CN106573004A - 用于妊娠糖尿病的维生素b2 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及包含肌醇和维生素B2的母亲营养组合物。这种组合物专门设计用于向期望怀孕的妇女、孕妇和/或哺乳期妇女提供优化的营养。本发明还涉及将维生素B2用于治疗或预防怀孕个体或其后代的妊娠糖尿病及其相关病症，其中在孕前和/或孕期和/或哺乳期向所述个体施用所述维生素B2。

Description

用于妊娠糖尿病的维生素B2
技术领域
本发明涉及包含肌醇和维生素B2的母亲营养组合物。这种组合物专门设计用于向期望怀孕的妇女、孕妇和/或哺乳期妇女提供优化的营养。本发明还涉及使用维生素B2或包含维生素B2的组合物来治疗或预防怀孕个体和/或其后代的妊娠糖尿病及其相关病症。
背景技术
越来越多的科学证据显示，产前和产后的早期营养和其他环境因素会影响长期健康和良好状态的调控，并且可引起慢性疾病发展的风险。有几项研究表明，在生育期饮食摄入发生变化或对各种大量和微量营养素加以控制，可影响几种生理过程，例如生长、代谢、食欲、心血管功能等(Koletzko B et al(2011)Am J Nutr 94(s):2036-43S(Koletzko B等人，2011年，《美国营养学杂志》，第94期增刊，第2036-2043页))。因此，妇女在孕前和孕期的营养状态(营养物质储备和饮食摄入)与优化新生儿和儿童健康结果相关。据信母亲营养会影响营养物质对发育中的胎儿的有效性和供应，这些营养物质是关键发育过程中所需的。妇女在孕前的营养状况也对其健康和福利产生影响，并对其婴儿的健康、成长和福利产生影响。例如，缺乏微量营养素对胎儿组织和器官具有深刻且通常持久的影响，即使母体并未表现缺乏这些微量营养素的临床征兆(Ashworth CJ et al(2001)122:527-35(AshworthCJ等人，2001年，第122卷，第527-535页))。多种微量营养素摄入不足在生活在资源贫乏地区的育龄妇女中比较常见(Torhem LE et al.(2010)J.Nutr.140:2051S–58S(Torhem LE等人，2010年，《营养学杂志》，第140卷，第2051S-2058S页))。妇女在分娩后的营养状况也对其健康和福利产生影响，并对其婴儿的健康、成长和福利产生影响。
在用于母亲施用的组合物中已经使用了种类繁多的营养物质，并且已开发了各种营养组合物来解决母亲营养需求。这些组合物通常含有维生素和矿物质混合物。然而，为了母亲及其婴儿的利益，仍然有用的是，通过为这些妇女选择最有用的营养物质(如提供为生育期妇女的营养需求定制的组合物)来优化母亲产前和产后的营养，从而特异性地针对这一特定人群的营养缺乏。
本发明人还已惊讶地发现，维生素B2可用于提高哺乳动物细胞中的葡萄糖摄取，尤其是哺乳动物肌肉细胞中的葡萄糖摄取。因此，在孕前和/或孕期向个体施用维生素B2可预防和/或治疗怀孕个体或其后代的GDM和/或预防怀孕个体或其后代的GDM相关病症。本发明人还发现，当在孕期施用补充维生素B2时，相较于未施用补充剂量的小鼠，杂合db/db小鼠具有较低的空腹血糖浓度。此外，本发明人已经发现，与补充维生素B2结合施用肌醇的小鼠在孕期或孕前具有令人惊讶的低空腹血糖浓度。
另外，人们发现，补充B2导致在OGTT的最初30分钟内葡萄糖增长百分比较低，并且当B2与肌醇结合时，葡萄糖增长百分比甚至更低。
除此之外，本发明人已经发现，当在孕期与补充维生素B2结合施用肌醇时，杂合db/db小鼠具有令人惊讶的较低的腹膜后脂肪沉积。
如Athukorala C et al.BMC Pregnancy Childbirth,2010,10:56(Athukorala C等人，《BMC妊娠分娩》，2010年，第10卷，第56页)；Ovesen P et al.Obstet Gynecol,2011,118:305(Ovesen P等人，《妇产科杂志》，2011年，第118卷，第305页)和Aisling MM ratal.2009,Diabetes Care 32(7):1308(Aisling MM等人，《糖尿病护理》，2009年，第32卷，第7期，第1308页)中所教导的那样，妊娠中身体脂肪沉积、肥胖和GDM之间的存在完善的联系。
在孕期，母体中荷尔蒙发生变化，导致胰岛素抗性增加并且血浆葡萄糖浓度升高。这些变化有助于确保营养物质从母亲传输给胎儿，从而有助于确保其最佳成长和发育。通常，母亲产生的增加的胰岛素抵消了增加的胰岛素抗性和升高的血浆葡萄糖浓度。然而，一些母亲不能产生足够量的胰岛素以抵消这种变化，这可导致所述母亲罹患妊娠糖尿病(下文称为GDM)。
GDM被定义为孕期出现或首次发现的任何程度的葡萄糖耐受不良(Metzger BE,Coustan DR(Eds.)：Proceedings of the Fourth International Work-shop-Conferenceon Gestational Diabetes Mellitus.Diabetes Care21(Suppl.2):B1–B167,1998(Metzger BE、Coustan DR(编辑)，第四次国际妊娠糖尿病研讨会论文集，《糖尿病护理》，第21卷(增刊2)，第B1–B167页，1998年))。
GDM是一种可提高许多母亲-胎儿病症风险的孕期病症，包括巨大儿、出生损伤、肩难产、早产和剖宫产(下文称为剖腹产)。患有GDM的母亲在孕期后立即和在以后生活中发展成II型糖尿病的风险也会升高。另外，患有GDM的母亲的后代发展成葡萄糖耐量受损和/或罹患超重/肥胖症及相关代谢紊乱(例如II型糖尿病和肥胖)的风险也会升高。
因此，需要找到治疗和/或预防怀孕个体的GDM的方法。
发明内容
发明内容在权利要求书中陈述。如上文所述，本发明人现已发现用于母亲施用的包含肌醇和维生素B2的组合物对于解决期望怀孕的妇女、孕妇和/或哺乳期妇女及其后代的特定营养需求特别有用。因此，这种组合物是本发明的目的。另一个目的是使用所述组合物来治疗或预防怀孕个体(例如，怀孕妇女、猫或狗)的GDM。还如上文所述，人们发现，维生素B2可用于提高哺乳动物细胞中的葡萄糖摄取，当在孕前和孕期施用补充维生素B2时，相较于未施用补充剂量的小鼠，杂合db/db小鼠具有较低的空腹血糖浓度，因此，维生素B2可用于治疗或预防怀孕个体(例如，怀孕妇女、猫或狗)的GDM。
如上文所述，GDM与影响怀孕个体和/或其后代的多种病症相关联，例如，早产和剖宫产、对母亲或婴儿的出生损伤、肩难产、巨大儿、后代血糖浓度过高、后代在出生后和在以后生活中的超重/肥胖症以及相关的代谢紊乱(例如，II型糖尿病、脂肪肝疾病和肥胖)，以及母亲在生产后和在以后生活中罹患或发展成II型糖尿病的风险增加。因此，通过治疗或预防GDM，维生素B2也可用于治疗或预防这些怀孕个体或其后代的这些病症。
在治疗或预防怀孕个体和/或其后代的GDM时，当与肌醇(顺式-1,2,3,5-反式-4,6-环己六醇)和/或一种或多种益生菌和/或维生素B6、B12和D中的一种或多种和/或锌结合使用时，维生素B2可特别有效。特别地，当与肌醇、维生素D或维生素D和锌结合使用时，维生素B2特别有效。
在孕前和/或孕期和/或哺乳期中，可向个体经胃肠内施用维生素B2和任选的肌醇和/或一种或多种益生菌和/或维生素B6、B12和D中的一种或多种和/或锌。
可以适合个体摄入的任何形式施用或使用维生素B2和任选的肌醇和/或一种或多种益生菌和/或维生素B6、B12和D中的一种或多种和/或锌，例如，以在例如牛奶、果汁或水、食物产品、饮料中重构的粉末状营养组合物、营养补充剂(诸如将被洒在食物上或溶解于例如牛奶、果汁或水的水性介质中的粉末状营养补充剂)或营养品的形式。
可将维生素B2和任选的肌醇和/或一种或多种益生菌和/或维生素B6、B12和D中的一种或多种和/或锌用于生产用来治疗或预防怀孕个体GDM的药物。
可随指示用于治疗或预防怀孕个体GDM的套盒中剂量需求的标签一起提供维生素B2和任选的肌醇和/或一种或多种益生菌和/或维生素B6、B12和D中的一种或多种和/或锌。
