CN106604727A - 改善过继性细胞疗法的组合物和方法 - Google Patents

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Abstract

利用整合素‑配体稳定剂增强过继性细胞疗法的效力和功效的组合物和方法，其中所述整合素选自由α4β1、α5β1、α4β7、αvβ3以及αLβ2组成的组，并使效应细胞与具有通式(I)的激动剂或稳定剂离体接触；用这类稳定剂处理表达整合素的细胞以增强肿瘤浸润的方法；以及包括将稳定剂或激动剂‑处理的细胞施用于需要治疗实体瘤、血液癌的哺乳动物的治疗方法。

Description

改善过继性细胞疗法的组合物和方法
PCT说明书
标题：改善过继性细胞疗法的组合物和方法
发明人：阿潘德拉·K·马拉地
受让人：7山利益有限责任公司
相关申请
本申请要求2014年7月1日(07/01/2014)提交的美国专利临时专利申请序列号62/019,793的优先权和权益。
背景技术
发明领域
本发明的实施方案涉及用于过继性T细胞疗法(ACT)的组合物和方法。
特别是，本发明的实施方案涉及改善基于T细胞的疗法的效力的组合物和方法，其中所述组合物适合于过继性细胞疗法，其包括效应细胞、处理的效应细胞，以及至少一种能使整合素与其同源配体之间的整合素受体-配体相互作用稳定的结合增强化合物(association enhancing compound)。
相关技术的描述
过继性细胞疗法(ACT)涉及分离和在活体外扩展肿瘤特异性淋巴细胞，以产生比可能由简单接种所实现的更多的肿瘤反应性效应T细胞。肿瘤特异性T细胞被输注入患有癌症的患者，以引发患者的免疫系统杀伤肿瘤细胞。ACT已经表现出显著的临床结果，特别是在转移性黑色素瘤中(Dudley，Wunderlich等人2005；Dudley，Yang等人2008)。
存在许多用于癌症的ACT形式，通常分为：1)培养的肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)；2)分离和扩展的一类对肿瘤细胞具有反应性的特定T细胞或克隆类型；以及3)基因改造的肿瘤特异性T细胞受体或嵌合抗原受体。
不管方法如何，抗肿瘤活性ACT的效力和功效是来自体循环的效应细胞如T细胞(CD8+和CD4+)和天然杀伤细胞(NK)对肿瘤间质(tumor stroma)的肿瘤内生物利用度(浸润)的直接函数。本发明提供了组合物、制造方法，以及处理以改善ACT肿瘤内生物利用度的方法，从而提高效应细胞的效力和功效。
尽管最近取得的进展，但是或许是由于注入的细胞治疗剂不能渗透到实体瘤中，因此许多患者经常放弃ACT(Melero，Rouzautetal 2014)。ACT所用的效应细胞的肿瘤内生物利用度需要静脉内注入的细胞治疗剂1)向肿瘤血管床归巢(home)，2)粘附于肿瘤内皮，3)变移穿过内皮屏障，以及3)浸润到肿瘤间质中。
治疗性细胞如T细胞(CD8+、CD4+)和NK细胞浸润到实体瘤中的程度与存活率的改善有关(Galon，Costes等人2006；Fridman，Pages等人2012)。然而活化的T细胞，尽管明显存在于体循环中，但是经常不能变移穿过肿瘤血管内皮(Buckanovich，Facciabene等人2008)。肿瘤血管具有妨碍T细胞粘附于肿瘤血管内皮和变移到和穿过肿瘤血管内皮的屏障，从而降低细胞治疗剂的肿瘤内生物利用度，并因此降低免疫疗法的效力。
在正常组织中，内皮细胞充当异常淋巴细胞变移(transmigration)的功能屏障。然而，在损伤的组织中，当内皮细胞和其他细胞产生导致淋巴细胞粘附和变移穿过内皮的促炎性细胞因子时，就触发炎性细胞从体循环变移到损伤部位，从而递送效应细胞而促进许多细胞过程，如创伤愈合和抗原呈递。在ACT的情况下，抗原呈递或直接细胞毒性所介导的抗肿瘤活性需要这种变移。
整合素是淋巴细胞变移穿过内皮屏障所需的细胞粘附分子。促炎性细胞因子活化整合素受并分别上调其在淋巴细胞和内皮细胞上的同源细胞外配体。在这样做时，细胞因子增加受体亲和性和配体聚集(clustering)。已经表明，许多细胞因子分别增加淋巴细胞上LFA-1(αLβ2)和VLA4(α4β1)整合素受体与内皮细胞表面上ICAM-1和VCAM-1的结合。已知这些整合素途径的活化介导T细胞变移穿过发炎的非癌性组织的内皮。
因此，刺激这些细胞粘附和变移途径是改善效应T细胞治疗剂变移穿过肿瘤内皮的所需方式。然而，与正常组织中的内皮细胞不同，肿瘤细胞分泌的旁分泌因子如VEGF下调肿瘤血管中邻近的内皮细胞的表面上的VCAM-1、ICAM-1以及其他粘附分子(Griffioen，Damen等人1996；Griffioen，Damen等人1996；Bouzin，Brouet等人2007；Motz和Coukos2011；Motz，Santoro等人2014)。
因此，提高肿瘤内皮细胞上整合素激动剂如ICAM-1和VCAM-1与其在T细胞上的同源受体的结合效率，可以通过促进更多数量的治疗性细胞稳固粘附和变移穿过肿瘤内皮屏障而改善T细胞治疗剂的效力。本发明人已经发现，整合素配体-受体相互作用的小分子稳定剂对改善T细胞疗法的肿瘤内生物利用度有用。
美国公开的专利申请第20130236434A1号和Vanderslice等人(The Journal ofBiological Chemistry，288，(27)，p 19414-19428，2013)公开了所选的整合素-配体相互作用的小分子稳定剂。美国公开的专利申请第20130236434A1号公开了增强细胞与整合素结合配体结合的方法，包括用整合素激动剂体外处理整合素表达细胞，其中整合素选自由α4β1(β-1整合素，极迟抗原4(VLA-4))组成的组，并使处理的细胞与整合素结合配体；整合素激动剂化合物接触。本申请的焦点是，利用意欲作为心血管适应症活性药物组分候选物的化合物，改善内皮祖细胞和造血干细胞的归巢和移植，用于组织修复和新血管形成。就此而论，本发明并未公开用于过继性细胞疗法的组合物，而旨在通过改善肿瘤内生物利用度来改善效应细胞的效力和功效。
Vanderslice等人公开了增强细胞与整合素结合配体结合的组合物和方法，包括用使整合素-配体相互作用稳定的化合物体外处理整合素表达细胞，其中所述整合素选自由对于他们各自的配体的α4β1、α4β7、α5β1、αLβ2以及αVβ3组成的组。特别是，这些研究者证明，化合物AEC1((6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯((benzodioxol))-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯)是T细胞(Jukat细胞，一种人T淋巴细胞的永生系)对VCAM-1和纤连蛋白包被的表面的有效稳定剂。他们进一步表明，该化合物还稳定α4β7/MedCam-1、αLβ2-ICAM-1相互作用，并致使更大量细胞粘附于模拟的内皮表面。该化合物的清晰预期应用是改善内皮祖细胞的归巢和移植，用于组织修复和新血管形成。
尽管已知相同的α4β1-VCAM-1、α4β7/MedCam-1、αLβ2-ICAM-1介导T细胞和肿瘤内皮相互作用，但是Vanderslice等人未能认识到这类化合物的使用增加基于T细胞的疗法的肿瘤内生物利用度。尽管研究者直接证明了通过稳定α4β1-VCAM-1而显著改善细胞粘附和跨模拟的内皮表面迁移的效力，但是并未想到化合物诸如AEC1((6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯)的使用可以用于通过促进变移穿过肿瘤内皮而改善ACT的效力。
尽管已经提出若干用于增强过继性T细胞疗法的方法和组合物，但是本领域对改善ACT效力和功效的新方法仍然有持续的需要，其中所述组合物包括效应细胞、处理的细胞以及至少一种能使整合素与其相关配体之间的整合素受体-配体相互作用稳定的结合增强化合物。
发明概述
本发明的实施方案包括包含整合素-配体稳定剂的细胞治疗剂、用整合素-配体稳定剂离体处理的细胞治疗剂、这样的效应细胞对癌症的用途、用整合素-配体稳定剂治疗患者的方法，以及改善细胞治疗剂的抗肿瘤活性的效应细胞治疗剂。优选的整合素-配体稳定剂是增强4β1-VCAM-1、α4β7/MedCam-1或αLβ2-ICAM-1结合的化合物，如AEC1((6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯)。
组合物
经由结合增强化合物的效应细胞和肿瘤内皮细胞粘附
本发明的实施方案提供了包括效应细胞和有效量的一种或多种结合增强化合物的组合物，所述结合增强化合物能增强所述细胞与其在肿瘤内皮细胞上的各自配体的整合素介导的结合。在某些实施方案中，这些化合物靶向的整合素包括但不限于α4β1、α4β7、α5β1、αLβ2和/或αVβ3。在各种实施方案中，配体包括但不限于VCAM-1、纤连蛋白(fibronectin)、MAdCAM-1、ICAM-1、ICAM-2和/或玻连蛋白(vitronectin)。
离体处理的效应细胞
本发明的实施方案提供了包括离体处理的效应细胞的细胞治疗剂组合物(celltherapeutic composition)，所述离体处理的效应细胞是用有效量的一种或多种能增强细胞与其各自配体的整合素介导的结合的结合增强化合物处理的。在某些实施方案中，这些化合物靶向的整合素包括但不限于α4β1、α4β7、α5β1、αLβ2以及αVβ3。在各种实施方案中，配体包括但不限于VCAM-1、纤连蛋白、MAdCAM-1、ICAM-1、ICAM-2以及玻连蛋白。
效应细胞、处理的效应细胞以及结合增强化合物
本发明的实施方案提供了包括效应细胞、处理的效应细胞和有效量的一种或多种结合增强化合物的组合物，所述结合增强化合物能增强细胞与其各自配体的整合素介导的结合，其中处理的效应细胞是用处理有效量的一种或多种能增强细胞与其各自配体的整合素介导的结合的结合增强化合物处理的。在某些实施方案中，这些化合物靶向的整合素包括但不限于α4β1、α4β7、α5β1、αLβ2以及αVβ3。在各种实施方案中，配体包括但不限于VCAM-1、纤连蛋白、MAdCAM-1、ICAM-1、ICAM-2以及玻连蛋白。
方法
效应细胞和肿瘤内皮细胞粘附增强化合物
本发明的实施方案提供了用于增强ACT所用的效应细胞的粘附和变移的方法，其中所述方法包括使组合物弥散到患者的靶组织中的步骤，其中所述组合物包括效应细胞和有效量的一种或多种能增强细胞与其各自配体的整合素介导的结合的化学化合物。在某些实施方案中，这些化合物靶向的整合素包括但不限于α4β1、α4β7、α5β1、αLβ2以及αVβ3。在各种实施方案中，配体包括但不限于VCAM-1、纤连蛋白、MAdCAM-1、ICAM-1、ICAM-2以及玻连蛋白。
离体处理的效应细胞
本发明的实施方案提供了改善过继性细胞疗法效力的方法，其中所述组合物包括效应细胞、处理的效应细胞以及至少一种能使整合素与其相关配体之间的整合素受体-配体相互作用稳定的结合增强化合物，其中所述方法包括使组合物弥散到患者的靶组织中的步骤，其中所述组合物包括用有效量的一种或多种能增强细胞与其各自配体的整合素介导的结合的化学化合物处理的效应细胞。在某些实施方案中，这些化合物靶向的整合素包括但不限于α4β1、α4β7、α5β1、αLβ2以及αVβ3。在各种实施方案中，配体包括但不限于VCAM-1、纤连蛋白、MAdCAM-1、ICAM-1、ICAM-2以及玻连蛋白。
效应细胞、处理的效应细胞以及结合增强化合物
本发明的实施方案提供了用于增强效应细胞的粘附和变移的方法，其中所述方法包括将组合物直接弥散到靶组织中或全身注入患者中的步骤，其中所述组合物包括用有效量的一种或多种能增强细胞与其各自配体的整合素介导的结合的化学化合物和额外量的一种或多种能增强细胞与其各自配体的整合素介导的结合的化学化合物处理的效应物。在某些实施方案中，这些化合物靶向的整合素包括但不限于α4β1、α4β7、α5β1、αLβ2以及αVβ3。在各种实施方案中，配体包括但不限于VCAM-1、纤连蛋白、MAdCAM-1、ICAM-1、ICAM-2以及玻连蛋白。
在某些实施方案中，化学化合物由通式(I)给出：
R1-M1-N(R2)-M2-M3-M4-M5-M6-R3 (I)
其中：
R1选自由芳基和芳烷基组成的组，
R2是烷基、芳基或芳烷基，
M1是CH2，
M2是CO，
M3是O、S或NR6，其中当R6存在时是氢或低级烷基，
M4不存在或是CH2，
M5是(CR11R12)，其中R11是氢，R12选自由氢、NR21CONR22R23、NR21COR24、NR21SO2R24、NR21COOR24、OCOR24、OR24、O(CH2CH2O)sR24、COOR24、烷基和羟基烷基组成的组，其中s是1-6的整数，R21和R22当存在时独立地选自由氢或低级烷基组成的组，R23当存在时选自由羟基烷基、烷氧基烷基、烷基、芳基、芳烷基以及烷氧基羰基烷基组成的组，条件是当M3是NR6，M4不存在且R12是CONR22R23时，则R23不是1-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-3-乙氧基-3-氧代丙基，R24当存在时选自由烷基、芳基、芳烷基、杂环基、环烷基、环烷基烷基以及杂环基烷基组成的组，
M6是(CH2)q，其中q是0-6的整数，
R3选自由氢、CONR13R14、NR15COOR16、NR15COR16、NR15CONR13R14、NR15SO2R16、OCOR16、COOR16、OR16、SR16、杂环基、羟基、羟基烷基、胍基(guanadino)、烷基以及芳基组成的组，其中R13和R15当存在时独立地是氢或低级烷基，R14和R16当存在时独立地选自由氢、烷基、芳基、芳烷基、环烷基、杂环基、环烷基烷基以及杂环基烷基组成的组，
R1、R2、R3、R12、R14、R16、R23和R24当存在时可以独立地是未取代的或是被选自由以下各项组成的组的一个或多个取代基取代的：烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂环基芳基、羟基、烷氧基、叠氮基、卤代烷氧基、羟基烷基、芳氧基、羟基芳基、烷氧基芳基、卤代、卤代烷基、卤代芳基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、-NHCO(烷基)、-NHCO(芳基)、-NHCO(芳烷基)、-NHCO(卤代烷基)、-NHSO2(烷基)、-NHSO2(芳基)、-NHSO2(芳烷基)、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、-OCO(烷基氨基)以及-OCO(二烷基氨基)。
本发明的实施方案提供了通过增加肿瘤内生物利用度来增加效应细胞的效力和或功效的方法，其中所述方法包括将组合物直接弥散到靶组织中或全身注入患者中的步骤，其中所述组合物包括用有效量的一种或多种能增强细胞与其各自配体的整合素介导的结合的化学化合物和额外量的一种或多种能增强细胞与其各自配体的整合素介导的结合的化学化合物处理的效应物。在某些实施方案中，这些化合物靶向的整合素包括但不限于α4β1、α4β7、α5β1、αLβ2以及αVβ3。在各种实施方案中，配体包括但不限于VCAM-1、纤连蛋白、MAdCAM-1、ICAM-1、ICAM-2以及玻连蛋白。
在某些实施方案中，化学化合物由通式(I)给出：
R1-M1-N(R2)-M2-M3-M4-M5-M6-R3 (I)
其中：
R1选自由芳基和芳烷基组成的组，
R2是烷基、芳基或芳烷基，
M1是CH2，
M2是CO，
M3是O、S或NR6，其中R6当存在时是氢或低级烷基，
M4不存在或是CH2，
M5是(CR11R12)，其中R11是氢，R12选自由氢、NR21CONR22R23、NR21COR24、NR21SO2R24、NR21COOR24、OCOR24、OR24、O(CH2CH2O)sR24、COOR24、烷基以及羟基烷基组成的组，其中s是1-6的整数，R21和R22当存在时独立地选自由氢或低级烷基组成的组，R23当存在时选自由羟基烷基、烷氧基烷基、烷基、芳基、芳烷基以及烷氧基羰基烷基组成的组，条件是当M3是NR6、M4不存在，且R12是CONR22R23时，则R23不是1-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-3-乙氧基-3-氧代丙基，R24当存在时选自由烷基、芳基、芳烷基、杂环基、环烷基、环烷基烷基以及杂环基烷基组成的组，
M6是(CH2)q，其中q是0-6的整数，
R3选自由氢、CONR13R14、NR15COOR16、NR15COR16、NR15CONR13R14、NR15SO2R16、OCOR16、COOR16、OR16、SR16、杂环基、羟基、羟基烷基、胍基、烷基以及芳基组成的组，其中R13和R15当存在时独立地是氢或低级烷基，R14和R16当存在时独立地选自由氢、烷基、芳基、芳烷基、环烷基、杂环基、环烷基烷基以及杂环基烷基组成的组，
R1、R2、R3、R12、R14、R16、R23以及R24当存在时可以独立地是未取代的或是被选自由以下各项组成的组的一个或多个取代基取代的：烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂环基芳基、羟基、烷氧基、叠氮基、卤代烷氧基、羟基烷基、芳氧基、羟基芳基、烷氧基芳基、卤代、卤代烷基、卤代芳基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、-NHCO(烷基)、-NHCO(芳基)、-NHCO(芳烷基)、-NHCO(卤代烷基)、-NHSO2(烷基)、-NHSO2(芳基)、-NHSO2(芳烷基)、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、-OCO(烷基氨基)以及-OCO(二烷基氨基)。
附图简述
参考下面详述的说明书以及所附示意图，能够更好地理解本发明，在所述示意图中，相同元件的编号相同。
图1描绘了利用AEC1在纤连蛋白(FN)细胞或VCAM-1细胞中的细胞迁移研究。
图2描绘了在未处理、团形成、团形成后洗涤1次以及团形成后洗涤2次的情况下，对照细胞和AEC1处理的细胞的结合细胞量。
发明所用的定义
除了具有惯用含义以及通常意义外，说明书和权利要求书的上下文许可之处适用下列定义：
″药物组合物″指作为药物施用于哺乳动物的、一种或多种化学品或其药学上可接受的盐与合适载体的混合物。
″细胞治疗剂″指作为药物施用于哺乳动物的、一种或多种细胞，或一种或多种化学品或其药学上可接受的盐与合适载体的混合物。
″治疗有效量″指至少在一定程度缓解正被治疗的病症的一种或多种症状的正在施用的化合物的量。例如，有效预防、减轻或改善疾病的症状或者延长正在治疗的个体的存活的化合物的量。
就疾病或病症而言，术语″治疗″指预防、阻止疾病或病症的发生，阻止疾病或病症的症状或副作用、使之退行或者使其缓解，和/或延长正被治疗的个体的存活。
本文所用的术语″烷基″单独或组合指通过除去一个氢原子而由饱和烃衍生的C1-C12直链或支链、取代或未取代的饱和链基。烷基的代表性实例尤其包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基以及叔丁基。
术语″烯基″单独或组合指含有2-10个碳原子的取代或未取代的直链或取代或未取代的支链烯基基团。这类基团的实例包括但不限于乙烯基、E-和Z-戊烯基、癸烯基等。
术语″炔基″单独或组合指含有2-10个碳原子的取代或未取代的直链或取代或未取代的支链炔基基团。这类基团的实例包括但不限于乙炔基、丙炔基、炔丙基、丁炔基、己炔基、癸炔基等。
术语″低级(lower)″修饰″烷基″、″烯基″、″炔基″或″烷氧基″，指特定功能性的C1-C6单位。例如低级烷基表示C1-C6烷基。
本文所用的术语″环烷基″单独或组合指具有3-10个碳原子和1-3个环的取代或未取代的脂肪族环系(aliphatic ring system)，尤其包括但不限于环丙基、环戊基、环己基、降冰片烯基(norbornyl)以及金刚烷基(adamantly)。环烷基可以是未取代的或是被独立地选自以下各项的一个、两个或三个取代基取代的：低级烷基、卤代烷基、烷氧基、硫代烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、羟基、卤代、巯基、硝基、甲醛、羧基、烷氧基羰基以及甲酰胺。该术语意在包括环烯基和环炔基。″环烷基″包括顺式形式或反式形式。而且取代基可以位于桥接的双环系中的内位(endo position)或外位(exo position)。
本文所用的术语″环烯基″单独或组合指含有4-8个碳原子和一个或多个双键的环状碳环。这类环烯基基团的实例包括但不限于环戊烯基、环己烯基、环戊二烯基等。
本文所用的术语″环烷基烷基″指附加于低级烷基的环烷基，包括但不限于环己基甲基。
本文所用的术语″卤代(halo)″或″卤素″指I、Br、Cl或F。
本文所用的术语″卤代烷基″指至少附加了一个卤素取代基的低级烷基基团，例如尤其是氯代甲基、氟代乙基、三氟甲基和五氟乙基。
术语″烷氧基″单独或组合指烷基醚基团，其中术语″烷基″如上文所限定。合适的烷基醚基团的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异-丙氧基、正丁氧基、异-丁氧基、仲-丁氧基、叔-丁氧基等。
术语″烯氧基″单独或组合指式烯基-O-基团，条件是所述基团不是烯醇醚，其中术语″烯基″如上文所定义。合适的烯氧基基团的实例包括但不限于烯丙氧基、E-和Z-3-甲基-2-丙烯氧基等。
术语″炔氧基″单独或组合指式炔基-O-基团，条件是所述基团不是-炔醇醚。合适的炔氧基基团的实例包括但不限于炔丙氧基(propargyloxy)、2-丁炔氧基等。
本文所用的术语″羧基″指示-CO2H。
术语″硫代烷氧基″指式烷基-S-的硫醚基团，其中″烷基″如上文所限定。
本文所用的术语″甲醛″指-C(O)R，其中R是氢。
本文所用的术语″甲酰胺″指-C(O)NR2，其中R是氢、烷基或任何其他合适的取代基。
本文所用的术语″烷氧基烷氧基″指Rb O-RcO-，其中Rb是上文所定义的低级烷基，并且Rc是亚烷基，其中亚烷基是-(CH2)n′-，其中n′是1-6的整数。烷氧基烷氧基的代表性实例尤其包括甲氧基甲氧基、乙氧基甲氧基以及叔丁氧基甲氧基。
本文所用的术语″烷基氨基″指Rd NH-，其中Rd是低级烷基，例如尤其是乙基氨基、丁基氨基。
术语″烯基氨基″单独或组合指式烯基-NH-或(烯基)2N-基团，其中术语″烯基″如上文所定义，条件是所述基团不是烯胺。这类烯基氨基基团的实例是烯丙基氨基基团。
术语″炔基氨基″单独或组合指式炔基-NH-或(炔基)2N-基团，其中，术语″炔基″如上文所定义，条件是所述基团不是胺。这类炔基氨基基团的实例是炔丙基氨基基团。
本文所用的术语″二烷基氨基″指ReRfN-，其中Re和Rf独立地选自低级烷基，例如尤其是二乙基氨基和甲基丙基氨基。
本文所用的术语″氨基″指H2N-。
本文所用的术语″烷氧基羰基″指通过羰基附加于母体分子部分的、之前所限定的烷氧基。烷氧基羰基的实例尤其包括甲氧基羰基、乙氧基羰基以及异丙氧基羰基。
