CN106596951A - 一种快速检测农作物中双甲脒含量的试剂盒 - Google Patents

一种快速检测农作物中双甲脒含量的试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN106596951A
CN106596951A CN201510664648.3A CN201510664648A CN106596951A CN 106596951 A CN106596951 A CN 106596951A CN 201510664648 A CN201510664648 A CN 201510664648A CN 106596951 A CN106596951 A CN 106596951A
Authority
CN
China
Prior art keywords
amitraz
kit
mol
antibody
liquid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
CN201510664648.3A
Other languages
English (en)
Inventor
杜霞
刘静
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhenjiang Yite Biotechnology Development Co Ltd
Original Assignee
Zhenjiang Yite Biotechnology Development Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhenjiang Yite Biotechnology Development Co Ltd filed Critical Zhenjiang Yite Biotechnology Development Co Ltd
Priority to CN201510664648.3A priority Critical patent/CN106596951A/zh
Publication of CN106596951A publication Critical patent/CN106596951A/zh
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
    • G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
    • G01N21/31—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
    • G01N21/77—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
    • G01N21/78—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator producing a change of colour
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
    • G01N33/535—Production of labelled immunochemicals with enzyme label or co-enzymes, co-factors, enzyme inhibitors or enzyme substrates
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Plasma & Fusion (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明提供了一种能检测果蔬中双甲脒的酶联免疫试剂盒，涉及免疫分析检测技术。该试剂盒包括：包被了双甲脒的酶标板；双甲脒抗体；双甲脒标准品；标准品稀释液；酶标二抗；底物显色液；洗涤缓冲液和终止液。本发明的关键技术在于制备了一种可以识别双甲脒的单克隆抗体。本发明的试剂盒采用此高特异性的双甲脒单克隆抗体，主要试剂以工作液形式提供，可以减少操作步骤，节省时间。