附图说明
图1是示出来自实施例3的发现分别有维生素D、维生素B12、维生素B6、叶酸、铁和锌缺乏的调查妇女的百分比的图。
图2A示出了孕期中母亲的低维生素B2水平与其后代在6岁时脂肪量之间的相关性。
图2B示出了孕期中母亲的低维生素B2水平与其后代在4岁时脂肪量之间的相关性。
图3-示出在不存在胰岛素的情况下维生素B2对培养2小时和4小时后L6分化的肌肉细胞中葡萄糖摄取的作用的图表。
图4-示出在不存在胰岛素的情况下维生素B2和1,25-二羟维生素D3的组合对培养2小时和4小时后L6分化的肌肉细胞中葡萄糖摄取的作用的图表。
图5-示出在不存在胰岛素的情况下维生素B2和1,25-二羟维生素D3与锌的组合对培养2小时后L6分化的肌肉细胞中葡萄糖摄取的作用的图表。
图6-示出施用了肌醇、维生素B2或它们的组合的小鼠在妊娠日(怀孕18.5天)结束时空腹血糖水平的图表。
图7-示出施用了肌醇、维生素B2或它们的组合的小鼠在妊娠日(怀孕18.5天)结束时腹膜后脂肪垫重量的图表。
图8-示出4周龄的野生型和杂合瘦蛋白受体db/+雌性小鼠之间OGTT反应的区别的图表。
图9-示出施用了肌醇、维生素B2或它们的组合的小鼠在孕期中(怀孕16.5天)来自空腹血糖水平的葡萄糖增加百分比的图表。
图10-示出在不存在胰岛素的情况下，维生素B2对短期培养(2小时)和长期培养(24小时)后胰岛素抗体L6分化的肌肉细胞中葡萄糖摄取的作用的图表。
图11是示出肌醇和益生菌的组合对10周后Goto Kakizaki大鼠的脂肪量百分比变化的作用的图表。
图12是示出肌醇和益生菌的组合对10周后Goto Kakizaki大鼠的脂肪增长与重量增长之比的作用的图表。
图13是示出肌醇和益生菌的组合对妊娠期19.5天的Goto Kakizaki大鼠的胰腺中胰岛素量的作用的图表。
图14是示出肌醇和益生菌的组合对妊娠期16.5天的Goto Kakizaki大鼠的AUC胰岛素增加的作用的图表。
图15是示出肌醇和维生素B2对孕期中瘦蛋白受体db/+小鼠的体重增加的作用的图表。
图16是示出肌醇和维生素B2对妊娠期18.5天的小鼠的空腹血浆瘦蛋白浓度的作用的图表。
具体实施方式
本发明人已研究了期望怀孕的妇女、孕妇和哺乳期妇女的特定需求，以识别对于此类特定人群最有用的营养物质。基于他们已设计的研究，优化的组合物包含肌醇和维生素B2，以具体地解决此类特定人群最精确的需求。
本发明的组合物包含肌醇和维生素B2。
肌醇或环己烷-1,2,3,4,5,6-六醇是多元醇，根据六个羟基的空间取向，其在九种立体异构形式下存在。肌醇或顺式-1,2,3,5-反式-4,6-环己六醇是肌醇的主要异构形式。肌醇是存在于动物和植物细胞中的化合物，并作为真核细胞中第二信使的结构基础，特别是作为肌醇三磷酸(IP3)、磷脂酰肌醇磷酸脂(PIP2/PIP3)和肌醇聚糖，在各种细胞过程中起重要作用。已发现肌醇参与多种生物过程，诸如细胞生长和生存、外周神经的发展和功能、骨生成、能量代谢和繁殖(Croze et al.(2013)Biochimie 95:1811-1827(Croze等人，《生物化学》，2013年，第95卷，第1811-1827页))。研究发现，肌醇在新鲜果实和蔬菜以及含籽粒的所有食物(豆类、谷类和坚果)中作为自由形式、磷酸肌醇和植酸(Clements RS andDarnell B.Am J Clin Nutr(1980)33:1954-1967(Clements RS和Darnell B.，《美国临床营养杂志》，1980年，第33卷，第1954-1967页))。在肠道中可通过植物、微生物和动物组织中存在的酶植酸酶释放来自植酸的肌醇(Schlemmer U et al.Mol Nutr Food Res(2009)53:S330-S375(Schlemmer U等人，《分子营养食品研究》，2009年，第53卷，第S330-S375页))。这些酶能够释放自由肌醇、正磷酸盐和中间产品，包括肌醇的单、二、三、四和五磷酸盐形式。大量摄入的肌醇六磷酸盐水解成肌醇。
如本文所用的术语“肌醇”是指肌醇(顺式-1,2,3,5-反式-4,6-环己六醇)和/或其代谢物。
如本文所用的术语“代谢物”是指在施用(如摄取)具体化合物之后由个体的身体从该具体化合物产生和/或形成的任何物质。其包括化合物的活性形式和分解代谢物。
适合怀孕个体摄入的任何来源的肌醇都可用于本发明中。
肌醇的代谢物可选自D-手性肌醇、L-手性肌醇和前述的组合。具体地讲，代谢物是D-手性肌醇。
由于其重要的生理作用，特别是由于其促进细胞生长的能力，对于期望怀孕的妇女以及对于孕妇和哺乳期妇女来说，肌醇值得特别关注。然而，由本发明人进行并在实施例4中详述的饮食摄入研究已显示，孕妇通常不会食用足够的其中存在肌醇的食物，大多是水果和蔬菜。因此，本发明人已发现，对于期望怀孕的妇女、对于孕妇和对于哺乳期妇女来说，进行肌醇补充是特别有益的。
当施用给孕妇时，维生素B2对母亲和后代二者都有益。具体地讲，本发明人最近已确认母亲施用维生素B2用于预防后代肥胖症增加、超重或肥胖的作用(未公开的专利申请EP 14161190.5和本申请的实施例5)。本发明人现已进行实施例4中详述的研究，该研究表明，高比例的孕妇在她们的正常饮食中没有摄取足够量的维生素B2。因此，特别感兴趣的是，用这种维生素补充孕妇的饮食。
如本文所用的术语“维生素B2”是指维生素B2和/或其代谢物。
可使用适合怀孕个体摄入的任何来源的维生素B2。具体地讲，维生素B2可以是核黄素，例如，以商标Riboflavin Universal出售的核黄素。
维生素B2的代谢物可选自黄素单核苷酸(下文称为FMN)、黄素腺嘌呤二核苷酸(下文称为FAD)以及它们的盐(例如，核黄素-5'-磷酸钠盐)。
优选地以下列量提供肌醇：每日剂量中0.2g至5g、优选地1.5g至5g、更优选地2g至5g、最优选地2g至4g。优选地以下列量提供维生素B2：每日剂量中0.14mg至14mg。
在一个优选的实施方案中，本发明的组合物还包含至少一种其他维生素，该维生素选自维生素D、维生素B6、维生素B12和它们的混合物。优选地，该组合物包含维生素D、维生素B6和维生素B12。
如本文所用的术语“维生素B12”是指维生素B12和/或其代谢物。
如本文所用的术语“维生素B6”是指维生素B6和/或其代谢物。
如本文所用的术语“维生素D”是指维生素D、其前体和/或其代谢物。
如本文所用的术语“前体”是指任何施用的物质，例如，由个体摄入并由所述个体身体用于产生和/或形成特定化合物。
具体地讲，维生素B6可以是盐酸吡哆醇和/或选自5’-磷酸吡哆醛(下文称为PLP)的维生素B6的代谢物。
具体地讲，维生素B12可以是氰钴胺和/或选自以下项的维生素B12的代谢物：羟钴胺素、甲钴胺、腺苷钴胺和它们的组合。
具体地讲，维生素D可以是维生素D2、维生素D3或它们的组合、选自7-脱氢胆固醇的维生素D的前体、选自25-羟基维生素D3、1,25-二羟维生素D3、25-羟基维生素D2、1,25-二羟维生素D2的维生素D的代谢物以及前述的组合。
最优选地，维生素D是维生素D3、选自25-羟基维生素D3、1,25-二羟维生素的维生素D的代谢物及任何前述的组合。甚至具体地讲，维生素D3是胆钙化醇。
如果存在，优选地以下列量提供维生素B6：每日剂量中0.19mg至19mg。如果存在，优选地以下列量提供维生素B12：每日剂量中0.26μg至26μg。如果存在，优选地以下列量提供维生素D：每日剂量中1.5μg至100μg。
最优选地，每日剂量的本发明组合物包含1.8mg的维生素B2、2.6mg的维生素B6、5.2μg的维生素B12和10μg的维生素D。
在实施例3中详述的研究中，本发明人已令人惊讶地示出，相较于其他营养物质，孕妇更经常缺乏维生素B6、B12和D。因此，特别感兴趣的是，用这些维生素补充孕妇的饮食，以补偿这些特别经常发生的缺乏。
