CN106613968A - 一种提前打破大百合休眠的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种提前打破大百合休眠的方法，其特征在于：包括外植体获取、外植体消毒、外植体低温处理和芽诱导培养工序，采集秋季生长发育成熟大百合小球作为外植体，通过对外植体无菌消毒、低温处理后，置于适宜的温度、湿度和光照强度条件下进行培养，诱导芽的萌发。本发明利用大百合球茎材料，在室内繁殖幼苗，不受季节限制，既可以满足生产上的数量需求，又可保持母本性状，并有效克服大百合生产过程中球茎休眠时间的过长的问题，缩短大百合休眠时间，实现了大百合的规模化生产，具有较好的经济效益、社会效益和生态效益。
Description
技术领域
本发明涉及大百合无性繁殖技术，具体涉及一种提前打破大百合休眠的方法。
背景技术
大百合（Cardiocrinum giganteum（Wall.）Makino），又名百合莲、百洼等，茎卵形，叶纸质网状脉，花白色狭喇叭形，蒴果近球形。原产中国，因其植株粗壮、高大，显著区别于百合属植物而得名。是我国南方常用的野生民间草药，球径可入药，有性味淡，平。清热止咳，宽胸利气。用于肺痨咯血，咳嗽痰喘，小儿高烧，胃痛及反胃，呕吐功能；另外球径可编淀粉含量较高可晒干后磨粉直接食用。随着社会经济的快速发展和人民生活水平的不断提高，当前以大百合为原料生产的纯天然、安全、保健的食品品和医药用品需求量极大，而大量的采集势必造成野生大百合资源的日益枯竭。因此，推进人工繁殖育苗的规模化、产业化进程，缩短休眠周期，对满足制药行业的需求，实现资源可持续发展有着积极的意义。
大百合的繁殖方法主要为主要用分球法繁殖，其次可用鳞片扦插。由于大百合球茎休眠时间较长，所以大百合规模化生产就受到限制。因此，开发一种有效的提前打破大百合休眠的方法非常重要。
发明内容
本发明为了克服现有技术的不足，提供一种能克服大百合球茎休眠时间过长的问题方法，为下一步的增殖培养提供量足、质优的无菌材料，促进大百合在生产过程中快速繁殖体系的建立。
为了实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：
一种提前打破大百合休眠的方法，包括外植体获取、外植体消毒、外植体低温处理和芽诱导培养工序，采集秋季生长发育成熟大百合小球作为外植体，通过对外植体无菌消毒、低温处理后，置于适宜的温度、湿度和光照强度条件下进行培养，诱导芽的萌发；其主要操作步骤为：
（1）外植体获取：采集秋季生长发育成熟的大百合小球作为外植体，将采集得到的大百合小球放入封口袋，立即带回室内；
（2）外植体消毒：对大百合小球进行洗涤预处理后，再用化学试剂进行消毒处理；
（3）外植体低温处理：将消毒后的大百合小球用无菌吸水纸吸干表面水分，然后再将大百合小球放入温度为3-5℃的冰箱或冷库中低温处理，放置40-50天；
（4）芽诱导培养：将步骤（3）低温处理的大百合小球接种于诱导培养基中，再置于适宜的条件下进行室内培养，诱导芽萌发。
以上步骤（2）中所述的洗涤预处理的方法是将得到的大百合小球及时用自来水冲洗2-3遍，再用脱脂棉蘸低浓度的洗洁精溶液擦拭大百合小球，最后将大百合小球装入纱布袋内并置于流水中，冲洗15-20min。
以上所述的低浓度的洗洁精溶液是体积浓度为1.5-3.0%的洗洁精水溶液。
以上步骤（2）中所述的消毒处理的方法是将洗涤预处理后的大百合小球置于干净烧杯内，用无菌水清洗2-3次，然后将大百合小球转到超净工作台上，置入灭菌过的广口三角瓶，迅速向瓶内倒入福尔马林溶液灭菌液进行灭菌消毒，充分浸没大百合小球后加盖盖好瓶口，轻轻晃动三角瓶3-5min，然后将灭菌液倒出，然后立即将大百合小球倒入无菌水轻搅漂洗3次，每次不少于2min。
以上步骤（3）中所述的低温处理在将大百合小球放入冰箱或冷库的过程中，必须保证每个大百合小球之间不发生接触。
以上步骤（4）中所述的诱导培养基为MS培养基+30g/L蔗糖+6g/L琼脂+1.5-2.0mg/L 6-BA+10mg/L维生素C+0.05mg/LNAA。
以上步骤（4）中所述的室内培养条件为白天温度20 ±2℃，夜间温度 14 ±2 ℃，采用日光灯培养，光照强度1600-1800lx，光照时数10h•d- 1。
与现有技术相比，本发明具有以下的优点和积极效果：
1、本发明的一种提前打破大百合休眠的方法，利用球茎材料，在室内繁殖幼苗，不受季节限制，既可以满足生产上的数量需求，又可保持母本性状，并有效克服大百合生产过程中球茎休眠时间的过长的问题，缩短大百合休眠时间，实现了大百合的规模化生产。