Description

一种快速检测农作物中双甲脒含量的试剂盒
技术领域
本发明属于农药残留分析和免疫分析检测技术领域，具体涉及一种能识别双甲脒的单克隆抗体制备及其酶联免疫检测试剂盒。本发明公开了特异性单克隆抗体、包被原、免疫原的制备方法和酶联免疫检测方法。与现有技术相比，本发明制备的单抗可以识别双甲脒，本发明的试剂盒和方法具有简便、快速、灵敏、准确等优点。
背景技术
双甲脒是一种广谱性杀螨剂，化学名称为N一甲基双 (2，4二甲苯亚氨基甲基)胺，广泛用于果树、茶叶、棉花、大豆、甜菜等作物防治多种害螨。双甲脒及其代谢产物均具有致癌性和可传递性，吸入、摄入或经过皮肤吸收均会引起中毒，对人体及动物造成危害。我国环境保护部发布的《农药安全使用规定》将其列为高毒杀螨剂。明确规定了其适用范围。但在日常生产生活中，由于不合理使用，由双甲脒引起的水体污染、牲畜中毒等情况时有发生。
双甲眯在环境体系及生物体内，会代谢或降解为单甲眯、2，4一二甲基苯基甲酞胺及2， 4一二甲基苯胺。目前报道的关于双甲胖的检验方法包括液相色谱法、气相色谱一质谱联用法及液相色谱一质谱联用法。液相色谱-质谱联用法因其良好的灵敏度及分离效率，近年来被越来越多地用于各种检测项目。
发明内容
（一）本发明要解决的技术问题
本发明目的在于提供一种结构简单、使用方便、价格便宜、便于携带、灵敏度高的用于双甲脒同时快速检测的酶联免疫试剂盒，并提供一种高效、准确、灵敏、适合大量筛选的定量检测方法。
（二）本发明的技术方案
为解决所述问题，本发明综合采用蛋白质偶联和生物化学制备等技术制备了可以识别双甲脒的单克隆抗体。将双甲脒与载体蛋白偶联制备成人工免疫抗原和包被抗原；用此人工免疫抗原免疫动物制备双甲脒的单克隆抗体；将双甲脒包被抗原包被吸附于固相载体上；将检测用的试剂配置成可直接使用的试剂。使用时，将双甲脒标准品或待测样品加入双甲脒抗体工作液，待测样品中残留的双甲脒与固相载体上包被的双甲脒抗原竞争双甲脒单克隆抗体，再加入酶标记二抗进行酶活性放大作用，显色后终止，测定样品的吸光度值，该值与样品中双甲脒残留呈负相关，与标准曲线比较即可得出样品中双甲脒的含量。
本酶联免疫检测试剂盒由下列成分组成：
（1）包被了双甲脒抗原的酶标板
（2）双甲脒抗体
（3）双甲脒标准品
（4）标准品稀释液
（5）酶标二抗
（6）底物显色液
（7）洗涤缓冲液
（8）终止液
其中，双甲脒抗原及双甲脒单克隆抗体的制备方法为：
（1）双甲脒抗原的合成
将载体蛋白（BSA）的羧基用乙二胺活化，再通过水溶性碳化二亚胺法（EDC）将双甲脒与活化载体蛋白（BSA）的氨基相偶联制备双甲脒抗原。本发明合成的免疫原采用免疫电泳测定其纯度为98.6%。
（2）双甲脒单克隆抗体制备
动物免疫程序：采用双甲脒抗原为免疫原，免疫BALB/C小鼠，免疫剂量为50μg，首次免疫为含弗氏完全佐剂的免疫原，以后每隔四周，用含弗氏不完全佐剂的免疫原加强免疫，前后共四次，可以得到血液里含有双甲脒抗原特异性抗体的小鼠；最后一次免疫后10天，采血，取脾细胞。
细胞融合与克隆化：取免疫BALB/C小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞杂交融合，制备杂交瘤细胞，采用间接竞争酶联免疫方法测定细胞上清液，筛选阳性孔。利用有限稀释法对阳性孔进行克隆化，筛选能稳定分泌双甲脒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
单克隆抗体的制备与纯化：采用体内诱生法，将BALB/C小鼠腹腔注入灭菌石蜡油，7-14天后腹腔注射杂交瘤细胞，7-10天后采集腹水，经硫酸铵盐析纯化，分装待用，-20℃保存。
其中，本发明的试剂盒所用试剂的配制方法如下：
（1）双甲脒标准溶液配制：准确称取标准双甲脒1 mg，精确到0.00001 g，配成1 μg/mL标准品溶液母液；使用时，用标准品稀释液稀释成所需的浓度（10-1000 ng/mL）；
（2）标准品稀释液为0.05 mol/L Tris-HCl，pH 8.0，0.9%NaCl的缓冲液；
（3）包被缓冲液为0.1 mol/L碳酸缓冲液，pH7.8，含0.05% NaN3，0.9% NaCl；
（4）封闭液为0.05 mol/L Tris-HCl溶液，pH8.0，含0.5% BSA，0.9% NaCl，0.04% NaN3；
（5）洗涤缓冲液为0.05 mol/L Tris-HCl，pH 8.0，0.9% NaCl，0.04% Tween20；
（6）双甲脒单克隆抗体工作液：将抗体用pH7.4，0.02 mol/L，含1%卵清蛋白的磷酸盐缓冲液稀释成蛋白浓度为0.1-1 μg/L使用；
（7）酶标二抗工作液：辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗；
（8）底物显色液A液：过氧化氢或过氧化脲；
（9）底物显色液B液：邻苯二胺（OPD）或四甲基联苯胺（TMB）；
（10）底物显色液对硝基磷酸盐缓冲液：pH8.1，含有MgCl2 0.01% 100 mmol/L Tris-HCl；
（11）终止液：2 mol/L硫酸。
其中，酶标板的包被方法为：包被抗原以合适浓度与包被缓冲液混合，添加于酶标板中且置于室温下反应14 h。用洗涤缓冲液洗涤3次后，用封闭缓冲液在37℃进行封闭（约1 h），去除孔内液体，干燥后用铝膜真空密封保存。
本发明试剂盒的检测原理和检测方法：
将双甲脒抗原偶联物包被吸附于固相载体上，加入双甲脒标准品或待测样品，并加入双甲脒抗体工作液，待测样品中残留的双甲脒与固相载体上包被的双甲脒抗原竞争双甲脒单克隆抗体，洗涤去除游离的抗原抗体复合物，再加入酶标记二抗进行酶活性放大作用，显色后终止，测定样品的吸光度值，该值与样品中双甲脒残留呈负相关，与标准曲线比较即可得出样品中双甲脒的含量。