即使锌缺乏程度比维生素B2、B12、B6和D的缺乏程度小，但实施例3的研究还提供了在孕妇的至少某些人群中都缺乏锌的证据。因此，用锌补充孕妇的饮食也是特别有利的。因此，在一个优选的实施方案中，本发明的组合物还包含锌。更优选地，锌以下列量存在：每日剂量中1.1mg至40mg。
可使用适合怀孕个体摄入的任何来源或形式的锌。具体地讲，锌可以是锌盐，诸如氯化锌、吡啶羧酸锌、硫酸锌、氧化锌、醋酸锌、碳酸锌和前述的组合。
更具体地讲，锌可以是氯化锌。
在另一个优选的实施方案中，该组合物还包含益生菌，这是由于已发现益生菌会改善肠道屏障功能，并帮助营养物质通过肠道(Cani PD et al.(2009)Gut 58:1091-1103(Cani PD等人，《肠道》，2009年，第58卷，第1091-1103页))。将肌醇和维生素B2与益生菌结合，从而促进这些营养物质和可能存在于组合物中的其他营养物质的吸收。
如本文所用的术语“益生菌”是指活益生菌、非复制型益生菌、死益生菌、无活力益生菌、益生菌的片段如DNA、益生菌的代谢物、益生菌的细胞质化合物、益生菌的细胞壁材料、益生菌的培养上清液以及任何前述物质的组合。
具体地讲，益生菌是活益生菌、非复制型益生菌、死益生菌、无活力益生菌以及它们的任何组合。更具体地讲，益生菌是活益生菌。
优选地，益生菌包含乳杆菌和双歧杆菌的组合。最优选的乳杆菌菌株是由雀巢研发上海有限公司(NestléR&D centre Shanghai Ltd)(中国上海市嘉定区曹安路13号桥南，邮编201812)保藏的鼠李糖乳杆菌GG菌株，其保藏在中国普通微生物菌种保藏中心(CGMCC)并且可以保藏号CGMCC1.3724获得的鼠李糖乳杆菌。最优选的双歧杆菌菌株是保藏在法国国家微生物保藏中心(Collection Nationale de Cultures De Microorganismes,CNCM)的CNCM I-3446的乳双歧杆菌BB12菌株。优选地，益生菌包括可以保藏号CGMCC 1.3724获得的鼠李糖乳杆菌GG菌株和作为CNCM I-3446保藏的乳双歧杆菌BB12菌株的混合物。最优选地，益生菌由可以保藏号CGMCC 1.3724获得的鼠李糖乳杆菌GG菌株和作为CNCM I-3446保藏的乳双歧杆菌BB12菌株的混合物组成。在一个优选的实施方案中，以下列量提供益生菌：每日剂量中105至1012菌落形成单位(cfu)，更优选地，每日剂量中107至1011cfu。
还可添加其他维生素和矿物质。例如，可根据政府机构(如USRDA)的建议添加维生素和矿物质。例如，组合物可含有下列微量营养素中的一种或多种：钙、镁、磷、铁、锌、铜、碘、硒、例如β-胡萝卜素或类胡萝卜素混合物形式的维生素A或视黄醇活性当量(RAE)、维生素C、维生素B1、烟酸、叶酸、生物素、维生素E。优选地，组合物可含有下列量的下列微量营养素中的一种或多种：100mg至2500mg钙、35mg至350mg镁、70mg至3500mg磷、2.7mg至45mg铁、0.1mg至10mg铜、22μg至1100μg碘、6μg至400μg硒、例如β-胡萝卜素或类胡萝卜素混合物形式的77μg至3000μg的维生素A或视黄醇活性当量(RAE)、8.5mg至850mg维生素C、0.14mg至14mg维生素B1、1.8mg至35mg烟酸、60μg至1000μg叶酸、3μg至300μg生物素、1.9μg至109μg维生素E。
本发明的组合物可有利地还包含本领域技术人员已知的任何合适量(例如，每日剂量中100mg至500mg、更优选地每日剂量中200每个和400mg之间的量)的至少一种选自长链多不饱和脂肪酸的油，诸如花生四烯酸(ARA)、二十碳五烯酸(EPA)和/或二十二碳六烯酸(DHA)。
然而，尽管存在上述情况，但孕期的高脂肪摄入和/或母亲PUFA补充已与后代中较高肥胖症风险的升高联系起来。因此，在一个具体实施方案中，本发明的组合物不包含长链多不饱和脂肪酸和/或动物脂肪和/或植物脂肪。
在另一个具体实施方案中，本发明的组合物不包含低聚糖。
本文所提及的任何营养物质都可以任何有效实现本发明目的的量使用。技术人员将能够确定合适的剂量。通常，剂量将取决于母亲的年龄、体型、健康状态、生活方式和基因遗传。
通常，本申请中将量定义为每日剂量的量。因此，可相应地根据是否意在每天一次或更频繁或更少地使用来选择每种组合物中营养物质的量。
营养物质可作为持续释放制剂提供。如果是这样，可降低使用营养物质的频率，同时身体仍能持续获得足够量的该营养物质供应。
本发明的组合物旨在用于母亲施用。这意味着，将向期望怀孕的妇女、孕妇和/或哺乳期妇女施用该组合物。优选地，将向期望怀孕的妇女和/或孕妇施用，最优选地向孕妇施用。
优选地，例如，在怀孕或期望怀孕前至少1、2、3或4个月期间，向期望怀孕的妇女施用本发明的组合物。当向怀孕或哺乳期妇女施用该组合物时，该组合物优选地在怀孕或哺乳期间施用至少4周、优选地至少8周、更优选地至少12周、更优选地至少16周、更优选地至少20周、更优选地至少24周、更优选地至少28周，甚至更优选地至少36周。随着怀孕中三个月和末三个月的营养需求不断增加，进一步优选的是在怀孕末三个月施用本发明的组合物，最优选地在怀孕中三个月和末三个月施用本发明的组合物。
重要的是，期望怀孕的妇女通过摄入恰当的营养物质来准备好身体以怀孕。然后，妇女在孕期和哺乳期的营养物质需求不断增加。此外，哺乳期要求母亲储备需要建立和补充的能量、蛋白质和其他营养物质。本发明的组合物专门设计以满足妇女在这些周期中每个期间的需求。
组合物可以是适于向妇女施用所有成分的任何形式。例如，其可以是在例如牛奶或水中重构的粉末状营养组合物、食物产品、功能性食物产品、饮料、乳制品、药物制剂、宠物食物产品、营养补充剂或营养品的形式。
当组合物是在牛奶或水中重构的粉末状营养组合物的形式时，其优选地包含蛋白质源、碳水化合物源和脂质源，优选地与卵磷脂一起。更优选地，该组合物还包含大豆卵磷脂和/或膨松剂。蛋白质源可以是奶粉或脱脂奶粉。蔗糖和/或麦芽糖糊精可用作碳水化合物源。脂质源可以是植物油。作为另一种选择或除此之外，制剂还可包含葡萄糖浆、乳脂、柠檬酸镁、胆碱盐和胆碱酯、益生元纤维和/或抗坏血酸棕榈酸酯。例如，可添加风味物化合物(例如，可可粉或蜂蜜)来提供不同口味。
如本文所用的术语“食物产品”是指可供人类或动物安全食用的任何种类的产品。所述食物产品可以是固体、半固体或液体形式，并且可包含一种或多种营养物质、食物或营养补充剂。例如，食物产品可另外包含以下营养物质和微量营养物质：蛋白质来源、脂质来源、碳水化合物来源、维生素和矿物质。该组合物还可包含抗氧化剂、稳定剂(以固体形式提供时)或乳化剂(以液体形式提供时)。
如本文所用的术语“功能性食物产品”是指为个体提供额外的健康促进或疾病预防功能的食物产品。
食物产品和功能性食物产品包括例如基于谷类的产品、酸奶或其他乳制品和棒。
如本文所用的术语“营养补充剂”或“饮食补充剂”是指为个体提供所述个体可能无法以其他方式足量消耗的营养物质的营养产品。例如，营养补充剂可包括维生素、矿物质、纤维、脂肪酸或氨基酸。
可例如以丸剂、片剂、锭剂，耐嚼胶囊或片剂、片剂或胶囊或者可例如溶解于水中或洒在食物上的粉末状补充剂的形式提供补充剂。最优选的是可溶解于液体中或洒在食物上、最优选地溶解于水中的粉末状补充剂。这种补充剂通常提供所选择的营养物质，而不呈现个体整体营养需求的显著比利。通常，它们不呈现多于个体每日能量需求的0.1％、1％、5％、10％或20％。
如本文所用的术语“乳制品”是指由动物如牛、山羊、绵羊、牦牛、马、骆驼以及其他哺乳动物生产的食物产品。乳制品的示例是低脂乳(例如，0.1％、0.5％或1.5％的脂肪)、无脂乳、乳粉、全脂乳、全脂乳制品、黄油、酪乳、酪乳制品、脱脂乳、脱脂乳制品、高乳脂产品、炼乳、鲜奶油、奶酪、冰淇淋和甜食产品、益生菌饮料或益生菌酸奶型饮料。
如本文所用的术语“药物制剂”是指包含至少一种药物活性剂、化学物质或药物的组合物。药物制剂可以是固体或液体形式，并且可包含至少一种本领域技术人员可识别的附加活性剂、载剂、溶媒、赋形剂或助剂。药物制剂可以是片剂、胶囊、颗粒、散剂、液体或糖浆的形式。如本文所用的术语“饮料产品”是指可以由个体安全食用的液体或半液体形式的营养产品。
