mL海藻酸钠-聚N-异丙基丙酰胺(AAlg-g-PNIPAAm)溶液，控制pH为5.0，室温(通常为18-25℃)反应4-8小时，之后室温透析4天，冷冻干燥后得到海藻酸钠(多巴胺)-g-聚N-异丙基丙烯酰胺(AAlg(DOAP)-g-PNIPAAm)反应产物；
制备可生物降解多肽AFAFAFPHSRNDED，方法参照实施例1；
将海藻酸钠(多巴胺)-g-聚N-异丙基丙烯酰胺(AAlg(DOAP)-g-PNIPAAm)溶于去离子水中，配制成溶液(S1)；用上述方法制备的多肽自组装纳米纤维溶液(S2)；将纳米羟基磷灰石分散于去离子水中，配制成悬浊液(S3)；配制磷酸氢二钠溶液(S4)；将硫酸钙分散于去离子水中，配制成悬浊液(S5)。在本实施例中，S1的质量浓度为9％，S2的质量浓度为3％，S3的浓度为0.3g/mL，S4的浓度为0.2mol/L，S5的浓度为0.1mol/L，在其它实施例中，不限于此浓度；
分别取45份S1，25份S2，25份S3和1份S4，搅拌混合均匀，再加入4份S5搅拌复合均匀，即得到粘稠的可注射骨材料。进一步将该可注射骨材料置于37度恒温箱中孵化，约5分钟即得到成型的骨材料。
实施例4
配置5mg/mL的多巴胺(DOPA)水溶液，加入0.8mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)在4℃的条件下反应，反应结束后加入10mg/mL海藻酸钠-聚N-异丙基丙酰胺(AAlg-g-PNIPAAm)溶液，控制pH为5.0，室温(通常为18-25℃)反应4-8小时，之后室温透析4天，冷冻干燥后得到海藻酸钠(多巴胺)-g-聚N-异丙基丙烯酰胺(AAlg(DOAP)-g-PNIPAAm)反应产物；
制备可生物降解多肽AAAAAYIGSRDDD，方法参照实施例1；
将海藻酸钠(多巴胺)-g-聚N-异丙基丙烯酰胺(AAlg(DOAP)-g-PNIPAAm)溶于去离子水中，配制成溶液(S1)；用上述方法制备的多肽自组装纳米纤维溶液(S2)；将纳米羟基磷灰石分散于去离子水中，配制成悬浊液(S3)；配制磷酸氢二钠溶液(S4)；将碳酸钙分散于去离子水中，配制成悬浊液(S5)。在本实施例中，S1的质量浓度为8％，S2的质量浓度为2％，S3的浓度为0.2g/mL，S4的浓度为0.2mol/L，S5的浓度为0.1mol/L，在其它实施例中，不限于此浓度；
分别取40份S1，25份S2，25份S3和4份S4，搅拌混合均匀，再加入6份S5搅拌复合均匀，即得到粘稠的可注射骨材料。进一步将该可注射骨材料置于37度恒温箱中孵化，约5分钟即得到成型的骨材料。

Claims (10)

1.一种可注射骨材料，包括温敏性高分子、多肽纳米纤维、羟基磷灰石、无机盐和水，所述温敏性高分子为海藻酸钠(多巴胺)-g-聚N-异丙基丙烯酰胺(AAlg(DOAP)-g-PNIPAAm)，所述海藻酸钠(多巴胺)-g-聚N-异丙基丙烯酰胺(AAlg(DOAP)-g-PNIPAAm)为海藻酸钠(Alg)接枝聚N-异丙基丙烯酰胺(PNIPAAm)和多巴胺(DOPA)，所述聚N-异丙基丙烯酰胺(PNIPAAm)的接枝率为20％-50％，所述多巴胺(DOPA)的接枝率为5％-30％，所述温敏高分子在所述可注射骨材料中的质量浓度为2％-5％；所述多肽纳米纤维在所述可注射骨材料中的质量浓度为0.5％-3％。
2.如权利要求1所述的可注射骨材料，其特征在于，所述多肽纳米纤维的直径为20-500nm，长度为0.5-10mm。
3.如权利要求1所述的可注射骨材料，其特征在于，所述羟基磷灰石为纳米羟基磷灰石，所述纳米羟基磷灰石呈短棒状或针状结构，长度范围为50-200nm，宽度范围为5-30nm，所述纳米羟基磷灰石在所述可注射骨材料中的浓度范围为0.02-0.2g/mL。
4.如权利要求1所述的可注射骨材料，其特征在于，所述无机盐选自磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、硫酸钙、碳酸钙中的一种或几种，所述无机盐在所述可注射骨材料中的浓度范围为0.005-0.1mol/L。
5.如权利要求1所述的可注射骨材料，其特征在于，所述可注射骨材料的孔隙率为70％-95％，压缩强度大于10MPa。
6.一种可注射骨材料的制备方法，其特征在于，包括：
将多巴胺(DOPA)水溶液与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)进行反应，然后加入海藻酸钠-g-聚N-异丙基丙酰胺(AAlg-g-PNIPAAm)溶液，控制PH为5.0，反应4-8小时，透析冷冻干燥得到海藻酸钠(多巴胺)-g-聚N-异丙基丙烯酰胺(AAlg(DOAP)-g-PNIPAAm)反应产物；
将所述海藻酸钠(多巴胺)-g-聚N-异丙基丙烯酰胺(AAlg(DOAP)-g-PNIPAAm)、多肽纳米纤维与纳米羟基磷灰石、无机盐与水复合，配制成温敏性可注射骨材料，在体温条件下自固化成型。
7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述可注射骨材料的固化时间为5-10分钟。
8.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述温敏性可注射骨材料中所述海藻酸钠(多巴胺)-g-聚N-异丙基丙烯酰胺(AAlg(DOAP)-g-PNIPAAm)的质量浓度为2％-5％，所述多肽纳米纤维的质量浓度为0.5％-3％，所述纳米羟基磷灰石的浓度范围为0.02-0.2g/mL，所述无机盐的浓度为0.005-0.1mol/L。
9.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述多肽纳米纤维是由多肽在水环境下静置0.5小时以上自发组装而成，所述自组装多肽包括疏水多肽片段，促细胞粘附多肽片段和阴离子多肽片段。
10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述疏水多肽片段选自缬氨酸-丙氨酸-缬氨酸-丙氨酸-缬氨酸-丙氨酸(VAVAVA)、缬氨酸-苯丙氨酸-缬氨酸-苯丙氨酸-缬氨酸-苯丙氨酸(VFVFVF)、丙氨酸-苯丙氨酸-丙氨酸-苯丙氨酸-丙氨酸-苯丙氨酸(AFAFAF)、丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸(AAAAAA)、缬氨酸-缬氨酸-缬氨酸-缬氨酸-缬氨酸-缬氨酸(VVVVVV)、苯丙氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸(FFFF)中的一种；所述促细胞粘附多肽片段选自精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)、酪氨酸-异亮氨酸-甘氨酸-丝氨酸-精氨酸(YIGSR)，异亮氨酸-赖氨酸-缬氨酸-丙氨酸-缬氨酸(IKVAV)、精氨酸-谷氨酸-天冬氨酸-缬氨酸(REDV)、脯氨酸-组氨酸-丝氨酸-精氨酸-天冬酰胺(PHSRN)中的一种；所述阴离子多肽片段选自谷氨酸-谷氨酸-谷氨酸(EEE)、天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸(DDD)、谷氨酸-天冬氨酸-谷氨酸(EDE)、天冬氨酸-谷氨酸-天冬氨酸(DED)中的一种。
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