（三）本发明的有益效果
本发明所制备的能识别双甲脒的酶联免疫试剂盒，具有简便、快速、灵敏、准确等特点，可用于定性或定量检测果蔬等样品中双甲脒的残留量；其最低检测限为0.01 ng/g，检测时间仅需3小时。本方法平均回收率为97-121%，批内误差小于8%，批间误差小于13%。
本发明的试剂盒采用高特异性的双甲脒单克隆抗体，主要试剂以工作液形式提供，可以减少操作步骤，节省时间。
附图说明
图1为双甲脒的标准曲线。
具体实施方式
实施例 1 试剂盒组分的制备
1、抗原的合成
a、取载体牛血清白蛋白（BSA）10 g 溶于35 mL pH9.6 碳酸盐缓冲液中，加入10g 乙二胺进行活化；
b、取双甲脒1 g溶于10 mL 0.5 M的氢氧化钠溶液中；
c、取1 g碳化二亚胺溶于5 mL纯水，然后加到双甲脒溶液中室温搅拌反应3小时；
d、将活化的载体蛋白BSA滴加到双甲脒溶液中4℃搅拌反应过夜；
e、将反应完所获得的人工抗原对0.1 M的PBS缓冲液透析5天，每天更换缓冲液4次；将获得的纯化的人工抗原经超滤浓缩或冻干保存。
2、双甲脒单克隆抗体制备
a、动物免疫程序：采用双甲脒人工抗原为免疫原，免疫BALB/C小鼠，免疫剂量为50 μg，首次免疫为含弗氏完全佐剂的免疫原，颈背部皮下多点注射，以后每隔四周，用含弗氏不完全佐剂的免疫原加强免疫，前后共四次，可以得到血液里含有双甲脒特异性抗体的小鼠；最后一次免疫后10天，采血，取脾细胞。
b、细胞融合与克隆化：取免疫BALB/C小鼠脾细胞，按照5:1的比例与小鼠SP2/0骨髓瘤细胞杂交融合，制备杂交瘤细胞，采用间接竞争酶联免疫方法测定细胞上清液，筛选阳性孔。利用有限稀释法对阳性孔进行克隆化，筛选能稳定分泌双甲脒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
c、单克隆抗体的制备与纯化：采用体内诱生法，将BALB/C小鼠腹腔注入0.5 mL灭菌石蜡油，7-14天后腹腔注射杂交瘤细胞，7-10天后采集腹水，经硫酸铵盐析纯化，分装待用，-20℃保存。
3、酶标二抗的制备
将辣根过氧化物酶（HRP）与羊抗鼠二抗进行偶联，方法如下：
a、8 mg辣根过氧化物酶溶解于2 mL蒸馏水中；
b、加入现配制的100 mmol/L NaIO4溶液0.4 mL，室温搅拌反应20分钟；
c、在4℃条件下，用1 mmol/L醋酸盐缓冲液透析过夜；
d、加入pH8.6，0.5 mol/L磷酸盐缓冲液40μL和含有羊抗鼠二抗蛋白IgG 16 mg的pH8.6，5 mol/L磷酸盐缓冲液2 mL，室温搅拌反应5小时；
e、加入现配制的NaBH4水溶液（1 mol/L）0.1 mL 4℃反应5小时；
f、纯化保存。
4、酶标板的制备
a、用包被缓冲液将包被抗原稀释至0.05 μg/mL；
b、于酶标板中每孔加入150μL，且置于室温下反应14 h；
c、去除包被液，用洗涤缓冲液洗涤3次后，用封闭缓冲液150μL在37℃进行封闭（约1 h），去除孔内液体，干燥后用铝膜真空密封保存。
实施例 2 用于双甲脒快速检测的酶联免疫试剂盒的组建
本酶联免疫检测试剂盒由下列成分组成：
（1）包被了双甲脒抗原的酶标板；
（2）蛋白浓度为0.5μg/L的双甲脒单克隆抗体工作液；
（3）浓度为1 μg/mL双甲脒标准品；
（4）标准品稀释液：0.05 mol/L Tris-HCl，pH 8.0，0.9%NaCl的缓冲液；
（5）用辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠酶标二抗工作液；
（6）底物显色液A液位过氧化氢，底物显色液B液位邻苯二胺；
（7）洗涤缓冲液为0.05 mol/L Tris-HCl，pH 8.0，0.9% NaCl，0.04% Tween20；
（8）终止液为2 mol/L硫酸。
实施例 3 样品中双甲脒残留的检测
1、样品前处理
a、取1 g粉碎并具有代表性的样品，加入5 mL乙腈；
b、充分振荡混匀3-5分钟，静置分层后取5 mL上清液4000 r/min离心5 min或用定量分析滤纸过滤；
c、取离心后的上清液或过滤后的滤液1 mL，50 ~60 ℃水浴氮气吹干；
d、加入标准品稀释液1 mL并充分混匀，4000 r/min离心5 min或用定量分析滤纸过滤；
e、取离心后的上清或过滤后的滤液进行分析。
2、用试剂盒进行检测
配制浓度为1000 ng/mL双甲脒母液，进行倍比稀释，分别稀释为0，0.3，0.9，2.7，8.1，24.3 ng/mL 6个浓度的标准品，按照100μL标准品或待测样品和50μL 双甲脒单克隆抗体工作液共150μL添加于包被有双甲脒抗原的酶标板微孔中，于25℃进行竞争反应1 h。竞争反应结束后，倒出孔中液体，每孔加入250μL洗涤液，30秒后倒出孔中液体，如此重复操作共洗板5次，用吸水纸吸干。加入辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗工作液100μL，用盖板膜封板，于25℃恒温反应30 min。取出酶标板，如前述洗板5次。每孔加入底物显色液A液50μL，再加B液50μL，轻轻震荡混匀，于25℃恒温反应15 min。加入终止液50μL/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450 nm处或双波长450/630 nm检测，测定每孔吸光度值（请在5 min内读完数据）。
结果分析：
测量吸光度值（OD值）并绘制标准曲线，所测标准品的吸光度值（OD值）对应双甲脒浓度作标准曲线图，相对应每一个样品中双甲脒的浓度可以从标准曲线上读出，从而得到所测样品的双甲脒含量。