如本文所用的术语“宠物食物产品”是指旨在由宠物食用的营养产品。如本文所提及的宠物或伴侣动物，应理解为选自狗、猫、鸟、鱼、啮齿类动物(例如，小鼠、大鼠和豚鼠、兔子)等的动物。
组合物的所有成分都可混合在一起，或者作为另外一种选择可以套盒的形式提供组合物，其中分别提供成分或成分组，并旨在由妇女一起消耗。
因此，套盒包括至少两种物理上分离的组合物，每一种都包含上述成分中的至少一种，其中物理上分离的组合物中的至少一种包含肌醇，并且物理上分离的组合物中的至少一种包含维生素B2，这是本发明的另一目的。
该物理上分离的组合物中的每一种都可进一步包含上述成分中的一种或多种。最优选地，第一组合物包含维生素B2和任选的上述其他维生素，第二组合物包含益生菌。可在第一组合物或第二组合物中提供肌醇，或者甚至在第一组合物或第二组合物中分别提供肌醇，但优选地在相同组合物中作为维生素提供。在本发明的一个优选实施方案中，套盒包括第一组合物和第二组合物，第一组合物包含肌醇和维生素B2，任选地具有除益生菌之外的上述任何其他维生素和/或营养物质，第二组合物包含益生菌。在一个最优选的实施方案中，套盒包括第一组合物和第二组合物，第一组合物包含肌醇、维生素B2、维生素B6、维生素B12、维生素D和锌，第二组合物包含益生菌。由于存在高浓度的矿物质或其他营养物质，将益生菌与其他成分分离是最优选的，以避免对益生菌的任何损伤。
针对本发明的目的，定期施用组合物(或套盒中的组合物)，例如一天两次、一天一次、每两天一次或每周一次。
在另一个实施方案中，本发明提供了用于生产供母亲施用的组合物的方法，该方法包括将肌醇与维生素B2并任选地与上述任何其他成分混合。
如上所述，除了本发明人发现供母亲施用且包含维生素B2和肌醇的组合物对于解决期望怀孕、孕妇和哺乳期妇女及其后代的具体营养需求特别有用之外，所述发明人还令人惊讶地发现，向个体施用维生素B2可增强哺乳动物细胞中的葡萄糖摄取。甚至更令人惊讶地，本发明人发现，当维生素B2与维生素D或维生素D和锌组合时，对增强哺乳动物细胞(尤其是哺乳动物肌肉细胞)中葡萄糖摄取具有改善作用。
因此，在孕前和/或孕期向个体施用维生素B2可预防和/或治疗怀孕个体或其后代的GDM和/或预防怀孕个体或其后代的GDM相关病症。
在本发明的另一个方面，提供了用于治疗或预防怀孕个体和/或其后代GDM及相关病症的维生素B2。
如上文所述，本发明人已惊讶地发现，维生素B2可用于提高哺乳动物细胞中的葡萄糖摄取，尤其是哺乳动物肌肉细胞中的葡萄糖摄取。因此，在孕前和/或孕期向个体施用维生素B2可预防和/或治疗怀孕个体或其后代的GDM和/或预防怀孕个体或其后代的GDM相关病症。本发明人还发现，当在孕前和孕期施用补充维生素B2时，相较于未施用补充剂量的小鼠，杂合db/db小鼠具有较低的空腹血糖浓度。
如本文所用的术语“个体”是指哺乳动物，更具体地讲是指猫、狗或人。
如本文所用的术语“GDM”是指在孕期出现或首次发现的任何程度的葡萄糖耐量受损。
无论哺乳动物是否葡萄糖耐量受损，均可通过检测其空腹血浆葡萄糖浓度或通过进行口腔葡萄糖耐受性测试(OGTT)来确定。本领域技术人员将熟悉这些测试和诊断葡萄糖耐量受损的标准，并因此熟悉诊断GDM的标准。根据载于由美国临床化学协会(AmericanAssociation for clinical chemistry,AACC)发布的临床生物化学国家科学院(NationalAcademy of clinical biochemistry,NACB)指南和糖尿病和妊娠研究组国际协会(international association of diabetes and pregnancy study group,IADPSG)指南中的标准，如果怀孕的人类个体的空腹血糖浓度等于5.1mmol/L或更多，或者如果在饮用75克葡萄糖饮料1小时后，其血糖浓度高于10mmol/L，或者如果在饮用75克葡萄糖饮料2小时后，其血糖浓度高于8.5mmol/L，则她们被认为是葡萄糖耐量受损。
如本文所用的术语“治疗”包括一种状态的改善和/或减轻，即病症症状的改善和/或减轻。其可例如涵盖降低个体的病症严重程度。
如本文所用的术语“预防”是指预防个体发生病症或降低个体发生病症的风险。
可使用适合怀孕个体摄入的任何来源或形式的维生素B2。具体地讲，维生素B2可以是核黄素，例如以商标Riboflavin Universal出售的核黄素。
维生素B2的代谢物可选自黄素单核苷酸(下文称为FMN)、黄素腺嘌呤二核苷酸(下文称为FAD)以及它们的盐(例如，核黄素-5'-磷酸钠盐)。
适合怀孕个体摄入的任何来源或形式的肌醇都可用于本发明中。
肌醇的代谢物可选自D-手性肌醇、L-手性肌醇和它们的组合。具体地讲，代谢物是D-手性肌醇。
维生素B2与肌醇(顺式-1,2,3,5-反式-4,6-环己六醇)和/或一种或多种益生菌和/或维生素B6、B12和D中的一种或多种和/或锌的组合对于治疗和/或预防怀孕个体和/或其后代的GDM及其相关病症特别有效。维生素B2与这些所列成分的组合可提供改善的作用，例如，大于累加效应或协同效应，该作用优于根据单独使用单独成分来治疗或预防怀孕个体和/或其后代的GDM及其相关病症时单独成分的作用所期望的作用。
因此，在一个实施方案中，维生素B2与肌醇和/或维生素B6、B12和D中的一种或多种和/或一种或多种益生菌和/或锌组合使用。
具体地讲，本发明人已发现，与单独使用维生素B2或维生素D相比，当维生素B2与维生素D组合使用时，改善增强了葡萄糖摄取。并且更具体地讲，本发明人已发现，与单独使用维生素B2、锌或维生素D相比，当维生素B2与维生素D和锌组合使用时，改善增强了葡萄糖摄取，并且这种改善增强可大于累加(效应)。
此外，本发明人已发现，与补充维生素B2结合施用肌醇的小鼠在孕期或孕前具有令人惊讶的低空腹血糖浓度，并且更进一步地，本发明人已发现，当在孕期与补充维生素B2结合施用肌醇时，杂合db/db小鼠具有令人惊讶的较低的腹膜后脂肪沉积。
因此，在一个具体的实施方案中，维生素B2与维生素D和/或锌中的一种或多种组合使用。
适合怀孕个体摄入的任何来源或形式的维生素B6、B12和D和/或锌都可用于本发明中。
具体地讲，维生素B6可以是盐酸吡多醇，和/或选自5'-磷酸吡哆醛(下文称为PLP)的维生素B6代谢物。
具体地讲，维生素B12可以是氰钴胺素，和/或选自羟钴胺素、甲基钴胺素、腺苷钴胺素的维生素B12代谢物，以及它们的组合。
具体地讲，维生素D可以是维生素D2、维生素D3、选自7-脱氢胆固醇的维生素D的前体、选自25-羟基维生素D3、1,25-二羟维生素D3、25-羟基维生素D2、1,25-二羟维生素D2的维生素D的代谢物以及任何前述的组合。
更具体地讲，维生素D是维生素D3、选自25-羟基维生素D3、1,25-二羟维生素的维生素D的代谢物以及任何前述的组合。甚至具体地讲，维生素D3是胆钙化醇。
具体地讲，益生菌是活益生菌、非复制型益生菌、死益生菌、无活力益生菌以及它们的任何组合。更具体地讲，益生菌是活益生菌。
一种或多种益生菌可以是任何乳酸菌、双歧杆菌(Bifidobacteria)或它们的组合，其中已经确定了所述乳酸菌和双歧杆菌的益生特性。乳酸菌菌株的非限制性实例包括：尤其是可从维利奥公司(Valio Oy of Finland)购得的商标为LGG的鼠李糖乳杆菌ATCC53103，以及由雀巢研发上海有限公司(NestléR&D centre Shanghai Ltd)(中国上海市嘉定区曹安路13号桥南，邮编201812))保藏的鼠李糖乳杆菌，其保藏在中国普通微生物菌种保藏中心(CGMCC)并且可以保藏号CGMCC 1.3724获得的鼠李糖乳杆菌。双歧杆菌菌株的非限制性实例包括：保藏在法国国家微生物保藏中心(Collection Nationale de CulturesDe Microorganismes,CNCM)的CNCM I-3446、尤其是由丹麦科汉森集团公司(ChristianHansen company of Denmark)以商标名Bb12出售的乳双歧杆菌；由日本的森永奶粉产业有限公司(Morinaga Milk Industry Co.Ltd.)以商标名BB536出售的长双歧杆菌ATCC BAA-999；由丹尼斯克公司(Danisco)以商标名Bb-03出售的短双歧杆菌的菌株；由森永公司(Morinaga)以商标名M-16V出售的短双歧杆菌的菌株；以及由拉曼集团罗塞尔研究院(Institut Rosell(Lallemand))以商标名R0070出售的短双歧杆菌的菌株。
