CN106591479A - 一种洪湖碘泡虫pcr特异性检测引物及其检测方法 - Google Patents

一种洪湖碘泡虫pcr特异性检测引物及其检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106591479A
CN106591479A CN201710058388.4A CN201710058388A CN106591479A CN 106591479 A CN106591479 A CN 106591479A CN 201710058388 A CN201710058388 A CN 201710058388A CN 106591479 A CN106591479 A CN 106591479A
Authority
CN
China
Prior art keywords
myxobolus
honghuensis
primer
honghu
pcr
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201710058388.4A
Other languages
English (en)
Inventor
刘新华
章晋勇
石琼
王敏
马昕羽
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hua Da (zhenjiang) Aquatic Science And Technology Industries Ltd
Original Assignee
Hua Da (zhenjiang) Aquatic Science And Technology Industries Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hua Da (zhenjiang) Aquatic Science And Technology Industries Ltd filed Critical Hua Da (zhenjiang) Aquatic Science And Technology Industries Ltd
Priority to CN201710058388.4A priority Critical patent/CN106591479A/zh
Publication of CN106591479A publication Critical patent/CN106591479A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明提供了一种洪湖碘泡虫PCR特异性检测引物及其检测方法。该洪湖碘泡虫的PCR特异性检测引物，包括正向引物和反向引物；正向引物MHF：5’‑TAAAGTTAGCATCGAGAGCA‑3’；反向引物MHR：5’‑CGCTGTATGATTAAACTGCT‑3’。上述洪湖碘泡虫PCR特异性检测引物，设计合理，用于洪湖碘泡虫检测，不仅能成功从鲫鱼喉部组织、血液中检测洪湖碘泡虫，也能从水样、土壤中检测洪湖碘泡虫，具有较高的特异性与灵敏性，操作简便，快速准确，同时还可以监测洪湖碘泡虫在水域生态系统中的整个生活史过程，可直接应用于生产实践中，对减轻洪湖碘泡虫对我国异育银鲫养殖业造成的损失有积极的作用。