Claims (3)

1.一种用于双甲脒快速检测的酶联免疫试剂盒，其特征在于它包含下列成分：
（1）包被了双甲脒抗原的酶标板
（2）双甲脒抗体
（3）双甲脒标准品
（4）标准品稀释液
（5）酶标二抗
（6）底物显色液
（7）洗涤缓冲液
（8）终止液
其中，本发明的试剂盒所用试剂的配制方法如下：
（1）双甲脒标准溶液配制：准确称取标准双甲脒1 mg，精确到0.00001 g，配成1 μg/mL标准品溶液母液；使用时，用标准品稀释液稀释成所需的浓度（10-1000 ng/mL）；
（2）标准品稀释液为0.05 mol/L Tris-HCl，pH 8.0，0.9%NaCl的缓冲液；
（3）包被缓冲液为0.1 mol/L碳酸缓冲液，pH7.8，含0.05% NaN3，0.9% NaCl；
（4）封闭液为0.05 mol/L Tris-HCl溶液，pH8.0，含0.5% BSA，0.9% NaCl，0.04% NaN3；
（5）洗涤缓冲液为0.05 mol/L Tris-HCl，pH 8.0，0.9% NaCl，0.04% Tween20；
（6）双甲脒单克隆抗体工作液：将抗体用pH7.4，0.02 mol/L，含1%卵清蛋白的磷酸盐缓冲液稀释成蛋白浓度为0.1-1 μg/L使用；
（7）酶标二抗工作液：辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗；
（8）底物显色液A液：过氧化氢或过氧化脲；
（9）底物显色液B液：邻苯二胺（OPD）或四甲基联苯胺（TMB）；
（10）底物显色液对硝基磷酸盐缓冲液：pH8.1，含有MgCl2 0.01% 100 mmol/L Tris-HCl；
（11）终止液：2 mol/L硫酸。
2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于包被抗原的制备：将载体蛋白（BSA）的羧基用乙二胺活化，再通过水溶性碳化二亚胺法（EDC）将双甲脒与活化载体蛋白（BSA）的氨基相偶联制备双甲脒抗原。
3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于识别双甲脒单克隆抗体制备：
a、动物免疫程序：采用双甲脒人工抗原为免疫原，免疫BALB/C小鼠，免疫剂量为50 μg，首次免疫为含弗氏完全佐剂的免疫原，颈背部皮下多点注射，以后每隔四周，用含弗氏不完全佐剂的免疫原加强免疫，前后共四次，可以得到血液里含有双甲脒特异性抗体的小鼠；最后一次免疫后10天，采血，取脾细胞；
b、细胞融合与克隆化：取免疫BALB/C小鼠脾细胞，按照5:1的比例与小鼠SP2/0骨髓瘤细胞杂交融合，制备杂交瘤细胞，采用间接竞争酶联免疫方法测定细胞上清液，筛选阳性孔；利用有限稀释法对阳性孔进行克隆化，筛选能稳定分泌双甲脒单克隆抗体的杂交瘤细胞株；
c、单克隆抗体的制备与纯化：采用体内诱生法，将BALB/C小鼠腹腔注入0.5 mL灭菌石蜡油，7-14天后腹腔注射杂交瘤细胞，7-10天后采集腹水，经硫酸铵盐析纯化，分装待用，-20℃保存。
CN201510664648.3A 2015-10-15 2015-10-15 一种快速检测农作物中双甲脒含量的试剂盒 Withdrawn CN106596951A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510664648.3A CN106596951A (zh) 2015-10-15 2015-10-15 一种快速检测农作物中双甲脒含量的试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510664648.3A CN106596951A (zh) 2015-10-15 2015-10-15 一种快速检测农作物中双甲脒含量的试剂盒