本文所用的术语″芳基″或″芳族″单独或组合指具有约6-12个碳原子的取代或未取代的碳环芳族基团，如苯基、萘基、茚基、茚满基、薁基、芴基以及蒽基；或选自由以下各项组成的组的杂环芳族基团：呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、2-吡唑啉基、吡唑烷基、异唑基、异噻唑基、1，2，3-二唑基、1，2，3-三唑基，1，3，4-噻二唑基、哒嗪基，嘧啶基、吡嗪基、1，3，5-三嗪基、1，3，5-三噻吩基(thianyl)、吲嗪基、吲哚基、异吲哚基、3H-吲哚基、吲哚满基、苯并[b]呋喃基、2，3-二氢苯并呋喃基、苯并[b]噻吩基、1H-吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、异喹啉基、噌嗪基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、1，8-二氮杂萘基(naphthridinyl)、蝶啶基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、苯氧基吖嗪基、吡唑并[1，5-c]三嗪基等。″芳基烷基(Arylalkyl)″和″烷基芳基(alkylaryl)″使用上文所定义的术语″烷基″。环可以是多取代的。芳香环可以与其他芳香环或非芳香环稠合，形成多环环(multicyclic ring)，并包括在本文所用的术语″芳族的″内。
术语″芳烷基″单独或组合指芳基取代的烷基基团，其中术语″烷基″和″芳基″如上文所定义。合适的芳烷基基团的实例包括但不限于苯甲基、苯乙基、苯己基、二苯甲基、吡啶基甲基、四唑基甲基、呋喃基甲基、咪唑基甲基、吲哚基甲基、噻吩基丙基等。
术语″芳烯基(aralkenyl)″单独或组合指芳基取代的烯基基团，其中术语″芳基″和″烯基″如上文所定义。
术语″芳基氨基″单独或组合指式芳基-NRg-基团，其中″芳基″如上文所定义。Rg尤其可选自由H、低级烷基、芳基以及芳烷基组成的组。芳基氨基基团的实例包括但不限于苯基氨基(苯胺基(anilido))、萘基氨基、2-，3-和4-吡啶基氨基等。
术语″联芳基″单独或组合指式芳基-芳基基团，其中术语″芳基″如上文所定义。
术语″硫代芳基″单独或组合指式芳基-S-基团，其中术语″芳基″如上文所定义。硫代芳基基团的实例是噻吩基基团。
术语″芳酰基″单独或组合指式芳基-CO-基团，其中术语″芳基″如上文所定义。合适的芳酰基基团的实例包括但不限于苯甲酰基、4-卤代苯甲酰基、4-羧基苯甲酰基、萘甲酰基、吡啶基羰基等。
术语″杂环基″单独或组合指含有至少一个内环N、O或S原子的非芳族3-10元环。杂环可以任选地是芳基稠合的。杂环还可以任选地被独立地选自由以下各项组成的组的至少一个取代基取代：尤其是氢、卤素、羟基、氨基、硝基、三氟甲基、三氟甲氧基、烷基、芳烷基、烯基、炔基、芳基、氰基、羧基、烷氧基羰基、羧基烷基、氧代(oxo)、芳基磺酰基以及芳烷基氨基羰基。
本文所用的术语″烷基杂环基″指通过杂环基附加于母体分子部分的、之前所定义的烷基。
本文所用的术语″杂环基烷基″指通过烷基附加于母体分子部分的之前所定义的杂环基。
本文所用的术语″缩醛胺″指结构RCH(NH2)(OH)的半缩醛。
术语″吸电子″或″供电子″指，如果氢占据分子中的相同位置，取代基相对氢吸收或贡献电子的能力。这些术语是本领域技术人员完全理解的，并且在J.March，1985，ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY(高级有机化学)，pp.16-18中讨论，其通过引用并入本文。吸电子基团包括尤其是卤素、硝基、羧基、低级烯基、低级炔基、甲醛，羧基酰胺基、芳基、季铵、三氟甲基以及芳基低级链烷酰基。供电子基团包括尤其是羟基、低级烷基、氨基、低级烷基氨基、二(低级烷基)氨基、芳氧基、巯基、低级烷基硫基、低级烷基巯基以及二硫化物这样的基团。本领域技术人员将理解，前述取代基在不同的化学条件下可以具有供电子属性或者吸电子属性。而且，本发明考虑到了选自上述确定基团的取代基的任何组合。
最优选的供电子取代基或吸电子取代基是卤素、硝基、链烷酰基、甲醛、芳基链烷酰基、芳氧基、羧基、甲酰胺、氰基、磺酰基、亚砜、杂环基、胍、季铵、低级烯基、低级炔基、硫鎓盐、羟基、低级烷氧基、低级烷基、氨基、低级烷基氨基、二(低级烷基)氨基、胺低级烷基巯基、巯基烷基、烷基硫基以及烷基二硫基。
使用上文术语旨在包括取代的和未取代的部分。取代可以是一个或多个诸如以下的基团：醇、醚、酯、酰胺、砜、硫化物、羟基、硝基、氰基、羧基、胺、杂原子、低级烷基、低级烷氧基、低级烷氧基羰基、烷氧基烷氧基、酰氧基、卤素、三氟甲氧基、三氟甲基、烷基、芳烷基、烯基、炔基、芳基、氰基、羧基、烷氧碳基、羧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、烷基杂环基、杂环基烷基、氧代、芳基磺酰基以及芳烷基氨基羰基，或前面段落的任意取代基，或被合适接头直接连接的那些取代基中的任意取代基。接头通常是含有-C-、-C(O)-、-NH-、-S-、-S(O)-、-O-、-C(O)O-或-S(O)O-的任意组合的、1-3个原子的短链。环可以被多次取代。
术语″哺乳动物″包括人和其他动物。
本文所用的术语″杂原子″包括氮、硫以及氧。
本文所用的术语″α″表示直接邻近所述位置的位置。
本文所用的术语″非活性成分″表示通常用作非活性成分的无害药物，如着色剂、乳化剂、赋形剂、调味剂、润滑剂、防腐剂或溶剂，在制备其他药物时，应免于法(21CFR201.117)的502(f)(1)部分。
本文所用的术语″赋形剂″表示除了活性药物或产品之外的任何物质，已经适当评估了其安全性，并且将其包括在药物递送系统中，以其制造过程中辅助药物递送系统的加工；保护、支持或增强稳定性、生物利用度或患者可接受性；帮助产品鉴别；或在贮存或使用过程中增强药物递送系统整体安全性和效力的任何其他属性(40CFR 63.1251)。
本文所用的术语″效应细胞″表示已经被其同源肿瘤抗原活化并参与消除癌细胞的细胞。效应细胞的类型可以包括：1)肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)，其是这样的淋巴细胞：分离自肿瘤、进行了离体扩展并且具有细胞表面标志物，所述标准物包括但不限于CD8或CD4，2)对一种或多种肿瘤抗原具有反应性并且具有细胞表面标志物的T细胞克隆，所述标准物包括但不限于CD8或CD4，3)用肿瘤特异性T细胞受体或嵌合抗原受体基因改造的、具有细胞表面标志物的T细胞，所述标准物包括但不限于CD8或CD4，4)对特定肿瘤抗原或多种肿瘤抗原具有反应性的天然杀伤细胞。
术语″过继性T细胞″是由天然T细胞衍生的效应细胞或具有效应器功能的活化T细胞。
本文所用的术语″实体瘤″表示通常不含囊或液体区的异常组织团块。实体瘤可以是良性的(不是癌症)或恶性的(癌症)。不同的实体瘤类型以形成它们的细胞类型命名。实体瘤的实例是肉瘤、癌(carcinoma)以及淋巴瘤。
本文所用的术语″小分子激动剂″并非常规配体，并且与同源配体-受体相互作用的稳定剂同义。
本发明所用的缩写
本文使用下列缩写：Ac是乙酰基，AcOH是乙酸，6-Ahx-OH是6-氨基己酸，Bn是苄基，Boc是叔-丁氧基羰基，nBu是叔丁基，nBuLi是在己烷中1.6M的正丁基锂(除非注明了其他浓度)，Cbz是苄氧基羰基，CDI是N，N′-羰基二咪唑，COMU是(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉代-六氟磷酸碳(carbenium)，Dab是2，4-二氨基丁酰基，DBU是1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一-7-烯，DCE是1，2-二氯乙烷，DCHA是二环己胺，DCM是二氯甲烷(二氯甲烷(methlyene chloride))，二烷是1，4-二烷，DIPEA是N，N-二异丙基乙胺，DMED是N，N′-二甲基乙二胺，DMF是N，N-二甲基甲酰胺，DMSO是二甲亚砜，Et是乙基，EtOH是乙醇，Fmoc是9H-芴-9-基甲氧基羰基，Glu是谷氨酸，Gly甘氨酸，HBTU是O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯，HMDS是六甲基二硅氮烷，iPr是异丙基，KHMDS是二(三甲基甲硅烷基)酰胺钾，Lys是赖氨酸，LHMDS是二(三甲基甲硅烷基)酰胺锂，Me是甲基，MeOH是甲醇，Nle是正亮氨酸，NMM是4-甲基吗啉，NSMC是N-琥珀酰亚胺-N-甲基氨基甲酸酯，OAc是乙酸酯，Orn是鸟氨酸，pTsOH是对甲苯磺胺，Ph是苯基，RT是室温，tBu是叔-丁基，TEA是三乙胺，Tfa是三氟乙酰基，THF是四氢呋喃，Tol是甲苯，Tyr是酪氨酸，以及Z是苄氧基羰基。
发明详述
尽管已知相同的4β1-VCAM-1，α4β7/MedCam-1，αLβ2-ICAM-1介导T细胞与肿瘤内皮相互作用，但是Vanderslice等人并未认识到，这类化合物用于增加基于T细胞的疗法的肿瘤内生物利用度的用途。尽管研究者直接证明了通过稳定α4β1-VCAM-1而显著改善细胞粘附和跨模拟的内皮表面迁移的效力，但是并未考虑诸如AEC1((6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯)的化合物的使用可以用于通过促进变移穿过肿瘤内皮而改善ACT的效力。
本发明的实施方案包括：包含整合素-配体稳定剂的T细胞治疗剂，用整合素-配体稳定剂离体处理的T-细胞治疗剂，这类T细胞对癌症的用途，用整合素-配体稳定剂治疗患者的方法，以及改善T细胞疗法的抗肿瘤活性的T-细胞治疗剂。优选的整合素-配体稳定剂是增强4β1-VCAM-1、α4β7/MedCam-1和/或αLβ2-ICAM-1结合的化合物，如AEC1((6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯)。
本发明人已经发现，某些小分子化合物或其混合物，增强整合素介导的粘附，因此作为治疗剂可有益于增强过继性T细胞疗法。因此合成了一组增强细胞与其各自配体的整合素介导的结合的化学化合物。这些化合物靶向的整合素包括但不限于α4β1、α4β7、α5β1、αLβ2和/或αVβ3。相应配体包括但不限于VCAM-1、纤连蛋白、MAdCAM-1、ICAM-1、ICAM-2和/或玻连蛋白。
下文进一步描述了激动剂化合物、代表性化合物增强整合素表达细胞结合的能力以及激动剂处理的细胞的治疗应用。
在本发明的一个实施方案中，提供了用于过继性T细胞疗法的组合物，其包含极迟抗原-4(VLA-4)和/或LFA-1整合素的小分子激动剂。
在本发明的另一实施方案中，提供了用于离体过继性T细胞疗法的介质用组合物，其包含极迟抗原-4(VLA-4)和/或LFA-1整合素的小分子激动剂。
在本发明的另一个实施方案中，提供了用于离体过继性T细胞疗法的介质用组合物，其包含足以增强过继性T细胞与肿瘤内皮细胞粘附的量的极迟抗原-4(VLA-4)和/或LFA-1整合素的小子激动剂。
在本发明的另一个实施方案中，组合物包含用足以增强过继性T细胞疗法的量的极迟抗原-4(VLA-4)和/或LFA-1整合素的小分子激动剂离体处理的过继性T细胞。
在本发明的另一个实施方案中，组合物包含用极迟抗原-4(VLA-4)和/或LFA-1整合素的小分子激动剂离体处理的过继性T细胞，以在注入过继性T细胞之前实现过继性T细胞疗法与肿瘤内皮粘附，其中所述细胞基本上不含小分子激动剂，即1fM(1飞摩尔(femtomolar)或1×10-15M)且小于100nM(100纳摩尔或1×10-9M)。
在本发明的另一个实施方案中，提供了使介质携带过继性T细胞用的组合物，所述组合物在电解液中包含极迟抗原-4(VLA-4)和/或LFA-1整合素的小分子激动剂。代表性介质可以包括但不限于：1)1型复方电解质注射液(Multiple Electrolytes Injection，Type1，USP(美国药典))，名义pH范围为5.5-8.0，这类介质可以是无菌、无热源的等渗溶液；2)无酚红的组织培养基(如RPMI-1640[RPMI])；3)基本培养基，包含含5％人血清白蛋白(Baxter或Talecris)的盐溶液(0.9％NaCl)和8％葡聚糖40(Hospira)(LMD/HSA)；4)培养和扩展培养基；以及5)任何包含MnCl2或MgCl2的等渗溶液。代表性介质可以含有细胞或细胞膜的等渗稳定剂，所述等渗稳定剂包括但不限于来源于血清或血浆的蛋白(以0.5重量％至50重量％的量存在)。
在本发明的另一个实施方案中，用于收集效应细胞的介质用组合物包含极迟抗原-4(VLA-4)和/或LFA-1整合素的小分子激动剂。
在本发明的另一个实施方案中，用于过继性T细胞的组合物包含极迟抗原-4(VLA-4)和/或LFA-1整合素的小分子激动剂。
在本发明的另一个实施方案中，给药用组合物包含极迟抗原-4(VLA-4)和/或LFA-1整合素的小分子激动剂、介质以及治疗有效量的过继性T细胞，其中过继性T细胞来源于患者的T细胞。
在本发明的另一个实施方案中，在存在结合增强化合物和处理的过继性T细胞的情况下，在存在结合增强化合物的情况下，通过静脉内注射、动脉内注射、淋巴管注射或淋巴管周注射施用组合物而进行移植的方法，所述组合物包含极迟抗原-4(VLA-4)和/或LFA-1整合素的小分子激动剂、介质以及治疗有效量的过继性T细胞。
在本发明的另一个实施方案中，在存在结合增强化合物和处理的过继性T细胞的情况下，在存在结合增强化合物的情况下，通过静脉内注射或动脉内注射施用组合物而长期移植的方法，所述组合物包含极迟抗原-4(VLA-4)和/或LFA-1整合素的小分子激动剂、介质以及治疗有效量过继性T细胞，其中，用极迟抗原-4(VLA-4)和/或LFA-1整合素的小分子激动剂预处理HSC，并且在注入动物前，过继性T细胞基本上不含极迟抗原-4(VLA-4)和/或LFA-1整合素的小分子激动剂。
在本发明的另一个实施方案中，提供了下述组合物，所述组合物包含输液袋、极迟抗原-4(VLA-4)和/或LFA-1整合素的小分子激动剂、在结合增强化合物存在的情况下携带过继性T细胞的介质以及在结合增强化合物的存在下的处理的过继性T细胞，所述组合物包含极迟抗原-4(VLA-4)和/或LFA-1整合素的小分子激动剂。代表性介质可以包括但不限于：1型复方电解质注射液(Multiple Electrolytes Injection，Type 1，USP(美国药典))，名义pH范围为5.5-8.0，这类介质可以是无菌、无热源的等渗溶液；2)无酚红的组织培养基(如RPMI-1640[RPMI])；3)基本培养基，包含含5％人血清白蛋白(Baxter或Talecris)的盐溶液(0.9％NaCl)和8％葡聚糖40(Hospira)(LMD/HSA)；4)培养和扩展培养基；以及5)包含MnCl2或MgCl2的任何等渗溶液。代表性介质可以含有细胞或细胞膜的等渗稳定剂，所述等渗稳定剂包含但不限于来源于血清或血浆的蛋白(以0.5重量％至50重量％的量存在)。
在本发明的另一个实施方案中，包括输液袋的医疗装置，所述输液袋含有极迟抗原-4(VLA-4)和/或LFA-1整合素的小分子激动剂，其中促进极迟抗原-4(VLA-4)和/或LFA-1整合素与内源配体相互作用的小分子化合物是非活性成分和/或赋形剂。
本发明的化合物能增强整合素表达细胞的结合，下文进一步描述了激动剂处理的细胞的治疗应用。
一般组合物和方法
本发明的实施方案涉及组合物，所述组合物包括过继性T细胞和有效量的一种或多种能增强细胞与其各自配体的整合素介导的结合的化学化合物，其中所述有效量介于约1fM和约300μM之间，且其中所述组合物用于治疗患有可用过继性T细胞治疗的癌症的患者。在某些实施方案中，癌症是肉瘤、癌、淋巴瘤以及白血病。在其他实施方案中，这些化合物靶向的整合素选自由α4β1、α4β7、α5β1、αLβ2、αVβ3以及其混合物或组合组成的组。在其他实施方案中，配体选自由VCAM-1、纤连蛋白、MAdCAM-1、ICAM-1、ICAM-2、玻连蛋白以及其混合物或组合组成的组。在其他实施方案中，化学化合物由通式(I)给出：
R1-M1-N(R2)-M2-M3-M4-M5-M6-R3 (I)
其中R1选自由芳基和芳烷基组成的组，R2是烷基、芳基或芳烷基，M1是CH2，M2是CO，M3是O、S或NR6，其中R6当存在时是氢或低级烷基，M4不存在或是CH2，M5是(CR11R12)，其中R11是氢，R12选自由氢、NR21CONR22R23、NR21COR24、NR21SO2R24、NR21COOR24、OCOR24、OR24、O(CH2CH2O)sR24、COOR24、烷基以及羟基烷基组成的组，其中s是1-6的整数，R21和R22当存在时独立地选自由氢或低级烷基组成的组，R23当存在时选自由羟基烷基、烷氧基烷基、烷基、芳基、芳烷基以及烷氧基羰基烷基组成的组，条件是当M3是NR6、M4不存在时，则R23不是1-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-3-乙氧基-3-氧代丙基，R24当存在时选自由烷基、芳基、芳烷基、杂环基、环烷基、环烷基烷基和杂环基烷基以及其混合物或组合组成的组，M6是(CH2)q，其中q是0-6的整数，R3选自由氢、CONR13R14、NR15COOR16、NR15COR16、NR15CONR13R14、NR15SO2R16、OCOR16、COOR16、OR16、SR16、杂环基、羟基、羟基烷基、胍基、烷基以及芳基组成的组，其中R13和R15当存在时独立地是氢或低级烷基，R14和R16当存在时独立地选自由氢、烷基、芳基、芳烷基、环烷基、杂环基、环烷基烷基以及杂环基烷基组成的组，R1、R2、R3、R12、R14、R16、R23以及R24当存在时可以独立地是未取代的或是被选自由以下各项组成的组中的一个或多个取代基取代的：烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂环基芳基、羟基、烷氧基、叠氮基、卤代烷氧基、羟基烷基、芳氧基、羟基芳基、烷氧基芳基、卤素、卤代烷基、卤代芳基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、-NHCO(烷基)、-NHCO(芳基)、-NHCO(芳烷基)、-NHCO(卤代烷基)、-NHSO2(烷基)、-NHSO2(芳基)、-NHSO2(芳烷基)、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、-OCO(烷基氨基)、-OCO(二烷基氨基)以及其混合物或组合。在其他实施方案中，所述化合物具有，R1是芳基或芳烷基，R2烷基或芳烷基，M1是CH2，M2是CO，M3不存在或是O或CH2，M4不存在或是CH2，M5不存在或是O或(CR11R12)，R11是氢，R12选自由氢、NR21CONR22R23、NR21COR24、NR21SO2R24以及NR21COOR24组成的组，M6选自由(CH2)q、(CH2)q-CH＝CH--(CH2)r、(CH2)q-亚芳基-(CH2)r以及(CH2CH2O)q组成的组，q和r独立地是0-6的整数，R3是CONR13R14，R21和R22各自当存在时独立地选自氢和低级烷基的组，R13、R14、R23以及R24各自当存在时独立地选自氢、烷基、芳基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基以及芳烷基，且R1、R2、R13、R14、R23以及R24当存在时可以是未取代的或是被选自由以下各项组成的组中的一个或多个取代基取代的：烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂环基芳基、羟基、烷氧基、叠氮基、卤代烷氧基、羟基烷基、芳氧基、羟基芳基、烷氧基芳基、卤代、卤代烷基、卤代芳基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、-NHCO(烷基)、-NHCO(芳基)、-NHCO(芳烷基)、-NHCO(卤代烷基)、-NHSO2(烷基)、-NHSO2(芳基)、-NHSO2(芳烷基)、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、-OCO(烷基氨基)、-OCO(二烷基氨基)以及其混合物或组合。在其他实施方案中，所述化合物具有，R1是芳基或芳烷基，R2是烷基或芳烷基，M1是CH2，M2是SO2或CO，M3不存在或是CH2，M4不存在或是CH2，M5不存在或是(CR11R12)，R11当存在时是氢，R12当存在时选自由氢、烷基、NR21CONR22R23、NR21COR24、NR21SO2R24以及NR21COOR24组成的组，M6是(CH2)q或NR34(CH2)q，q是0-6的整数，R3选自由CONR13R14、SO2NR13R14、NR15COOR16、NR15COR16、NR15CONR13R14以及NR15SO2R16组成的组，R15、R16、R21以及R22各自当存在时独立地选自氢、低级烷基以及芳烷基的组，R13、R14、R23以及R24各自当存在时独立地选自由氢、烷基、芳基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基以及芳烷基组成的组，R34当存在时选自由烷基、芳烷基、COR35以及SO2R35组成的组，R35当存在时选自由烷基、芳基以及芳烷基组成的组，且R1、R2、R13、R14、R15、R16、R23、R24、R34以及R35当存在时可以是未取代的或是被选自由以下各项组成的组中的一个或多个取代基取代的：烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂环基芳基、羟基、烷氧基、叠氮基、卤代烷氧基、羟基烷基、芳氧基、羟基芳基、烷氧基芳基、卤代、卤代烷基、卤代芳基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、-NHCO(烷基)、-NHCO(芳基)、-NHCO(芳烷基)、-NHCO(卤代烷基)、-NHSO2(烷基)、-NHSO2(芳基)、-NHSO2(芳烷基)、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、-OCO(烷基氨基)以及-OCO(二烷基氨基)，条件是当M2是CO时，则M6是NR34(CH2)q，其中q不是0。在其他实施方案中，化学化合物是非活性成分或赋形剂。在其他实施方案中，在载体中的有效量大于1fM且小于100nM。在其他实施方案中，在载体中的有效量大于1fM且小于50nM。在其他实施方案中，在载体中的有效量大于1fM且小于25nM。
本发明的实施方案涉及包括处理的过继性T细胞的组合物，其包含用一种或多种能增强细胞与其各自配体的整合素介导的结合的化学化合物处理的过继性T细胞，其中所述组合物用于治疗患有癌症的患者。在某些实施方案中，癌症是肉瘤、癌、淋巴瘤以及白血病。在其他实施方案中，这些化合物靶向的整合素选自由α4β1、α4β7、α5β1、αLβ2、αVβ3以及其混合物或组合组成的组。在其他实施方案中，配体选自由VCAM-1、纤连蛋白、MAdCAM-1、ICAM-1、ICAM-2、玻连蛋白以及其混合物或组合组成的组。在其他实施方案中，化学化合物由通式(I)给出：
R1-M1-N(R2)-M2-M3-M4-M5-M6-R3 (I)