2、本发明的一种提前打破大百合休眠的方法，通过对外植体进行预处理和消毒灭菌后，放入于冰箱进行低温处理，外植体发芽率较好，萌发时间为缩短3-4个月左右，可满足下一步的增殖培养的需要。
3、本发明的一种提前打破大百合休眠的方法，采用秋天生长发育成熟的小球作为外植体，保证了外植体活力。
4、本发明的一种提前打破大百合休眠的方法，材料易得，成本低，方法简单，操作方便，质量保证，能实现大百合快速繁殖体系的建立，具有较好的经济效益、社会效益和生态效益。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例1：
一种提前打破大百合休眠的方法，在9月初采集生长发育成熟的大百合小球作为外植体，将采集得到的大百合小球放入封口袋，立即带回室内，及时用自来水冲洗2-3遍，再用脱脂棉蘸体积浓度为1.5%的洗洁精水溶液擦拭大百合小球，最后将大百合小球装入纱布袋内并置于流水中，冲洗15min。将洗涤预处理后的大百合小球置于干净烧杯内，用无菌水清洗2-3次，然后将大百合小球转到超净工作台上，置入灭菌过的广口三角瓶，迅速向瓶内倒入福尔马林溶液灭菌液进行灭菌消毒，充分浸没大百合小球后加盖盖好瓶口，轻轻晃动三角瓶3-5min，然后将灭菌液倒出，然后立即将大百合小球倒入无菌水轻搅漂洗3次，每次不少于2min。将消毒后的大百合小球用无菌吸水纸吸干表面水分，然后再将大百合小球放入温度为3℃的冰箱中低温处理，放置40天。在将大百合小球放入冰箱的过程中，必须保证每个大百合小球之间不发生接触。将低温处理的大百合小球接种于诱导培养基中，将接种后的外植体置于白天温度20 ±2℃，夜间温度 14 ±2 ℃的室内，采用日光灯培养，光照强度1600-1800lx，光照时数10h•d- 1，诱导芽萌发。所述的诱导培养基中所述的诱导培养基为MS培养基+30g/L蔗糖+6g/L琼脂+1.5 mg/L 6-BA+10mg/L维生素C+0.05mg/LNAA。
7d后调查，外植体发芽率为87.6%，芽苗生长正常。
实施例2：
一种提前打破大百合休眠的方法，在10月中旬采集生长发育成熟的大百合小球作为外植体，将采集得到的大百合小球放入封口袋，立即带回室内，及时用自来水冲洗2-3遍，再用脱脂棉蘸体积浓度为2.0%的洗洁精水溶液擦拭大百合小球，最后将大百合小球装入纱布袋内并置于流水中，冲洗15min。将洗涤预处理后的大百合小球置于干净烧杯内，用无菌水清洗2-3次，然后将大百合小球转到超净工作台上，置入灭菌过的广口三角瓶，迅速向瓶内倒入福尔马林溶液灭菌液进行灭菌消毒，充分浸没大百合小球后加盖盖好瓶口，轻轻晃动三角瓶3-5min，然后将灭菌液倒出，然后立即将大百合小球倒入无菌水轻搅漂洗3次，每次不少于2min。将消毒后的大百合小球用无菌吸水纸吸干表面水分，然后再将大百合小球放入温度为3℃的冰箱或冷库中低温处理，放置45天。在将大百合小球放入冰箱的过程中，必须保证每个大百合小球之间不发生接触。将低温处理的大百合小球接种于诱导培养基中，将接种后的外植体置于白天温度20 ±2℃，夜间温度 14 ±2 ℃的室内，采用日光灯培养，光照强度1600-1800lx，光照时数10h•d- 1，诱导芽萌发。所述的诱导培养基中所述的诱导培养基为MS培养基+30g/L蔗糖+6g/L琼脂+2.0 mg/L 6-BA+10mg/L维生素C+0.05mg/LNAA。
7d后调查，外植体发芽率为90.6%，芽苗生长正常。
实施例3：
一种提前打破大百合休眠的方法，于11月上旬采集生长发育成熟的大百合小球作为外植体，将采集得到的大百合小球放入封口袋，立即带回室内，及时用自来水冲洗2-3遍，再用脱脂棉蘸体积浓度为2.5%的洗洁精水溶液擦拭大百合小球，最后将大百合小球装入纱布袋内并置于流水中，冲洗20min。将洗涤预处理后的大百合小球置于干净烧杯内，用无菌水清洗2-3次，然后将大百合小球转到超净工作台上，置入灭菌过的广口三角瓶，迅速向瓶内倒入福尔马林溶液灭菌液进行灭菌消毒，充分浸没大百合小球后加盖盖好瓶口，轻轻晃动三角瓶3-5min，然后将灭菌液倒出，然后立即将大百合小球倒入无菌水轻搅漂洗3次，每次不少于2min。将消毒后的大百合小球用无菌吸水纸吸干表面水分，然后再将大百合小球放入温度为5℃的冷库中低温处理，放置50天。在将大百合小球放入冰箱的过程中，必须保证每个大百合小球之间不发生接触。将低温处理的大百合小球接种于诱导培养基中，将接种后的外植体置于白天温度20 ±2℃，夜间温度 14 ±2 ℃的室内，采用日光灯培养，光照强度1600-1800lx，光照时数10h•d- 1，诱导芽萌发。所述的诱导培养基中所述的诱导培养基为MS培养基+30g/L蔗糖+6g/L琼脂+1.5 mg/L 6-BA+10mg/L维生素C+0.05mg/LNAA。