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN106596951A true CN106596951A (zh) 2017-04-26

Family

ID=58552193

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510664648.3A Withdrawn CN106596951A (zh) 2015-10-15 2015-10-15 一种快速检测农作物中双甲脒含量的试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106596951A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111763657A (zh) * 2020-07-08 2020-10-13 江南大学 一株分泌双甲脒单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101354401A (zh) * 2008-09-09 2009-01-28 中国检验检疫科学研究院 头孢氨苄残留酶联免疫检测试剂盒及其应用
CN103439503A (zh) * 2013-08-03 2013-12-11 河南省农业科学院 司帕沙星的酶联免疫试剂盒及其组建和检测方法
CN103713122A (zh) * 2014-01-02 2014-04-09 中山市粤尔生物技术有限公司 一种地塞米松快速检测试剂盒
CN103808931A (zh) * 2012-11-06 2014-05-21 江苏维赛科技生物发展有限公司 一种检测磺胺嘧啶的酶联免疫试剂盒及其检测方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101354401A (zh) * 2008-09-09 2009-01-28 中国检验检疫科学研究院 头孢氨苄残留酶联免疫检测试剂盒及其应用
CN103808931A (zh) * 2012-11-06 2014-05-21 江苏维赛科技生物发展有限公司 一种检测磺胺嘧啶的酶联免疫试剂盒及其检测方法
CN103439503A (zh) * 2013-08-03 2013-12-11 河南省农业科学院 司帕沙星的酶联免疫试剂盒及其组建和检测方法
CN103713122A (zh) * 2014-01-02 2014-04-09 中山市粤尔生物技术有限公司 一种地塞米松快速检测试剂盒

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111763657A (zh) * 2020-07-08 2020-10-13 江南大学 一株分泌双甲脒单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN100403030C (zh) 检测苏丹红药物的酶联免疫试剂盒及方法
CN102955031B (zh) 检测黄曲霉毒素b1药物的酶联免疫试剂盒及其应用
CN101413955B (zh) 一种检测玉米赤霉烯酮的elisa测试盒及制备及检测方法
CN101226194B (zh) 无色孔雀石绿残留的酶联免疫检测试剂盒及其使用方法
CN101256188B (zh) 检测林可霉素药物的酶联免疫试剂盒及其应用
CN100501409C (zh) 一种检测动物源性食品中氯霉素类药物的酶联免疫试剂盒
CN104655847A (zh) 检测阿德呋啉的酶联免疫试剂盒及其检测方法
CN101571539A (zh) 检测头孢类药物的酶联免疫试剂盒及其应用
CN101776685B (zh) 检测三甲氧苄胺嘧啶药物的酶联免疫试剂盒及其应用
CN1153908A (zh) 一种检测黄曲霉毒素b1的试剂盒及其检测方法
CN104849251A (zh) 一种快速检测地沟油的时间分辨荧光免疫方法及试剂盒
US5747346A (en) Detection of novel carbohydrates directly associated with chronic alcoholism
CN101526525B (zh) 一种适用于五氯酚残留分析的酶联免疫吸附检测试剂盒
CN109180519B (zh) 一种喹乙醇代谢物抗原、抗体及酶联免疫检测试剂盒与检测方法
Samsonova et al. Enzyme-linked immunosorbent assay of ampicillin in milk
CN110133306A (zh) 检测西马特罗的酶联免疫试剂盒及其应用
CN103018451B (zh) 检测氯霉素的酶联免疫试剂盒及其应用
CN1687782A (zh) 一种甲萘威残留的酶联免疫吸附分析试剂盒
CN103018447B (zh) 检测沙丁胺醇的酶联免疫试剂盒及其方法
CN105758846A (zh) 检测克伦特罗的化学发光酶联免疫检测试剂盒
CN113125753A (zh) 一种用于检测尘螨组分特异性抗体的试剂盒
CN106596951A (zh) 一种快速检测农作物中双甲脒含量的试剂盒
CN102331500A (zh) 用于检测柠檬黄的方法及酶联免疫试剂盒
CN1569840A (zh) 吡虫啉人工半抗原、人工抗原、特异性抗体制备方法及其用途
US5958785A (en) Detection of a carbohydrate biomarker directly associated with chronic alcoholism

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WW01 Invention patent application withdrawn after publication
WW01 Invention patent application withdrawn after publication

Application publication date: 20170426