其中R1选自由芳基和芳烷基组成的组，R2是烷基、芳基或芳烷基，M1是CH2，M2是CO，M3是O、S或NR6，其中R6当存在时是氢或低级烷基，4不存在或是CH2，M5是(CR11R12)，其中R11是氢，R12选自由氢、NR21CONR22R23、NR21COR24、NR21SO2R24、NR21COOR24、OCOR24、OR24、O(CH2CH2O)sR24、COOR24、烷基以及羟基烷基组成的组，其中s是1-6的整数，R21和R22当存在时独立地选自由氢或低级烷基组成的组，R23当存在时选自由羟基烷基、烷氧基烷基、烷基、芳基、芳烷基以及烷氧基羰基烷基组成的组，条件是当M3是NR6、M4不存在时，则R23不是1-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-3-乙氧基-3-氧代丙基，R24当存在时选自由烷基、芳基、芳烷基、杂环基、环烷基、环烷基烷基以及杂环基烷基以及其混合物或组合组成的组，M6是(CH2)q，其中q是0-6的整数，R3选自由氢、CONR13R14、NR15COOR16、NR15COR16、NR15CONR13R14、NR15SO2R16、OCOR16、COOR16、OR16、SR16、杂环基、羟基、羟基烷基、胍基、烷基以及芳基组成的组，其中R13和R15当存在时独立地是氢或低级烷基，R14和R16当存在时独立地选自由氢、烷基、芳基、芳烷基、环烷基、杂环基、环烷基烷基以及杂环基烷基组成的组，R1、R2、R3、R12、R14、R16、R23以及R24当存在时可以独立地是未取代的或是被选自由以下各项组成的组中的一个或多个取代基取代的：烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂环基芳基、羟基、烷氧基、叠氮基、卤代烷氧基、羟基烷基、芳氧基、羟基芳基、烷氧基芳基、卤代、卤代烷基、卤代芳基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、-NHCO(烷基)、-NHCO(芳基)、-NHCO(芳烷基)、-NHCO(卤代烷基)、-NHSO2(烷基)、-NHSO2(芳基)、-NHSO2(芳烷基)、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、-OCO(烷基氨基)、-OCO(二烷基氨基)以及其混合物或组合。在其他实施方案中，化学化合物具有，R1是芳基或芳烷基，R2是烷基或芳烷基，M1是CH2，M2是CO，M3不存在或是O或CH2，M4不存在或是CH2，M5不存在或是O或(CR11R12)，R11是氢，R12选自由氢、NR21CONR22R23、NR21COR24、NR21SO2R24以及NR21COOR24组成的组，M6选自由(CH2)q、(CH2)q-CH＝CH--(CH2)r、(CH2)q-亚芳基-(CH2)r以及(CH2CH2O)q组成的组，q和r独立地是0-6的整数，R3是CONR13R14，R21和R22各自当存在时独立地选自由氢和低级烷基组成的组，R13、R14、R23以及R24各自当存在时独立地选自由氢、烷基、芳基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基以及芳烷基组成的组，且R1、R2、R13、R14、R23以及R24当存在时可以是未取代的或是被选自由以下各项组成的组中的一个或多个取代基取代的：烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂环基芳基、羟基、烷氧基、叠氮基、卤代烷氧基、羟基烷基、芳氧基、羟基芳基、烷氧基芳基、卤代、卤代烷基、卤代芳基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、-NHCO(烷基)、-NHCO(芳基)、-NHCO(芳烷基)、-NHCO(卤代烷基)、-NHSO2(烷基)、-NHSO2(芳基)、-NHSO2(芳烷基)、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、-OCO(烷基氨基)、-OCO(二烷基氨基)以及其混合物或组合。在其他实施方案中，化学化合物具有，R1是芳基或芳烷基，R2是烷基或芳烷基，M1是CH2，M2是SO2或CO，M3不存在或是CH2，M4不存在或是CH2，M5不存在或是(CR11R12)，R11当存在时是氢，R12当存在时选自由氢、烷基、NR21CONR22R23、NR21COR24、NR21SO2R24以及NR21COOR24组成的组，M6是(CH2)q或NR34(CH2)q，q是0-6的整数，R3选自由CONR13R14、SO2NR13R14、NR15COOR16、NR15COR16、NR15CONR13R14以及NR15SO2R16组成的组，R15、R16、R21以及R22各自当存在时独立地选自氢、低级烷基以及芳烷基的组，R13、R14、R23以及R24各自当存在时独立地选自由氢、烷基、芳基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基以及芳烷基组成的组，R34当存在时选自由烷基、芳烷基、COR35以及SO2R35组成的组，R35当存在时选自由烷基、芳基以及芳烷基组成的组，且R1、R2、R13、R14、R15、R16、R23、R24、R34以及R35当存在时可以是未取代的或是被选自由以下各项组成的组中的一个或多个取代基取代的：烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂环基芳基、羟基、烷氧基、叠氮基、卤代烷氧基、羟基烷基、芳氧基、羟基芳基、烷氧基芳基、卤代、卤代烷基、卤代芳基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、-NHCO(烷基)、-NHCO(芳基)、-NHCO(芳烷基)、-NHCO(卤代烷基)、-NHSO2(烷基)、-NHSO2(芳基)、-NHSO2(芳烷基)、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、-OCO(烷基氨基)以及-OCO(二烷基氨基)，条件是当M2是CO时，则M6是NR34(CH2)q，其中q不是0。在其他实施方案中，化学化合物是非活性成分或赋形剂。在其他实施方案中，载体中的有效量大于1fM且小于100nM。在其他实施方案中，载体中的有效量大于1fM且小于50nM.在其他实施方案中，载体中的有效量大于1fM且小于25nM。
本发明的实施方案涉及用于增强过继性T细胞向肿瘤间质浸润的方法，所述方法包括将组合物弥散到患者的靶组织中，其中所述组合物包含过继性T细胞和有效量的一种或多种能增强细胞与其各自配体的整合素介导的结合的化学化合物，其中所述化学化合物以介于约1fM和约300μM之间的有效量存在，和/或处理的过继性T细胞，其包含用一种或多种能增强细胞与其各自配体的整合素介导的结合的化学化合物处理的过继性T细胞，其中靶组织是实体瘤间质，并且其中所述患者所患的癌症为肉瘤、癌、淋巴瘤以及白血病。在某些实施方案中，还包括洗涤处理的过继性T细胞，直到化学化合物的浓度介于约1fM和约300μM之间。在其他实施方案中，这些化合物靶向的整合素选自由组α4β1、α4β7、α5β1、αLβ2、αVβ3及其混合物或组合组成的。在其他实施方案中，配体选自由VCAM-1、纤连蛋白、MAdCAM-1、ICAM-1、ICAM-2、玻连蛋白以及其混合物或组合组成的组。在其他实施方案中，化学品化合物由通式(I)给出：
R1-M1-N(R2)-M2-M3-M4-M5-M6-R3 (1)
其中
R1选自芳基和芳烷基，R2是烷基、芳基或芳烷基，M1是CH2，M2是CO，M3是O、S或NR6，其中R6当存在时是氢或低级烷基，M4不存在或是CH2，M5是(CR11R12)，其中R11是氢，R12选自由氢、NR21CONR22R23、NR21COR24、NR21SO2R24、NR21COOR24、OCOR24、OR24、O(CH2CH2O)sR24、COOR24、烷基以及羟基烷基组成的组，其中s是1-6的整数，R21和R22当存在时独立地选自由氢或低级烷基组成的组，R23当存在时选自由羟基烷基、烷氧基烷基、烷基、芳基、芳烷基以及烷氧基羰基烷基组成的组，条件是当M3是NR6、M4不存在时，则R23不是1-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-3-乙氧基-3-氧代丙基，R24当存在时选自由烷基、芳基、芳烷基、杂环基、环烷基、环烷基烷基以及杂环基烷基及其混合物或组合组成的组，M6是(CH2)q，其中q是0-6的整数，R3选自由氢、CONR13R14、NR15COOR16、NR15COR16、NR15CONR13R14、NR15SO2R16、OCOR16、COOR16、OR16、SR16、杂环基、羟基、羟基烷基、胍基、烷基以及芳基组成的组，其中R13和R15当存在时独立地是氢或低级烷基，R14和R16当存在时独立地选自由氢、烷基、芳基、芳烷基、环烷基、杂环基、环烷基烷基以及杂环基烷基组成的组，R1、R2、R3、R12、R14、R16、R23以及R24当存在时可以独立地是未取代的或是被选自由以下各项组成的组中的一个或多个取代基取代的：烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂环基芳基、羟基、烷氧基、叠氮基、卤代烷氧基、羟基烷基、芳氧基、羟基芳基、烷氧基芳基、卤代、卤代烷基、卤代芳基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、-NHCO(烷基)、-NHCO(芳基)、-NHCO(芳烷基)、-NHCO(卤代烷基)、-NHSO2(烷基)、-NHSO2(芳基)、-NHSO2(芳烷基)、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、-OCO(烷基氨基)、-OCO(二烷基氨基)以及其混合物或组合。在某些实施方案中，化学化合物具有，R1是芳基或芳烷基，R2是烷基或芳烷基，M1是CH2，M2是CO，M3不存在或是O或CH2，M4不存在或是CH2，M5不存在或是O或(CR11R12)，R11是氢，R12选自由氢、NR21CONR22R23、NR21COR24、NR21SO2R24以及NR21COOR24组成的组，M6选自由(CH2)q、(CH2)q-CH＝CH--(CH2)r、(CH2)q-亚芳基-(CH2)r以及(CH2CH2O)q组成的组，q和r独立地是0-6的整数，R3是CONR13R14，R21和R22各自当存在时独立地选自氢和低级烷基，R13、R14、R23以及R24各自当存在时独立地选自由氢、烷基、芳基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基以及芳烷基组成的组，且R1、R2、R13、R14、R23和R24当存在时可以是未取代的或是被选自由以下各项组成的组中的一个或多个取代基取代的：烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂环基芳基、羟基、烷氧基、叠氮基、卤代烷氧基、羟基烷基、芳氧基、羟基芳基、烷氧基芳基、卤代、卤代烷基、卤代芳基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、-NHCO(烷基)、-NHCO(芳基)、-NHCO(芳烷基)、-NHCO(卤代烷基)、-NHSO2(烷基)、-NHSO2(芳基)、-NHSO2(芳烷基)、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、-OCO(烷基氨基)、-OCO(二烷基氨基)以及其混合物或组合。在某些实施方案中，化学化合物具有，R1是芳基或芳烷基，R2是烷基或芳烷基，M1是CH2，M2是SO2或CO，M3不存在或是CH2，M4不存在或是CH2，M5不存在或是(CR11R12)，R11当存在时是氢，R12当存在时选自由氢、烷基、NR21CONR22R23、NR21COR24NR21SO2R24以及NR21COOR24组成的组，M6是(CH2)q或NR34(CH2)q，q是0-6的整数，R3选自由CONR13R14、SO2NR13R14、NR15COOR16、NR15COR16、NR15CONR13R14以及NR15SO2R16组成的组，R15、R16、R21以及R22各自当存在时独立地选自由氢、低级烷基以及芳烷基组成的组，R13、R14、R23以及R24各自当存在时独立地选自由氢、烷基、芳基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基以及芳烷基组成的组，R34当存在时选自由烷基、芳烷基、COR35以及SO2R35组成的组，R35当存在时选自由烷基、芳基以及芳烷基组成的组，且R1、R2、R13、R14、R15、R16、R23、R24、R34以及R35当存在时可以是未取代的或是被选自由以下各项组成的组中的一个或多个取代基取代的：烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂环基芳基、羟基、烷氧基、叠氮基、卤代烷氧基、羟基烷基、芳氧基、羟基芳基、烷氧基芳基、卤代、卤代烷基、卤代芳基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、-NHCO(烷基)、-NHCO(芳基)、-NHCO(芳烷基)、-NHCO(卤代烷基)、-NHSO2(烷基)、-NHSO2(芳基)、-NHSO2(芳烷基)、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、-OCO(烷基氨基)以及-OCO(二烷基氨基)，条件是当M2是CO时，则M6是NR34(CH2)q，其中q不是0。在其他实施方案中，化学化合物是非活性成分或赋形剂。在其他实施方案中，载体中的有效量大于1fM且小于100nM。在其他实施方案中，载体中的有效量大于1fM且小于50nM。在其他实施方案中，载体中的有效量大于1fM且小于25nM。
激动剂预处理的效应细胞
首先用本文所述具有通式(I)的激动剂化合物处理(预处理)一种或多种整合素表达细胞，以在细胞表面上形成激动剂结合的整合素分子。整合素表达细胞可以是例如活化的CD4+或CD8T细胞或天然杀伤细胞。在有些情况下，细胞表达整合素α4β1、α5β1、α4β7、αvβ3以及αLβ2中的一种或多种。细胞的处理通常包括使整合素表达细胞与激动剂体外接触。在大多数应用中，本申请的激动剂化合物在处理介质中的浓度范围为约100nM至约30μM。在一些情况下，激动剂的浓度范围为约1μM至约10μM。在暴露于激动剂后，所得激动剂处理细胞结合同源配体的能力增强。整合素表达于细胞表面，并且可以是天然存在的或由已经被转化而表达外源整合素基因的细胞转基因表达。整合素结合的蛋白或其他同源配体或表达于细胞表面或是细胞外基质的一部分。
预处理的效应细胞与整合素结合配体的增强的结合
将溶解于药学上可接受的稀释剂中的上文所述的激动剂添加于细胞培养基或细胞悬浮液中并混合。将所得的激动剂处理的细胞引入整合素结合配体或结合位点，于是处理的细胞结合、附着或粘附于溶液中或表面或靶组织上的同源配体。在有些情况下，整合素结合蛋白是血管细胞粘附分子-1(VCAM 1)、纤连蛋白、粘膜地址素细胞粘附分子-1(MAdCAM-1)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、细胞间粘附分子-2(ICAM-2)或玻连蛋白。与未用激动剂处理的整合素表达细胞的结合相比，由于激动剂处理，激动剂处理的细胞与配体的结合得以增强或增加。在有些情况下，激动剂处理的细胞结合配体包被的表面比未处理的整合素表达细胞多至少3倍。在有些情况下，激动剂处理的细胞与整合素结合蛋白结合比未处理的细胞多高达3倍。
预处理的细胞对表达整合素结合配体的组织的保留增强
不管细胞的类型、作用机制或其如何递送，对许多应用而言，关键是效应细胞变移到肿瘤间质中，并保留在肿瘤间质中。在动物模型和临床试验中观察到的低的细胞保留水平，被认为是基于ACT的疗法进展的主要障碍。即使当全身注射大量效应细胞，并且所述效应细胞存在于体循环中，利用基于细胞的常规疗法，在肿瘤间质中检测到很少的注射细胞。通过比较，目前所公开方法的许多实施方案增加了效应细胞穿过外源递送的效应物的肿瘤内皮的变移速率和程度，结果增加了抗肿瘤活性的细胞治疗效力和功效。
增强外源引入的细胞在哺乳动物体内靶位点滞留的方法通常包括：(a)用整合素激动剂体外处理整合素表达细胞，其中激动剂是本文所述具有通式I的化合物；(b)将激动剂处理的细胞引入哺乳动物的体内靶位点；以及(c)如果将未用所述激动剂处理的整合素表达细胞引入所述靶位点，则相对于保留的细胞数量，使更大数量的所述引入的激动剂处理的细胞保留在所述靶位点。靶位点例如包括整合素结合蛋白诸如血管细胞粘附分子-1(VCAM 1)、纤连蛋白、粘膜地址素细胞粘附分子-1(MAdCAM-1)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、细胞间粘附分子-2(ICAM-2)或玻连蛋白。
通过肿瘤内注射到癌性病灶，所述方法增强外源引入的细胞的保留，所述癌性病灶包括但不限于皮肤、乳房、肺、肝、结肠、前列腺、胰腺以及脑的实体瘤，或血源性癌症如白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。
介质组合物
用于生产离体介质的本文所述的化合物可以以衍生于无机酸或有机酸的药学上可接受的盐的形式使用。短语″药学上可接受的盐″表示这样的盐，在合理的医学判断范围内，其适合用于与人和低等动物的组织接触，而无异常毒性、刺激、过敏反应等，并且与合理的效应/风险比相称。药学上可接受的盐是本领域公知的。例如S.M.Berge等在J.Pharmaceutical Sciences(药学)，1977，66：1中详细描述了药学上可接受的盐以及下列等盐。盐可以在化合物的最终分离和纯化过程中原位制备，或通过使自由碱官能团与合适的有机酸反应单独制备。代表性的酸加成盐包括但不限于乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、双葡萄糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐，2-羟基乙磺酸盐(异硫代硫酸盐)、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐以及十一烷酸盐(undecanoate)。此外，碱性含氮基团可以用如下试剂季铵化：低级烷基卤化物如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物，溴化物和碘化物；二烷基硫酸盐如二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸酯；长链卤化物如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基氯化物、溴化物和碘化物；芳烷基卤化物如苄基和苯乙基溴化物等。由此获得水或油可溶性或可分散性产物。可用于形成药学上可接受的酸加成盐的酸的实例包括诸如盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸的无机酸，以及诸如草酸、马来酸、琥珀酸和柠檬酸的有机酸。
在一些实施方案中，在公开的化合物的最终分离和纯化期间，通过使含羧酸的部分与合适的碱例如药学上可接受的金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐或与氨或有机伯胺、仲胺或叔胺反应来原位制备碱加成盐。药学上可接受的盐尤其包括但不限于基于碱金属或碱土金属的阳离子，例如锂盐、钠盐、钾盐、钙盐、镁盐和铝盐等，和非毒性季铵和胺阳离子，包括铵、四甲基铵、四乙基铵、甲基铵、二甲基铵、三甲基铵、三乙基铵、二乙基铵和乙基铵。可用于形成碱加成盐的其它代表性有机胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶、哌嗪等。
介质组合物中组分的实际浓度可以变化，以便针对具体患者、组合物以及给药模式获得有效实现由介质处理的细胞治疗剂介导的所需治疗反应的一种或多种化合物的量。所选择的浓度水平将取决于具体化合物的活性、给药途径、所治疗的病症的严重性，以及所治疗的患者的状况和先前的病史。然而，以低于实现期望的治疗效果所需的水平开始化合物的剂量，并逐渐增加剂量，直至实现所需效果，这在本领域的技术范围内。
当用于生产用于各种治疗性处理的细胞时，治疗有效量的一种或多种公开的化合物以纯形式使用，或者当存在这种形式时，以药学上可接受的盐、酯或前药的形式使用。在有些情况下，化合物作为药物组合物施用，其含有感兴趣的化合物与一种或多种其他药学上可接受的非活性成分或赋形剂组合。短语公开的化合物的“治疗有效量”指，以适用于任何医学治疗的合理的效益/风险比，所述化合物足以产生治疗病症的细胞治疗剂的量。用于任何具体患者的化合物的具体治疗有效浓度和细胞剂量应取决于多种因素，包括所治疗的病症和病症的严重程度；所用具体化合物的活性；所用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；给药时间、给药途径和所用的具体化合物的排泄速率；治疗的持续时间；与所用的具体化合物联合使用或同时使用的药物；以及医学领域众所周知的类似因素。例如，以低于实现期望的治疗效果所需的水平开始化合物的细胞剂量，并逐渐增加剂量，直到实现所需效果，这是本领域技术人员所熟知的。
所公开的化合物在离体处理介质中单独或与合适介质中治疗细胞组合用于注入人或低级动物的浓度可以为1fM(1飞摩尔或1×10-15M)至小于10μM。如果需要，为了给药的目的，有效浓度可以分成多个剂量；因此，单剂量组合物可含有这样的量或其约数(submultiples)，以配制细胞或化合物的每日剂量。
与合适的介质中的治疗细胞联合施用于人或低级动物的所公开的化合物的每日总浓度可以为1fM(1飞摩尔或1×10-15M)至小于10μM。如果需要，有效每日剂量可以分为多个剂量用于给药目的；因此，单剂量组合物可含有这样的量或其约数，以配制细胞的日剂量或化合物的暴露。
适于胃肠外注射的组合物可以包含生理学上可接受的无菌水溶液或非水性溶液、分散液、悬浮液或乳液和用于重构(reconstitution)成无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末。合适的水性和非水性载体、稀释剂、溶剂或媒介物(vehicle)的实例包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、甘油等)、植物油(如橄榄油)、可注射的有机酯如油酸乙酯，以及其合适的混合物。这些组合物还可以含有佐剂，例如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。可以通过各种抗菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等来确保防止微生物的作用。还可能需要包括等渗剂，例如糖、氯化钠等。可注射药物形式的延长吸收可以通过使用延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸铝和明胶来实现。
除活性化合物外，悬浮液还可含有悬浮剂，例如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝(aluminum metahydroxide)、膨润土、琼脂-琼脂和黄芪胶，或这些物质的混合物等。可以例如通过使用包衣材料例如卵磷脂，通过在分散体的情况下维持所需的粒度和通过使用表面活性剂来保持适当的流动性。
在一些情况下，对于具有最小溶解度的化合物，溶解度增强剂没有限制地包括表面活性剂，例如两性离子磷脂、非酯化脂肪酸，单-、二-或三甘油酯，可以单独或联合使用第二表面活性剂。
可注射制剂可以通过例如用细菌截留过滤器过滤或通过掺入无菌固体组合物形式的灭菌剂来灭菌，所述无菌固体组合物可以在使用前溶解于或分散于无菌水或其它无菌可注射介质中。
在一些实施方案中，提供了具有通式(I)的化合物：
R1-M1-N(R2)-M2-M3-M4-M5-M6-R3 (1)
其中
R1选自由芳基和芳烷基组成的组，
R2是烷基、芳基或芳烷基，
M1是CH2，
M2是CO，
M3是O、S或NR6，其中R6当存在时是氢或低级烷基，
M4不存在或是CH2，
M5是(CR11R12)，其中R11是氢，R12选自由氢、NR21CONR22R23、NR21COR24、NR21SO2R24、NR21COOR24、OCOR24、OR24、O(CH2CH2O)sR24、COOR24、烷基以及羟基烷基组成的组，其中s是1-6的整数，R21和R22当存在时独立地选自由氢或低级烷基组成的组，R23当存在时选自由羟基烷基、烷氧基烷基、烷基、芳基、芳烷基以及烷氧基羰基烷基组成的组，条件是当M3是NR6、M4不存在、且R12是CONR22R23时，则R23不是1-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-3-乙氧基-3-氧代丙基，R24当存在时选自由烷基、芳基、芳烷基、杂环基、环烷基、环烷基烷基以及杂环基烷基组成的组，
M6是(CH2)q，其中q是0-6的整数，
R3选自由氢、CONR13R14、NR15COOR16、NR15COR16、NR15CONR13R14、NR15SO2R16、OCOR16、COOR16、OR16、SR16、杂环基、羟基、羟基烷基、胍基、烷基以及芳基组成的组，其中R13和R15当存在时独立地是氢或低级烷基，R14和R16当存在时独立地选自由氢、烷基、芳基、芳烷基、环烷基、杂环基、环烷基烷基以及杂环基烷基组成的组，
R1、R2、R3、R12、R14、R16、R23以及R24当存在时可以独立地是未取代的或是被选自由以下各项组成的组中的一个或多个取代基取代的：烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂环基芳基、羟基、烷氧基、叠氮基、卤代烷氧基、羟基烷基、芳氧基、羟基芳基、烷氧基芳基、卤代、卤代烷基、卤代芳基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、-NHCO(烷基)、-NHCO(芳基)、-NHCO(芳烷基)、-NHCO(卤代烷基)、-NHSO2(烷基)、-NHSO2(芳基)、-NHSO2(芳烷基)、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、-OCO(烷基氨基)以及-OCO(二烷基氨基)。
在一些实施方案中，所述化合物选自由以下各项组成的组：(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯；(6S，10R)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯；(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-7-甲基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12酸甲酯；(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-9-甲基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯；(6S，10R)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-7-甲基-3，8-二氧代-1-(-2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸乙酯；(10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基-甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯；甲基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酯；(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-2-甲基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯；(6S)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，-9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯；(2S)-2-{[(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基甲基)氨甲酰基]氨基}己基二(2-噻吩基甲基)氨基甲酸酯；(6S，10S)-6-丁基-3，8-二氧代-10-苯基-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯；(2S)-2-({[(1S)-1-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-3-羟丙基]氨甲酰基}氨基)己基-二(2-噻吩基甲基)氨基甲酸酯；(2S)-2-[(苄基氨甲酰基)氨基]己基-二(2-噻吩基甲基)氨基甲酸酯；(2S)-2-[(吗啉-4-基羰基)氨基]己基-二(2-噻吩基甲基)氨基甲酸酯；(2S)-2-{[(3-甲氧基丙基)氨甲酰基]氨基}己基-二(2-噻吩基甲基)氨基甲酸酯；(2S)-2-{[(2-甲氧基乙基)氨甲酰基]氨基}己基-二(2-噻吩基甲基)氨基甲酸酯；[(2S)-1-{[二(2-噻吩基甲基)氨甲酰基]氧基}己-2-基]氨基甲酸叔丁酯；(2S)-2-[(叔丁基氨甲酰基)氨基]己基-二(2-噻吩基甲基)氨基甲酸酯；(2S)-2-[(异丙基氨甲酰基)氨基]己基-二(2-噻吩基甲基)氨基甲酸酯；(2S)-2-[(甲基氨甲酰基)氨基]己基-二(2-噻吩基甲基)氨基甲酸酯；[(2R)-1-{[二(2-噻吩基甲基)氨甲酰基]氧基}己-2-基]氨基甲酸叔丁酯；{(5S)-6-{[二(2-噻吩基甲基)氨甲酰基]氧基}-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]己基}氨基甲酸苄酯；(9S，13S)-13-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-9-({[二(2-噻吩基甲基)氨甲酰基]氧基}甲基)-3，11-二氧代-1-苯基-2-氧杂-4，10，12-三氮杂十五烷-15-酸甲酯；(2S)-2-乙酰胺基己基二(2-噻吩基甲基)氨基甲酸酯；(3R)-3-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-3-{[(2S)-2-{[二(2-噻吩基甲基)氨甲酰基]氨基}己酰基]氨基}丙酸甲酯；(3R)-3-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-3-{[(2R)-2-{[二(2-噻吩基甲基)氨甲酰基]氨基}己酰基]氨基}丙酸甲酯；(3S)-3-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-3-{[(2R)-2-{[二(2-噻吩基甲基)氨甲酰基]氨基}己酰基]氨基}丙酸甲酯；(6R，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯；(6R，10R)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯；(2S)-2-{[二(2-噻吩基甲基)-氨甲酰基]氨基}己酸甲酯；(2R)-2-{[二(2-噻吩基甲基)氨甲酰基]氨基}己酸甲酯；3-[(2S)-1-羟基己-2-基]-1，1-二(2-噻吩基甲基)脲；3-[(2R)-1-羟基己-2-基]-1，1-二(2-噻吩基甲基)脲；(2S)-6-{[(苄氧基)羰基]氨基}-2-{[二(2-噻吩基甲基)氨甲酰基]氨基}己酸甲酯；{[二(2-噻吩基甲基)氨甲酰基](甲基)氨基}乙酸甲酯；{[二(2-噻吩基甲基)氨甲酰基]氨基}乙酸甲酯；{[二(2-噻吩基甲基)氨甲酰基](丁基)氨基}乙酸甲酯；3-(3-羟基丙基)-1，1-二(2-噻吩基甲基)脲；(2R)-{[二(2-噻吩基甲基)氨甲酰基]氨基}(苯基)乙酸甲酯；{[二(2-噻吩基甲基)氨甲酰基]氨基}乙酸叔丁酯；{[二(2-噻吩基甲基)氨甲酰基](丁基)氨基}乙酸叔丁酯；{(5S)-6-{[二(4-甲氧基苄基)氨甲酰基]氧基}-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]己基}氨基甲酸苄酯；[(2S)-1-{[二(4-甲氧基苄基)氨甲酰基]氧基}己-2-基]氨基甲酸叔丁酯；(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-2-(4-甲氧基苄基)-1-(4-甲氧基苯基)-3，8-二氧代-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯；(2S)-2-({[(1S)-1-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-3-羟基丙基]氨甲酰基}氨基)己基-二(4-甲氧基苄基)氨基甲酸酯；(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]己基二苄基氨基甲酸酯；(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-2-苄基-6-丁基-3，8-二氧代-1-苯基-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯；[(2S)-1-{[二(4-甲基苄基)氨甲酰基]氧基}己-2-基]氨基甲酸叔丁酯；(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-2-(4-甲基苄基)-1-(4-甲基苯基)-3，8-二氧代-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯；[(2S)-1-{[二(4-氯代苄基)氨甲酰基]氧基}己-2-基]氨基甲酸叔丁酯；(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-2-(4-氯代苄基)-1-(4-氯代苯基)-3，8-二氧代-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯；(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]己基(4-溴代苯基)(2-噻吩基甲基)氨基甲酸酯；(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-2-(4-溴代苯基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯；(6S，10S)-2-(4-叠氮基苄基)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯；(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]己基苯基(2-噻吩基甲基)氨基甲酸酯；(6S，100S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-2-苯基-1-(2-噻吩基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯；[(2S)-1-{[二(3-噻吩基甲基)氨甲酰基]氧基}己-2-基]氨基甲酸叔丁酯；(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(3-噻吩基-)-2-(3-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯；[(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-{[丁基(2-噻吩基甲基)氨甲酰基]氧基}己基]氨基甲酸苄酯；(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]己基丁基(2-噻吩基-甲基)氨基甲酸酯；(3S，7S)-3-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-7-丁基-5，10-二氧代-[1-(2-噻吩基甲基)-9-氧杂-4，6，11-三氮杂十五烷-1-酸甲酯；[(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-{[(2-甲氧基乙基)(2-噻吩基-甲基)氨甲酰基]氧基}己基]氨基甲酸苄酯；(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]己基(2-甲氧基乙基)(2-噻吩基甲基)-氨基甲酸酯；(9S，13S)-13-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-9-丁基-6，11-二氧代-5-(-2-噻吩基甲基)-2，7-二氧杂-5，10，12-三氮杂十五烷-15-酸甲酯；(2S)-2-[({3-[(甲基磺酰基)氨基]苄基}氨甲酰基)氨基]己基(2-甲氧基乙基)(2-噻吩基甲基)氨基甲酸酯；(2S)-2-{[(4-溴代苯基)氨甲酰基]氨基}己基-二(2-噻吩基甲基)氨基甲酸酯；(2S)-2-{[(4-叠氮基苄基)氨甲酰基]氨基}己基-二(2-噻吩基甲基)氨基甲酸酯；[(2S)-1-{[二(2-噻吩基甲基)氨甲酰基]硫代}己-2-基]氨基甲酸叔丁酯；以及(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-硫杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯。
在某些实施方案中，化学化合物是(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯。
在一些实施方案中，提供了具有通式(I)的化学化合物，其中R1是芳基或芳烷基，R2是烷基、芳基或芳烷基，M1是CH2，M2是CO，M3不存在，M4不存在或是CH2，M5是(CR11R12)，M6是(CH2)q，其中q是0-6的整数，R11是氢，且R12选自由氢、NR21CONR22R23、NR21COR24、NR21SO2R24、NR21COOR24、OCOR24、OR24、SCOR24、SR24、N3、CN以及O(CH2CH2O)sR24组成的组，其中s是1-6的整数，R21和R22当存在时独立地选自由氢、低级烷基或芳烷基组成的组，R23当存在时选自由羟基烷基、烷氧基烷基、烷基、芳基、芳烷基以及烷氧基羰基烷基组成的组，R24当存在时选自由烷基、芳基、芳烷基、杂环基、环烷基、环烷基烷基以及杂环基烷基组成的组，条件是当M3和M4不存在时，R12不是下式：
其中A选自由-O-、-S-以及-NR26-组成的组，E选自由-CH2-、-O-、-S-以及-NR27-组成的组，J选自由-O-、-S-以及-NR28-组成的组，T选自由CO和(CH2)b组成的组，其中b是0-3的整数，L选自由--(CH2)n--、--O--、--S-以及--NR29--组成的组，其中n是0-3的整数，M选自CR30R31和(CH2)uu，其中u是整数0或1，X选自由CO2B、PO3H2、SO3H、OPO3H2、CONHCOR32、CONHSO2R33、唑基、四唑基以及氢组成的组，B、R25、R26、R27、R28、R29、R30、R31、R32以及R33独立地选自由以下各项组成的组：氢、卤素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、烯氧基、炔氧基、硫代烷氧基、脂肪族酰基、--CF3、硝基、氨基、氰基、N(C1-C3烷基)CO(C1-C3烷基)、C1-C3烷基氨基、烯氨基、炔氨基、二(C1-C3烷基)氨基、CO2(C1-C3烷基氨基)、CONH(C1-C3烷基氨基)、CH＝NOH、PO3H2、OPO3H2、CON(C1-C3烷基)2、卤代烷基、烷氧基羰基、烷氧基烷氧基、甲醛、甲酰胺、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、芳酰基、芳氧基、芳基氨基、联芳基、硫代芳基、杂环基、杂环基(heterocycloyl)、烷基芳基、芳烯基、芳烷基、烷基杂环基、杂环基烷基(heterocyclycalkyl)、磺酰基、磺酰胺、氨基甲酸酯、芳氧基烷基、羧基以及CONH(苄基)，其中B、X、R25、R26、R27、R28、R29、R30、R31以及R32是未取代的或是被至少一个供电子基团或亲电子基团取代的，R3选自由氢、NR15COOR16、NR15COR16、NR15CONR13R14、NR15SO2R16、OCOR16、COOR16、烷基、SR16、杂环基、羟基、羟基烷基、胍基(guanadino)以及芳基组成的组，其中R13和R15当存在时独立地是氢、低级烷基或芳烷基，R14和R16当存在时独立地选自由氢、烷基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基以及杂环基烷基组成的组，条件是当R3是氢、烷基或芳基时，R12不是氢，且条件是当R1是苯基、R3是苄氧基羰基氨基且R12是氢时，R2不是2-甲氧基苄基，且R1、R2、R3、R12、R13、R14、R15、R16、R21、R22、R23以及R24当存在时可以独立地是未取代的或是被选自由以下各项组成的组中的一个或多个取代基取代的：烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂环基芳基、羟基、烷氧基、叠氮基、羟基烷基、芳氧基、羟基芳基、烷氧基芳基、卤代、卤代烷基、卤代芳基、卤代烷氧基、氨基，烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、-NHCO(烷基)、-NHCO(芳基)、-NHCO(芳烷基)、-NHCO(卤代烷基)、-NHSO2(烷基)、-NHSO2(芳基)、-NHSO2(芳烷基)、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、-OCO(烷基氨基)、-OCO(二烷基氨基)。
在一些实施方案，化合物选自由以下各项组成的组：(2R)-2-({[(1S)-1-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-3-羟丙基]氨甲酰基}氨基)-N，N-二(2-噻吩基甲基)己酰胺；(3S)-3-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-3-[({3-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-3-氧代丙基}氨甲酰基)氨基]丙酸甲酯；(2S)-2-[(叔丁基氨甲酰基)氨基]-N，N-二(2-噻吩基甲基)己酰胺；{(2S)-1-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-1-氧代己-2-基}氨基甲酸叔丁酯；{(5S)-6-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-5-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯；{(5S)-6-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯；{(5R)-6-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯；{(2R)-1-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-1-氧代己-2-基}氨基甲酸叔丁酯；(2S)-2-乙酰胺基-N，N-二(2-噻吩基甲基)己酰胺；{(5S)-5-乙酰胺基-6-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯；(2R)-2-乙酰胺基-N，N-二(2-噻吩基甲基)己酰胺；{(5S)-5-(苯甲酰基氨基)-6-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯；(2S)-2-[(苯基磺酰基)氨基]-N，N-二(2-噻吩基甲基)己酰胺；(2S)-2-[甲基(苯基磺酰基)氨基]-N，N-二(2-噻吩基甲基)己酰胺；2-[(苯基磺酰基)氨基]-N，N-二(2-噻吩基甲基)乙酰胺；2-[甲基(苯基磺酰基)氨基]-N，N-二(2-噻吩基甲基)乙酰胺；(2S)-2-[(甲基磺酰基)氨基]-N，N-二(2-噻吩基甲基)己酰胺；(2S)-2-({[3-(4-甲氧基苯氧基)丙基]磺酰基}氨基)-N，N-二(2-噻吩基甲基)己酰胺；{(5S)-6-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-6-氧代-5-[(2-噻吩基磺酰基)氨基]己基}氨基甲酸苄酯；{(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[(3-甲氧基苄基)(2-噻吩基-甲基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯；{(5S)-6-[二(3-甲氧基苄基)氨基]-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯；{(5R)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[(3-甲氧基苄