在一个具体实施方案中，一种或多种益生菌是鼠李糖乳杆菌CGMCC1.3724和乳双歧杆菌CNCM I-3446的混合物。
鼠李糖乳杆菌CGMCC 1.3724和乳双歧杆菌CNCM I-3446可以1:99至99:1的比例使用，但更具体地讲，它们将以1:2至2:1、甚至更具体地以1:1的比例使用。
可以任何有效剂量使用任选地与肌醇和/或一种或多种益生菌和/或维生素B6、B12和D中的一种或多种和/或锌组合的维生素B2，所述有效剂量会关于治疗或预防怀孕个体和/或其后代的GDM及其相关病症提供益处。
有效剂量可以是以任何程度改善怀孕个体的葡萄糖耐量受损的任何剂量。
确定有效剂量完全在本领域技术人员的能力范围内。通常，有效剂量将取决于个体的类型、年龄、体型和健康状态，取决于个体的生活方式，以及取决于个体的遗传基因。
可例如通过测试剂量对个体的空腹血糖浓度或通过进行OGTT来确定有效剂量。有效剂量应改善个体的空腹血糖浓度并降低个体的升糖反应。
维生素B2的具体有用剂量可以是0.14mg至14mg、1mg至2.5mg、1.5mg至2mg或1.8mg。
如果存在，肌醇的具体有用剂量可以是0.2mg至5mg、1.5mg至5mg、2g至4g或2g。
特别有用的一种或多种益生菌(如果存在)剂量是10e5至10e12个菌落形成单位(cfu)，或10e7至10e11个cfu。
特别有用的维生素B6(如果存在)剂量是0.19mg至19mg，或2.6mg。特别有用的维生素B12(如果存在)剂量是0.26μg至26μg，或5.2μg。特别有用的维生素D(如果存在)剂量是1.5μg至100μg，或10μg。
如果存在，锌的具体有用剂量可以是1.1mg至40mg或10mg。
如本文所用的术语“剂量”是指在孕前和/或孕期和/或哺乳期向个体施用的每日量。每日量或剂量可一次性全部施用，或者可在一天内分若干次施用。剂量可通过任何已知的方法施用，尤其是经胃肠内施用，例如口服。
一种或多种剂量可在任何时间施用，例如白天或夜间。如果在个体食用食物或饮用饮料(例如，食用正餐或零食)之前施用，则剂量可特别有效。
在一个实施方案中剂量分2次施用，具体地讲，剂量分2次施用，早上一次，晚上一次，具体为在早餐前和晚餐前。
如本文所用的术语“早餐”是指当天的第一餐。
如本文所用的术语“晚餐”是指当天的最后一餐。
在本发明的另一个方面，提供了用于治疗或预防怀孕个体和/或其后代GDM及其相关病症的套盒，所述套盒包括：
a.维生素B2，以及任选的肌醇和/或一种或多种益生菌和/或维生素
B6、B12和D中的一种或多种和/或锌
b.标签，该标签指示怀孕个体的剂量要求。
剂量需求可以是每天施用2次，具体地讲，每天在食用任何食物或饮用任何饮料之前施用2次。更具体地讲，每天施用2次，其中早上一次，晚上一次。甚至更具体地讲，每天施用2次，其中早上早餐前一次，晚上晚餐前一次。
可以提供所述维生素或者一种或多种益生菌持续释放的模式提供全部维生素B2、肌醇、一种或多种益生菌和维生素B6、B12和D中的一种或多种。这样，可降低消耗这些化合物的频率，同时仍能持续供给身体足量的这些化合物。
当维生素B2与肌醇和/或一种或多种益生菌和/或维生素B6、B12和D中的一种或多种和/或锌组合使用时，可在相同组合物中作为所述肌醇和/或一种或多种益生菌和/或维生素B6、B12和D中的一种或多种和/或锌施用。作为另一种选择，可向所述维生素B2分开施用所述肌醇和/或一种或多种益生菌和/或维生素B6、B12和D中的一种或多种和/或锌中的一种或多种，例如，可向所述一种或多种益生菌中分开施用维生素B2(任选地与肌醇和维生素B6、B12和D中的一种或多种和/或锌一起)。分开施用可以是同时但分开施用，例如，可向所述一种或多种益生菌中同时但分开施用维生素B2(任选地与肌醇和维生素B6、B12和D中的一种或多种和/或锌一起)，例如，以两片剂(例如，在5分钟、4分钟、3分钟、2分钟、1分钟内)向所述一种或多种益生菌中分开并相继连续快速施用。
任选地与肌醇和/或一种或多种益生菌和/或维生素B6、B12和D中的一种或多种和/或锌组合的维生素B2意在用于向期望怀孕的个体、怀孕个体和/或哺乳期个体施用。具体地讲，向期望怀孕的个体和/或怀孕个体施用。更具体地讲，将向怀孕个体施用。
如果向期望怀孕的个体施用任选地与肌醇和/或一种或多种益生菌和/或维生素B6、B12和D中的一种或多种和/或锌组合的维生素B2，则其可例如在怀孕或期望怀孕前至少1、2、3或4个月期间施用。如果向怀孕个体施用任选地与肌醇和/或一种或多种益生菌和/或维生素B6、B12和D中的一种或多种和/或锌组合的维生素B2，则根据个体的妊娠期，其可在整个孕期或部分孕期施用，例如至少4周、至少8周、至少12周、至少16周、至少20周、至少24周、至少28周、至少36周。也可在所述个体的整个哺乳期或部分哺乳期内继续施用。
由于在怀孕中三个月和末三个月中GDM的风险增加，所以，在怀孕中三个月和末三个月中施用可能特别有益。
可以适合个体摄入的任何形式施用或使用任选地与肌醇和/或一种或多种益生菌和/或维生素B6、B12和D中的一种或多种和/或锌组合的维生素B2，例如，可以组合物(例如，粉末状营养组合物)、食物产品、功能性食物产品、饮料、乳制品、药物制剂、宠物食物产品、营养品、(例如)将洒在食物上或溶解于水性介质(例如水或果汁)或牛奶中的营养补充剂(例如，粉末状营养补充剂)的形式使用。
当组合物是粉末状营养组合物的形式时，其还可包括蛋白质源、碳水化合物源和脂质源，可能与卵磷脂一起。该组合物还可包括大豆卵磷脂和/或膨松剂。蛋白质源可以是奶粉或脱脂奶粉。蔗糖和/或麦芽糖糊精可用作碳水化合物源。脂质源可以是植物油。作为另一种选择或除此之外，制剂还可包含葡萄糖浆、乳脂、柠檬酸镁、胆碱盐和胆碱酯、益生元纤维和/或抗坏血酸棕榈酸酯。例如，可添加风味物化合物(例如，可可粉或蜂蜜)来提供不同口味。
任选地与肌醇和/或一种或多种益生菌和/或维生素B6、B12和D中的一种或多种和/或锌组合的维生素B2还可与其他维生素和矿物质组合使用。例如，政府机构(诸如USRDA)建议在孕期补充维生素和矿物质，例如，钙、镁、磷、铁、铜、碘、硒、维生素A或视黄醇活性当量(RAE)(例如β-胡萝卜素或类胡萝卜素的混合物)、维生素C、维生素B1、烟酸、叶酸、生物素、维生素E。
如果任选地与肌醇和/或一种或多种益生菌和/或维生素B6、B12和D中的一种或多种和/或锌组合的维生素B2与下列微量营养素中的一种或多种以下列量组合使用，可特别有益：100mg至2500mg钙、35mg至350mg镁、70mg至3500mg磷、2.7mg至45mg铁、0.1mg至10mg铜、22μg至1100μg碘、6μg至400μg硒、例如β-胡萝卜素或类胡萝卜素混合物形式的77μg至3000μg的维生素A或视黄醇活性当量(RAE)、8.5mg至850mg维生素C、0.14mg至14mg维生素B1、1.8mg至35mg烟酸、60μg至1000μg叶酸、3μg至300μg生物素、1.9μg至109μg维生素E。
任选地与肌醇和/或一种或多种益生菌和/或维生素B6、B12和D中的一种或多种和/或锌组合的维生素B2还可有利地与至少一种低聚糖和/或至少一种长链多不饱和脂肪酸(诸如花生四烯酸(ARA)，二十碳五烯酸(EPA)和/或二十二碳六烯酸(DHA))组合使用。寡糖和长链多不饱和脂肪酸可以对个体施用安全的任何浓度使用。