Description

一种洪湖碘泡虫PCR特异性检测引物及其检测方法
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种洪湖碘泡虫PCR特异性检测引物及其检测方法。
背景技术
粘孢子虫是一类世界分布的后生动物寄生虫，可寄生于鲫鱼、两栖类、爬行类、鸟类以及哺乳类，绝大多数种类对宿主不会造成危害，但部分种类能造成非常严重的病害。异育银鲫是中国科学院水生生物研究所的鲫鱼育种专家于1976～1981年研制成功的一种鲫鱼养殖新对象，它是利用天然雌核发育的方正银鲫为母本，以兴国红鲤为父本，经人工授精繁育的子代。该鱼具有良好的杂种优势，增产效果明显，且肉质细嫩，营养丰富。近年来，随着中科三号的成功培育及养殖技术的推广，其养殖规模也不断扩大，随之而来的鲫鱼病害也日趋严重。
粘孢子虫具有复杂的生活史，其宿主包括宿主鱼和水蚯蚓。研究表明，粘孢子虫在鱼体内行无性繁殖形成营养体，然后通过血液移形到靶器官发育成熟形成包囊(成熟孢子)；孢子成熟后脱落或随着鱼体死亡、鲫鱼粪便、尿液落入水柱中并沉淀到底部，进而被土壤中的水蚯蚓吞食，孢子被水蚯蚓摄入后在其体内行有性生殖发育、移形并以放射孢子虫的形式释放到水柱中，水柱中的放射孢子虫又通过皮肤、鳃等感染鲫鱼宿主并在体内发育进行下一个生活史。
洪湖碘泡虫是异育银鲫“喉孢子虫病”病原体，主要感染鲫鱼鱼种，但近年来在鱼苗也有发现，主要寄生在鲫鱼喉部，严重寄生时会导致鲫鱼喉部严重充血，剪开喉部会发现里面充满了大量豆腐渣样包囊，有时也会直接撑破喉部导致鲫鱼死亡。然而，当鲫鱼喉部出现明显病症，镜检可发现成熟孢子时已处于发病末期，主要是由于粘孢子虫成熟后在孢子外形成坚硬的几丁质壳，一般的药物无法穿透，因此无法杀死该虫。但当孢子在鱼体内处于营养体以及在水 体中处于放射孢子虫阶段时，普通的药物都可以轻易将它杀死，从而达到预防的目的。另一方面，土壤中孢子丰度对我们评估洪湖碘泡虫的爆发有积极指导作用。因此，发展洪湖碘泡虫特异性检测方法检测鱼体内处于营养期的孢子、水体中放射孢子虫以及土壤中孢子丰度尤为必要。
发明内容
基于此，有必要提供一种特异性强、灵敏度高、快速检测的洪湖碘泡虫PCR特异性检测引物及其检测方法。
一种洪湖碘泡虫PCR特异性检测引物，包括正向引物和反向引物；
正向引物MHF：5’-TAAAGTTAGCATCGAGAGCA-3’；
反向引物MHR：5’-CGCTGTATGATTAAACTGCT-3’。
一种洪湖碘泡虫的PCR特异性检测方法，包括以下步骤：以洪湖碘泡虫的ITS基因为靶基因，通过PCR方法，以待检样品为模板，以上述特异性检测引物扩增靶基因，经琼脂糖电泳后检测是否会产生432bp大小的特异性电泳条带，从而将洪湖碘泡虫成分进行特异性鉴定。
在其中一个实施例中，PCR方法的反应体系为：10×PCR BuFFer 2.5μL，2.5mmol/L的dNTP Mixture 2.0μL，5U/μl Takara Taq 0.3μL，10μmol/L MHF 0.5μL，10μmol/L MHR0.5μL，DNA模板1μL，灭菌双蒸水补足至体积25μL。
在其中一个实施例中，所述PCR方法的反应参数如表1所示：
表1
上述洪湖碘泡虫PCR特异性检测引物，设计合理，用于洪湖碘泡虫检测，不仅能成功从鲫鱼喉部组织、血液中检测洪湖碘泡虫，也能从水样、土壤中检测洪湖碘泡虫，具有较高的特异性与灵敏性，操作简便，快速准确，同时还可以监测洪湖碘泡虫在水域生态系统中的整个生活史过程，可直接应用于生产实 践中，对减轻洪湖碘泡虫对我国异育银鲫养殖业造成的损失有积极的作用。
附图说明
图1为本发明的洪湖碘泡虫PCR引物特异性检测图，其中，1：双蒸水空白对照；2：洪湖碘泡虫；3：鲫鱼肌肉组织；4：瓶囊碘泡虫；5：吴李碘泡虫；6：塔形碘泡虫；7：射阳碘泡虫；8：倪李碘泡虫；9：丑陋圆形碘泡虫；10：口腔碘泡虫；11：普罗尼碘泡虫；12:荆州碘泡虫；13：多涅茨尾孢虫；14：水滴尾孢虫；15：DL2000Marker；
图2为鲫鱼喉部组织样品中洪湖碘泡虫PCR特异性检测图，图中，1：孢子添加个数为7.0x104；2：孢子添加个数为7.0x103；3：孢子添加个数为7.0x102；4：孢子添加个数为7.0x101；5：孢子添加个数为7.0x100；M：DL2000Marker；
图3为鲫鱼血液中洪湖碘泡虫PCR特异性检测图，图中，1：孢子添加个数为7.0x104；2：孢子添加个数为7.0x103；3：孢子添加个数为7.0x102；4：孢子添加个数为7.0x101；5：孢子添加个数为7.0x100；M：DL2000Marker；
图4为池塘水中洪湖碘泡虫PCR特异性检测图，图中，1：孢子添加个数为7.0x104；2：孢子添加个数为7.0x103；3：孢子添加个数为7.0x102；4：孢子添加个数为7.0x101；5：孢子添加个数为7.0x100；M：DL2000Marker；
图5为土壤样品中洪湖碘泡虫PCR特异性检测图，图中，1：孢子添加个数为7.0x104；2：孢子添加个数为7.0x103；3：孢子添加个数为7.0x102；4：孢子添加个数为7.0x101；5：孢子添加个数为7.0x100；M：DL2000Marker。
具体实施方式
下面结合附图对本发明的较佳实施例进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。