基)(2-噻吩基-甲基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯；{(5R)-6-[二(3-甲氧基苄基)氨基]-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯；[(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氧代-6-{[2-(2-噻吩基)乙基](-2-噻吩基甲基)氨基}己基]氨基甲酸苄酯；[(5R)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氧代-6-{[2-(2-噻吩基)乙基](-2-噻吩基甲基)氨基}己基]氨基甲酸苄酯；[(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-(二苄基氨基)-6-氧代己基]氨基甲酸苄酯；{(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[(4-硝基苄基)(2-噻吩基甲基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯；{(5R)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[(4-硝基苄基)(2-噻吩基甲基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯；[(2R)-1-[(4-氨基苄基)(2-噻吩基甲基)氨基]-6-{[(苄氧基)-羰基]氨基}-1-氧代己-2-基]氨基甲酸叔丁酯；[(2S)-1-[(4-氨基苄基)(2-噻吩基甲基)氨基]-6-{[(苄氧基)-羰基]氨基}-1-氧代己-2-基]氨基甲酸叔丁酯；{(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[甲基(2-噻吩基甲基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯；{(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[丁基(2-噻吩基甲基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯；{(5S)-6-[二(4-甲氧基苄基)氨基]-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯；{(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氧代-6-[(吡啶-4-基甲基)(-2-噻吩基甲基)氨基]己基}氨基甲酸苄酯；{(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氧代-6-[(吡啶-3-基甲基)(-2-噻吩基甲基)氨基]己基}氨基甲酸苄酯；{(5S)-6-[二(吡啶-4-基甲基)氨基]-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯；{(2S)-1-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-1-氧代-6-[(2-噻吩基磺酰基)氨基]己-2-基}氨基甲酸叔丁酯；{(2S)-6-乙酰胺基-1-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-1-氧代己-2-基}氨基甲酸叔丁酯；{(2S)-1-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-1-氧代-6-[(三氟乙酰基)氨基]己-2-基}氨基甲酸叔丁酯；{(2S)-1-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-6-[(甲基磺酰基)氨基]-1-氧代己-2-基}氨基甲酸叔丁酯；{(2S)-1-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-1-氧代-6-[(2-噻吩基羰基)氨基]己-2-基}氨基甲酸叔丁酯；{(2S)-1-[二(2-噻吩基甲基)氨基1-1-氧代-6-[(苯基磺酰基)氨基]己-2-基}氨基甲酸叔丁酯；{(2S)-1-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-1-氧代-6-[(吡啶-3-基羰基)氨基]己-2-基}氨基甲酸叔丁酯；{(2S)-1-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-1-氧代-6-[(2-噻吩基乙酰基)氨基]己-2-基}氨基甲酸叔丁酯；{(2S)-1-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-6-羟基-1-氧代己-2-基}氨基甲酸叔丁酯；[(2S)-1-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-1-氧代-6-{[(三氟甲基)磺酰基]氨基}己-2-基]氨基甲酸叔丁酯；{(2S)-6-[(苄基磺酰基)氨基]-1-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-1-氧代己-2-基}氨基甲酸叔丁酯；{(2S)-6-[苄基(三氟乙酰基)氨基]-1-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-1-氧代己-2-基}氨基甲酸叔丁酯；[(1R)-2-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-1-(4-羟基苯基)-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯；(4S)-5-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-4-[(叔丁氧基羰基)氨基]-5-氧代戊酸甲酯；{(3S)-4-[二(噻吩-2-基甲基)氨基]-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-氧代丁基}氨基甲酸苄酯；{(4S)-5-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-4-[(叔丁氧基羰基)氨基]-5-氧代戊基}氨基甲酸苄酯；{2-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-2-氧代乙基}氨基甲酸叔丁酯；{2-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-2-氧代乙基}甲基氨基甲酸叔丁酯；N，N-二(2-噻吩基甲基)-6-[(2-噻吩基磺酰基)氨基]己酰胺；N-{6-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-6-氧代己基}噻吩-2-甲酰胺；N-{6-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-6-氧代己基}-N-(2-噻吩基甲基)噻吩-2-甲酰胺；N-苄基-N-{6-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-6-氧代己基}噻吩-2-甲酰胺；6-[苄基(2-噻吩基磺酰基)氨基]-N，N-二(2-噻吩基甲基)己酰胺；6-[甲基(2-噻吩基磺酰基)氨基]-N，N-二(2-噻吩基甲基)己酰胺；6-[(苄基磺酰基)氨基]-N，N-二(2-噻吩基甲基)己酰胺；6-[(2-噻吩基乙酰基)氨基]-N，N-二(2-噻吩基甲基)己酰胺；N-{6-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-6-氧代己基}-N-(3-甲氧基苄基)噻吩-2-甲酰胺；6-[(3-甲氧基苄基)(2-噻吩基磺酰基)氨基]-N，N-二(2-噻吩基甲基)己酰胺；6-[(苄基磺酰基)(3-甲氧基苄基)氨基]-N，N-二(2-噻吩基甲基)己酰胺；{6-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯；{6-[二(噻吩-2-基甲基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸叔丁酯；[(2S)-1-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-3-(4-羟基苯基)-1-氧代丙-2-基]氨基甲酸叔丁酯；(5S)-6-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氧代己酸甲酯；(2S)-2-[乙酰基(甲基)氨基]-N，N-二(2-噻吩基甲基)己酰胺；{(5S)-5-[乙酰基(甲基)氨基]-6-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯；(2S)-6-{[(苄氧基)羰基]氨基}-1-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-1-氧代己-2-基乙酸酯；{(2S)-6-[苄基(2-噻吩基磺酰基)氨基]-1-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-1-氧代己-2-基}氨基甲酸叔丁酯；{(5S)-6-{二[4-(三氟甲氧基)苄基]氨基}-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯；[(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氧代-6-{(2-噻吩基甲基)[2-(三氟甲基)苄基]氨基}己基]氨基甲酸苄酯；[(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氧代-6-{(2-噻吩基甲基)[2-(三氟甲氧基)苄基]氨基}己基]氨基甲酸苄酯；[(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-{[2-(二氟甲氧基)苄基]-(2-噻吩基甲基)氨基}-6-氧代己基]氨基甲酸苄酯；{6-[二(4-甲氧基苄基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸叔丁酯；N-{6-[二(4-甲氧基苄基)氨基]-6-氧代己基}-4-甲氧基苯甲酰胺；N-{6-[二(4-甲氧基苄基)氨基]-6-氧代己基}-4-甲氧基-N-(4-甲氧基苄基)苯甲酰胺；N-{6-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-6-氧代己基}-N-甲基噻吩-2-甲酰胺；6-[(3-甲氧基苄基)(2-噻吩基乙酰基)氨基]-N，N-二(2-噻吩基甲基)己酰胺；{4-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-4-氧代丁基}氨基甲酸叔丁酯；(3S)-3-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-3-[({4-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-4-氧代丁基}氨甲酰基)氨基]丙酸甲酯；6-{[(3-氯代丙基)磺酰基]氨基}-N，N-二(4-甲氧基苄基)己酰胺；6-(1，1-二氧代-1，2-噻唑烷-2-基)-N，N-二(4-甲氧基苄基)己酰胺；N，N-二(4-甲氧基苄基)-6-({[2-(吗啉-4-基)乙基]磺酰基}氨基)己酰胺；3-{[二(2-噻吩基甲基)氨甲酰基]氨基}-N，N-二(2-噻吩基甲基)丙酰胺；{3-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-3-氧代丙基}丁基氨基甲酸叔丁酯；3-{[二(2-噻吩基甲基)氨甲酰基](丁基)氨基}-N，N-二(2-噻吩基甲基)丙酰胺；3-{丁基[(2-噻吩基甲基)氨甲酰基]氨基}-N，N-二(2-噻吩基甲基)丙酰胺；4-(1，1-二氧代-1，2-噻唑烷-2-基)-N，N-二(2-噻吩基甲基)丁酰胺；N，N-二(2-噻吩基甲基)-3-{[(2-噻吩基甲基)氨甲酰基]氨基}丙酰胺；{(5S)-6-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-5-羟基-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯；{(5S)-6-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-5-氰基-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯；{(5R)-5-叠氮基-6-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯；S-{(2R)-6-{[(苄氧基)羰基]氨基}-1-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-1-氧代己-2-基}硫代乙酸酯(ethanethioate)；[(2S)-1-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-6-({[(4-溴代苯基)氧基]羰基}氨基)-1-氧代己-2-基]氨基甲酸叔丁酯；{(5S)-6-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-5-[(叔丁氧基羰基)-氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸4-叠氮基苄酯；{(5S)-6-[(4-溴代苯基)(2-噻吩基甲基)氨基]-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯；[(2S)-1-[(4-叠氮基苄基)(2-噻吩基甲基)氨基]-6-{[(苄氧基)-羰基]氨基}-1-氧代己-2-基]氨基甲酸叔丁酯；{(2S)-1-[(4-溴代苯基)(2-噻吩基甲基)氨基]-1-氧代己-2-基-}氨基甲酸叔丁酯；{(5S)-6-[二(3-噻吩基甲基)氨基]-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯；以及{(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[(环丙基甲基)(2-噻吩-基甲基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯。
在某些实施方案中，所述化学化合物是(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯。
在一些实施方案中，提供了具有通式(I)的化学化合物，其中R1是烷基、芳基或芳烷基，R2选自由芳烷基和烷基组成的组，条件是当R1是烷基时，R2是芳烷基，M1是CO或SO2，条件是当M1是SO2，且R1是苯基、4-甲基苯基或2，4，6-三甲基苯基时，R2不是烷基、2-苯乙基、苄基或2-甲氧基-2-氧代乙基，且当M1是CO且R1是2-呋喃基、4-吡啶基或3，5-二硝基苯基时，R2不是烷基、苄基或2-(1H-吲哚-2-基)乙基，M2不存在或是CH2，M3和M4不存在，M5是(CR11R12)，R11是氢，R12选自由氢、NR21CONR22R23、NR21COR24、NR21SO2R24、NR21COOR24、CONR22R23、COOR24、O(CH2CH2O)sR24羟基烷基以及烷氧基烷基组成的组，其中s是1-6的整数，M6是(CH2)q，其中q是0-6的整数，R3选自由NR15COOR16、NR15COR16、NR15CONR13R14以及NR15SO2R16组成的组，且R13、R21以及R22当存在时独立地选自由氢和低级烷基组成的组，且R14、R15、R16、R23以及R24各自当存在时独立地选自由氢、烷基、芳基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基以及芳烷基组成的组，且R1、R2、R3、R12、R14、R15、R16、R23以及R24当存在时可以独立地是未取代的或是被选自由以下各项组成的组中的一个或多个取代基取代的：烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂环基芳基、羟基、烷氧基、叠氮基、卤代烷氧基、羟基烷基、芳氧基、羟基芳基、烷氧基芳基、卤代、卤代烷基、卤代芳基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、-NHCO(烷基)、-NHCO(芳基)、-NHCO(芳烷基)、-NHCO(卤代烷基)、-NHSO2(烷基)、-NHSO2(芳基)、-NHSO2(芳烷基)、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、-OCO(烷基氨基)以及-OCO(二烷基氨基)。
在一些实施方案中，化合物选自由以下各项组成的组：(2S)-6-{[(苄氧基)羰基]氨基}-2-[苄基(2-噻吩基磺酰基)氨基]己酸甲酯；(2S)-6-{[(苄氧基)羰基]氨基}-2-[苄基(苯基磺酰基)氨基]-己酸甲酯；(2S)-6-{[(苄氧基)羰基]氨基}-2-[(2-噻吩基羰基)(2-噻吩基甲基)氨基]己酸甲酯；(2S)-6-{[(苄氧基)羰基]氨基}-2-[(2-噻吩基乙酰基)(2-噻吩基甲基)氨基]己酸甲酯；(2S)-2-[苄基(异丁基磺酰基)氨基]-6-{[(苄氧基)羰基]氨基}己酸甲酯；{(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[(2-噻吩基甲基)(2-噻吩基-磺酰基)氨基]己基}氨基甲酸苄酯；{(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[(2-噻吩基乙酰基)(2-噻吩基甲基)氨基]己基}氨基甲酸苄酯；{(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[(甲基磺酰基)(2-噻吩基甲基)氨基]己基}氨基甲酸苄酯；{(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[(苯基磺酰基)(2噻吩基-甲基)氨基]己基}氨基甲酸苄酯；{(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[(2-噻吩基羰基)(2-噻吩基甲基)氨基]己基}氨基甲酸苄酯；N，N′-庚-1，7-二基二[N-(2-噻吩基甲基)苯甲酰胺]；N，N′-庚-1，7-二基二[N-(2-噻吩基甲基)噻吩-2-甲酰胺]；[(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-{[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-(2-噻吩基甲基)氨基}己基]氨基甲酸苄酯；{(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[(4-甲氧基苯甲酰基)(2-噻吩基甲基)氨基]己基}氨基甲酸苄酯；N，N′-己-1，6-二基二[N-(2-噻吩基甲基)噻吩-2-甲酰胺]；N，N′-己-1，6-二基二[N-(3-甲氧基苄基)噻吩-2-甲酰胺]；{5-[(4-甲氧基苄基)(2-噻吩基磺酰基)氨基]戊基}氨基甲酸叔丁酯；N，N′-戊-1，5-二基二[N-(3-甲氧基苄基)噻吩-2-磺酰胺]；N-(3-甲氧基苄基)-{5-[(2-噻吩基磺酰基)氨基]戊基}噻吩-2-磺酰胺；{5-[(2-噻吩基羰基)(2-噻吩基甲基)氨基]戊基}氨基甲酸叔丁酯；N-(3-甲氧基苄基)-N-{5-[(2-噻吩基羰基)氨基]戊基}噻吩-2-甲酰胺；以及N，N′-戊-1，5-二基二[N-(3-甲氧基苄基)噻吩-2-甲酰胺]。
在某些实施方案中，所述化学化合物是(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯。
在一些实施方案中，选择具有通式(I)的化学化合物，其中R1是芳基或芳烷基，R2是烷基或芳烷基，M1是CH2，M2是CO，M3不存在或是O或CH2，M4不存在或是CH2，M5不存在或是O或(CR11R12)，R11是氢，R12选自由氢、NR21CONR22R23、NR21COR24、NR21SO2R24以及NR21COOR24组成的组，M6选自由(CH2)q、(CH2)q-CH＝CH--(CH2)r、(CH2)q-亚芳基-(CH2)r以及(CH2CH2O)q组成的组，其中q和r独立地是0-6的整数，R3是CONR13R14，R21和R22各自当存在时独立地选自由氢和低级烷基组成的组，R13、R14、R23以及R24各自当存在时独立地选自由氢、烷基、芳基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基以及芳烷基组成的组，且R1、R2、R13、R14、R23以及R24当存在时可是未取代的或是被选自由以下各项组成的组中的一个或多个取代基取代的：烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂环基芳基、羟基、烷氧基、叠氮基、卤代烷氧基、羟基烷基、芳氧基、羟基芳基、烷氧基芳基、卤代、卤代烷基、卤代芳基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、-NHCO(烷基)、-NHCO(芳基)、-NHCO(芳烷基)、-NHCO(卤代烷基)、-NHSO2(烷基)、-NHSO2(芳基)、-NHSO2(芳烷基)、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、-OCO(烷基氨基)以及-OCO(二烷基氨基)。