任选地与肌醇和/或一种或多种益生菌和/或维生素B6、B12和D中的一种或多种和/或锌组合的维生素B2还可与通常以(其所采用)组合物形式使用的其他成分组合使用，例如，粉末状营养补充剂或食物产品。此类成分的非限制性示例包括：其他营养物质，例如选自脂质(除DHA和ARA之外的任选脂质)、碳水化合物和蛋白质、微量营养素(除了上面列出的那些之外)或药物活性剂；常规食物添加剂，例如抗氧化剂、稳定剂、乳化剂、酸化剂、增稠剂、缓冲剂或用于pH调节的试剂、螯合剂、着色剂、赋形剂、调味剂、渗透剂、药学上可接受的载剂、防腐剂、糖、甜味剂、质构剂、乳化剂、水、以及它们的任何组合。
然而，如上所述，孕期的高脂肪摄入和/或母亲PUFA补充已与后代较高的肥胖症风险的升高联系起来。因此，在一个具体实施方案中，任选地与肌醇和/或一种或多种益生菌和/或维生素B6、B12和D中的一种或多种和/或锌组合的维生素B2未与长链多不饱和脂肪酸和/或动物脂肪和/或植物脂肪组合使用。
在一个具体实施方案中，任选地与肌醇和/或一种或多种益生菌和/或维生素B6、B12和D中的一种或多种和/或锌组合的维生素B2未与寡糖组合使用。
如上文所述，GDM与影响怀孕个体和/或其后代的各种病症相关联。如果GDM提高了个体在孕期期间、生产期间、生产后或者所述怀孕个体或其后代的以后生活中罹患或发展成病症的风险，则GDM被认为是与该病症相关联。
与GDM相关联、影响怀孕个体和/或其后代的病症的非限制性实例包括：早产和剖宫产、对母亲或婴儿的出生损伤、肩难产、巨大儿、后代血糖浓度过高、后代在出生后和在以后生活中的超重/肥胖症以及相关的代谢紊乱(例如，II型糖尿病、脂肪肝疾病和肥胖)，以及母亲在生产后和在以后生活中罹患或发展成II型糖尿病的风险增加。因此，通过治疗或预防GDM，任选地与肌醇和/或一种或多种益生菌和/或维生素B6、B12和D中的一种或多种和/或锌组合的维生素B2还可用于治疗或预防这些怀孕个体和/或其后代的这些病症。
在本发明的另一个方面，提供了任选地与肌醇和/或一种或多种益生菌和/或维生素B6、B12和D中的一种或多种和/或锌组合的维生素B2，用于在生产治疗和/或预防怀孕个体和/或其后代的GDM及其相关病症的药物中，其中在孕前和/或孕期和/或哺乳期向所述个体施用所述药物。
在本发明的另一个方面，提供了治疗和/或预防怀孕个体和/或其后代的GDM及其相关病症的方法，所述方法包括在孕前和/或孕期和/或哺乳期向所述个体施用任选地与肌醇和/或一种或多种益生菌和/或维生素B6、B12和D中的一种或多种和/或锌组合的维生素B2。
如果个体超重或肥胖，如果有GDM或II型糖尿病的家族史，则个体在孕前患有GDM的情况更为普遍。如果个体是人类且超过25岁，并且如果个体是人类且是黑人、西班牙裔、美洲印第安人或亚洲人。
因此，对于治疗和/或预防个体的这些子集中一个或多个的GDM，任选地与肌醇和/或一种或多种益生菌和/或维生素B6、B12和D中的一种或多种和/或锌组合的维生素B2可特别有益。
如本文所述，维生素B2和本文所公开的任何其他任选成分可包含在组合物中，诸如本发明的组合物，其可通过本文所载的任何方法或用途使用。
本领域的技术人员将理解，他们可以自由地组合本文所公开的本发明的所有特征。具体地讲，可将针对本发明不同实施例所描述的特征进行组合。对于具体的特征如果存在已知的等同物，则这些等同物被纳入，如同在本说明书中明确提到这些等同物。根据附图和非限制性实施例，本发明的其他优点和特征将显而易见。
现在将通过以下实施例更详细地描述本发明。
实施例
实施例1
包含与肌醇、维生素B6、B12和D以及鼠李糖乳杆菌GG1和乳双歧杆菌BB122组合的维生素B2的示例性组合物载于表1中。
表1中的组合物用于粉末形式的营养补充剂，该粉末形式的营养补充剂旨在喷洒到食物上。
表1：实施例1的组合物
1)以名称CGMCC 1.3724保藏的菌株
2)以名称CNCM I-3446保藏的菌株
该组合物可以作为套盒提供，该套盒包含在一个小袋中的益生菌粉末和在第二小袋中的所有其他成分。
实施例2
提供了将在水中重构的用于孕妇的奶粉饮料，该奶粉饮料由与表1中所列成分混合的每份30g奶粉组成，其量是表1中提及的一半。在孕期的至少末三个月期间，向孕妇每天两次施用该组合物。
实施例3
在短期(2小时)和长期(24小时)培养之后，测量维生素B2对L6分化的肌肉细胞中葡萄糖摄取的作用。
成分G是指维生素B2，成分k是指1,25-二羟维生素D3，成分J是指氯化锌。
在1μM处测试成分G。在10nM处测试成分K，在20μM处测试成分J。
在实验当天，将成分在含有5.5mM D-葡萄糖的无血清培养基(DMEM)中稀释，以达到最终测试浓度和0.1％的DMSO。
将L6成肌细胞保持在生长培养基或补充有10％胎牛血清(FBS)、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的DMEM 25mM葡萄糖中。对于葡萄糖摄取的研究，以1000-1500个细胞/孔的密度在0.5mL的生长培养基中的24孔板上培养细胞。涂板后五天，在含有2％FBS、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的DMEM 25mM葡萄糖中，在37℃下、5％CO2气氛下进行分化诱导成肌管。每隔一天更换一次培养基。
对于短期培养(2小时)，在测试前一天，用含有0.25％BSA、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的DMEM 25mM D-葡萄糖替代培养基。在测试后一天和测试前一天，洗涤细胞并在含有5.5mM D-葡萄糖、0.25％BSA的DMEM中、在各成分存在的情况下无胰岛素培养2小时。
对于长期培养(24小时)，在测试前一天，在含有0.25％BSA、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的DMEM 25mM D-葡萄糖中，将细胞在测试成分(成分J、K或它们的组合)存在的情况下无胰岛素预培养22小时。在测试之后一天和测试之前一天，洗涤细胞并在含有5.5mMD-葡萄糖、0.25％BSA的DMEM中、在各测试成分存在的情况下无胰岛素再培养2小时。
通过培养有放射标记的2-脱氧-D-[1,2 3H]葡萄糖的细胞15分钟来测量葡萄糖摄取。通过在冰冷的PBS 1X中的两个洗涤步骤阻止葡萄糖摄取。然后将细胞在0.1N NaOH中溶解30分钟。然后计数与放射活性相关的细胞，并使用比色Lowry法确定蛋白质定量。
一式三份地测试每种成分。
以pmol掺入葡萄糖/min/mg蛋白质和以对照或基础状态(100％)的百分比来表示结果。
进行允许多重比较(单向ANOVA，然后是Dunnett的t测试；*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001相对于对照状态)的统计分析。相较于对照或基础状态，显示葡萄糖摄取显著上升的所有成分被认为是活性的。
结果示于图3至图5中。
如从图3可以看出，在无胰岛素短期培养(2小时)和长期培养(24小时)后，具有成分G的L6分化的肌肉细胞中观察到葡萄糖摄取增加。
如从图4可以看出，在无胰岛素短期培养(2小时)和长期培养(24小时)后，具有成分G和成分K的组合的L6分化的肌肉细胞中观察到葡萄糖摄取增加。
如从图5可以看出，在无胰岛素短期培养(2小时)后，具有成分G、K和成分J的组合的L6分化的肌肉细胞中观察到葡萄糖摄取增加。
实施例4
动物
雄性和雌性杂合db/db小鼠(瘦蛋白受体db/+)源自Jackson实验室(JacksonLaboratories)(美国)，并建立繁殖地(新西兰鲁亚库拉(Ruakura,New Zealand))。
对雌性小鼠进行基因分型，然后在21天龄断奶，给予野生型(瘦蛋白受体+/+)和杂合(瘦蛋白受体db/+)小鼠AIN-93G饮食(表2中具体给出的组合物)。在28天龄时，进行口服葡萄糖耐受性测试(OGTT)，然后随机给予小鼠4种饮食中的一种：
1-AIN-93G对照
2-用肌醇补充的AIN-93G
3-用维生素B2补充的AIN-93G