实施例中主要试剂与仪器为：
动物组织和血液样品基因组提取试剂盒(采购于北京百泰克生物技术有限公司)、土壤样品和水样基因组提取试剂盒(采购于Omega Bio-Tek公司)。Percoll 细胞分离液(GE)、胎牛血清、Marker DL2000、6×Loading BuFFer、10×PCR BuFFer、dNTP Mixture、TaqDNA聚合酶均购自Takara公司。
实施例1
洪湖碘泡虫PCR特异性引物筛选：
将目前在我国鲫鱼发现并实验室内有的粘孢子虫序列全部下载下来进行同源性比较与筛选，最终在ITS序列筛选到一对特异性非常强的引物。引物具体信息如下：
正向引物MHF：5’-TAAAGTTAGCATCGAGAGCA-3’；
反向引物MHR：5’-CGCTGTATGATTAAACTGCT-3’。
实施例2
洪湖碘泡虫PCR引物的特异性检测方法，包括以下步骤：
1)洪湖碘泡虫、鲫鱼肌肉组织、瓶囊碘泡虫、吴李碘泡虫、塔形碘泡虫、射阳碘泡虫、倪李碘泡虫、丑陋圆形碘泡虫、口腔碘泡虫、普罗尼碘泡虫、荆州碘泡虫、多涅茨尾孢虫、水滴尾孢虫的基因组DNA提取；
2)采用PCR方法，用实施例1中的洪湖碘泡虫PCR特异性引物扩增步骤1)各样品的DNA基因，其中PCR方法的反应体系为：10×PCR BuFFer 2.5μL，2.5mmol/L的dNTP Mixture2.0μL，5U/μl Takara Taq 0.3μL，10μmol/L MHF 0.5μL，10μmol/L MHR 0.5μL，DNA模板1μL，灭菌双蒸水补足至体积25μL。
其中，PCR方法的反应参数如表2所示：
表2
3)琼脂糖凝胶电泳检测：将各扩增后的DNA基因经琼脂糖凝胶电泳检测后结果如图1所示。由图1可知，所设计的洪湖碘泡虫PCR特异性引物可以成功的扩增出432bp的目的条带，且特异性良好，能很好的区别其他在鲫鱼上发 现的粘狍子虫。
实施例3
洪湖碘泡虫PCR特异性检测方法的应用
1)鲫鱼喉部组织样品中洪湖碘泡虫的检测：将纯化得到洪湖碘泡虫人为的添加到鲫鱼喉部组织中，以7.0x104、7.0x 103、7.0x 102、7.0x101、7.0x100个添加进去，用上述组织基因组DNA抽取试剂盒提取基因组，同时用发展的引物和上述体系和条件进行PCR扩增、电泳检测，结果如图2所示。
结果表明：利用洪湖碘泡虫PCR特异性检测引物，通过PCR方法，可以成功检测鲫鱼喉部组织样品中的洪湖碘泡虫，且最低个数为7.0x101个。
2)鲫鱼血液样品中洪湖碘泡虫的检测：将纯化得到洪湖碘泡虫人为的添加到抽取的鲫鱼血液中，以7.0x104、7.0x 103、7.0x 102、7.0x101、7.0x100个添加进去，用上述血液组织基因组DNA抽取试剂盒提取基因组，同时用发展的引物和上述体系和条件进行PCR扩增、电泳检测，结果如图3所示。
结果表明：利用洪湖碘泡虫PCR特异性检测引物，通过PCR方法，可以成功检测鲫鱼血液中的洪湖碘泡虫，且最低个数为7.0x101个。
3)水样中洪湖碘泡虫的检测：将纯化得到洪湖碘泡虫人为的添加到1L的池塘水中，以7.0x104、7.0x 103、7.0x 102、7.0x101、7.0x100个添加进去，用上述水样基因组DNA抽取试剂盒提取基因组，同时用发展的引物和上述体系和条件进行PCR扩增、电泳检测，结果如图4所示。
结果表明：利用洪湖碘泡虫PCR特异性检测引物，通过PCR方法，可以成功检测池塘水中的洪湖碘泡虫，且最低个数为7.0x101个。
4)土壤中洪湖碘泡虫的检测：将纯化得到洪湖碘泡虫人为的添加到1L的池塘水中，以7.0x104、7.0x 103、7.0x 102、7.0x101、7.0x100个添加进去，用上述土壤样品基因组DNA抽取试剂盒提取基因组，同时用发展的引物和上述体系和条件进行PCR扩增、电泳检测，结果如图4所示。
结果表明：利用洪湖碘泡虫PCR特异性检测引物，通过PCR方法，可以成功检测土壤中的洪湖碘泡虫，且最低个数为7.0x102个。
上述洪湖碘泡虫PCR特异性检测引物，设计合理，用于洪湖碘泡虫检测，不仅能成功从鲫鱼喉部组织、血液中检测洪湖碘泡虫，也能从水样、土壤中检测洪湖碘泡虫，具有较高的特异性与灵敏性，操作简便，快速准确，同时还可以监测洪湖碘泡虫在水域生态系统中的整个生活史过程，可直接应用于生产实践中，对减轻洪湖碘泡虫对我国异育银鲫养殖业造成的损失有积极的作用。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
SEQUENCE LISTING
<110> 华大（镇江）水产科技产业有限公司
<120> 一种洪湖碘泡虫PCR特异性检测引物及其检测方法
<130> 20170113001
<160> 2
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 人工序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(20)
<400> 1
taaagttagc atcgagagca 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 人工序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(20)
<400> 2
cgctgtatga ttaaactgct 20