7d后调查，外植体发芽率为90.8%，芽苗生长正常。
实施例4：
一种提前打破大百合休眠的方法，在12月上旬采集生长发育成熟的大百合小球作为外植体，将采集得到的大百合小球放入封口袋，立即带回室内，及时用自来水冲洗2-3遍，再用脱脂棉蘸体积浓度为3.0%的洗洁精水溶液擦拭大百合小球，最后将大百合小球装入纱布袋内并置于流水中，冲洗20min。将洗涤预处理后的大百合小球置于干净烧杯内，用无菌水清洗2-3次，然后将大百合小球转到超净工作台上，置入灭菌过的广口三角瓶，迅速向瓶内倒入福尔马林溶液灭菌液进行灭菌消毒，充分浸没大百合小球后加盖盖好瓶口，轻轻晃动三角瓶3-5min，然后将灭菌液倒出，然后立即将大百合小球倒入无菌水轻搅漂洗3次，每次不少于2min。将消毒后的大百合小球用无菌吸水纸吸干表面水分，然后再将大百合小球放入温度为5℃的冷库中低温处理，放置45天。在将大百合小球放入冰箱的过程中，必须保证每个大百合小球之间不发生接触。将低温处理的大百合小球接种于诱导培养基中，将接种后的外植体置于白天温度20 ±2℃，夜间温度 14 ±2 ℃的室内，采用日光灯培养，光照强度1600-1800lx，光照时数10h•d- 1，诱导芽萌发。所述的诱导培养基中所述的诱导培养基为MS培养基+30g/L蔗糖+6g/L琼脂+2.0 mg/L 6-BA+10mg/L维生素C+0.05mg/LNAA。
7d后调查，外植体发芽率为89.2%，芽苗生长正常。
Claims (7)
1.一种提前打破大百合休眠的方法，其特征在于：包括外植体获取、外植体消毒、外植体低温处理和芽诱导培养工序，采集秋季生长发育成熟大百合小球作为外植体，通过对外植体无菌消毒、低温处理后，置于适宜的温度、湿度和光照强度条件下进行培养，诱导芽的萌发；其主要操作步骤为：
（1）外植体获取：采集秋季生长发育成熟的大百合小球作为外植体，将采集得到的大百合小球放入封口袋，立即带回室内；
（2）外植体消毒：对大百合小球进行洗涤预处理后，再用化学试剂进行消毒处理；
（3）外植体低温处理：将消毒后的大百合小球用无菌吸水纸吸干表面水分，然后再将大百合小球放入温度为3-5℃的冰箱或冷库中低温处理，放置40-50天；
（4）芽诱导培养：将步骤（3）低温处理的大百合小球接种于诱导培养基中，再置于适宜的条件下进行室内培养，诱导芽萌发。
2.根据权利要求1所述的一种提前打破大百合休眠的方法，其特征在于：步骤（2）中所述的洗涤预处理的方法是将得到的大百合小球及时用自来水冲洗2-3遍，再用脱脂棉蘸低浓度的洗洁精溶液擦拭大百合小球，最后将大百合小球装入纱布袋内并置于流水中，冲洗15-20min。
3.根据权利要求2所述的一种提前打破大百合休眠的方法，其特征在于：所述的低浓度的洗洁精溶液是体积浓度为1.5-3.0%的洗洁精水溶液。
4.根据权利要求1所述的提前打破大百合休眠的方法，其特征在于：步骤（2）中所述的消毒处理的方法是将洗涤预处理后的大百合小球置于干净烧杯内，用无菌水清洗2-3次，然后将大百合小球转到超净工作台上，置入灭菌过的广口三角瓶，迅速向瓶内倒入福尔马林溶液灭菌液进行灭菌消毒，充分浸没大百合小球后加盖盖好瓶口，轻轻晃动三角瓶3-5min，然后将灭菌液倒出，然后立即将大百合小球倒入无菌水轻搅漂洗3次，每次不少于2min。
5.根据权利要求1所述的提前打破大百合休眠的方法，其特征在于：步骤（3）中所述的低温处理在将大百合小球放入冰箱或冷库的过程中，必须保证每个大百合小球之间不发生接触。
6.根据权利要求1所述的一种提前打破大百合休眠的方法，其特征在于：步骤（4）中所述的诱导培养基为MS培养基+30g/L蔗糖+6g/L琼脂+1.5-2.0 mg/L 6-BA+10mg/L维生素C+0.05mg/LNAA。
7.根据权利要求1所述的一种提前打破大百合休眠的方法，其特征在于：步骤（4）中所述的室内培养条件为白天温度20 ±2℃，夜间温度 14 ±2 ℃，采用日光灯培养，光照强度1600-1800lx，光照时数10h•d- 1。
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Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108124537A (zh) * | 2017-12-24 | 2018-06-08 | 云南农业大学 | 一种激素处理促进大百合种子萌发的方法 |