4-用肌醇和维生素B2补充的AIN-93G
表2中具体给出了AIN-93G的组合物。
在实验饮食之前和之后进行进一步的OGTT。
以相同的方法进行所有OGTT。简言之，使小鼠禁食6小时(从上午7点至下午1点)。使用手持式血糖仪(Abbott的Freestyle Optimum血糖仪)测量从尾端取出血液的空腹血糖。然后小鼠接受通过灌服输送的葡萄糖刺激-2g/kg。在葡萄糖刺激后的30、60、90和120分钟时，使用血糖仪测量血糖浓度。
在12周龄时，将雌性鼠与基因型匹配的雄性鼠安置在一起，直至观察到阴道栓，指示妊娠日0.5(怀孕期＝19.5天)。在整个妊娠期中保持给予雌性小鼠它们的分配实验饮食。在妊娠日16.5进行OGTT。
在妊娠日18.5，禁食6小时后，宰杀小鼠。得到空腹血液样本和腹膜后脂肪垫。
表2：AIN-93G饮食
表2b–添加至AIN-93G的维生素混合物
成分 g 10g中的量
维生素A，醋酸酯(500,000IU/gm) 0.8 4000IU
维生素D3(100,000IU/gm) 1 1,000IU
维生素E醋酸酯(500IU/gm) 15 75IU
叶绿醌 0.075 0.75mg
生物素，1.0％ 2 0.2mg
氰钴胺，0.1％ 2.5 25μg
叶酸 0.2 2mg
烟酸 3 30mg
泛酸钙 1.6 16mg
盐酸吡哆醇 0.7 7mg
核黄素 0.6 6mg
盐酸硫胺 0.6 6mg
蔗糖 971.925
总计 1000
表2c–实验饮食中肌醇和维生素B2的补充量
饮食组 存在肌醇的量 存在维生素B2的量
1 0g 6mg/kg饮食
2 10g/kg饮食 6mg/kg饮食
3 0g 24mg/kg饮食
4 10g/kg饮食 24mg/kg饮食
结果
表3–4周龄的野生型和杂合小鼠的血糖浓度和AUC平均值+/-标准误差均值
如从表3和图8可以看出，在随机施加实验饮食前，野生型和杂合雌性小鼠的OGTT之间无差别。
表4-空腹血糖(妊娠日18.5)测量–数据表示为平均值+/-标准误差均值
饮食组 18.5天时的空腹血糖(mmol/L)
野生型组1 7.1+/-0.9
杂合组1 9.2+/-0.7
杂合组2 8.2+/-0.8
杂合组3 8.1+/-0.8
杂合组4 6.9+/-1.0
如从图6和表4的数据可以看出，在妊娠期末，相较于单独施用肌醇或益生菌的杂合小鼠或施用肌醇或B2的杂合小鼠，施用维生素B2和肌醇组合的杂合小鼠表现出具有较低空腹血糖水平。
表5-腹膜后脂肪垫和性腺脂肪的重量，平均值+/-标准误差均值
饮食组 腹膜后脂肪垫的重量(g) 性腺脂肪(g)
野生型组1 0.078+/-0.008 0.24+/-0.02
杂合组1 0.152+/-0.041 0.32+/-0.04
杂合组2 0.120+/-0.021 0.30+/-0.04
杂合组3 0.164+/-0.040 0.42+/-0.05
杂合组4 0.112+/-0.010 0.27+/-0.04
如从图7和/或表5的数据可以看出，在妊娠期末，相较于单独施用肌醇或益生菌的杂合小鼠或施用肌醇或B2的杂合小鼠，施用维生素B2和肌醇组合的杂合小鼠表现出具有较低腹膜后脂肪垫重量和较低性腺脂肪重量。
表6–12周龄时OGTT后的空腹血糖浓度平均值+/-标准误差均值
饮食组 0分钟(mmol/L) 30分钟(mmol/L)
野生型组1 9.1+/-1.1 21.7+/-1.9
杂合组1 8.3+/-0.4 17.6+/-1.2
杂合组2 7.5+/-0.8 16.7+/-1.2
杂合组3 8.4+/-1.0 17.1+/-1.5
杂合组4 6.9+/-0.8 16.6+/-1.9
如从表6的数据可以看出，在12周龄时(妊娠期之前)，相较于不施用肌醇或B2的杂合小鼠或施用肌醇的杂合小鼠，施用维生素B2和/或维生素B2和肌醇组合的杂合小鼠表现出具有较低空腹血糖浓度。
表7-在妊娠日18.5测量的血浆瘦蛋白浓度(平均值+/-标准误差均值)
如从表7的数据和图17可以看出，在妊娠日18.5时，相较于不施用肌醇或B2的杂合小鼠或施用肌醇的杂合小鼠，施用维生素B2和肌醇组合的杂合小鼠表现出具有较低血浆瘦蛋白浓度。
表8-口服葡萄糖耐受性测试结果-在妊娠日16.5时测量(平均值+/-标准误差均 值)
如从表8的数据可以看出，在妊娠日16.5时，相较于施用肌醇或B2的杂合小鼠，施用B2和/或维生素B2和肌醇组合的杂合小鼠表现出具有较低空腹血糖浓度和AUC。
实施例5
在短期(2小时)和长期(24小时)无胰岛素培养之后，测量维生素B2对胰岛素抗体L6分化的肌肉细胞中葡萄糖摄取的作用。
成分G是指维生素B2，并且在1μM处测试。
在实验当天，将成分G在含有5.5mM的D-葡萄糖无血清培养基(DMEM)中稀释，以得到最终测试浓度和0.1％的DMSO。
将L6成肌细胞保持在生长培养基或补充有10％胎牛血清(FBS)、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的DMEM 25mM葡萄糖中。对于葡萄糖摄取的研究，以1000-1500个细胞/孔的密度在0.5mL的生长培养基中的24孔板上培养细胞。涂板后五天，在含有2％FBS、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的DMEM 25mM葡萄糖中，在37℃下、5％CO2气氛下进行分化诱导成肌管。每隔一天更换一次培养基。
对于短期培养(2小时)，在测试前一天，在含有0.25％BSA、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的DMEM 25mM D-葡萄糖中培养细胞18小时。在测试之后一天和测试之前一天，洗涤细胞并在含有5.5mM D-葡萄糖、0.34％BSA、300μM棕榈酸盐(PALM)的DMEM中无胰岛素再培养6小时。培养时间结束前2小时，将维生素B2以1μΜ的终浓度加入到培养基。
对于长期培养(24小时)，在测试前一天，在含有0.25％BSA、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的DMEM 25mM D-葡萄糖中，将细胞在维生素B2(1μM)存在的情况下无胰岛素预培养18小时。在测试之后一天和测试之前一天，洗涤细胞并在含有5.5mM D-葡萄糖、0.34％BSA、300μM棕榈酸盐(PALM)的DMEM中在维生素B2(1μM)存在的情况下无胰岛素再培养6小时。
通过培养有放射标记的2-脱氧-D-[1,2 3H]葡萄糖的细胞15分钟来测量葡萄糖摄取。通过在冰冷的PBS 1X中的两个洗涤步骤阻止葡萄糖摄取。然后将细胞在0.1N NaOH中溶解30分钟。然后计数与放射活性相关的细胞，并使用比色Lowry法确定蛋白质定量。
一式三份地测试每种成分。
以pmol掺入葡萄糖/min/mg蛋白质和以对照的百分比来表示结果。
进行允许多重比较(单向ANOVA，然后是Dunnett的t测试；*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001相对于对照状态)的统计分析。相较于对照，显示葡萄糖摄取显著上升的所有成分被认为是活性的。
结果在图10中示出。
实施例6
将从查尔斯河实验室(Charles River)(法国和美国)购得的80只体重相近的4-5周龄雌性未交配Goto Kakizaki(GK)在控温室(22±1℃)中以12小时的光照/黑暗循环单独笼养，并持续喂食AIN-93G啮齿动物生长饮食(研究饮食，美国表9)。
驯化一周后，在基于AUC葡萄糖值和体重进行随机化后将GK大鼠分成4组(n＝20)并接受如下相应处理10周：
1.对照组：GK雌鼠随意食用AIN-93G饮食+对照明胶(表10)。
2.肌醇组：GK雌鼠随意食用补充肌醇饮食(每100g饮食含1g肌醇*)的AIN-93G饮食+对照明胶(表10)。
3.益生菌组：GK雌鼠随意食用AIN-93G+含有109LPR CFU和109乳双歧杆菌CFU的明胶(表10)。
4.混合组：GK雌鼠随意食用补充肌醇饮食(每100g饮食含1g肌醇*)的AIN93G饮食+含有109LPR CFU和109乳双歧杆菌CFU的明胶(表10)。
*柯驰医药有限公司(Kirsh Pharma)
在15周龄时，将雌性大鼠与Wistar雄性大鼠(法国查尔斯河实验室(CharlesRivers,France))合笼，直到观察到阴道栓，这指示妊娠第0.5天。雌性大鼠在整个妊娠期间保持喂食为其所分配的实验饲料。在妊娠16.5天对所有雌性(每组n＝20)进行OGTT，在妊娠19.5天在禁食6小时后处死一半动物(每组n＝9-11)。
表9：AIN-93G研究饲料
表10：实验明胶的组成
处理 对照
明胶(g) 12 12
糖精(mg) 0.06 0.06
益生菌(g)* 7.7 0
麦芽糖糊精混合物(g) 0 6.7
总干物质+水(mL) 80.2 81.2
总计(mL) 99.96 99.96
*预混料含有2.53E+10cfu/g鼠李糖乳杆菌(NCC4007)和1.58E+10cfu/g的乳双歧杆菌(NCC2818)。
测量和分析
生理测量和样品收集：
·将5周龄和妊娠16.5天的所有动物在白天食物剥夺6小时后(从上午7.30至下午13.30)后进行口服葡萄糖耐受性测试(OGTT)。在OGTT期间，从尾静脉采集两个基线血样，其中在取样(时间-10和0)之间间隔至少10分钟，随后以1.5g/Kg体重的剂量经口灌服葡萄糖溶液(20％重量体积比(wt/v))。然后在施用葡萄糖后15、30、45、60、90和120分钟时从尾部切口收集另外的血样。使用Contour Next血糖仪(瑞士苏黎世的拜耳公司(Bayer AG,Zurich,Switzerland))直接分析所有血样的血糖水平。
·在整个研究中每周测量动物的体重和食物摄取量2次。
·在治疗10周之前和之后通过使用核磁共振仪(EchoMRI TM2004，美国休斯顿声望科技医疗公司(Echo Medical Systems,Houston,USA))测量身体组成(体脂率、瘦体质量和身体水分含量)。从这些收集的数据，可以如下计算脂肪百分比变化和脂肪增量/体重增量：
·脂肪百分比变化：(治疗结束时的脂肪百分比-治疗开始前的脂肪百分比)
·脂肪增量/体重增量：(治疗期结束时的脂肪(g)-治疗开始前的脂肪(g))/(治疗期结束时的体重(g)-治疗开始前的体重(g))
·瘦体增量/体重增量：(治疗期结束时的瘦体(g)-治疗开始前的瘦体(g))/(治疗期结束时的体重(g)-治疗开始前的体重(g))
·脂肪增量：治疗期结束时的脂肪(g)-治疗开始前的脂肪(g)
·瘦体增量：治疗期结束时的瘦体(g)-治疗开始前的瘦体(g)
·脂肪量百分数：脂肪量(g)/体重*100
·瘦体质量百分数：瘦体质量(g)/体重*100
处死：在白天食物剥夺6小时(从上午7.30至下午13.30)之后，将雌鼠斩首，通过解剖收集器官，称重并立即在液氮中冷冻。将其保存在-80℃直至分析。
·胰岛素胰腺测量：在处死期间将胰腺称重，并保存在酸-乙醇-H2O溶液中，直至提取胰岛素以测定胰腺胰岛素，将胰腺用酸-乙醇(溶液体积比(v/v)：75％乙醇，1.5％的37％HCl和23.5％蒸馏水)匀浆化，并在-20℃下温育过夜。使用购自美国伊利诺伊州晶体化学公司(Crystal Chem.Inc(IL,USA))的试剂盒，通过ELISA方法测量上清液中的胰岛素含量。
结果：每次测量的平均值示于表9中。在图11至图14中还可以看到脂肪百分比变化、脂肪增量/体重增量、μg胰腺胰岛素/g胰腺的结果。
表11

Claims (15)

1.一种用于母亲施用的组合物，包含肌醇和维生素B2。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物还包含选自下述的至少一种维生素：维生素B6、维生素B12、维生素D和锌以及它们的混合物，并且其中每日剂量的所述组合物优选地包含0.14mg至14mg的维生素B2量和0.2mg至5mg的肌醇量。
3.根据权利要求2所述的组合物，其中如果存在维生素B6，则维生素B6的存在量为每日剂量中0.19mg至19mg，如果存在维生素B12，则维生素B12的存在量为每日剂量中0.26μg至26μg，如果存在维生素D，则维生素D的存在量为每日剂量中1.5μg至100μg，以及如果存在锌，则锌的存在量为每日剂量中1.1mg至40mg。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的组合物，其中所述组合物还包含益生菌，并且其中所述益生菌优选包括乳杆菌和双歧杆菌的组合，并且优选地，其中所述乳杆菌为可以保藏号CGMCC 1.3724获得的鼠李糖乳杆菌GG菌株，并且所述双歧杆菌为作为CNCM I-3446保藏的乳双歧杆菌BB12菌株。
5.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，所述组合物包含肌醇、维生素B2、维生素B6、维生素B12、维生素D、乳双歧杆菌BB12 CNCMI-3446和鼠李糖乳杆菌GG CGMCC 1.3724。
6.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物将向期望怀孕的妇女、孕妇或哺乳期妇女施用，并且优选地，其中所述组合物为将在牛奶或水中重构的粉末状营养组合物、食物产品、饮料、营养补充剂或营养品的形式。
7.一种套盒，包括至少两种物理上分离的组合物，每一种都包含权利要求5所述的成分中的至少一种，其特征在于，所述物理上分离的组合物中的至少一种包含肌醇，并且所述物理上分离的组合物中的至少一种包含维生素B2。
8.将如权利要求1-6中任一项所述的组合物用于治疗或预防怀孕个体和/或其后代的妊娠糖尿病及其相关病症的用途，其中在孕前和/或孕期和/或哺乳期向所述个体施用所述组合物。
9.根据权利要求8所述的组合物，其中所述个体为选自以下的哺乳动物：猫、狗、人类，并且其中优选地经胃肠内施用所述组合物，更优选地口服施用所述组合物，并且所述组合物优选地为粉末状营养组合物、食物产品、饮料、诸如粉末状营养补充剂的营养补充剂、或营养品。
10.根据权利要求8或9所述的组合物，其中所述与妊娠糖尿病相关的病症为早产和剖宫产、对母亲或婴儿的出生损伤、肩难产、巨大儿、后代血糖浓度过高、后代在出生后和在以后生活中的超重/肥胖症以及相关的代谢紊乱，例如II型糖尿病、脂肪肝疾病和肥胖，以及母亲在生产后和在以后生活中罹患或发展成II型糖尿病的风险增加。
11.维生素B2，其用于治疗或预防怀孕个体和/或其后代的妊娠糖尿病及与其相关病症，其中在孕前和/或孕期和/或哺乳期向所述个体施用所述维生素B2。
12.根据权利要求11所述的维生素B2，其中所述维生素B2与一种或多种肌醇、一种或多种益生菌和/或维生素B6、B12、D和锌中的一种或多种组合施用，并且其中所述维生素B2与一种或多种肌醇、一种或多种益生菌和/或维生素B6、B12、D和锌中的一种或多种分开地或相继地施用，并且其中所述与妊娠糖尿病相关的病症优选为早产和剖宫产、对母亲或婴儿的出生损伤、肩难产、巨大儿、后代血糖浓度过高、后代在出生后和在以后生活中的超重/肥胖症以及相关的代谢紊乱，例如II型糖尿病、脂肪肝疾病和肥胖，以及母亲在生产后和在以后生活中罹患或发展成II型糖尿病的风险增加。
13.一种治疗和/或预防怀孕个体和/或其后代的妊娠糖尿病及其相关病症的方法，包括在孕前和/或孕期和/或哺乳期向所述个体施用权利要求1-6中任一项所述的组合物或权利要求11或12所述的维生素B2。
14.根据权利要求7所述的套盒，其用于治疗或预防怀孕个体和/或其后代的妊娠糖尿病及其相关病症，所述套盒还包括指示个体剂量需求的标签。
15.根据权利要求1-6中任一项所述的组合物或根据权利要求11或12所述的维生素B2，其用于制备治疗和/或预防怀孕个体和/或其后代的妊娠糖尿病及其相关病症的组合物。
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