Claims (4)

1.一种洪湖碘泡虫PCR特异性检测引物，其特征在于，包括正向引物和反向引物；
正向引物MHF：5’-TAAAGTTAGCATCGAGAGCA-3’；
反向引物MHR：5’-CGCTGTATGATTAAACTGCT-3’。
2.一种洪湖碘泡虫的PCR特异性检测方法，其特征在于，包括以下步骤：以洪湖碘泡虫的ITS基因为靶基因，通过PCR方法，以待检样品为模板，以权利要求1中的特异性检测引物扩增靶基因，经琼脂糖电泳后检测是否会产生432bp大小的特异性电泳条带，从而将洪湖碘泡虫成分进行特异性鉴定。
3.根据权利要求2所述的洪湖碘泡虫的PCR特异性检测方法，其特征在于，PCR方法的反应体系为：10×PCR BuFFer 2.5μL，2.5mmol/L的dNTP Mixture 2.0μL，5U/μl Takara Taq0.3μL，10μmol/L MHF 0.5μL，10μmol/L MHR 0.5μL，DNA模板1μL，灭菌双蒸水补足至体积25μL。
4.根据权利要求2所述的洪湖碘泡虫的PCR特异性检测方法，其特征在于，所述PCR方法的反应参数如表1所示：
表1
CN201710058388.4A 2017-01-23 2017-01-23 一种洪湖碘泡虫pcr特异性检测引物及其检测方法 Pending CN106591479A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710058388.4A CN106591479A (zh) 2017-01-23 2017-01-23 一种洪湖碘泡虫pcr特异性检测引物及其检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710058388.4A CN106591479A (zh) 2017-01-23 2017-01-23 一种洪湖碘泡虫pcr特异性检测引物及其检测方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN106591479A true CN106591479A (zh) 2017-04-26