| CN109463240A (zh) * | 2019-01-07 | 2019-03-15 | 长沙秋点兵信息科技有限公司 | 中药材多花黄精的种植方法 |
| CN111440689A (zh) * | 2020-04-23 | 2020-07-24 | 广西壮族自治区林业科学研究院 | 一种风味饮品的制备方法 |
| CN111903519A (zh) * | 2020-07-31 | 2020-11-10 | 广西壮族自治区林业科学研究院 | 一种诱导大百合解除休眠后生根的方法 |
| CN113455391A (zh) * | 2021-06-16 | 2021-10-01 | 广西壮族自治区林业科学研究院 | 一种以种子为外植体进行组培扩繁大百合的繁殖方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101617580A (zh) * | 2009-07-30 | 2010-01-06 | 云南农业大学 | 破除大百合种子休眠促其发芽的方法 |
| CN103070163A (zh) * | 2013-01-30 | 2013-05-01 | 云南农业大学 | 云南大百合原生质体超低温保存方法及活性鉴定方法 |
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2016
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Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101617580A (zh) * | 2009-07-30 | 2010-01-06 | 云南农业大学 | 破除大百合种子休眠促其发芽的方法 |
| CN103070163A (zh) * | 2013-01-30 | 2013-05-01 | 云南农业大学 | 云南大百合原生质体超低温保存方法及活性鉴定方法 |
Non-Patent Citations (10)
| Title |
|---|
| 伍丹: "四川大百合繁殖及遗传多样性研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 农业科技辑》 * |
| 关文灵等: "大百合种子休眠特性及休眠破除", 《西北植物学报》 * |
| 周俐宏等: "东方百合鳞茎打破休眠和低温冷藏技术研究", 《黑龙江农业科学》 * |
| 周晓音等: "切花百合鳞茎低温处理效应初探", 《浙江农业科学》 * |
| 张金政等: "大百合的生物多样性及其引种观察", 《园艺学报》 * |
| 汪小飞等: "野生花卉大百合属植物繁殖技术研究进展", 《生物技术通报》 * |
| 王洪习等: "《植物组织培养技术》", 31 January 2014 * |
| 程家胜: "《植物组织培养与工厂化育苗技术》", 31 March 2003 * |
| 苗永美等: "大百合的繁殖", 《中国林副特产》 * |
| 辛秀兰: "《生物技术综合实训指导》", 31 August 2011 * |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108124537A (zh) * | 2017-12-24 | 2018-06-08 | 云南农业大学 | 一种激素处理促进大百合种子萌发的方法 |
| CN109463240A (zh) * | 2019-01-07 | 2019-03-15 | 长沙秋点兵信息科技有限公司 | 中药材多花黄精的种植方法 |
| CN111440689A (zh) * | 2020-04-23 | 2020-07-24 | 广西壮族自治区林业科学研究院 | 一种风味饮品的制备方法 |
| CN111903519A (zh) * | 2020-07-31 | 2020-11-10 | 广西壮族自治区林业科学研究院 | 一种诱导大百合解除休眠后生根的方法 |
| CN113455391A (zh) * | 2021-06-16 | 2021-10-01 | 广西壮族自治区林业科学研究院 | 一种以种子为外植体进行组培扩繁大百合的繁殖方法 |
| CN113455391B (zh) * | 2021-06-16 | 2022-06-10 | 广西壮族自治区林业科学研究院 | 一种以种子为外植体进行组培扩繁大百合的繁殖方法 |
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