在一些实施方案中，化合物选自由以下各项组成的组：N，N，N′，N′-四(2-噻吩基甲基)戊二酰胺；N-(3-甲氧基苄基)-N，N′，N′-三(2-噻吩基甲基)戊二酰胺；N，N，N′-三(2-噻吩基甲基)戊二酰胺；N′-[2-(2-噻吩基)乙基]-N，N-二(2-噻吩基甲基)戊二酰胺；N-[2-(2-噻吩基)乙基]-N，N′，N′-三(2-噻吩基甲基)戊二酰胺；N，N-二(吡啶-4-基甲基)-N′，N′-二(2-噻吩基甲基)戊二酰胺；N，N-二(吡啶-3-基甲基)-N′，N′-二(2-噻吩基甲基)戊二酰胺；N，N-二(3-甲氧基苄基)-N′，N′-二(2-噻吩基甲基)戊二酰胺；N，N，N′，N′-四(4-甲氧基苄基)戊二酰胺；N，N，N′，N′-四(2-噻吩基甲基)己二酰胺；N，N，N′，N′-四(4-甲氧基苄基)己二酰胺；N，N，N′，N′-四(3-甲氧基苄基)己二酰胺；N，N，N′，N′-四(2-噻吩基甲基)庚二酰胺；2，2′-(1，3-亚苯基)二[N，N-二(2-噻吩基甲基)乙酰胺]；N，N，N′，N′-四(4-甲氧基苄基)庚二酰胺；N，N，N′，N′-四(2-噻吩基甲基)辛二酰胺；(3E)-N，N，N′，N′-四(2-噻吩基甲基)己-3-烯二酰胺；2，2′-氧基二[N，N-二(2-噻吩基甲基)乙酰胺]；3-氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4，7，10-三氧杂-2-氮杂十二烷-12-基二(2-噻吩基甲基)氨基甲酸酯；N，N，N′，N′-四(4-甲氧基苄基)琥珀酰胺乙-1，2-二基二[二(2-噻吩基甲基)氨基甲酸酯]；N，N，N′，N′-四(4-甲氧基苄基)辛二酰胺；N，N，N′，N′-四(2-噻吩基甲基)吡啶-3，5-二甲酰胺；N，N，N′，N′-四(2-噻吩基甲基)吡啶-2，6-二甲酰胺；N，N，N′，N′-四(2-噻吩基甲基)吡啶-2，4-二甲酰胺；2，2′-(1，4-亚苯基)二[N，N-二(2-噻吩基甲基)乙酰胺]；8-{2-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-2-氧代乙氧基}-N，N-二(2-噻吩基甲基)喹啉-2-甲酰胺；N，N′-二(4-甲氧基苄基)-N，N′-二(2-噻吩基甲基)己二酰胺；以及{(2S)-1，6-二[二(2-噻吩基甲基)氨基]-1，6-二氧代己-2-基}氨基甲酸叔丁酯。
在某些实施方案中，所述化学化合物是(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯。
在一些实施方案中，提供了具有通式(I)的化学化合物，其中R1是芳基或芳烷基，R2是烷基或芳烷基，M1是CH2，M2是SO2或CO，M3不存在或是CH2，M4不存在或是CH2，M5不存在或是(CR11R12)，R11当存在时是氢，R12当存在时选自由氢、烷基、NR21CONR22R23、NR21COR24、NR21SO2R24以及NR21COOR24组成的组，M6是(CH2)q或NR34(CH2)q，其中q是0-6的整数，R3选自由CONR13R14、SO2NR13R14、NR15COOR16、NR15COR16、NR15CONR13R14以及NR15SO2R16组成的组，R15、R16、R21以及R22各自当存在时独立地选自由氢、低级烷基以及芳烷基组成的组，R13、R14、R23以及R24各自当存在时独立地选自由氢、烷基、芳基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基以及芳烷基组成的组，R34当存在时选自由烷基、芳烷基、COR35以及SO2R35组成的组，其中R35当存在时选自由烷基、芳基以及芳烷基组成的组，且R1、R2、R13、R14、R15、R16、R23、R24、R34以及R35当存在时可以是未取代的或是被选自由以下各项组成的组中的一个或多个取代基取代的：烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂环基芳基、羟基、烷氧基、叠氮基、卤代烷氧基、羟基烷基、芳氧基、羟基芳基、烷氧基芳基、卤代、卤代烷基、卤代芳基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、-NHCO(烷基)、-NHCO(芳基)、-NHCO(芳烷基)、-NHCO(卤代烷基)、-NHSO2(烷基)、-NHSO2(芳基)、-NHSO2(芳烷基)、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、-OCO(烷基氨基)以及-OCO(二烷基氨基)，前提条件是当M2是CO时，则M6是NR34(CH2)q，其中q不是0。
在一些实施方案中，化合物选自由以下各项组成的组：N-{2-[二(2-噻吩基甲基)氨磺酰基]乙基}-N-(2-噻吩基甲基)噻吩-2-磺酰胺；N-{2-[二(2-噻吩基甲基)氨磺酰基]乙基}-N-(2-噻吩基甲基)噻吩-2-甲酰胺；2-{丁基[(2-噻吩基甲基)氨甲酰基]氨基}-N，N-二(2-噻吩基甲基)乙烷磺酰胺；2-{[二(2-噻吩基甲基)氨甲酰基](丁基)氨基}-N，N-二(2-噻吩基甲基)乙烷磺酰胺；N-{3-[二(2-噻吩基甲基)氨磺酰基]丙基}-(2-噻吩基甲基)噻吩-2-磺酰胺；2-[(甲基磺酰基)(2-噻吩基甲基)氨基]-N，N-二(2-噻吩基甲基)乙烷磺酰胺；2-{[二(2-噻吩基甲基)氨甲酰基]氨基}-N，N-二(2-噻吩基甲基)乙烷磺酰胺；N-{2-[二(2-噻吩基甲基)氨磺酰基]乙基}噻吩-2-磺酰胺；N-{2-[二(2-噻吩基甲基)氨磺酰基]乙基}-2-(2-噻吩基)乙酰胺；N-{2-[二(2-噻吩基甲基)氨磺酰基]乙基}噻吩-2-甲酰胺；N，N-二(2-噻吩基甲基)-2-{[(2-噻吩基甲基)氨甲酰基]氨基}乙烷磺酰胺；2-({2-[二(2-噻吩基甲基)氨磺酰基]乙基}氨基)-N，N-二(2-噻吩基甲基)乙酰胺；3-[{2-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-2-氧代乙基}(丁基)氨基]-N，N-二(2-噻吩基甲基)丙酰胺；2-[{2-[二(2-噻吩基甲基)氨磺酰基]乙基}(甲基)氨基]-N，N-二(2-噻吩基甲基)乙酰胺；2-[{2-[二(2-噻吩基甲基)氨磺酰基]乙基}(丁基)氨基]-N，N-二(2-噻吩基甲基)乙酰胺；3-({2-[二(2-噻吩基甲基)氨磺酰基]乙基}氨基)-N，N-二(2-噻吩基甲基)丙酰胺；3-({2-[二(2-噻吩基甲基)氨磺酰基]乙基}氨基)-N，N-二(4-甲氧基苄基)丙酰胺；3-({2-[二(4-甲氧基苄基)氨磺酰基]乙基}氨基)-N，N-二(2-噻吩基甲基)丙酰胺；3-[{2-[二(2-噻吩基甲基)氨磺酰基]乙基}(甲基)氨基]-N，N-二(2-噻吩基甲基)丙酰胺；3-[{2-[二(4-甲氧基苄基)氨磺酰基]乙基}(甲基)氨基]-N，N-二(2-噻吩基甲基)丙酰胺；(2S)-2-({2-[二(2-噻吩基甲基)氨磺酰基]乙基}氨基)-N，N-二(2-噻吩基甲基)己酰胺；(2S)-2-({2-[二(4-甲氧基苄基)氨磺酰基]乙基}氨基)-N，N-二(2-噻吩基甲基)己酰胺；2-(乙酰基{2-[二(2-噻吩基甲基)氨磺酰基]乙基}氨基)-N，N-二(2-噻吩基甲基)乙酰胺；以及2-(乙酰基{2-[二(4-甲氧基苄基)氨磺酰基]乙基}氨基)-N，N-二(2-噻吩基-甲基)乙酰胺。
在一些实施方案中，化合物选自由以下各项组成的组：[(2S)-1-{[二(环丙基甲基)氨甲酰基]氧基}己-2-基]氨基甲酸叔丁酯；(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]己基二异丁基氨基甲酸酯；(8S，12S)-12-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-8-丁基-4-异丁基-2-甲基-5，10--二氧代-6-氧杂-4，9，11-三氮杂十四烷-14-酸甲酯；以及{(5S)-6-[二(环丙基甲基)氨基]-5-[(叔丁氧基羰基)氨基-]-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯。
在某些实施方案中，所述化学化合物是(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯。
根据某些实施方案，提供了包含上述化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体的药物组合物。
根据某些实施方案，提供了处理表达整合素的细胞的方法。例如，整合素可以是α4β1、α5β1、α4β7、αvβ3以及αLβ2中的一种或多种。在一些实施方案中，处理表达整合素的细胞的方法包括使至少一个表达整合素的细胞与所述整合素的激动剂体外接触，其中所述激动剂是具有通式(I)的化合物，其中R1和R2独立地选自由烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、卤代烷基、杂环基以及杂环基烷基组成的组，M1和M2之一是CO或SO2，另一个是(CR4R5)1，条件是当M2是CO时，M3是O、S、NR6或(CR7R)m，且条件是当M2是SO2或(CR4R5)1时，M3是(CR7R8)m，M4不存在或是(CR9R10)n，M5不存在或是O或(CR11R12)p，M6不存在或是选自由(CH2)q、(CH2)q--CH＝CH--(CH2)r、(CH2)q-亚芳基-(CH2)r、(CH2CH2O)q，以及NR34(CH2)q组成的组，且R3选自由氢、OH、OR16、CONR13R14、NR15COOR16、NR15COR16、NR15CONR13R14、NR15SO2R16、OCOR16、COOR16、烷基、芳基、芳烷基、SR16、杂环基、羟基烷基以及胍基组成的组，R34当存在时选自由烷基、芳烷基、COR35以及SO2R35组成的组，R35当存在时选自由烷基、芳基以及芳烷基组成的组，且R12当存在时选自由氢、烷基、OH、N3、CN、NR21CONR22R23、NR21COR24、NR21COOR24、NR21SO2R24、CONR22R23、COOR24、OCOR24、OR24、SCOR24、SR24、叠氮基、CN以及O(CH2CH2O)sR24组成的组，R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R15以及R21各自当存在时独立地选自氢、低级烷基以及芳烷基，R13、R14、R16、R22、R23以及R24各自当存在时独立地选自由烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、卤代烷基、杂环基、杂环基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基组成的组，l、m、n以及p独立地是0-1的整数，q、r以及s独立地是0-6的整数，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R21、R22、R23、R24、R34以及R35各自当存在时独立地是未取代的或是被选自由以下各项组成的组中的一个或多个取代基取代的：烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂环基芳基、羟基、烷氧基、卤代烷氧基、叠氮基、羟基烷基、芳氧基、羟基芳基、烷氧基芳基、卤素、卤代烷基、卤代芳基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、-NHCO(烷基)、-NHCO(芳基)、-NHCO(卤代烷基)、-NHSO2(烷基)、-NHSO2(芳基)、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、-OCO(烷基氨基)、-OCO(二烷基氨基)。
根据某些实施方案，提供了增强细胞与整合素结合配体结合的方法，其中所述方法包括用上文所述的整合素激动剂体外处理表达整合素的细胞，其中所述整合素选自由α4β1、α5β1、α4β7、αvβ3以及αLβ2组成的组；并使处理的细胞与整合素结合配体接触。
在一些实施方案中，上文所述方法中所用的整合素激动剂是选自由以下各项组成的组的化合物：(3R)-3-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-3-[({(2R)-1-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-1-氧代己-2-基}氨甲酰基)氨基]丙酸甲酯；(3S)-3-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-3-[({(2R)-6-{[(苄氧基)羰基]氨基}-1-[二(噻吩-2-基甲基)氨基]-1-氧代己-2-基}氨甲酰基)氨基]丙酸甲酯；(3S)-3-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-3-[({(2R)-1-[二(噻吩-2-基-甲基)氨基]-1-氧代己-2-基}氨甲酰基)氨基]丙酸甲酯；(3R)-3-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-3-[({(2S)-1-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-1-氧代己-2-基}氨甲酰基)氨基]丙酸甲酯；(3S)-3-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-3-[({2-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-2-氧代乙基}氨甲酰基)氨基]丙酸甲酯；(3S)-3-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-3-[({2-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-2-氧代乙基}氨甲酰基)氨基]丙酸甲酯；(3S)-3-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-3-{[{2-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-2-氧代乙基}(甲基)氨甲酰基]氨基}丙酸甲酯；(3R)-3-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-3-{[{2-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-2-氧代乙基}(甲基)氨甲酰基]氨基}丙酸甲酯；(3R)-3-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-3-[({2-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-2-氧代乙基}氨甲酰基)氨基]丙酸甲酯；(2R)-[({(2S)-1-[二(噻吩-2-基甲基)氨基]-1-氧代己-2-基}氨甲酰基)氨基](苯基)乙酸甲酯；甲基-3-[({(2S)-1-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-1-氧代己-2-基}氨甲酰基)氨基]丙酸酯；(2S)-2-[(异丙基氨甲酰基)氨基]-N，N-二(2-噻吩基甲基)己酰胺；(2S)-2-[(甲基氨甲酰基)氨基]-N，N-二(2-噻吩基甲基)己酰胺；(2S)-2-[(苄基氨甲酰基)氨基]-N，N-二(2-噻吩基甲基)己酰胺；(2R)-2-[(苄基氨甲酰基)氨基]-N，N-二(2-噻吩基甲基)己酰胺；{(5S)-5-[(苄基氨甲酰基)氨基]-6-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯；(2S)-2-{[(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基甲基)氨甲酰基]氨基}-N，N-二(2-噻吩基-甲基)己酰胺；[(5S)-6-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-6-氧代-5-{[(吡啶-3-基甲基)氨甲酰基]氨基}己基]氨基甲酸苄酯；(2S)-2-{[(吡啶-3-基甲基)氨甲酰基]氨基}-N，N-二(2-噻吩基甲基)己酰胺；(2S)-2-({[(6-甲氧基吡啶-3-基)甲基]氨甲酰基}氨基)-N，N-二(-2-噻吩基甲基)己酰胺；(2S)-2-({[3-(吗啉-4-基)苄基]氨甲酰基}氨基)-N，N-二(2-噻吩基甲基)己酰胺；(2S)-2-{[(4-羟基苄基)氨甲酰基]氨基}-N，N-二(2-噻吩基甲基)己酰胺；(2S)-2-({[4-(二甲基氨基)苄基]氨甲酰基}氨基)-N，N-二(2-噻吩基甲基)己酰胺；[(5S)-6-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-5-({[3-(吗啉-4-基)苄基]氨甲酰基}氨基)-6-氧代己基]氨基甲酸苄酯；{(5S)-6-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-5-[({3-[(甲基磺酰基)氨基]苄基}氨甲酰基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯；{(2S)-6-{[(苄氧基)羰基]氨基}-1-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-1-氧代己-2-基}氨基甲酸苄酯；{(2S)-1-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-1-氧代己-2-基}氨基甲酸苄酯；{(5S)-6-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-5-[(乙氧基羰基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯；[(5S)-6-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-5-(丁酰氨基)-6-氧代己基]氨基甲酸苄酯；以及{(5S)-6-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-6-氧代-5-[(3-苯氧基丙酰基)氨基]己基}氨基甲酸苄酯。
在某些实施方案中，所述化学化合物是(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯。
在其他实施方案中，在增强细胞与整合素结合配体结合的方法中所用的整合素激动剂选自由具有通式(I)的化合物组成的组，其中R1选自由烷基、芳基以及芳烷基组成的组，R2选自由烷基、芳基、芳烷基、烷氧基烷基以及羟基烷基组成的组，M1是CH2，M2是SO2；M3、M4、M5以及M6独立地不存在或是CH2；R3选自由烷基、芳基、芳烷基、芳氧基烷基、烷氧基烷基、环烷基以及环烷基烷基组成的组；R1、R2以及R3独立地未取代的或是被选自由以下各项组成的组中的一个或多个取代基取代的：烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂环基芳基、羟基、烷氧基、羟基烷基、芳氧基、羟基芳基、烷氧基芳基、卤代、卤代烷基、卤代芳基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、-NHCO(烷基)、-NHCO(芳基)、-NHCO(卤代烷基)、-NHSO2(烷基)、-NHSO2(芳基)、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基，-OCO(烷基氨基)或-OCO(二烷基氨基)。
根据一些其他实施方案，在增强细胞与整合素结合配体结合的方法中所用的整合素激动剂选自由以下各项组成的组：N-二(2-噻吩基甲基)苯磺酰胺；N，N-二(2-噻吩基甲基)乙酰胺；1-苯基-N，N-二(2-噻吩基甲基)甲磺酰胺；2-甲基-N，N-二(2-噻吩基甲基)丙-1-磺酰胺；N-(3-甲氧基苄基)-N-(2-噻吩基甲基)苯磺酰胺；N-(3-甲氧基苄基)-N-(2-噻吩基甲基)丙-2-磺酰胺；N-(3-甲氧基苄基)-2-甲基-N-(2-噻吩基甲基)丙-1-磺酰胺；N-(4-羟基苄基)-3-甲氧基-N-(2-噻吩基甲基)苯磺酰胺；N-[2-(2-噻吩基)乙基]-N-(2-噻吩基甲基)苯磺酰胺；N，N-二苄基苯磺酰胺；N-(吡啶-3-基甲基)-N-(2-噻吩基甲基)苯磺酰胺；N-丁基-N-(2-噻吩基甲基)苯磺酰胺；N-(3-羟基丙基)-N-(2-噻吩基甲基)苯磺酰胺；N-(2-甲氧基乙基)-N-(2-噻吩基甲基)苯磺酰胺；-(2-甲氧基乙基)-(2-噻吩基甲基)噻吩-2-磺酰胺；N，N-二(3-甲氧基苄基)苯磺酰胺；N，N-二(4-甲氧基苄基)噻吩-2-磺酰胺；2-氯-N，N-二(2-噻吩基甲基)苯磺酰胺；3-氯-N，N-二(2-噻吩基甲基)苯磺酰胺；4-氯-N，N-二(2-噻吩基甲基)苯磺酰胺；3-甲氧基-N，N-二(2-噻吩基甲基)苯磺酰胺；4-甲氧基-N，N-二(2-噻吩基甲基)苯磺酰胺；N，N-二(吡啶-4-基甲基)苯磺酰胺；N，N-二(吡啶-3-基甲基)苯磺酰胺；N-(2-呋喃基甲基)-(2-噻吩基甲基)苯磺酰胺；N，N-二(2-呋喃基甲基)苯磺酰胺；N，N-二(3-甲氧基苄基)噻吩-2-磺酰胺；甲基-3-[二(3-甲氧基苄基)氨磺酰基]噻吩-2-甲酸酯；2-(羟基甲基)-N，N-二(3-甲氧基苄基)噻吩-3-磺酰胺；N，N-二(4-甲氧基苄基)-3-甲基苯磺酰胺；N-苯基-(2-噻吩基甲基)苯磺酰胺；N-苯基-N-(2-噻吩基甲基)噻吩-2-磺酰胺；N-(3-甲氧基苄基)-N-苯基噻吩-2-磺酰胺；N-(3-甲氧基苄基)-苯基苯磺酰胺；3-(4-甲氧基苯氧基)-N，N-二(2-噻吩基甲基)丙-1-磺酰胺；4-甲基-N，N-二(2-噻吩基甲基)苯磺酰胺；2-甲基-N，N-二(2-噻吩基甲基)苯磺酰胺；以及3-甲基-N，N-二(2-噻吩基甲基)苯磺酰胺。
在某些实施方案中，所述化学化合物是(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯。
在其他实施方案中，提供了增强细胞与整合素结合配体结合的方法，其中所述整合素激动剂是选自由以下各项组成的组的化合物：(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯；(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-7-甲基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯；[(2S)-1-{[二(2-噻吩基甲基)氨甲酰基]氧基}己-2-基]氨基甲酸叔丁酯；(2S)-2-{[(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基甲基)氨甲酰基]氨基}己基-二(2-噻吩基甲基)氨基甲酸酯；(6S，100S)-6-丁基-3，8-二氧代-10-苯基-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯；(2S)-2-[(苄基氨甲酰基)氨基]己基二(2-噻吩基甲基)氨基甲酸酯；(2S)-2-({[(1S)-1-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-3-羟丙基]氨甲酰基}氨基)己基二(2-噻吩基甲基)氨基甲酸酯；(6S，100R)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯；{(5S)-6-{[二(2-噻吩基甲基)氨甲酰基]氧基}-5-[(叔丁氧基羰基-1)氨基]己基}氨基甲酸苄酯；(9S，13S)-13-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-9-({[二(2-噻吩基甲基)氨甲酰基]氧基}甲基)-3，11-二氧代-1-苯基-2-氧杂-4，10，12-三氮杂十五烷-15-酸甲酯；[(2R)-1-{[二(2-噻吩基甲基)氨甲酰基]氧基}己-2-基]氨基甲酸叔丁酯；{[二(2-噻吩基甲基)氨甲酰基](丁基)氨基}乙酸叔丁酯；{(5S)-6-{[二(4-甲氧基苄基)氨甲酰基]氧基}-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]己基}氨基甲酸苄酯；[(2S)-1-{[二(4-甲氧基苄基)氨甲酰基]氧基}己-2-基]氨基甲酸叔丁酯；(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-2-(4-甲氧基苄基)-1-(4-甲氧基苯基)-3，8-二氧代-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯；(2S)-2-({[(1S)-1-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-3-羟丙基]氨甲酰基}氨基)己基-二(4-甲氧基苄基)氨基甲酸酯；(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]己基二苄基氨基甲酸酯；(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-2-苄基-6-丁基-3，8-二氧代-1-苯基-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯；[(2S)-1-{[二(4-甲基苄基)氨甲酰基]氧基}己-2-基]氨基甲酸叔丁酯-(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-2-(4-甲基苄基)-1-(4-甲基苯基)-3，8-二氧代-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯；[(2S)-1-{[二(4-氯代苄基)氨甲酰基]氧基}己-2-基]氨基甲酸叔丁酯；(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-2-(4-氯代苄基)-1-(4--氯代苯基)-3，8-二氧代-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯；(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-2-(4-溴代苯基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯；(6S，10S)-2-(4-叠氮基苄基)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯；(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]己基苯基(2-噻吩基甲基)氨基甲酸酯；(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-2-苯基-1-(2-噻吩基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯；[(2S)-1-{[二(3-噻吩基甲基)氨甲酰基]氧基}己-2-基]氨基甲酸叔丁酯；(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(3-噻吩基)-2-(3-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯；[(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-{[丁基(2-噻吩基甲基)氨甲酰基]氧基}己基]氨基甲酸苄酯；(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]己基丁基(2-噻吩基甲基)氨基甲酸酯；(3S，7S)-3-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-7-丁基-5，10-二氧代-11-(2-噻吩基甲基)-9-氧杂-4，6，11-三氮杂十五烷-1-酸甲酯；[(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-{[(2-甲氧基乙基)(2-噻吩基-甲基)氨甲酰基]氧基}己基]氨基甲酸苄酯；(2S)-2-{[(4-溴代苯基)氨甲酰基]氨基}己基二(2-噻吩基甲基)氨基甲酸酯；(2S)-2-{[(4-叠氮基苄基)氨甲酰基]氨基}己基二(2-噻吩基甲基)氨基甲酸酯；[(2S)-1-{[二(2-噻吩基甲基)氨甲酰基]硫代}己-2-基]氨基甲酸叔丁酯；以及(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-硫杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯。
在某些实施方案中，所述化学化合物是(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯。
在一些实施方案中，提供了增强细胞与整合素结合配体结合的方法，其中整合素激动剂是选自由以下各项组成的组的化合物：{(5R)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[(3-甲氧基苄基)(2-噻吩基甲基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯；{(5R)-6-[二(3-甲氧基苄基)氨基]-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯；{(5S)-6-[二(4-甲氧基苄基)氨基]-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯；{(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氧代-6-[(吡啶-3-基甲基)(-2-噻吩基甲基)氨基]己基}氨基甲酸苄酯；{(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氧代-6-[(吡啶-4-基甲基)(2-噻吩基甲基)氨基]己基}氨基甲酸苄酯；(2S)-2-[甲基(苯基磺酰基)氨基]-N，N-二(2-噻吩基甲基)己酰胺；(2S)-2-({[3-(4-甲氧基苯氧基)丙基]磺酰基}氨基)-N，N-二(2-噻吩基-甲基)己酰胺；{(5R)-6-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯；{(5S)-6-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯；{(5S)-6-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-6-氧代-5-[(2-噻吩基磺酰基)氨基]己基}氨基甲酸苄酯；{(2S)-1-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-1-氧代-6-[(2-噻吩基磺酰基)氨基]己-2-基}氨基甲酸叔丁酯；6-[甲基(2-噻吩基磺酰基)氨基]-N，N-二(2-噻吩基甲基)己酰胺；6-[(2-噻吩基乙酰基)氨基]-N，N-二(2-噻吩基甲基)己酰胺；{(4S)-5-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-4-[(叔丁氧基羰基)氨基]-5-氧代戊基}氨基甲酸苄酯；[(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氧代-6-{(2-噻吩基甲基)[2一(三氟甲基)苄基]氨基}己基]氨基甲酸苄酯；[(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氧代-6-{(2-噻吩基甲基)[2-(三氟甲氧基)苄基]氨基}己基]氨基甲酸苄酯；[(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-{[2-(二氟甲氧基)苄基]-(2-噻吩基甲基)氨基}-6-氧代己基]氨基甲酸苄酯；{6-[二(4-甲氧基苄基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸叔丁酯；N-{6-[二(4-甲氧基苄基)氨基]-6-氧代己基}-4-甲氧基-N-(4-甲氧基苄基)苯甲酰胺；N-{6-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-6-氧代己基}-N-甲基噻吩-2-甲酰胺；6-[(3-甲氧基苄基)(2-噻吩基乙酰基)氨基]-N，N-二(2-噻吩基甲基)己酰胺；(3S)-3-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-3-[({4-[二(2-噻吩基甲基-)氨基]-4-氧代丁基}氨甲酰基)氨基]丙酸甲酯；6-{[(3-氯代丙基)磺酰基]氨基}-N，N-二(4-甲氧基苄基)己酰胺；3-{[二(2-噻吩基甲基)氨甲酰基]氨基}-N，N-二(2-噻吩基甲基)丙酰胺；3-{丁基[(2-噻吩基甲基)氨甲酰基]氨基}-N，N-二(2-噻吩基甲基)丙酰胺；{(5S)-6-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-5-氰基-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯；{(5R)-5-叠氮基-6-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯；以及{(5S)-6-[二(3-噻吩基甲基)氨基]-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯。
在某些实施方案中，所述化学化合物是(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯。
在其他实施方案中，提供了增强细胞与整合素结合配体结合的方法，其中整合素激动剂是选自由以下各项组成的组中的化合物：N-(3-甲氧基苄基)-N，N′，N′-三(2-噻吩基甲基)戊二酰胺；N-[2-(2-噻吩基)乙基]-N，N′，N′-三(2-噻吩基甲基)戊二酰胺；N，N-二(3-甲氧基苄基)-N′，N′-二(2-噻吩基甲基)戊二酰胺；N，N-二(吡啶-4-基甲基)-N′，N′-二(2-噻吩基甲基)戊二酰胺；N，N，N′，N′-四(2-噻吩基甲基)己二酰胺；N，N，N′，N′-四(3-甲氧基苄基)己二酰胺；N，N，N′，N′-四(4-甲氧基苄基)己二酰胺；(3E)-N，N，N′，N′-四(2-噻吩基甲基)己-3-烯二酰胺；N，N，N′，N′-四(2-噻吩基甲基)戊二酰胺；N，N，N′，N′-四(4-甲氧基苄基)戊二酰胺；2，2′-氧基二[N，N-二(2-噻吩基甲基)乙酰胺]；N，N，N′，N′-四(2-噻吩基甲基)辛二酰胺；N，N，N′，N′-四(2-噻吩基甲基)庚二酰胺；3-氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4，7，10-三氧杂-2-氮杂十二-12-基二(2-噻吩基甲基)氨基甲酸酯；2，2′-(1，3-亚苯基)二[N，N-二(2-噻吩基甲基)乙酰胺]；N，N，N′，N′-四(4-甲氧基苄基)庚二酰胺；N，N，N′，N′-四(4-甲氧基苄基)琥珀酰胺乙-1，2-二基二[二(2-噻吩基甲基)氨基甲酸酯]；N，N，N′，N′-四(4-甲氧基苄基)辛二酰胺；N，N，N′，N′-四(2-噻吩基甲基)吡啶-3，5-二甲酰胺；N，N，N′，N′-四(2-噻吩基甲基)吡啶-2，6-二甲酰胺；N，N，N′，N′-四(2-噻吩基甲基)吡啶-2，4-二甲酰胺；2，2′-(1，4-亚苯基)二[N，N-二(2-噻吩基甲基)乙酰胺]；以及N，N′-二(4-甲氧基苄基)-N，N′-二(2-噻吩基甲基)己二酰胺。
在某些实施方案中，所述化学化合物是(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯。
在另一实施方案中，增强表达整合素的细胞与整合素结合配体结合的方法使用选自由下述各项组成的组的整合素激动剂化合物：(2S)-6-{[(苄氧基)羰基]氨基}-2-[苄基(苯基磺酰基)氨基]-己酸甲酯；(2S)-6-{[(苄氧基)羰基]氨基}-2-[苄基(2-噻吩基磺酰基)氨基]己酸甲酯；(2S)-6-{[(苄氧基)羰基]氨基}-2-[(2-噻吩基乙酰基)(2-噻吩基甲基)氨基]己酸甲酯；(2S)-6-{[(苄氧基)羰基]氨基}-2-[(2-噻吩基羰基)(2-噻吩基甲基)氨基]己酸甲酯；{(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[(2-噻吩基甲基)(2-噻吩基磺酰基)氨基]己基}氨基甲酸苄酯；{(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[(苯基磺酰基)(2-噻吩基甲基)氨基]己基}氨基甲酸苄酯；{(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[(2-噻吩基乙酰基)(2-噻吩基甲基)氨基]己基}氨基甲酸苄酯；{(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[(甲基磺酰基)(2-噻吩基甲基)氨基]己基}氨基甲酸苄酯；{(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[(2-噻吩基羰基)(2-噻吩基甲基)氨基]己基}氨基甲酸苄酯；[(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-{[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-(2-噻吩基甲基)氨基}己基]氨基甲酸苄酯；{(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[(4-甲氧基苯甲酰基)(2-噻吩基甲基)氨基]己基}氨基甲酸苄酯；N，N′-庚-1，7-二基二[N-(2-噻吩基甲基)噻吩-2-甲酰胺]；N，N′-庚-1，7-二基二[N-(2-噻吩基甲基)苯甲酰胺；N，N′-己-1，6-二基二[N-(2-噻吩基甲基)噻吩-2-甲酰胺]；N，N′-己-1，6-二基二[N-(3-甲氧基苄基)噻吩-2-甲酰胺]；{5-[(4-甲氧基苄基)(2-噻吩基磺酰基)氨基]戊基}氨基甲酸叔丁酯；N-(3-甲氧基苄基)-N-{5-[(2-噻吩基磺酰基)氨基]戊基}噻吩-2-磺酰胺；{(2S)-1，6-二[二(2-噻吩基甲基)氨基]-1，6-二氧代己-2-基}氨基甲酸叔丁酯；{5-[(2-噻吩基羰基)(2-噻吩基甲基)氨基]戊基}氨基甲酸叔丁酯；N-(3-甲氧基苄基)-N-{5-[(2-噻吩基羰基)氨基]戊基}噻吩-2-甲酰胺；以及N，N′-戊-1，5-二基二[N-(3-甲氧基苄基)噻吩-2-甲酰胺]。
在某些实施方案中，所述化学化合物是(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯。
在另一实施方案中，增强表达整合素的细胞与整合素结合配体结合的方法使用了选自由以下各项组成的组的整合素激动剂化合物：N-{2-[二(2-噻吩基甲基)氨磺酰基]乙基}-N-(2-噻吩基甲基)噻吩-2-甲酰胺；2-{丁基[(2-噻吩基甲基)氨甲酰基]氨基}-N，N-二(2-噻吩基甲基)乙烷磺酰胺；2-[(甲基磺酰基)(2-噻吩基甲基)氨基]-N，N-二(2-噻吩基甲基)乙烷磺酰胺；2-{[二(2-噻吩基甲基)氨甲酰基]氨基}-N，N-二(2-噻吩基甲基)乙烷磺酰胺；N-{2-[二(2-噻吩基甲基)氨磺酰基]乙基}噻吩-2-磺酰胺；N-{2-[二(2-噻吩基甲基)氨磺酰基]乙基}-2-(2-噻吩基)乙酰胺；N-{2-[二(2-噻吩基甲基)氨磺酰基]乙基}噻吩-2-甲酰胺；N，N-二(2-噻吩基甲基)-2-{[(2-噻吩基甲基)氨甲酰基]氨基}乙烷磺酰胺；2-({2-[二(2-噻吩基甲基)氨磺酰基]乙基}氨基)-N，N-二(2-噻吩基甲基)乙酰胺；3-[{2-[二(2-噻吩基甲基)氨基]-2-氧代乙基}(丁基)氨基]-N，N-二(2-噻吩基甲基)丙酰胺；2-[{2-[二(2-噻吩基甲基)氨磺酰基]乙基}(甲基)氨基]-N，N-二(2-噻吩基甲基)乙酰胺；3-({2-[二(2-噻吩基甲基)氨磺酰基]乙基}氨基)-N，N-二(2-噻吩基甲基)丙酰胺；3-({2-[二(2-噻吩基甲基)氨磺酰基]乙基}氨基)-N，N-二(4-甲氧基苄基)丙酰胺；2-(乙酰基{2-[二(2-噻吩基甲基)氨磺酰基]乙基}氨基)-N，N-二(2-噻吩基甲基)乙酰胺；以及2-(乙酰基{2-[二(4-甲氧基苄基)氨磺酰基]乙基}氨基)-N，N-二(2-噻吩基甲基)乙酰胺。
在某些实施方案中，所述化学化合物是(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯。
在一些实施方案中，提供了增强细胞与整合素结合配体结合的方法，其中所述整合素激动剂是选自由以下各项组成的组的化合物：[(2S)-1-{[二(环丙基甲基)氨甲酰基]氧基}己-2-基]氨基甲酸叔丁酯；(2S)-[(叔丁氧基羰基)氨基]己基二异丁基氨基甲酸酯；(8S，12S)-12-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-丁基-4-异丁基-2-甲基-5，10-二氧代-6-氧杂-4，9，11-三氮杂十四烷-14-酸甲酯；以及{(5S)-6-[二(环丙基甲基)氨基]-5-[(叔丁氧基羰基)氨基-]-6-氧代己基}氨基甲酸苄酯。
在某些实施方案中，所述化学化合物是(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯。
发明的实施方案
实施例1
通过引用使用Vanderslice等人的图3、5、8中的Jurkat细胞系，包括了对由VCAM-1、ICAM-1和MAdCam-1介导的与其各自的整合素受体化合物的增强的效应细胞与内皮细胞粘附的证明，所述化合物如AEC1((6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯)。
效应T细胞功能的基本作用基于使用这种白血病T细胞系作为宿主而对信号传导的了解(Abraham和Weiss，2004)。尽管Vanderslice等人在当前优先权日之前发表，但是显然作者自身以及引用他们工作的研究者并未认识到，该发现已经变为实践一种新手段来创建用于ACT的改进的组合物和方法(Isreali-Roseberg等人，2014，Galetti，等人2014，Wang等人2014，以及Sishido等人2014)。
Vanderslice等人使用迁移测定来以间质(stomal)趋化因子模拟Jurkat细胞跨模拟内皮表面的运动，以模拟内皮或造血干细胞向损伤的心脏组织迁移。未认识到的这个系统的特征是，它直接模拟效应T细胞从体循环以较高保真度变移进入肿瘤间质(stoma)中。
在该系统中，测量了在间质趋化试剂的刺激下Jukat细胞跨VCM-1包被的表面的迁移程度。迁移测定在3μM孔径的Transwells(24孔，Costar，Cambridge，MA)中进行。上室在4℃下在50mL TBS中用3mg/mL纤连蛋白(FN)或10mg/mL VCAM-1预包被过夜，然后在室温下用2％BSA封闭1小时。配体浓度≤5％。在用迁移培养基(补充有1％FBS，100单位/mL青霉素和100mg/mL链霉素的RPMI-1640)洗涤后，在上室中加入在160mL迁移培养基中的Jurkat细胞(2×105个细胞)。下室含有600mL补充有10mg/mL间质细胞衍生因子1(SDF-1a)的迁移培养基，以诱导趋化性。将Jurkat细胞与媒介物(1％DMSO)或所示浓度的AEC1((6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯)混合，之后直接添加于上室。在37℃、5％CO2下孵育4小时后，移去上室，收集下室中的细胞并在血细胞计数器中计数。将结果表示为迁移的细胞总数±S.D.*，相比单独的SDF-1，p＜0.05。
当本发明人将该迁移模型的环境重新定义为实体瘤时，在他们的系统中有3个模拟实体肿瘤血管床的关键因素的重要实验成分，所述实体肿瘤血管床对于效应细胞粘附和变移穿过内皮进入肿瘤间质非常重要：
1.Jurkat细胞代表了潜在地用于过继性细胞疗法的活化的T细胞。很多对T细胞受体信号传导和效应功能的基本看法基于作为宿主的转化的T细胞系。最了解的模型系统是该Jurkat T细胞系(Abraham和Weiss，2004)。如同活化的T细胞，即天然T细胞，Jurkat细胞在较高的亲和性状态下组成性表达VLA-4。
2.模拟的内皮表面的模型中所用的配体，即VCAM-1的浓度，不足以促进向模拟间质的最大迁移。已知在实体瘤的内皮细胞中下调VLA-4以及ICAM-1和MAdCam-1，这可以降低效应细胞粘附、变移的程度，并导致效应细胞进入肿瘤间质的肿瘤内生物利用度降低。
2.SDF-1是已知的由实体瘤间质中发现的成纤维细胞分泌的趋化剂，所述实体瘤如与成纤维细胞相关的乳腺癌(Orimo等人，2005)。
在图1所示的环境中，AEC1((6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯)诱导的迁移增加2倍，这直接表明，该化合物可以用于改善VLA-4和VCAM-1介导的效应T细胞的稳固粘附和变移。由于Venderslice等也证明，AEC1((6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯)增加ICAM-1和MAdCam-1介导的对其同源整合素的细胞粘附，因此，对于这类粘附途径下调的实体瘤而言，诸如AEC1((6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯)的化合物可能是效应细胞和内皮相互作用的特别优选的稳定剂。
在此情况下，使用效应T细胞的ACT的效力和功效可通过用改善肿瘤内皮细胞粘附和变移的化合物预处理所述细胞来改善，所述化合物如AEC1((6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯)。因为需要细胞的大量离体扩展，这需要花费4-6周，因此改善目前ACT方法的效力可促进较少效应细胞的注入，而不包括抗肿瘤活性。在制造用于ACT的效应细胞时使用较少的离体细胞加倍，原位寿命也可以通过降低细胞衰老风险和程度来增加，并能使所期望的中间效应细胞而不是晚期效应细胞的使用成为可能(US8383099B2和Gattinoni等人2006)。用较大数量的跨肿瘤内皮屏障的治疗性效应细胞，可改善ACT的过度(over)功效或抗肿瘤活性。
在进一步回顾Vanderslice等人的数据时，本申请人发现，由于化合物((6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯)使VCAM-1和VLA-4相互作用稳定，并且在内源性配体结合后，所述化合物被置换，因此可将所述从离体细胞处理培养基中除去，并且可将基本上不含所述化合物的细胞弥散到患者中。处理然后除去激动剂，之后将处理的效应细胞引入的优点是，使所述激动剂的全身暴露最小化。同样，使任何相关毒性最小化。通过使用所述化合物来稳定内源性配体与受体之间已有的分子相互作用，如同二价阳离子的情形，用于生产细胞治疗剂的所述化合物视为非活性成分和/或赋形剂。
实施例2
平行板流动分离测定(Parallel Plate Flow Detachment Assav)
如前所述进行分离测定。将重组人VCAM-1(10μg/mL或5μg/mL，在0.1M NaHCO3(pH9.5)中)在4℃下在从15×100mm聚苯乙烯皮氏培养皿(Petri dishes)切割的24×50mm载玻片上固定过夜。用磷酸盐缓冲溶液(PBS)洗涤载玻片，在室温下用2％(w/v)牛血清白蛋白(BSA)封闭2小时，并装配到平行板流动室中。对于分离测定，将媒介物(10μM(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯)与TF-1细胞(一种造血干细胞系)在低亲和性运行的细胞载体中混合，接着将2.0×106个细胞注射到流动室中，并允许其在载玻片上静置10min。使用计算机控制的注射泵(Harvard Apparatus)，将线性梯度渐增的剪切流倾倒在贴壁细胞(adherent cell)上，持续300s。每50s，测定剪切应力计算。将以dynes/cm2表示的剪切应力定义为(6μQ)/(wh2)，其中μ是培养基的粘度(0.007)；Q是以cm3/s表示的流动速率；w是室的宽度(0.3175em)，h是室的高度(0.01524em)。用数字显微镜记录附着的细胞的数量。Vanderslice等人已经表明，VLA-4激动剂显著改善对VCAM-1包被的表面的粘附。在回顾这些数据时，本申请人发现，所述化合物(AEC1)稳定VCAM-1和VLA-4相互作用，并且在内源性配体结合后，所述化合物被置换。可将所述化合物从离体细胞处理培养基中除去，并且将基本上不含所述化合物的细胞弥散到患者中。对于其他详情，读者可参阅Vanderslice等人The Journal of Biological Chemistry，288，(27)，p 19414-19428，2013。
有效浓度
如下所述，通过表达整合素的细胞与固定的整合素配体的体外静态粘附，来评价细胞载体中代表性激动剂化合物(AEC1)的有效浓度。如图1所示，存在于细胞载体中的激动剂化合物的有效量为至少1飞摩尔(fM)至10μM。暴露于激动剂后，所得激动剂处理的细胞在几分钟内具有增强的与同源配体结合的能力。将细胞载体中的化合物通过多个1000倍连续稀释从10μM降低至细胞载体低至1fM，但是，稀释的载体中的细胞保持显示增强的粘附潜能(potential)的能力，尽管该浓度会被Vanderslice等人或PCT/US2012/066987视为有效。因此，现有技术(1)扩大了有效浓度范围，(2)提供了处理方法以及基本上不含化合物(1fM至小于100nM)的细胞载体组合物，以及(3)将激动剂化合物重新定义为不是典型的受体激动剂，而是作为非活性成分(其是在高亲和性状态下稳定整合素受体的防腐剂)，并且增加表达整合素的细胞对表达整合素配体的细胞或表面的粘附潜能。出于指定载体的组分的功能的调节目的，化合物的这种防腐作用被认为是非活性成分和/或赋形剂。
评估静态粘附的方法
利用表达整合素的细胞与固定的整合素配体的静态粘附，评估AEC1(本实施例所用的代表性激动剂化合物)的有效浓度。合成纤连蛋白的命名为连接片段1(CS1)的25个氨基酸的可选剪接序列，并与BSA缀合。将50μL代表性细胞载体中的0.3μg/mL的CS1-BSA添加到96孔板的孔中，并在4℃下包被过夜。代表性细胞载体是包含50mM Tris-HCl(pH 7.4)、150mM NaCl和1mM MgCl2的等渗Tris缓冲盐水，并且是模型等渗缓冲液。用细胞载体洗涤所述板，并用2重量％BSA封闭1小时。将32×106个Jurkat细胞用钙黄绿素-AM(MolecularProbes)标记30分钟，用细胞载体洗涤2次，重悬于8mL细胞载体中，并在两个管之间平均分配。一管细胞悬浮液用40μL DMSO(对照)处理，而另一管用DMSO中的40μL 1mM AEC1处理。将含有对照的管和含有AEC1的管各自进一步等分到4个微量离心管中(对于每组，管1-4)，从而每管在1mL含有对照或含有AEC1的细胞载体中含有4×106个细胞。并未进一步处理各组的管1(″未处理″)。将管2-4于室温以100x G离心5min。用移液管小心移除上清液，并将每一细胞团重悬于1mL无激动剂化合物的细胞载体中。并未进一步处理管2(″团″)。将管3-4再次以100×G离心5min。用移液管小心移除上清液，并将每一细胞团重悬于1mL无激动剂化合物的细胞载体中。并未进一步处理3(″1次洗涤″)。将管4再次以100×G离心5min。用移液管小心移除上清液，并细胞团重悬于1mL无激动剂化合物的细胞载体中。并未进一步处理微量离心管4(″2次洗涤″)。对于未处理、团、1次洗涤、2次洗涤而言的各细胞载体中AEC1的终浓度为10μM、0.01μM、0.00001μM以及0.000000001μM。将50μL各细胞悬浮液添加于配体包被的平板(2×105个细胞/孔)上。于37℃孵育30分钟后，用结合细胞载体将平板洗涤3次，裂解贴壁细胞，并在Tecan Safire平板读数器上测量荧光。通过将荧光与测定所用的相同混合物所产生的细胞数量关联的标准曲线，测定结合的细胞数量。
本发明引用的参考文献
本说明书引用了下述参考文：
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通过引用并入本文所引用的所有参考文献。尽管就其优选的实施方案而言已经公开了本发明，但是通过阅读本说明书，本领域技术人员可认识到可进行改变和修饰，这些改变和修饰并未偏离上文所述和下文所请求保护的本发明的范围和主旨。

Claims (26)

1.组合物，其包含：
效应细胞，和
有效量的一种或多种结合增强化合物，
其中所述结合增强化合物能增强所述效应细胞的整合素与其各自配体的整合素介导的结合。
2.如权利要求1所述的组合物，其中所述整合素包括α4β1、α4β7、α5β1、αLβ2和/或αVβ3。
3.如权利要求1所述的组合物，其中所述配体包括VCAM-1、纤连蛋白、MAdCAM-1、ICAM-1、ICAM-2和/或玻连蛋白。
4.如权利要求1所述的组合物，其中所述结合增强化合物由通式(I)给出：
R1-M1-N(R2)-M2-M3-M4-M5-M6-R3 (I)
其中：
R1选自由芳基和芳烷基组成的组，
R2是烷基、芳基或芳烷基，
M1是CH2，
M2是CO，
M3是O、S或NR6，其中R6当存在时是氢或低级烷基，
M4不存在或是CH2，
M5是(CR11R12)，
其中：
R11是氢，
R12选自由氢、NR21CONR22R23、NR21COR24、NR21SO2R24、NR21COOR24、OCOR24、OR24、O(CH2CH2O)sR24、COOR24、烷基以及羟基烷基组成的组，其中s是1-6的整数，R21和R22当存在时独立地选自由氢或低级烷基组成的组，R23当存在时选自由羟基烷基、烷氧基烷基、烷基、芳基、芳烷基以及烷氧基羰基烷基组成的组，条件是当M3是NR6、M4不存在，且R12是CONR22R23时，则R23不是1-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-3-乙氧基-3-氧代丙基，R24当存在时选自由烷基、芳基、芳烷基、杂环基、环烷基、环烷基烷基以及杂环基烷基组成的组，
M6是(CH2)q，其中q是0-6的整数，
R3选自由氢、CONR13R14、NR15COOR16、NR15COR16、NR15CONR13R14、NR15SO2R16、OCOR16、COOR16、OR16、SR16、杂环基、羟基、羟基烷基、胍基、烷基以及芳基组成的组，其中R13和R15当存在时独立地是氢或低级烷基，R14和R16当存在时独立地选自由氢、烷基、芳基、芳烷基、环烷基、杂环基、环烷基烷基以及杂环基烷基组成的组，
R1、R2、R3、R12、R14、R16、R23以及R24当存在时可以独立地是未取代的或是被选自由以下各项组成的组中的一个或多个取代基取代的：烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂环基芳基、羟基、烷氧基、叠氮基、卤代烷氧基、羟基烷基、芳氧基、羟基芳基、烷氧基芳基、卤代、卤代烷基、卤代芳基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、-NHCO(烷基)、-NHCO(芳基)、-NHCO(芳烷基)、-NHCO(卤代烷基)、-NHSO2(烷基)、-NHSO2(芳基)、-NHSO2(芳烷基)、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、-OCO(烷基氨基)以及-OCO(二烷基氨基)。
5.如权利要求4所述的组合物，其中所述结合增强化合物是(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯。
6.如权利要求1所述的组合物，其中所述结合增强化合物是非活性成分或赋形剂。
7.组合物，其包含：
用有效量的一种或多种结合增强化合物处理的效应细胞，
其中所述结合增强化合物能增强所述效应细胞的整合素与其各自配体的整合素介导的结合。
8.如权利要求7所述的组合物，其中所述整合素包括α4β1、α4β7、α5β1、αLβ2和/或αVβ3。
9.如权利要求7所述的组合物，其中所述配体包括VCAM-1、纤连蛋白、MAdCAM-1、ICAM-1、ICAM-2和/或玻连蛋白。
10.如权利要求7所述的组合物，其中所述结合增强化合物由通式(I)给出：
R1-M1-N(R2)-M2-M3-M4-M5-M6-R3 (I)
其中：
R1选自由芳基和芳烷基组成的组，
R2是烷基、芳基或芳烷基，
M1是CH2，
M2是CO，
M3是O、S或NR6，其中R6当存在时是氢或低级烷基，
M4不存在或是CH2，
M5是(CR11R12)，其中R11是氢，R12选自由氢、NR21CONR22R23、NR21COR24、NR21SO2R24、NR21COOR24、OCOR24、OR24、O(CH2CH2O)sR24、COOR24、烷基以及羟基烷基组成的组，其中s是1-6的整数，R21和R22当存在时独立地选自由氢或低级烷基组成的组，R23当存在时选自由羟基烷基、烷氧基烷基、烷基、芳基、芳烷基以及烷氧基羰基烷基组成的组，条件是当M3是NR6、M4不存在，且R12是CONR22R23时，则R23不是1-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-3-乙氧基-3-氧代丙基，R24当存在时选自由烷基、芳基、芳烷基、杂环基、环烷基、环烷基烷基以及杂环基烷基组成的组，
M6是(CH2)q，其中q是0-6的整数，
R3选自由氢、CONR13R14、NR15COOR16、NR15COR16、NR15CONR13R14、NR15SO2RS、OCOR16、COOR16、OR16、SR16、杂环基、羟基、羟基烷基、胍基、烷基以及芳基组成的组，其中R13和R15当存在时独立地是氢或低级烷基，R14和R16当存在时独立地选自由氢、烷基、芳基、芳烷基、环烷基、杂环基、环烷基烷基以及杂环基烷基组成的组，
R1、R2、R3、R12、R14、R16、R23以及R24当存在时可以独立地是未取代的或是被选自由以下各项组成的组中的一个或多个取代基取代的：烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂环基芳基、羟基、烷氧基、叠氮基、卤代烷氧基、羟基烷基、芳氧基、羟基芳基、烷氧基芳基、卤代、卤代烷基、卤代芳基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、-NHCO(烷基)、-NHCO(芳基)、-NHCO(芳烷基)、-NHCO(卤代烷基)、-NHSO2(烷基)、-NHSO2(芳基)、-NHSO2(芳烷基)、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、-OCO(烷基氨基)以及-OCO(二烷基氨基)。
11.如权利要求10所述的组合物，其中所述结合增强化合物是(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-l-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯。
12.如权利要求7所述的组合物，其中所述结合增强化合物是非活性成分或赋形剂。
13.治疗患有癌症的患者的方法，其包括：
共同施用效应细胞和一种或多种结合增强化合物，
其中所述结合增强化合物能增强所述效应细胞的整合素与其各自配体的整合素介导的结合。
14.如权利要求13所述的方法，其中所述配体包括VCAM-1、纤连蛋白、MAdCAM-1、ICAM-1、ICAM-2和/或玻连蛋白。
15.如权利要求13所述的方法，其中这些化合物靶向的整合素包括但不限于α4β1、α4β7、α5β1、αLβ2以及αVβ3。
16.如权利要求13所述的方法，其中所述化学化合物由通式(I)给出：
R1-M1-N(R2)-M2-M3-M4-M5-M6-R3 (I)
其中：
R1选自由芳基和芳烷基组成的组，
R2是烷基、芳基或芳烷基，
M1是CH2，
M2是CO，
M3是O、S或NR6，其中R6当存在时是氢或低级烷基，
M4不存在或是CH2，
M5是(CR11R12)，其中R11是氢，R12选自由氢、NR21CONR22R23、NR21COR24、NR21SO2R24、NR21COOR24、OCOR24、OR24、O(CH2CH2O)sR24、COOR24、烷基以及羟基烷基组成的组，其中s是1-6的整数，R21和R22当存在时独立地选自由氢或低级烷基组成的组，R23当存在时选自由羟基烷基、烷氧基烷基、烷基、芳基、芳烷基以及烷氧基羰基烷基组成的组，条件是当M3是NR6、M4不存在，且R12是CONR22R23时，则R23不是1-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-3-乙氧基-3-氧代丙基，R24当存在时选自由烷基、芳基、芳烷基、杂环基、环烷基、环烷基烷基以及杂环基烷基组成的组，
M6是(CH2)q，其中q是0-6的整数，
R3选自由氢、CONR13R14、NR15COOR16、NR15COR16、NR15CONR13R14、NR15SO2R16、OCOR16、COOR16、OR16、SR16、杂环基、羟基、羟基烷基、胍基、烷基以及芳基组成的组，其中R13和R15当存在时独立地是氢或低级烷基，R14和R16当存在时独立地选自由氢、烷基、芳基、芳烷基、环烷基、杂环基、环烷基烷基以及杂环基烷基组成的组，
R1、R2、R3、R12、R14、R16、R23以及R24当存在时可以独立地是未取代的或是被选自由以下各项组成的组中的一个或多个取代基取代的：烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂环基芳基、羟基、烷氧基、叠氮基、卤代烷氧基、羟基烷基、芳氧基、羟基芳基、烷氧基芳基、卤代、卤代烷基、卤代芳基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、-NHCO(烷基)、-NHCO(芳基)、-NHCO(芳烷基)、-NHCO(卤代烷基)、-NHSO2(烷基)、-NHSO2(芳基)、-NHSO2(芳烷基)、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、-OCO(烷基氨基)以及-OCO(二烷基氨基)。
17.如权利要求16所述的组合物，其中所述结合增强化合物是(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯。
18.如权利要求1所述的组合物，其中所述结合增强化合物是非活性成分或赋形剂。
19.治疗患有癌症的患者的方法，其包括：
共同施用处理的效应细胞和结合增强化合物，
其中所述处理的效应细胞是用所述结合增强化合物处理的，且其中所述结合增强化合物能增强所述处理的效应细胞的整合素与其各自配体的整合素介导的结合。
20.如权利要求19所述的方法，其中所述配体包括VCAM-1、纤连蛋白、MAdCAM-1、ICAM-1、ICAM-2和/或玻连蛋白。
21.如权利要求19所述的方法，其中所述整合素包括α4β1、α4β7、α5β1、αLβ2和/或αVβ3。
22.如权利要求19所述的方法，其中所述结合增强化合物由通式(I)给出：
R1-M1-N(R2)-M2-M3-M4-M5-M6-R3 (I)
其中：
R1选自由芳基和芳烷基组成的组，
R2是烷基、芳基或芳烷基，
M1是CH2，
M2是CO，
M3是O、S或NR6，其中R6当存在时是氢或低级烷基，
M4不存在或是CH2，
M5是(CR11R12)，其中R11是氢，R12选自由氢、NR21CONR22R23、NR21COR24、NR21SO2R24、NR21COOR24、OCOR24、OR24、O(CH2CH2O)sR24、COOR24、烷基以及羟基烷基组成的组，其中s是1-6的整数，R21和R22当存在时独立地选自由氢或低级烷基组成的组，R23当存在时选自由羟基烷基、烷氧基烷基、烷基、芳基、芳烷基以及烷氧基羰基烷基组成的组，条件是当M3是NR6、M4不存在，且R12是CONR22R23时，则R23不是1-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-3-乙氧基-3-氧代丙基，R24当存在时选自由烷基、芳基、芳烷基、杂环基、环烷基、环烷基烷基以及杂环基烷基组成的组，
M6是(CH2)q，其中q是0-6的整数，
R3选自由氢、CONR13R14、NR15COOR16、NR15COR16、NR15CONR13R14、NR15SO2R16、OCOR16、COOR16、OR16、SR16、杂环基、羟基、羟基烷基、胍基、烷基以及芳基组成的组，其中R13和R15当存在时独立地是氢或低级烷基，R14和R16当存在时独立地选自由氢、烷基、芳基、芳烷基、环烷基、杂环基、环烷基烷基以及杂环基烷基组成的组，
R1、R2、R3、R12、R14、R16、R23以及R24当存在时可以独立地是未取代的或是被选自由以下各项组成的组中的一个或多个取代基取代的：烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂环基芳基、羟基、烷氧基、叠氮基、卤代烷氧基、羟基烷基、芳氧基、羟基芳基、烷氧基芳基、卤代、卤代烷基、卤代芳基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、-NHCO(烷基)、-NHCO(芳基)、-NHCO(芳烷基)、-NHCO(卤代烷基)、-NHSO2(烷基)、-NHSO2(芳基)、-NHSO2(芳烷基)、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、-OCO(烷基氨基)以及-OCO(二烷基氨基)。
23.如权利要求22所述的组合物，其中所述结合增强化合物是(6S，10S)-10-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-6-丁基-3，8-二氧代-1-(2-噻吩基)-2-(2-噻吩基甲基)-4-氧杂-2，7，9-三氮杂十二烷-12-酸甲酯。
24.如权利要求19所述的组合物，其中所述结合增强化合物是非活性成分或赋形剂。
25.组合物，其包含：
等渗介质，和
通式(I)的结合增强化合物：
R1-M1-N(R2)-M2-M3-M4-M5-M6-R3 (I)
其中：
R1选自由芳基和芳烷基组成的组，
R2是烷基、芳基或芳烷基，
M1是CH2，
M2是CO，
M3是O、S或NR6，其中R6当存在时是氢或低级烷基，
M4不存在或是CH2，
M5是(CR11R12)，其中R11是氢，R12选自由氢、NR21CONR22R23、NR21COR24、NR21SO2R24、NR21COOR24、OCOR24、OR24、O(CH2CH2O)sR24、COOR24、烷基以及羟基烷基组成的组，其中s是1-6的整数，R21和R22当存在时独立地选自由氢或低级烷基组成的组，R23当存在时选自由羟基烷基、烷氧基烷基、烷基、芳基、芳烷基以及烷氧基羰基烷基组成的组，条件是当M3是NR6、M4不存在，且R12是CONR22R23时，则R23不是1-(1，3-苯并二氧杂环戊二烯-5-基)-3-乙氧基-3-氧代丙基，R24当存在时选自由烷基、芳基、芳烷基、杂环基、环烷墓、环烷基烷基以及杂环基烷基组成的组，
M6是(CH2)q，其中q是0-6的整数，
R3选自由氢、CONR13R14、NR15COOR16、NR15COR16、NR15CONR13R14、NR15SO2R16、OCOR16、COOR16、OR16、SR16、杂环基、羟基、羟基烷基、胍基、烷基以及芳基组成的组，其中R13和R15当存在时独立地是氢或低级烷基，R14和R16当存在时独立地选自由氢、烷基、芳基、芳烷基、环烷基、杂环基、环烷基烷基以及杂环基烷基组成的组，
R1、R2、R3、R12、R14、R16、R23以及R24当存在时可以独立地是未取代的或是被选自由以下各项组成的组中的一个或多个取代基取代的：烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂环基芳基、羟基、烷氧基、叠氮基、卤代烷氧基、羟基烷基、芳氧基、羟基芳基、烷氧基芳基、卤代、卤代烷基、卤代芳基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、-NHCO(烷基)、-NHCO(芳基)、-NHCO(芳烷基)、-NHCO(卤代烷基)、-NHSO2(烷基)、-NHSO2(芳基)、-NHSO2(芳烷基)、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、-OCO(烷基氨基)以及-OCO(二烷基氨基)。
26.如权利要求25所述的组合物，其中所述结合增强化合物是非活性成分或赋形剂。
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