Family

ID=58586924

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710058388.4A Pending CN106591479A (zh) 2017-01-23 2017-01-23 一种洪湖碘泡虫pcr特异性检测引物及其检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106591479A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108411018A (zh) * 2018-05-07 2018-08-17 中国科学院水生生物研究所 一种洪湖碘泡虫的实时荧光定量pcr检测引物、试剂盒及检测方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105567827A (zh) * 2016-01-26 2016-05-11 华中农业大学 一种同时检测异育银鲫多种寄生粘孢子虫的pcr方法
CN105695573A (zh) * 2016-02-24 2016-06-22 华大(镇江)水产科技产业有限公司 一种无粘孢子虫病害的异育银鲫苗种培育方法
CN104164515B (zh) * 2014-09-02 2016-09-07 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心 一种洪湖碘泡虫特异性pcr检测引物及其检测方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104164515B (zh) * 2014-09-02 2016-09-07 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心 一种洪湖碘泡虫特异性pcr检测引物及其检测方法
CN105567827A (zh) * 2016-01-26 2016-05-11 华中农业大学 一种同时检测异育银鲫多种寄生粘孢子虫的pcr方法
CN105695573A (zh) * 2016-02-24 2016-06-22 华大(镇江)水产科技产业有限公司 一种无粘孢子虫病害的异育银鲫苗种培育方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
牛庆丽等: "转录间隔区(ITS)在寄生虫分子生物学分类中的应用及其进展", 《中国兽医寄生虫病》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108411018A (zh) * 2018-05-07 2018-08-17 中国科学院水生生物研究所 一种洪湖碘泡虫的实时荧光定量pcr检测引物、试剂盒及检测方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Poortvliet et al. A dated molecular phylogeny of manta and devil rays (Mobulidae) based on mitogenome and nuclear sequences
Oliver-Ferrando et al. Epidemiological and pathological investigation of fowl aviadenovirus serotypes 8b and 11 isolated from chickens with inclusion body hepatitis in Spain (2011–2013)
CN102134593B (zh) 半滑舌鳎性别特异微卫星标记及其在超雌鱼鉴定中的应用
CN106048016B (zh) 一种凡纳滨对虾抗性相关的多组合分子标记和应用
Dornburg et al. Molecular phylogenetics of squirrelfishes and soldierfishes (Teleostei: Beryciformes: Holocentridae): Reconciling more than 100 years of taxonomic confusion
Di Domenico et al. Molecular and morphological phylogeny of Saccocirridae (Annelida) reveals two cosmopolitan clades with specific habitat preferences
Henschel et al. Position of enigmatic miniature trichomycterid catfishes inferred from molecular data (Siluriformes)
Mulei et al. Infectious pancreatic necrosis virus isolated from farmed rainbow trout and tilapia in Kenya is identical to European isolates
Austin et al. Systematic revision, diversity patterns and trophic ecology of the tropical Indo-West Pacific sea slug genus Phanerophthalmus A. Adams, 1850 (Cephalaspidea, Haminoeidae)
Ravara et al. Taxonomy, distribution and ecology of the order Phyllodocida (Annelida, Polychaeta) in deep-sea habitats around the Iberian margin
Esparza-Leal et al. Detection of white spot syndrome virus in filtered shrimp-farm water fractions and experimental evaluation of its infectivity in Penaeus (Litopenaeus) vannamei
Ghorani et al. Phylogenetic analysis of the glycoprotein gene of viral hemorrhagic septicemia virus from Iranian trout farms points towards a common European origin
Chantangsi et al. Fusiforma themisticola n. gen., n. sp., a new genus and species of apostome ciliate infecting the hyperiid amphipod Themisto libellula in the Canadian Beaufort Sea (Arctic Ocean), and establishment of the Pseudocolliniidae (Ciliophora, Apostomatia)
Ashrafi et al. Migratory routes, domesticated birds and cercarial dermatitis: the distribution of Trichobilharzia franki in Northern Iran
Krailas et al.  Cercarial dermatitis outbreak caused by ruminant parasite with intermediate snail host: schistosome in Chana, South Thailand
Zhang et al. Larval identification of Lutjanus Bloch in Nansha coral reefs by AFLP molecular method
CN106591479A (zh) 一种洪湖碘泡虫pcr特异性检测引物及其检测方法
Kaltenbach et al. New species of Indocloeon Müller-Liebenau from South-East Asia (Ephemeroptera, Baetidae)
Moore et al. Impact of poxvirus lesions on saltwater crocodile (Crocodylus porosus) skins
Székely et al. Myxozoan infection of the Malaysian mahseer, Tor tambroides, of Tasik Kenyir Reservoir, Malaysia: description of a new species Myxobolus tambroides sp. n.
Ammar et al. Toxoplasma gondii prevalence in hunter-killed mourning doves (Zenaida macroura) and rock pigeons (Columba livia) from east Tennessee, USA
CN104164515B (zh) 一种洪湖碘泡虫特异性pcr检测引物及其检测方法
Chi et al. Taxonomy and phylogeny of the dileptid ciliate genus Paradileptus (Protista: Ciliophora), with a brief review and redescriptions of two species isolated from a wetland in northern China
CN105567827B (zh) 一种同时检测异育银鲫多种寄生粘孢子虫的pcr方法
LaFortune Species identification and habitat assessment of the south Texas siren

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20170426

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication