CN106566829A

CN106566829A - 一种核衣壳装配必需元件及其应用

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Publication number: CN106566829A
Application number: CN201610937372.6A
Authority: CN
Inventors: 黄智宏; 潘梦佳; 吴文碧; 袁美妗; 杨凯
Original assignee: National Sun Yat Sen University
Current assignee: National Sun Yat Sen University
Priority date: 2016-11-01
Filing date: 2016-11-01
Publication date: 2017-04-19
Anticipated expiration: 2036-11-01
Also published as: CN106566829B

Abstract

本发明涉及病毒核衣壳的装配领域，特别涉及一种杆状病毒的核衣壳装配必需元件及其在核衣壳装配和构建含有靶标核苷酸序列的载体等方面的应用。本发明公开的核衣壳装配必需元件包括位于甲型杆状病毒属的病毒基因组的45‑65图单位，优选47‑61图单位的位置内的DNA序列。NAE序列在核衣壳装配过程中起着必不可少的作用。由于杆状病毒在基因转导领域具有广阔的应用前景，利用本发明所发现的NAE序列，可以对杆状病毒基因转导载体进行改良，使其构建过程更加简便，靶标DNA容量更大，具有更良好的生物安全性，使之适用于所需的基因转导操作以及更适合基因治疗等临床应用的需求。

Description

一种核衣壳装配必需元件及其应用

技术领域

本发明涉及病毒核衣壳的装配领域，特别涉及一种杆状病毒的核衣壳装配必需元件及其在核衣壳装配和构建含有靶标核苷酸序列的载体等方面的应用。

背景技术

杆状病毒(baculovirus)是一类专一性感染昆虫的dsDNA病毒。杆状病毒的基因组是一个共价闭合的环状dsDNA分子，大小介于80-180kb，编码89-183个基因，包装在一个呈杆状并有囊膜包被的蛋白质衣壳中。其中，苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographacalifornica multiple nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)是杆状病毒的代表种。

杆状病毒可以产生两种形态的病毒粒子，分别是包埋型病毒粒子(occlusion-derived virion,ODV)和芽生型病毒粒子(budded virion,BV)。其中，BV的囊膜上有高效的膜融合蛋白GP64，可以使BV高效进入不同种类的细胞，所以杆状病毒可以用作基因转导载体。目前，杆状病毒基因转导载体具有广阔的应用前景，被认为可能是最理想的人体基因治疗载体之一。将外源基因克隆到杆状病毒的基因组中，可获得携带外源基因的重组病毒，作为基因转导载体可应用于各种动物细胞的基因转导、基础医学研究、基因治疗、疫苗接种、干细胞和细胞分化研究、药物筛选等不同领域中。与腺病毒(adenovirus)和慢病毒(lentivirus)基因转导载体相比，杆状病毒载体具有众多独特的优点：(1)生物安全性好，杆状病毒不能在哺乳动物细胞中复制，对细胞的毒性非常低，几乎不影响细胞生长；(2)可以高效转导包括节肢类、鱼类、两栖类、鸟类、哺乳类等不同物种的细胞，也可以转导包括干细胞和神经细胞等不同类型的细胞；(3)对插入片段的容量大，目前已知可容纳大小为38kb的外源片段，有助于同时转导多个基因和调控序列；(4)遗传操作简单，容易获得高滴度的重组病毒。

虽然杆状病毒基因转导载体具有众多优点，但仍存在一些缺点影响其进一步应用。其中，杆状病毒庞大的基因组是阻碍杆状病毒载体进一步用于基因治疗的因素之一。在昆虫细胞中，杆状病毒的基因组存在不稳定性，容易发生重组和片段丢失，不利于获得临床应用所需的载体。此外，虽然未有证据表明杆状病毒的基因能在哺乳动物细胞中发挥功能，但有研究指出在HeLa14和BHK细胞中，杆状病毒的少数基因可以发生转录，并使宿主的actin基因转录水平上调，但仍没有证据表明这些转录的病毒基因在哺乳动物细胞中具有功能。有转录组学研究表明，在杆状病毒转导的HEK293细胞中，虽然未发现细胞基因的转录水平受到影响，但部分病毒早期基因有表达。这些例子说明，杆状病毒作为基因转导载体仍有进一步改良的空间。研究杆状病毒核衣壳的装配机制，有助于增加杆状病毒载体的容量、解决其基因组稳定性不高和部分病毒基因在哺乳动物细胞中表达等问题。

杆状病毒含有37个核心基因。这些基因存在于所有已测序的杆状病毒中，主要参与病毒基因组复制，基因表达，病毒粒子组装和口服感染的过程。其中，ac83是最新发现的与杆状病毒核衣壳装配相关的核心基因。ac83全长2544bp，编码847个氨基酸，预测分子量为96.2kDa。Ac83蛋白含有一个几丁质结合结构域(Chitin-binding domain,CBD)。缺失CBD会使病毒丧失口服感染的能力，但不影响病毒在体外培养细胞中的增殖。另外，敲除ac83不影响病毒基因组的复制，但会完全阻断病毒核衣壳的装配，在电子显微镜下可以观察到细胞核中出现大量中空的衣壳前体。仅补回编码Ac83的451-600aa的基因序列即可以低水平地挽救病毒的增殖能力。对AcMNPV病毒粒子的囊膜衣壳分离实验和质谱检测都表明，Ac83位于AcMNPV病毒粒子的囊膜上，不是核衣壳的结构成分。免疫电镜观察也发现，Ac83不定位于核衣壳装配的场所。所以Ac83的定位特征不能很好地解释其参与病毒基因组装配的功能。

发明内容

本发明通过严谨的实验设计，发现了在甲型杆状病毒属(Alphabaculovirus)中存在一种核衣壳装配必需元件(NAE)。NAE序列在核衣壳装配过程中起着必不可少的作用。

通过本发明的分析发现，天然的NAE序列在甲型杆状病毒属定位于ac38基因及其同源基因的中，且位于其中的近3’端。也就是说，天然的NAE序列在病毒基因组中的位置具有一定的保守性，它们均分布在相应基因组的45-65图单位(map unit,m.u.)的位置。其中，在各杆状病毒基因组中，定义多角体蛋白基因所处位置为0m.u.，多角体蛋白基因的转录方向为正向。

因此，本发明之一提供了一种核苷酸序列，其包括与位于甲型杆状病毒属的病毒基因组的45m.u.-65m.u.的位置内的核苷酸序列相同的序列。

优选地，本发明的核苷酸序列包括与位于甲型杆状病毒属的病毒基因组的47m.u.-61m.u.的位置内的核苷酸序列相同的序列；更优选地，本发明的核苷酸序列包括与位于甲型杆状病毒属的病毒基因组的47.9m.u.-60.8m.u.的位置内的核苷酸序列相同的序列。

在明确一段核苷酸序列的应用功能之后，本领域的技术人员容易理解其一般存在最短的功能核心序列，例如来自生物的天然DNA全长基因序列(以起始密码子起始，以终止密码子终止的DNA序列)中一般会存在一些非必需的DNA序列，但只要存在其中的核心DNA序列即可行驶其功能；或者改变一个或几个可变区的可变位点上的三联体密码子(对于非编码DNA序列，则是核苷酸残基)也不会影响其功能；或者在其起始密码子之后或终止密码子之前添加至少一个的三联体密码子(对于非编码DNA序列，则是在其5’端或3’端添加至少一个核苷酸残基)同样不会影响其功能，例如添加用来纯化的组氨酸标签，或者绿色荧光蛋白等融合蛋白都是基于这样的原理。因此，在包括核衣壳装配必需元件的必要的最短核心序列，或者只要包括其保守序列的情况下，改变可变区或可变位点上的核苷酸残基，或者在其5’端或3’端添加至少一个的核苷酸残基，都不影响核衣壳装配必需元件的功能。

因此，优选地，在一个具体实施例中，所述核苷酸序列具有不超过500nt/bp的核苷酸残基。例如，本发明的核苷酸序列包括与位于甲型杆状病毒属的病毒基因组的45m.u.-65m.u.的位置内的核苷酸序列相同的序列，且所述核苷酸序列具有不超过500nt/bp的核苷酸残基。或者本发明的核苷酸序列包括与位于甲型杆状病毒属的病毒基因组的47m.u.-61m.u.的位置内的核苷酸序列相同的序列，且所述核苷酸序列具有不超过500nt/bp的核苷酸残基。或者本发明的核苷酸序列包括与位于甲型杆状病毒属的病毒基因组的47.9m.u.-60.8m.u.的位置内的核苷酸序列相同的序列，且所述核苷酸序列具有不超过500nt/bp的核苷酸残基。

在一个具体实施例中，所述核苷酸序列具有不超过450nt/bp的核苷酸残基。例如，本发明的核苷酸序列包括与位于甲型杆状病毒属的病毒基因组的45m.u.-65m.u.的位置内的核苷酸序列相同的序列，且所述核苷酸序列具有不超过450nt/bp的核苷酸残基。或者本发明的核苷酸序列包括与位于甲型杆状病毒属的病毒基因组的47m.u.-61m.u.的位置内的核苷酸序列相同的序列，且所述核苷酸序列具有不超过450nt/bp的核苷酸残基。或者本发明的核苷酸序列包括与位于甲型杆状病毒属的病毒基因组的47.9m.u.-60.8m.u.的位置内的核苷酸序列相同的序列，且所述核苷酸序列具有不超过450nt/bp的核苷酸残基。

在一个具体实施例中，所述核苷酸序列具有不超过400nt/bp的核苷酸残基。例如，本发明的核苷酸序列包括与位于甲型杆状病毒属的病毒基因组的45m.u.-65m.u.的位置内的核苷酸序列相同的序列，且所述核苷酸序列具有不超过400nt/bp的核苷酸残基。或者本发明的核苷酸序列包括与位于甲型杆状病毒属的病毒基因组的47m.u.-61m.u.的位置内的核苷酸序列相同的序列，且所述核苷酸序列具有不超过400nt/bp的核苷酸残基。或者本发明的核苷酸序列包括与位于甲型杆状病毒属的病毒基因组的47.9m.u.-60.8m.u.的位置内的核苷酸序列相同的序列，且所述核苷酸序列具有不超过400nt/bp的核苷酸残基。

在一个具体实施例中，所述核苷酸序列具有不超过350nt/bp的核苷酸残基。例如，本发明的核苷酸序列包括与位于甲型杆状病毒属的病毒基因组的45m.u.-65m.u.的位置内的核苷酸序列相同的序列，且所述核苷酸序列具有不超过350nt/bp的核苷酸残基。或者本发明的核苷酸序列，且所述核苷酸序列具有不超过350nt/bp的核苷酸残基。或者本发明的核苷酸序列包括与位于甲型杆状病毒属的病毒基因组的47.9m.u.-60.8m.u.的位置内的核苷酸序列相同的序列，且所述核苷酸序列具有不超过350nt/bp的核苷酸残基。

在一个具体实施例中，所述核苷酸序列具有不超过300nt/bp的核苷酸残基。例如，本发明的核苷酸序列包括与位于甲型杆状病毒属的病毒基因组的45m.u.-65m.u.的位置内的核苷酸序列相同的序列，且所述核苷酸序列具有不超过300nt/bp的核苷酸残基。或者本发明的核苷酸序列包括与位于甲型杆状病毒属的病毒基因组的47m.u.-61m.u.的位置内的核苷酸序列相同的序列，且所述核苷酸序列具有不超过300nt/bp的核苷酸残基。或者本发明的核苷酸序列包括与位于甲型杆状病毒属的病毒基因组的47.9m.u.-60.8m.u.的位置内的核苷酸序列相同的序列，且所述核苷酸序列具有不超过300nt/bp的核苷酸残基。

在一个具体实施例中，所述核苷酸序列具有不超过250nt/bp的核苷酸残基。例如，本发明的核苷酸序列包括与位于甲型杆状病毒属的病毒基因组的45m.u.-65m.u.的位置内的核苷酸序列相同的序列，且所述核苷酸序列具有不超过250nt/bp的核苷酸残基。或者本发明的核苷酸序列包括与位于甲型杆状病毒属的病毒基因组的47m.u.-61m.u.的位置内的核苷酸序列相同的序列，且所述核苷酸序列具有不超过250nt/bp的核苷酸残基。或者本发明的核苷酸序列包括与位于甲型杆状病毒属的病毒基因组的47.9m.u.-60.8m.u.的位置内的核苷酸序列相同的序列，且所述核苷酸序列具有不超过250nt/bp的核苷酸残基。

在一个具体实施例中，所述核苷酸序列具有150nt/bp至250nt/bp的核苷酸残基。例如，本发明的核苷酸序列包括与位于甲型杆状病毒属的病毒基因组的45m.u.-65m.u.的位置内的核苷酸序列相同的序列，且所述核苷酸序列具有150nt/bp至250nt/bp的核苷酸残基。或者本发明的核苷酸序列包括与位于甲型杆状病毒属的病毒基因组的47m.u.-61m.u.的位置内的核苷酸序列相同的序列，且所述核苷酸序列具有150nt/bp至250nt/bp的核苷酸残基。或者本发明的核苷酸序列包括与位于甲型杆状病毒属的病毒基因组的47.9m.u.-60.8m.u.的位置内的核苷酸序列相同的序列，且所述核苷酸序列具有150nt/bp至250nt/bp的核苷酸残基。

在一个具体实施例中，所述核苷酸序列具有180nt/bp至250nt/bp的核苷酸残基。例如，本发明的核苷酸序列包括与位于甲型杆状病毒属的病毒基因组的45m.u.-65m.u.的位置内的核苷酸序列相同的序列，且所述核苷酸序列具有180nt/bp至250nt/bp的核苷酸残基。或者本发明的核苷酸序列包括与位于甲型杆状病毒属的病毒基因组的47m.u.-61m.u.的位置内的核苷酸序列相同的序列，且所述核苷酸序列具有180nt/bp至250nt/bp的核苷酸残基。或者本发明的核苷酸序列包括与位于甲型杆状病毒属的病毒基因组的47.9m.u.-60.8m.u.的位置内的核苷酸序列相同的序列，且所述核苷酸序列具有180nt/bp至250nt/bp的核苷酸残基。

在一个具体实施例中，所述核苷酸序列具有200nt/bp至213nt/bp的核苷酸残基。例如，本发明的核苷酸序列包括与位于甲型杆状病毒属的病毒基因组的45m.u.-65m.u.的位置内的核苷酸序列相同的序列，且所述核苷酸序列具有200nt/bp至213nt/bp的核苷酸残基。或者本发明的核苷酸序列包括与位于甲型杆状病毒属的病毒基因组的47m.u.-61m.u.的位置内的核苷酸序列相同的序列，且所述核苷酸序列具有200nt/bp至213nt/bp的核苷酸残基。或者本发明的核苷酸序列包括与位于甲型杆状病毒属的病毒基因组的47.9m.u.-60.8m.u.的位置内的核苷酸序列相同的序列，且所述核苷酸序列具有200nt/bp至213nt/bp的核苷酸残基。

本发明的核苷酸序列由完全保守位点、高度保守位点和可变位点组成。

在一个具体实施例中，所述核苷酸序列包括从5’端起的如下核苷酸序列：顺序的(1)2-3个选自A、T、G或C的核苷酸残基；(2)T；(3)20-22个选自A、T、G或C的核苷酸残基；(4)AT；(5)0-2个选自A、T、G或C的核苷酸残基；(6)ATA；(7)2个选自A、T、G或C的核苷酸残基；(8)AC；(9)11-16个选自A、T、G或C的核苷酸残基；(10)T；(11)29-32个选自A、T、G或C的核苷酸残基；(12)ATATA；(13)1个选自A、T、G或C的核苷酸残基；(14)T；(15)1个选自A、T、G或C的核苷酸残基；(16)C；(17)18个选自A、T、G或C的核苷酸残基；(18)T；(19)14-15个选自A、T、G或C的核苷酸残基；(20)A；(21)17-25个选自A、T、G或C的核苷酸残基；(22)AA；(23)32个选自A、T、G或C的核苷酸残基；(24)AA；(25)3个选自A、T、G或C的核苷酸残基；(26)A；(27)23或24个选自A、T、G或C的核苷酸残基。

在本发明之一的核苷酸序列中，除了具有上述顺序(2)、(4)、(6)、(8)、(10)、(12)、(14)、(16)、(18)、(20)、(22)、(24)和(26)中的23个完全保守的位点之外，还存在多个高度保守的位点。因此，在本发明的一个实施例中，在顺序(1)中，与顺序(2)的核苷酸残基向5’端间隔2个核苷酸残基的核苷酸残基为C或被缺失；与顺序(2)的核苷酸残基向5’端间隔1个的核苷酸残基A或T，优选为A；与顺序(2)的核苷酸残基向5’端相邻的核苷酸残基为T或C，优选为T；在顺序(3)中，与顺序(2)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为T或A，优选为T；与顺序(2)的核苷酸残基向3’端间隔8个的核苷酸残基为T或被缺失，优选被缺失；与顺序(2)的核苷酸残基向3’端间隔9个核苷酸残基的核苷酸残基优选为C；与顺序(2)的核苷酸残基向3’端间隔12个的核苷酸残基为A、T或G，优选为A；与顺序(2)的核苷酸残基向3’端间隔13个的核苷酸残基为T或A，优选为T；与顺序(2)的核苷酸残基向3’端间隔14个的核苷酸残基为A、T或C，优选为A；与顺序(2)的核苷酸残基向3’端间隔15个的核苷酸残基为T、C或A，优选为T；与顺序(2)的核苷酸残基向3’端间隔19个的核苷酸残基为C、A、T或被缺失，优选为C；与顺序(2)的核苷酸残基向3’端间隔21个的核苷酸残基为A、G或C，优选为A；在顺序(7)中，与顺序(6)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为C或G，优选C；与顺序(6)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为T、A或G，优选为T；在顺序(9)中，与顺序(8)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A或G，优选为A；与顺序(8)的核苷酸残基向3’端间隔3-8个的核苷酸残基为T、G或A，优选为T；与顺序(8)的核苷酸残基向3’端间隔6-11个的核苷酸残基为G、T或A，优选G；与顺序(8)的核苷酸残基向3’端间隔7-12个的核苷酸残基为A、T或G，优选A；与顺序(8)的核苷酸残基向3’端间隔8-13个的核苷酸残基为C或T，优选C；与顺序(8)的核苷酸残基向3’端间隔10-15个的核苷酸残基为T、A或C，优选T；与顺序(8)的核苷酸残基向3’端间隔11-16个的核苷酸残基为T、或G，优选T；在顺序(11)中，与顺序(10)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为G或T，优选G；与顺序(10)的核苷酸残基向3’端间隔6-9个的核苷酸残基为T或G，优选T；与顺序(10)的核苷酸残基向3’端间隔8-11个的十二核苷酸残基为T或C，优选T；与顺序(10)的核苷酸残基向3’端间隔19-22个的核苷酸残基为T或A，优选T；与顺序(10)的核苷酸残基向3’端间隔22-25个的核苷酸残基为A或G，优选A；与顺序(10)的核苷酸残基向3’端间隔25-28个的核苷酸残基优选为A；与顺序(10)的核苷酸残基向3’端间隔28-31个的核苷酸残基为A或C，优选A；在顺序(13)中，与顺序(12)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为C或T，优选C；在顺序(15)中，与顺序(14)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A或T，优选A；在顺序(17)中，与顺序(16)的核苷酸残基向3’端间隔2个的核苷酸残基为T、C或A，优选T；与顺序(16)的核苷酸残基向3’端间隔10个的核苷酸残基优选为A；与顺序(16)的核苷酸残基向3’端间隔11个的核苷酸残基为A或C，优选A；与顺序(16)的核苷酸残基向3’端间隔12个的核苷酸残基为A、C或G，优选A；与顺序(16)的核苷酸残基向3’端间隔13个的核苷酸残基为T或G，优选T；与顺序(16)的核苷酸残基向3’端间隔14个的核苷酸残基A或被缺失，优选A；与顺序(16)的核苷酸残基向3’端间隔14-15个的核苷酸残基为T或C，优选T；与顺序(16)的核苷酸残基向3’端间隔15-16个的核苷酸残基为A或C，优选A；与顺序(16)的核苷酸残基向3’端间隔16-17个的核苷酸残基为C或G，优选C；在顺序(19)中，与顺序(18)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A、C或G，优选A；与顺序(18)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为C或A，优选C；与顺序(18)的核苷酸残基向3’端间隔14个的核苷酸残基为A或C，优选A；在顺序(21)中，与顺序(20)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基优选被缺失0-4个核苷酸残基；与顺序(20)的核苷酸残基向3’端相邻或间隔1-4个的核苷酸残基为T或被缺失，优选T；与顺序(20)的核苷酸残基向3’端相邻或间隔1-5个的核苷酸残基为A、C或G，优选A；与顺序(20)的核苷酸残基向3’端间隔1-6个的核苷酸残基为T或C，优选T；与顺序(20)的核苷酸残基向3’端间隔2-7个的核苷酸残基为A或G，优选A；与顺序(20)的核苷酸残基向3’端间隔7-12个的核苷酸残基为C、T或A，优选C；与顺序(20)的核苷酸残基向3’端间隔8-13个的核苷酸残基优选被缺失0-4个核苷酸残基；与顺序(20)的核苷酸残基向3’端间隔14-23个的核苷酸残基为G或A，优选G；与顺序(20)的核苷酸残基向3’端间隔15-24个的核苷酸残基为T或A，优选T；在顺序(23)中，与顺序(22)的核苷酸残基向3’端间隔16-25个的核苷酸残基为A或C，优选A；与顺序(22)的核苷酸残基向3’端间隔17-26个的核苷酸残基优选为A；与顺序(22)的核苷酸残基向3’端间隔26-35个的核苷酸残基为A、G或T，优选A；与顺序(22)的核苷酸残基向3’端间隔28-37个的核苷酸残基为A或T，优选A；与顺序(22)的核苷酸残基向3’端间隔29-38个的核苷酸残基为T、C或A，优选T；与顺序(22)的核苷酸残基向3’端间隔30-39个的核苷酸残基为A或G，优选A；与顺序(22)的核苷酸残基向3’端间隔31-40个的核苷酸残基为T或C，优选T；与顺序(22)的核苷酸残基向3’端间隔33-42个的核苷酸残基为G或A，优选G；与顺序(22)的核苷酸残基向3’端间隔35-44个的核苷酸残基第177位为A、T或C，优选A；与顺序(22)的核苷酸残基向3’端间隔37-46个的核苷酸残基为A、G或C，优选A；与顺序(22)的核苷酸残基向3’端间隔38-47个的核苷酸残基为T、A或C，优选T；与顺序(22)的核苷酸残基向3’端间隔40-49个的核苷酸残基为A或C，优选A；与顺序(22)的核苷酸残基向3’端间隔47-56个的核苷酸残基为A、G或T，优选A；在顺序(25)中，与顺序(24)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为T或A，优选T；与顺序(24)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为A或T，优选A；在顺序(27)中，与顺序(26)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为C、A或T，优选C；与顺序(26)的核苷酸残基向3’端间隔11-14个的核苷酸残基为T、A或C，优选T。

具体地，在发明中的核苷酸序列选自SEQ ID Nos.1-52所示的序列中的至少一种。其中SEQ ID No.20和SEQ ID No.52分别为序列比对之后的优选序列，SEQ ID No.20参见附图3中获得的分析序列(第一行)和SEQ ID No.52参见附图2中获得的分析序列(第一行)。

在甲型杆状病毒属(Alphabaculovirus)中的Group I的病毒中，NAE的保守性很高，有110个位点在Group I病毒中完全一致，另外49个位点高度保守以及有36个位点具有一定的保守性。其中，完全保守的位点多为A或T，形成了更明显的保守区域。

因此，在本发明的一个实施例中，所述核衣壳装配必需元件包括的DNA序列如下：从5’端起，在顺序(一)中，与顺序(二)的核苷酸残基向5’端间隔2个核苷酸残基的核苷酸残基为C或T，优选为C；与顺序(二)的核苷酸残基向5’端间隔1个核苷酸残基的核苷酸残基为A或T，优选为A；与顺序(二)的核苷酸残基向5’端相邻的核苷酸残基为T或C，优选为T；在顺序(二)中，为T；在顺序(三)中，与顺序(二)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为T或A，优选为T；与顺序(二)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为A、T、G或C，优选为T；与顺序(二)的核苷酸残基向3’端间隔2个核苷酸残基的核苷酸残基为C、A或G，优选为C；在顺序(四)中，为A；在顺序(五)中，与顺序(四)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A或G，优选为G；与顺序(四)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为C或A，优选为C；与顺序(四)的核苷酸残基向3’端间隔2个核苷酸残基的核苷酸残基为A或G，优选为G；与顺序(四)的核苷酸残基向3’端间隔3个核苷酸残基的核苷酸残基优选为A、T、C或G，优选A；在顺序(六)中，为CGTATATT；在顺序(七)中，与顺序(六)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A或G，优选为G；与顺序(六)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为A或G，优选为A；在顺序(八)中，为C；在顺序(九)中，为A、T或C，优选为C；在顺序(十)中，为AATATACTACA；在顺序(十一)中，为G或A，优选为G；在顺序(十二)中，为T或G，优选为T；在顺序(十三)中，为C；在顺序(十四)中，为G或A，优选为G；在顺序(十五)中，为GAC；在顺序(十六)中，为A或G，优选为A；在顺序(十七)中，为TTTG；在顺序(十八)中，为T或C，优选为T；在顺序(十九)中，为G或A，优选为G；在顺序(二十)中，为C；在顺序(二十一)中，与顺序(二十)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A、T、C或G，优选为C；与顺序(二十)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为A、C或G，优选为G；与顺序(二十)的核苷酸残基向3’端间隔2个的核苷酸残基为A或G，优选为A；与顺序(二十)的核苷酸残基向3’端间隔3个的核苷酸残基为C、G或T，优选为C；与顺序(二十)的核苷酸残基向3’端间隔4个的核苷酸残基为C或A，优选为C；在顺序(二十二)中，为TATA；在顺序(二十三)中，为T或C，优选为T；在顺序(二十四)中，为ACTAC；在顺序(二十五)中，与顺序(二十四)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A或G，优选为G；与顺序(二十四)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为A、C或T，优选为A；在顺序(二十六)中，为T；在顺序(二十七)中，为A、T或G，优选为T；在顺序(二十八)中，为TA；在顺序(二十九)中，与顺序(二十八)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为T或C，优选为C；与顺序(二十八)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为A或C，优选为C；与顺序(二十八)的核苷酸残基向3’端间隔2个的核苷酸残基为A或G，优选为A；在顺序(三十)中，为AAAATATACTACA；在顺序(三十一)中，为T或C，优选为C；在顺序(三十二)中，为T；在顺序(三十三)中，与顺序(三十二)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A、T或G；与顺序(三十二)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为A或G，优选为G；与顺序(三十二)的核苷酸残基向3’端间隔2个的核苷酸残基为A或C，优选为C，与顺序(三十二)的核苷酸残基向3’端间隔3个的核苷酸残基为A、T、C或G；与顺序(三十二)的核苷酸残基向3’端间隔4个的核苷酸残基为T或C，优选为C；与顺序(三十二)的核苷酸残基向3’端间隔5个的核苷酸残基为A、C或G；与顺序(三十二)的核苷酸残基向3’端间隔6个的核苷酸残基为A、T、C或G；在顺序(三十四)中，为AAATATACTACA；在顺序(三十五)中，与顺序(三十四)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A或G，优选为A；与顺序(三十四)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为C或G，优选为C；与顺序(三十四)的核苷酸残基向3’端间隔2个的核苷酸残基为T或G，优选为T，与顺序(三十四)的核苷酸残基向3’端间隔3个的核苷酸残基为T或C，优选为C；在顺序(三十六)中，为C；在顺序(三十七)中，与顺序(三十六)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A、T、C或G，优选为A或G；与顺序(三十六)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为T、C或G，优选为C；与顺序(三十六)的核苷酸残基向3’端间隔2个的核苷酸残基为T或C，优选为T；与顺序(三十六)的核苷酸残基向3’端间隔3个的核苷酸残基为A、T或C，优选为T；与顺序(三十六)的核苷酸残基向3’端间隔4个的核苷酸残基为A或C，优选为C；在顺序(三十八)中，为AATA；在顺序(三十九)中，为T或C，优选为T；在顺序(四十)中，为A；在顺序(四十一)中，与顺序(四十)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A或C，优选为A；与顺序(四十)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为T或C，优选为C；与顺序(四十)的核苷酸残基向3’端间隔2个的核苷酸残基为T、C或G，优选为T，与顺序(四十)的核苷酸残基向3’端间隔3个的核苷酸残基为A或G，优选为A；与顺序(四十)的核苷酸残基向3’端间隔4个的核苷酸残基为C或T，优选为C；在顺序(四十二)中，为A；在顺序(四十三)中，为T或C，优选为C；在顺序(四十四)中，为T；在顺序(四十五)中，为T或C，优选为C；在顺序(四十六)中，为TCGTAAA；在顺序(四十七)中，为A或G，优选为A；在顺序(四十八)中，为C；在顺序(四十九)中，与顺序(四十八)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A、C或G，优选为G；与顺序(四十八)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为A、C或G，优选为G；与顺序(四十八)的核苷酸残基向3’端间隔2个的核苷酸残基为T或C，优选为C；在顺序(五十)中，为C；在顺序(五十一)中，与顺序(五十)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为T或C，优选为T；与顺序(五十)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为A、C或G；与顺序(五十)的核苷酸残基向3’端间隔2个的核苷酸残基为A、C或G，优选为A；在顺序(五十二)中，为AAATA；在顺序(五十三)中，与顺序(五十二)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为T或C，优选为T；与顺序(五十二)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为A、C或G，优选为G；在顺序(五十四)中，为G；在顺序(五十五)中，与顺序(五十四)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A或T，优选为T；与顺序(五十四)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为A或T，优选为A；与顺序(五十四)的核苷酸残基向3’端间隔2个的核苷酸残基为A、T或G，优选为G；在顺序(五十六)中，为TATATG；在顺序(五十七)中，与顺序(五十六)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A、C或G，优选为C；与顺序(五十六)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为A、T或G，优选为T或G；与顺序(五十六)的核苷酸残基向3’端间隔2个的核苷酸残基为A、C或G，优选为A或G；与顺序(五十六)的核苷酸残基向3’端间隔3个的核苷酸残基为A、T或C；在顺序(五十八)中，为AAATA；在顺序(五十九)中，为C或T，优选为C；在顺序(六十)中，为AC；在顺序(六十一)中，与顺序(六十)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A、C或G，优选为G；与顺序(六十)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为A、T或C，优选为T；在顺序(六十二)中，为T；在顺序(六十三)中，与顺序(六十二)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为T或C，优选为T；与顺序(六十二)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为A、T、C或G，优选为A；在顺序(六十四)中，为A；在顺序(六十五)中，与顺序(六十四)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A或C，优选为A；与顺序(六十四)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为A或G，优选为A；在顺序(六十六)中，为A；在顺序(六十七)中，与顺序(六十六)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A或T，优选为A；与顺序(六十六)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为C或T，优选为C；与顺序(六十六)的核苷酸残基向3’端间隔2个的核苷酸残基为T或G，优选为G；与顺序(六十六)的核苷酸残基向3’端间隔3个的核苷酸残基为T或C，优选为C；在顺序(六十八)中，为T；在顺序(六十九)中，为A或G，优选为A；在顺序(七十)中，为C；在顺序(七十一)中，与顺序(七十)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A或G，优选为G；与顺序(七十)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为A或C，优选为A；与顺序(七十)的核苷酸残基向3’端间隔2个的核苷酸残基为T或C，优选为T；与顺序(七十)的核苷酸残基向3’端间隔3个的核苷酸残基为A或T，优选为T；与顺序(七十)的核苷酸残基向3’端间隔4个的核苷酸残基为T、C或G，优选为T；与顺序(七十)的核苷酸残基向3’端间隔5个的核苷酸残基为T或C，优选为C。

在一个实施例中，优选所述核苷酸序列选自SEQ ID Nos.1-20所示的序列中的至少一种。

本领域的技术人员容易理解，在核苷酸具有上述完全的保守位点的情况下，与SEQID Nos.1-52所示的一种核苷酸序列具有11％-100％，优选在55％-100％的一致性的序列，且同时具有本发明的核衣壳装配必需元件的功能的序列也在本发明的保护范围内。因此，本发明之二提供了一种核苷酸序列，其与如上本发明之一的核苷酸序列具有11％-100％，优选55％-100％的一致性；且其具有如上本发明之一的核苷酸序列中的顺序(2)、(4)、(6)、(8)、(10)、(12)、(14)、(16)、(18)、(20)、(22)、(24)和(26)中的完全保守序列；或具有如上本发明之一的核苷酸序列中的顺序(二)、(四)、(六)、(八)、(十)、(十三)、(十五)、(十七)、(二十)、(二十二)、(二十四)、(二十六)、(二十八)、(三十)、(三十二)、(三十四)、(三十六)、(三十八)、(四十)、(四十二)、(四十四)、(四十六)、(四十八)、(五十)、(五十二)、(五十四)、(五十六)、(五十八)、(六十)、(六十二)、(六十四)、(六十六)、(六十八)和(七十)中的完全保守序列；并且具有与如上本发明之一的核苷酸序列的相同的功能。本段中所述的相同的功能可以指作为核衣壳装配必需元件的功能。

在一个实施例中，根据SEQ ID Nos.1-19和SEQ ID Nos.21-51所示的序列两两之间的比对结果，本发明之二的所述核苷酸序列具有与本发明之一的核苷酸序列70％至99.8％的一致性，例如具有与本发明之一的核苷酸序列71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％的一致性，或由它们组成的任意一个范围内的一致性，如75％至99.8％的一致性，80％至99.5％的一致性，90％至99.5％的一致性或90％至99.5％的一致性。举例来讲，当其序列长度为500nt/bp，且具有与如上本发明之一的核苷酸序列99.8％的一致性时，则可以在其可变位点仅有一个核苷酸残基发生了改变。再如，当其序列长度为200nt/bp，且具有与如上本发明之一的核苷酸序列99.5％的一致性时，则可以在其可变位点仅有一个核苷酸残基发生了改变。

在一个实施例中，所述核苷酸序列选自单链DNA、双链DNA、单链cDNA、单链RNA和双链RNA中的至少一种；其中，当所述核苷酸序列为单链RNA和/或双链RNA时，核苷酸序列中的T被替换为U。

本发明之三提供了一种如本发明之一和/或本发明之二的核苷酸序列的反向互补序列。

在一个具体实施例中，本发明之三的核苷酸序列选自单链DNA、单链cDNA和单链RNA中的至少一种；其中，当所述核苷酸序列为单链RNA时，核苷酸序列中的T被替换为U。

由于杆状病毒在基因转导领域具有广阔的应用前景，在本发明的研究结果的基础上，本领域的技术人员能够很容易地理解利用本发明所发现的NAE序列，可以对杆状病毒基因转导载体进行改良。并且本领域的技术人员也能够知道通过使用本发明中的NAE序列，会使得载体的构建过程更加简便，而且能够增大靶标核苷酸容量。另外，NAE序列具有更良好的生物安全性，使之适用于所需的基因转导操作以及更适合基因治疗等临床应用的需求。

因此，本发明之四提供了前述任意一种的核苷酸序列在构建含有靶标核苷酸序列的载体中的应用，特别是在构建将含有的靶标核苷酸序列到昆虫、昆虫细胞、人体、人的器官、人的组织、人源细胞、动物体、动物的器官、动物的组织和动物源细胞中的至少一种的载体中的应用。例如可以通过所述载体将靶标核苷酸序列导入到果蝇、果蝇细胞(例如来源于果蝇的细胞系)、蚕(例如家蚕和/或榨蚕等)、蚕细胞(例如来源于蚕体的细胞系)中，以实现在所述果蝇、果蝇细胞、蚕或蚕细胞中发挥靶标核苷酸序列的功能。不过，由于其他很多元件都未研究透彻，甚至可能尚未发现，受到这些方面的制约，优化天然杆状病毒基因组成为人工载体仍然存在巨大的空间。

本发明之五提供了前述本发明之一和本发明之二的核苷酸序列，以及本发明之三的反向互补序列中的任意一种在病毒核衣壳装配中的应用，优选在杆状病毒科(Baculoviridae)的核衣壳装配中的应用，更优选在甲型杆状病毒属(Alphabaculovirus)的核衣壳装配中的应用。

本发明之六提供了前述本发明之一和本发明之二的核苷酸序列，以及本发明之三的反向互补序列中的任意一种在通过失活其功能来阻止病毒核衣壳装配中的应用，优选在通过失活其功能来阻止杆状病毒科(Baculoviridae)的核衣壳装配中的应用，更优选在通过失活其功能来阻止甲型杆状病毒属(Alphabaculovirus)的核衣壳装配中的应用。

本发明之七提供了前述本发明之一和本发明之二的核苷酸序列，以及本发明之三的反向互补序列中的任意一种在寻找失活其功能功能的药物中的应用，换句话可以说本发明之七提供了前述本发明之一和本发明之二的核苷酸序列，以及本发明之三的反向互补序列中的任意一种在寻找阻断其发挥功能的药物中的应用。

例如可以有针对性地寻找阻断本发明的核衣壳装配必需元件发挥其功能的药物来阻止杆状病毒装配，从而避免杆状病毒对其寄主的为害，例如利用寻找到的药物可以避免杆状病毒对蚕(例如家蚕，柞蚕等)等有益昆虫的为害，从而挽回因杆状病毒为害造成的经济损失。其中，所述的药物可以为化合物、多肽、蛋白质、DNA和RNA等物质。

在本发明中，腺嘌呤用A或a表示，胞嘧啶用C或c表示，鸟嘌呤用G或g表示，胸腺嘧啶用T或t表示，尿嘧啶用U或u表示。且本领域的技术人员公知，存在于DNA或cDNA中胸腺嘧啶等同于存在于RNA中的尿嘧啶，为了方便表述起见，在本发明中在没有特别指出核苷酸序列为DNA还是RNA时，两者均以胸腺嘧啶T或t表示，这并不妨碍本领域的技术人员对该技术的理解。

附图说明

图1为PCR检测病毒基因组DNA。(A)用引物对38KORF-U/38KORF-D对病毒基因组进行PCR检测。用引物对CNEKO-CHECK-U/CNEKO-CHECK-D对病毒基因组进行PCR检测。用引物对Ac83promoter-U2/Ac83KO-CHECK-D对病毒基因组进行PCR检测。泳道M，DNA分子marker；泳道bacmid mix，用vAc83KO、vCNEKO和v38KKO的DNA混合物作为模板进行PCR扩增；泳道Mock，用未感染病毒的Sf9细胞DNA作为模板进行PCR扩增；泳道Ac83KO，用vAc83KO转染Sf9细胞，收集上清再感染Sf9细胞，提取被感染细胞中的DNA，进行DpnI消化作为PCR模板；泳道38KKO，用v38KKO转染Sf9细胞，收集上清再感染Sf9细胞，提取被感染细胞中的DNA，进行DpnI消化作为PCR模板；泳道CNEKO，用vCNEKO转染Sf9细胞，收集上清再感染Sf9细胞，提取被感染细胞中的DNA，进行DpnI消化作为PCR模板；泳道Ac83KO+38KKO，用v38KKO和vAc83KO共转染Sf9细胞，收集上清再感染Sf9细胞，提取被感染细胞中的DNA，进行DpnI消化作为PCR模板；泳道CNEKO+38KKO，用v38KKO和vCNEKO共转染Sf9细胞，收集上清再感染Sf9细胞，提取被感染细胞中的DNA，进行DpnI消化作为PCR模板；泳道CNEKO+Ac83KO，用vAc83KO和vCNEKO共转染Sf9细胞，收集上清再感染Sf9细胞，提取被感染细胞中的DNA，进行DpnI消化作为PCR模板。

图2为甲型杆状病毒中NAE序列的比对图。其中，背景色为黑色的位点是完全保守的位点；背景色为灰色的位点是高度保守的位点；背景色为浅灰色的位点是部分保守位点。

图3为甲型杆状病毒中Group I杆状病毒的NAE序列比对图。其中，背景色为黑色的位点是完全保守的位点；背景色为灰色的位点是高度保守的位点；背景色为浅灰色的位点是部分保守位点。

具体实施方式

细胞系

草地贪夜蛾卵巢上皮细胞系Sf9：27℃恒温摇床，110rpm悬浮培养。每72h传代并更换新鲜细胞培养基。传代时，按1:100的比例在细胞培养基中加入10％pluronic F-68溶液，以减少液体的剪切力和气泡对细胞的损伤作用。

菌株

(1)DH5α：基因型为F–Φ80lacZΔM15Δ(lacZYA-argF)U169recA1endA1hsdR17(rK–,mK+)phoA supE44λ–thi-1gyrA96relA1

(2)DH10B：基因型为F–mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)Φ80lacZΔM15ΔlacX74recA1endA1araD139Δ(ara leu)7697galU galK rpsL nupGλ–

质粒和BAC载体

(1)pUC18：克隆载体。具有氨苄青霉素抗性。

(2)pEASY-Blunt：克隆载体。具有氨苄青霉素和卡那霉素抗性。

(3)pMON7124^ts：转座辅助质粒。可以表达Tn7转座所需的酶。具有四环素抗性。

(4)pFB1^ts-PH-GFP：转座供体质粒。含有Tn7转座酶识别的序列Tn7L和Tn7R。Tn7L和Tn7R之间有庆大霉素抗性基因、polh、egfp以及多克隆位点。具有庆大霉素和氨苄青霉素抗性。

(5)pSIM6：Red同源重组质粒，由中山大学刘建忠教授馈赠。含有λ噬菌体的red基因(即exo，bet和gam)。通过42℃热激，可以表达Red同源重组所需的酶。温敏型质粒，在37℃或以上培养会丢失。具有氨苄青霉素抗性。

(6)bMON14272：以AcMNPV E2株的基因组为基础构建的细菌人工染色体，在其polh位点中插入了大肠杆菌F质粒的mini-F片段(该片段包含其在大肠杆菌中复制所需的基因和DNA位点)、LacZ基因(包含Tn7位点特异性转座系统中的mini-attTn7靶位点)和用于抗性筛选的卡那霉素抗性基因。在大肠杆菌和昆虫细胞中均可复制，是细菌和昆虫细胞间的穿梭载体。

本发明中使用到的培养基、抗生素、缓冲液、各种限制性内切酶等常规试剂或试剂盒均可商业获得或自行配制完成。

本发明中的PCR扩增、目的片段的回收、目的片段连接克隆载体、限制性内切酶消化、目的片段与载体连接、大肠杆菌化学感受态细胞的制备、热激转化及单克隆的挑取、质粒提取、Simple cloning、Red同源重组、昆虫细胞的瞬时转染(包括共转染)、BV滴度测定(TCID₅₀法)、BV上清感染昆虫细胞、昆虫细胞样品的收取、转录本检测、蛋白免疫印迹实验(Western blotting)、病毒基因组装配的检测等技术均属于本领域的常规技术，可参考DRO'Reilly,LK Miller,VA Luckow,Baculovirus expression vectors:a laboratorymanual.New York:Oxford University Press,1994；和Sambrook,DavidW.Russell.Molecular cloning:A laboratory manual:3rd ed.New York:Cold SpringHarbor Laboratory Press,2001操作。

实施例1Ac83蛋白不是杆状病毒核衣壳装配所必需的

1.1.1用大片段插入阻断Ac83的表达不影响病毒在昆虫细胞中的正常增殖

1.1.1.1用于同源重组的线性片段Ac83US2-CmR-Ac83DS2的制备

首先要构建用于Red同源重组的线性片段。以bMON14272为模板，用引物对Ac83KO2-US-U/Ac83KO2-US-D和Ac83KO2-DS-U/Ac83KO2-DS-D分别PCR扩增待缺失区域的上下游序列，并命名为Ac83US2和Ac83DS2。pUC18-38KUS-CmR-38KDS是前人构建的重组质粒，其氯霉素抗性(chloramphenicol resistance,CmR)基因上下游含有38K基因的上下游序列。用限制性内切酶PstI/HindIII对Ac83DS2片段进行消化，并克隆到pUC18-38KUS-CmR-38KDS中的相应位点，替换其中的38KDS片段，阳性克隆命名为pUC18-38KUS-CmR-Ac83DS2。再用SacI/BamHI消化Ac83US2片段，并克隆到pUC18-38KUS-CmR-Ac83DS2中的相应位点，替换其中的38KUS片段，阳性克隆命名为pUC18-Ac83US2-CmR-Ac83DS2。最后，用SacI/HindIII消化pUC18-Ac83US2-CmR-Ac83DS2，即获得线性片段Ac83US2-CmR-Ac83DS2。

1.1.1.2ac83缺失型杆状病毒质粒(bacmid)bAc83KO2的构建

将pSIM6热激转化到只含有bMON14272的DH10B菌株后，将该菌株制备成电击感受态。用线性片段Ac83US2-CmR-Ac83DS2进行电击转化。通过线性片段Ac83US2-CmR-Ac83DS2与bMON14272中待缺失区域的重组，使CmR基因插入到bMON14272相应位点上并替换ac83的361-464nt区域。在含有卡那霉素(Kanamycin,Kan)和氯霉素(chloramphenicol,Cm)的LB平板上对重组子进行筛选，将阳性克隆接种到含有Kan和Cm的LB培养基中37℃过夜培养后划线分离，去除pSIM6，阳性克隆并命名为bAc83KO2。

1.1.1.3具有egfp和polh标记的ac83缺失型和补回型重组病毒的构建

为观察bAc83KO2在细胞中的复制进程，需要在bAc83KO2中插入egfp和polh标记基因。将转座辅助质粒pMON7124^ts和供体质粒pFB1^ts-PH-GFP依次热激转化到bAc83KO2菌株中，进行Tn7位点特异性转座，阳性克隆命名为vAc83KO2。

为进一步证明在ac83的缺失过程中，病毒基因组上的其他位点没有受到影响，在病毒基因组中对ac83进行异位补回，构建ac83补回型病毒。以bMON14272为模板，用引物对Ac83promoter-U2/Ac83:FLAG-D进行PCR扩增，获得上游带有自身启动子且3′末端带有FLAG标签编码序列的Ac83:FLAG片段。用限制性内切酶EcoRI/BamHI对Ac83:FLAG片段进行消化后，将其连接至pUC18-Ac76:FLAG-SV40相应位点中，替换Ac76片段，同时使Ac83:FLAG片段与SV40的多聚腺苷酸信号(polyadenylation signal,polyA)连接，阳性克隆命名为pUC18-Ac83:FLAG-SV40。用EcoRI/XbaI消化pUC18-Ac83:FLAG-SV40，回收Ac83:FLAG-SV40片段并连接至pFB1^ts-PH-GFP相应位点中，阳性克隆命名为pFB1^ts-PH-GFP-Ac83:FLAG。

将pFB1^ts-PH-GFP-Ac83:FLAG热激转化至含有bAc83KO2和pMON7124^ts的DH10B菌株中。通过Tn7位点特异性转座，使egfp、polh和Ac83:FLAG-SV40片段插入bAc83KO2中，阳性克隆命名为vAc83:FLAG2。

1.1.1.4vAc83KO2可以在细胞中的正常增殖

提取vAcWT、vAc83KO、vAc83KO2和vAc83:FLAG2的杆状病毒质粒DNA，分别转染Sf9细胞。转染后24h，各转染样品的细胞中都能观察到荧光，说明已成功将重组杆状病毒质粒转染到Sf9细胞内。转染后48h，在vAcWT、vAc83KO2和vAc83:FLAG2转染的细胞中都能观察到带绿色荧光的扩散斑，说明这些重组病毒都能在Sf9细胞中进行复制，并产生具有感染力的子代BV。直至转染后96h，vAc83KO转染的样品中绿色荧光仍局限于单个细胞中，而其他样品中几乎全部细胞都可以观察到绿色荧光。收取转染后96h的病毒上清，检测子代BV的滴度，发现vAcWT、vAc83KO2和vAc83:FLAG2的子代BV产量没有显著差异(p>0.05)。实验结果说明，ac83缺失型病毒vAc83KO2可以在Sf9细胞中进行复制，Ac83蛋白对杆状病毒的核衣壳装配过程可能不是必需的。

1.1.2缺失ac83的启动子不影响病毒在昆虫细胞中的正常增殖

为了进行严谨的验证，将ac83的启动子及其起始密码子ATG进行缺失，在保留ac83大部分序列的同时完全阻断Ac83的表达。ac83启动子缺失型病毒的构建以bAc83KO为基础。在bAc83KO的基础上，通过Tn7位点特异性转座将不带有启动子序列和ATG的ac83片段插入bAc83KO中，即可获得缺失ac83启动子的重组病毒。

在bAc83KO中，虽然CmR基因插入并替换了ac83的大部分序列，但ac83的1-360nt和2418-2544nt仍被保留。如果插入片段带有这部分序列，可能会在细胞内通过同源重组整合到ac83原位点，形成完整的ac83基因并表达出相应的蛋白产物。为减少这种情况对实验结果的影响，用不含有1-360nt和2418-2544nt部分的ac83片段插入bAc83KO中，构建相应的重组病毒。在前人的研究中，缺失Ac83的N末端包含INM-SM和CBD的449aa(即ac83的4-1350nt)或者缺失Ac83C末端的106aa(即ac83的2224-2541nt)都不影响病毒在细胞中的复制。因此，将插入片段限制在ac83的361-2417nt范围内，既与ac83缺失位点所保留的部分片段没有重叠，从理论上降低上述回复突变发生的可能性，也可以很大程度地保留了ac83的序列。

1.1.2.1ac83启动子敲除型病毒vAc83(361-2417)的构建

以bMON14272为模板，用引物对ac83361-U/ac832417:FLAG-D扩增ac83的361-2417nt片段。为方便后续实验中对该片段是否能表达蛋白产物进行检测，通过PCR在该片段的3′末端加上FLAG标签编码序列。用限制性内切酶EcoRI/XbaI对ac83(361-2417)片段进行消化后，将ac83(361-2417)片段连接至pFB1^ts-PH-GFP相应位点，阳性克隆命名为pFB1^ts-PH-GFP-ac83(361-2417)。

将pFB1^ts-PH-GFP-ac83(361-2417)转化至含有bAc83KO和pMON7124^ts的DH10B菌株中，通过转座作用使ac83(361-2417)片段以及egfp和polh两个标记基因插入bAc83KO中，阳性克隆命名为vAc83(361-2417)。

1.1.2.2阳性对照病毒vAc83:FLAG的构建

为了给后续的蛋白检测实验提供阳性对照，还需要构建一个带有FLAG标签的ac83补回型病毒。将pFB1^ts-PH-GFP-Ac83:FLAG转化至含有bAc83KO和pMON7124^ts的DH10B菌株中，通过Tn7转座作用使Ac83:FLAG片段及egfp、polh两个标记基因插入bAc83KO中，阳性克隆命名为vAc83:FLAG。

1.1.2.3ac83启动子缺失型病毒vAc83(361-2417)可以在细胞中正常增殖

成功构建vAc83(361-2417)后，对其在Sf9细胞中的复制情况进行了检测。分别用vAc83(361-2417)、vAc83KO、vAc83:FLAG和vAcWT的杆状病毒质粒DNA进行转染Sf9细胞。从转染后48h开始，在阳性对照病毒vAc83:FLAG和vAcWT转染的Sf9细胞中，可以观察到绿色荧光逐渐从初次转染的细胞扩散，形成带绿色荧光的扩散斑，到转染后96h可以观察到几乎全部细胞都被感染；阴性对照vAc83KO转染的样品中，绿色荧光在整个观察过程中都只局限在单个细胞内，病毒不能复制。而在vAc83(361-2417)转染的细胞中，病毒复制的情况与vAc83:FLAG和vAcWT相似，在转染后96h也可以观察到全部细胞被感染。收取转染后96h的病毒上清，通过TCID₅₀方法检测其中的BV滴度。在转染后96h，未检测到vAc83KO所产生的子代BV，而vAc83(361-2417)、vAc83:FLAG和vAcWT产生的子代BV的滴度并没有显著差异(p>0.05)。上述结果说明，用不带有启动子序列和起始密码子ATG的ac83(361-2417)片段可以有效挽救ac83缺失型病毒的核衣壳装配能力。

虽然ac83(361-2417)片段不含有启动子、多聚腺苷酸信号(polyadenylationsignal,polyA)和起始密码子ATG，理论上不会产生相应的蛋白产物，但也不能完全排除该片段由于因未知原因而表达出蛋白产物的可能性。

用Western blotting检测该片段是否可以翻译出蛋白产物。在转染后96h收取细胞样品，用SDS-12％PAGE进行电泳后，用抗FLAG的单克隆抗体进行检测。在ac83补回型病毒vAc83:FLAG中，可以检测到预测的Ac83条带，但是在vAc83(361-2417)转染的细胞样品中，并未检测到任何信号。在vAc83(361-2417)和vAc83:FLAG转染的细胞样品中，用抗actin的单克隆抗体都可以检测到水平相当的actin蛋白，说明各细胞样品的制备都没问题。

综上所述，在vAc83(361-2417)中ac83(361-2417)片段并未表达出相应的蛋白产物。所以，在参与病毒核衣壳装配的过程中，ac83的启动子及其蛋白产物Ac83并不是必需的，参与核衣壳装配过程的是ac83序列中潜在的其他因子。

实施例2通过检测子代病毒DNA鉴定ac83的化学本质

为检测ac83的化学本质，设计实验以检测ac83是否具有顺式作用元件的特点。若ac83是通过其中的顺式作用元件参与病毒核衣壳装配，则理论上只有当ac83存在于病毒基因组上时，该基因组才可以装配进入子代病毒中。

在本实验中，用38K缺失型病毒v38KKO作为阳性对照。38K是杆状病毒核衣壳上的结构蛋白。在杆状病毒感染细胞的过程中，38K参与病毒核衣壳装配，缺失38K不影响病毒基因组的复制，但会导致病毒基因组无法压缩包装至衣壳前体中。因此，38K蛋白可以通过反式作用挽救v38KKO的核衣壳装配能力。另外，用含有CNE缺失型病毒vCNEKO作为阴性对照。由于CNE序列是病毒基因组上必需的顺式作用元件，CNE理论上不能通过反式作用使vCNEKO在细胞中的复制。

2.1.1CNE缺失型病毒的构建(阳性对照病毒的构建)

设计引物CNEKO-U和CNEKO-D。该引物对可以扩增CmR基因，且在其5′末端上都连接有CNE的上下游序列(各约50bp)。以pUC18-Ac83US2-CmR-Ac83DS2为模板，用引物对CNEKO-U/CNEKO-D扩增CmR基因，得到两端连有CNE上下游同源序列的线性片段CNEUS-CmR-CNEDS。

然后，将含有bMON14272和pSIM6的菌株制备成电击感受态，用线性片段CNEUS-CmR-CNEDS进行电击转化。通过CNEUS-CmR-CNEDS与bMON14272中同源片段间的重组，使CmR基因插入到bMON14272相应位点上并替换待缺失区域，阳性克隆命名为bCNEKO。

为观察CNE缺失型病毒能否在细胞中增殖及形成多角体，通过位点特异性转座在病毒基因组中插入egfp和polh标记基因。以此将pMON7124^ts和pFB1^ts-PH-GFP热激转化到bCNEKO菌株中，使egfp和polh插入bCNEKO，阳性克隆命名为vCNEKO。

2.1.2vAc83KO、vCNEKO与v38KKO共转染昆虫细胞

使用vAc83KO、vCNEKO和v38KKO两两组合共转染Sf9细胞。以vCNEKO和v38KKO的杆状病毒质粒DNA共转染的组合为例，这些杆状病毒质粒DNA进入昆虫细胞后，通过有两种可能的途径产生病毒粒子：(1)利用共转染的杆状病毒质粒提供自身缺失的基因产物，从而产生子代病毒。如v38KKO可以利用vCNEKO所表达的38K蛋白完成核衣壳的装配。在该情况中，如果对其子代BV进行PCR检测，仍然可以检测到被CmR插入替换的38K缺失位点。(2)通过与共转染的杆状病毒质粒进行重组获得自身缺失的顺式作用元件，使基因组可以正常复制并装配至子代病毒中。如vCNEKO可以通过同源重组从v38KKO中获得CNE片段。在这种情况中，对子代病毒或其感染的细胞进行PCR检测，只能检测到野生型的CNE位点，而不能检测到被CmR插入替换的CNE缺失位点。使用vAc83KO与另外两种缺失型病毒(vCNEKO和v38KKO)的杆状病毒质粒DNA进行共转染，再对其子代病毒感染的细胞进行PCR检测，可以鉴定ac83是否具有顺式作用的特征。

将vAc83KO、vCNEKO和v38KKO两两组合进行共转染至Sf9细胞。在三个共转染的样品中，都可以观察到具有绿色荧光的扩散斑，并且在转染后96h几乎全部细胞都已被病毒感染，说明三个组合都可以产生子代BV。在转染后96h，收取病毒上清并用0.45μm的滤膜过滤清除细胞碎片。用收取的病毒上清感染健康的Sf9细胞，可以观察到几乎所有细胞都被感染。

2.1.3不含有ac83的基因组无法装配至子代BV中

在感染后96h收取细胞样品并提取总DNA。用DpnI对总DNA进行消化，以去除初始转染时残留的杆状病毒质粒DNA。如图1所示，用引物对Ac83promoter-U2/Ac83KO-CHECK-D、CNEKO-CHECK-U/CNEKO-CHECK-D和38KORF-U/38KORF-D，对DpnI消化后的各总DNA样品进行检测。在三个共转染样品中，用引物对38KORF-U/38KORF-D都可以扩增出两个特异的条带，其中一个条带大小与野生型38K位点的大小相符，另一个条带与38K缺失位点大小相符。这个结果说明，无论病毒基因组中是否存在38K都可以装配至子代BV中，这与38K通过其蛋白产物参与核衣壳装配的功能相符。用引物对CNEKO-CHECK-U/CNEKO-CHECK-D只能扩增出一个特异条带，该条带与野生型的CNE片段大小相符，而未扩增出与CNE缺失位点大小相近的明显的条带。该结果说明，不含有CNE片段的病毒基因组不能装配至子代病毒中，与前人研究结果相符。使用引物对Ac83promoter-U2/Ac83KO-CHECK-D只能扩增出一条与野生型的ac83的大小相符的条带，而未扩增出与ac83缺失位点大小相近的明显的条带。这个结果说明，ac83具有顺式作用元件的特征，不含有ac83的病毒基因组也不能装配至子代病毒中。另外，使用vAc83KO、vCNEKO和v38KKO的混合杆状病毒质粒DNA作为模板时，上述三个引物对都可分别扩增出两个明显的条带(分别代表野生型和缺失型位点)，所以上述结果并不是引物的偏好性所导致的。综上所述，本发明发现ac83内部存在病毒核衣壳装配所必需的顺式作用元件。在此，我们将这个顺式作用元件命名为核衣壳装配必需元件(nucleocapsidassembly-essential element，NAE)。

实施例3鉴定NAE的具体区域

3.1.1ac83截短型病毒的构建

ac83的1351-2011nt可能包含了NAE的完整序列，而其1651-1800nt可能是NAE的核心区域。因此，本发明设计了一系列的ac83截短型病毒，尝试通过比较其产生子代BV的能力来确定NAE的具体区域。

首先，分别用引物对ac831351-U/ac832011-D、ac831451-U/ac832011-D、ac831551-U/ac832011-D、ac831651-U/ac832011-D、ac831351-U/ac831850-D、ac831351-U/ac831900:FLAG-D和ac831351-U/ac831950-D，以bMON14272为模板进行PCR扩增，获得ac83截短型片段ac83(1351-2011)、ac83(1451-2011)、ac83(1551-2011)、ac83(1651-2011)、ac83(1351-1850)、ac83(1351-1900)和ac83(1351-1950)。然后，用限制性内切酶XbaI/PstI对ac83(1351-1900)片段进行消化，并连接到pUC8-SV40相应位点中，阳性克隆命名为pUC18-ac83(1351-1900)。

用EcoRI/PstI消化pUC18-ac83(1351-1900)，回收目的片段后将其克隆至pFB1^ts-PH-GFP中相应位点，阳性克隆命名为pFB1^ts-PH-GFP-ac83(1351-1900)。

获得pFB1^ts-PH-GFP-ac83(1351-1900)后，以该质粒为基础，构建含有其他含有ac83截短片段的供体质粒。用限制性内切酶XbaI/XhoI对ac83截短型片段ac83(1351-2011)、ac83(1451-2011)、ac83(1551-2011)、ac83(1651-2011)、ac83(1351-1850)、ac83(1351-1950)和pFB1^ts-PH-GFP-ac83(1351-1900)进行消化。琼脂糖凝胶电泳后，回收pFB1^ts-PH-GFP-ac83(1351-1900)的载体部分，并将其分别与上述各片段进行连接，阳性克隆分别命名为pFB1^ts-PH-GFP-ac83(1351-2011)、-ac83(1451-2011)、-ac83(1551-2011)、-ac83(1651-2011)、-ac83(1351-1850)和-ac83(1351-1950)。

分别将上述构建的供体质粒热激转化至含有bAc83KO和pMON7124^ts的DH10B菌株中，使polh、egfp和各ac83截短型片段插入bAc83KO中，阳性克隆分别命名为vAc83(1351-2011)、vAc83(1451-2011)、vAc83(1551-2011)、vAc83(1651-2011)、vAc83(1351-1850)、vAc83(1351-1900)和vAc83(1351-1950)。

3.1.2各ac83截短型病毒在细胞中复制能力的比较

获得一系列ac83截短型杆状病毒质粒后，通过检测其产生病毒粒子的能力，鉴定NAE所在的具体区域。首先，从上述含有截短型突变体的菌株中提取不含宿主菌基因组DNA污染的超纯杆状病毒质粒DNA(通过使用DNA外切酶对线性DNA片段进行消化，只保留超螺旋状态的杆状病毒质粒DNA)。之后，分别用等量的超纯杆状病毒质粒DNA转染Sf9细胞，通过荧光显微镜观察这些ac83截短型病毒在细胞中的复制情况。在转染后24h，各样品中观察到的具有绿色荧光的细胞比例大致相等，说明各重组杆状病毒质粒的转染效率相当。到转染后96h，上述重组病毒在Sf9细胞中的复制情况都与vAc83:FLAG相似，几乎所有细胞都被感染而呈现绿色荧光，未能明显地观察到各重组病毒之间复制能力的差异。这个结果可能是由于本研究的截短策略对NAE只造成了的较小的影响或未影响到NAE序列，所以未能在光学显微镜下观察到这些重组病毒在复制能力上的差异。因此，收取上述实验中转染后96h的子代BV进行滴度测定。结果这些截短型病毒在转染后96h产生的BV的滴度也与vAc83:FLAG没有显著差异(p>0.05)。

由上述结果可知，从ac83的5′末端截短至1651nt或从ac83的3′末端截短至1850nt均不影响病毒在细胞中的增殖能力，说明只要保留ac83的1651-1850nt病毒基因组的装配就不会受到影响。3.1.3NAE位于ac83的1651-1850nt内。

为确定ac83的1651-1850nt缺失具有NAE完整的功能。按照上述方法，构建含有ac83的1651-1850nt片段的截短型病毒vAc83(1651-1850)。用vAc83(1651-1850)和vAc83:FLAG感染Sf9细胞(感染复数为5)。在感染后96h收取病毒上清，并用TCID₅₀法检测滴度。结果发现vAc83(1651-1850)和vAc83:FLAG产生的子代BV的滴度没有显著差异(p>0.05)，说明vAc83(1651-1850)的核衣壳装配能力与vAc83:FLAG相当。所以，ac83的1651-1850nt具有NAE介导核衣壳装配的完整功能，即NAE就是位于ac83的1651-1850nt，而ac83中的其他区域可能与病毒基因组的装配无关。

实施例4NAE的序列分析

4.1.1NAE在杆状病毒中的分布

通过局部序列比对基本检索工具(basic local alignment search tool，BLAST)和人工校对的方式，在已测序的杆状病毒中搜索与NAE具有相似性的序列，以了解NAE在杆状病毒中的分布情况。在所有已测序的甲型杆状病毒属(Alphabaculovirus)中都可以搜索到NAE的同源序列。而且，这些NAE同源序列都定位于各病毒的ac83同源基因中。上述结果说明，NAE广泛分布于甲型杆状病毒中。

4.1.2NAE的序列比对分析

用GeneDoc多序列比对软件对搜索到50个种的甲型杆状病毒NAE序列进行比对，可以发现这些序列具有较高的保守性。在约200bp的NAE序列内，共有109个位点具有保守性。其中，分析结果显示，有40个位点高度保守，另有23个位点完全保守(在50个用于比对的病毒中完全一致)。上述保守位点多数为A或T，而且大部分集中分布在9个区域中(其中8个是富含A/T的区域)，见图2。在上述保守区域中，有5个区域都含有一个ATATAC(或近似序列)的模序，暂时未知这个潜在的模序是否与NAE的功能相关。

对甲型杆状病毒中Group I的NAE进行序列比对。在Group I的病毒中，NAE的保守性很高，分析结果显示，有110个位点在Group I病毒中完全一致，另外49个位点高度保守以及有36个位点具有一定的保守性。其中，完全保守的位点多为A或T，形成了更明显的保守区域，见图3。

4.1.3NAE在各杆状病毒基因组中的定位

为研究NAE在各杆状病毒基因组中的定位情况，以位于各NAE序列中心的核苷酸的图单位代表NAE在各杆状病毒基因组中的位置。其中，在各杆状病毒基因组中，定义多角体蛋白基因所处位置为0m.u.，多角体蛋白基因的转录方向为正向。由于绝大部分杆状病毒基因组的序列都以多角体蛋白基因为起始位置，所以基因组内的任一核苷酸的图单位等于该核苷酸的位置除以其所在基因组的大小所得的比值再乘以100。以家蚕核多角体病BmNPV为例，其NAE序列位于基因组的63899–64098nt范围内，所以其中心的核苷酸的位置是63999nt。BmNPV基因组大小为128413bp，所以其NAE的图单位位置约为49.8m.u.。按照这一方法，统计甲型杆状病毒的NAE序列在各基因组的位置，详见表1，发现所有甲型杆状病毒的NAE序列均位于45-65m.u.范围内。

表1

YH1662335CN 核苷酸序列表

<110> 中山大学

<120> 一种核衣壳装配必需元件及其应用

<130> YH1662335CN

<160> 75

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 200

<212> DNA

<213> 柞蚕核型多角体病毒（Antheraea pernyi nucleopolyhedrovirus, AnpeNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 1

TTTTTGCAACATCGTATATTGACCAATATACTACAATCAGACATTTGCACACGCATATATACTACGATGTACCAAAAATATACTACACTGGCGCAAAAATATACTACAACTCCGCTACAATATAACTACACTCTCGTAAAACGGCCCCGAAATACGGTAGTATATGCTGCAAATATACCCTCTACGATTTTTGCACCAGC；

<210> 2

<211> 200

<212> DNA

<213> 黎豆夜蛾核型多角体病毒（Anticarsia gemmatalis multiplenucleopolyhedrovirus, AngeMNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 2

CATTTACAGCATCGTATATTAACCAATATACTACAATCGGACATTTGTGCTAACCTATATACTACGATGTACCAAAAATATACTACACTGGCACAGAAATATACTACAACTCCGCTACAATATAACTACACTCTCGTAAAACAACCTCGAAATATGGTAGTATATGCTAAAAATATACAATTGAAAAACGCTACGATTTC；

<210> 3

<211> 200

<212> DNA

<213> 苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒（Autographa californica multiplenucleopolyhedrovirus, AcMNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 3

CATTTTCAGCGACGTATATTGACAAATATACTACAGTCGGACGTTTGTGCCGACCTATATACTACACTTTACCAAAAATATACTACACTAAACTCTAAATATACTACAACTCCACTTCAATATAACCACACTCTCGTAAAACGGCCCAAAAATATCGAAATATATGGGGCAAATACACGTTTAAAAAACGCTACGATTCC；

<210> 4

<211> 200

<212> DNA

<213> 桑野蚕核型多角体病毒（Bombyx mandarina nucleopolyhedrovirus,BomaNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 4

CATTTTCAGCGACGTATATTGACAAATATACTACAGTCGGACGTTTGTGCCAACATATATACTACACTTTACCAAAAATATACTACATTAAACCCTAAATATACTACAACTCCACTTCAATATAACCGCATTCTCGTAAAGCGGCCTAAAAATATCGAAATATATGGGGCAAATACACGTTTAAAAAACGCTACGATTCC；

<210> 5

<211> 200

<212> DNA

<213> 家蚕核型多角体病毒（Bombyx mori nucleopolyhedrovirus, BmNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 5

<210> 6

<211> 200

<212> DNA

<213> 云杉卷叶蛾核型多角体病毒DEF型（Choristoneura fumiferana DEF multiplenucleopolyhedrovirus, CfDEFNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 6

CATTTACAGCATCGTATATTGACCAATATACTACAATCGGACATTTGTGCCGATCTATATACTACGATGTACCAAAAATATACTACACTGGCACAGAAATATACTACAACTCCGCTACAATATAACTACACTCTCGTAAAACGGCCTCGAAATATGGTAGTATATGCTGCAAATATACATTTAAAAAACGCTACGATTTC；

<210> 7

<211> 200

<212> DNA

<213> 云杉卷叶蛾核型多角体病毒（Choristoneura fumiferana multiplenucleopolyhedrovirus, CfMNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 7

CATTTCCAGCGACGTATATTGACTAATATACTACAGTCGGACATTTGTGCCGATCTATACACTACGATTTACCAAAAATATACTACACTGGCGCGCAAATATACTACAAGTCCGGTTCAATATAACTACACTTTCGTAAAACGGCCTGAAAATATGGTAGTATATGCTAAAAATACACGTTTCAAAAACGCTACGATTTC；

<210> 8

<211> 200

<212> DNA

<213> 紫色卷蛾核型多角体病毒（Choristoneura murinana nucleopolyhedroviru,ChmuNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 8

CATTTTCAACGACGTATATTGACCAATATACTACAGTCGGACATTTGTACCGATCTATACACTACGATTTACCAAAAATATACTACACTGGCGCGCAAATATACTACAACTCCGCTTCAATATAACTACACTTTCGTAAAACGGCCTGAAAATATGGTAGTATATGCTAAAAATACACGTTTAAAAAACGCTACGATTTC；

<210> 9

<211> 200

<212> DNA

<213> 西枞色卷蛾核型多角体病毒（Choristoneura occidentalisnucleopolyhedrovirus, ChocNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 9

CATTTCCAGCGACGTATATTGACTAATATACTACAGTCGGACATTTGTGCCGATCTATACACTACGATTTATCAAAAATATACTACACTGGCGCGCAAATATACTACAACTCCGGTTCAATATAACTACACTTTCGTAAAACGGCCTGAAAATATGGTAGTATATGCTAAAAATACACGTTTCAAAAACGCTACGATTGC；

<210> 10

<211> 200

<212> DNA

<213> 玫瑰色卷蛾核型多角体病毒（Choristoneura rosaceananucleopolyhedrovirus, ChroNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 10

CACTATCAACGACGTATATTGACCAATATACTACAGTCGGACATTTGCGCCAATCTATACACTACGATTTACCAAAAATATACTACACTGGCACGTAAATATACTACAACTCCGCTTCAATATAACTACACTTTCGTAAAACGGCCTGCAAATATGGTAGTATATGCTAAAAATATACGTTTCAAAAACGCTACGATTTT；

<210> 11

<211> 200

<212> DNA

<213> 巴西白杨树飞蛾核型多角体病毒（Condylorrhiza vestigialisnucleopolyhedrovirus, CoveMNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 11

CATTTACAACATCGTATATTGACCAATATACTACAATCGGACATTTGTGCCGACCTATATACTACGATGTACCAAAAATATACTACACTGGCACAAAAATATACTACAACTCCACTACAATATAACTACACTCTCGTAAAACGGCCTCGAAATATGGTAGTATATGCTAAAAATATACAATCAAAAAACGCTACGATTTC；

<210> 12

<211> 200

<212> DNA

<213> 苹果浅褐卷蛾核型多角体病毒（Epiphyas postvittananucleopolyhedrovirus, EppoNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 12

CATTTTGAGCGACGTATATTGACCAATATACTACAATCGGACGTTTGTGCCGATCTATATACTACGATGTACCAAAAATATACTACACTTGCACGAAAATATACTACAACTCCGTTTCAATATACTTACACTTTCGTAAAACCGCCTCCAAATATCGTTGTATATGCTAAAAATATACAATTAAAAAACGCTACGATTTC；

<210> 13

<211> 200

<212> DNA

<213> 美国白蛾核型多角体病毒（Hyphantria cunea nucleopolyhedrovirus,HycuNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 13

CACTTTCAGCGACGTATATTGACCAATATACTACAATCGGACATTTGCACCGATCTATACACTACGATTTACAAAAAATATACTACACTAGCACGCAAATATACTACAACTCCGTTTCAATATAACTACACTTTCGTAAAACAACCCCAAAATATGGTAGTATATGCTGAAAATACACAATTAAAAAACGCTACGATTTC；

<210> 14

<211> 200

<212> DNA

<213> 披肩粘虫核型多角体病毒（Maruca vitrata nucleopolyhedrovirus,MaviMNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 14

CATTTTAAGAGGCGTATATTAACAAATATACTACAGTCGGACGTTTGTGCCAACATATATACTACACTGTACCAAAAATATACTACACTTGCTTCAAAATATACTACAACTCCGTTTCAATATAACGACACTTTCGTAAAACGGTCTAAAAATATGGAAGTATATGAGGTAAATACACGTTTTAAAAACGCTACGATTTT；

<210> 15

<211> 200

<212> DNA

<213>黄杉毒蛾核型多角体病毒（Orgyia pseudotsugata multiplenucleopolyhedrovirus, OpMNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 15

CATTTTGAGCGCCGTATATTGGCCAATATACTACAGGCAGACATTTGCGCCGAGCTATACACTACGATTTACCAAAAATATACTACACTGGCACGGAAATATACTACAGCGTCTCCCAAATACAACTACACTTTCGTAAAACGCCCTCCAAATATAGTAGTATATGCAGAAAATACACATTTAAAAAACTCTACGATTTC；

<210> 16

<211> 200

<212> DNA

<213> 小菜蛾核多角体病毒（Plutella xylostella multiplenucleopolyhedrovirus, PlxyMNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 16

CATTTTCAGCGACGTATATTGACAAATATACTACAGTCGGACGTTTGTGCCGACCTATATACTACACTTTACCAAAAATATACTACACTAAACTCTAAATATACTACAACTCCACTTCAATATAACCACACTCTCGTAAAACGGCCCAAAAATATCGAAATATATGGGGCAAATACACGTTTAAAAAACGCTACGATTCT；

<210> 17

<211> 200

<212> DNA

<213> 薄荷灰夜蛾核多角体病毒（Rachiplusia ou multiplenucleopolyhedrovirus, RoMNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 17

CATTTTCAGCGACGTATATTGACAAATATACTACAGTCGGACGTTTGTGCCGACATATATACTACACTTTACCAAAAATATACTACACTAAACTCTAAATATACTACAACTCCGCTTCAATATAACTATACTCTCGTAAAACGGCCTAAAAATATCGAAATATATGGGGTAAATACACGTTTGAAAAACGCTACGATTCC；

<210> 18

<211> 200

<212> DNA

<213> 拟中金翅夜蛾核型多角体病毒（Thysanoplusia orichalceanucleopolyhedrovirus, ThorNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 18

CATTTTCAACGGCGTATATTGACCAATATACTACAGGCGGACGTTTGTGCGGACATATATACTACATTATACAGAAAATATACTACACTTAAATCTAAATATACTACAACTCCCGTTCAATATAACTACACTCTCGTAAAACGGCCCAAAAATATGGAATTATATGGGCCAAATACACGTTTAAAAAACGCTACGATTTC；

<210> 19

<211> 200

<212> DNA

<213> 樗蚕核型多角体病毒（Philosamia cynthia ricini nucleopolyhedrovirus,PhcyNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 19

TTTTTGCAACATCGTATATTGACCAATATACTACAATCAGACATTTGCACCCGCATATATACTACGATGTACCAAAAATATACTACACTGGCGCAAAAATATACTACAACTCCGCTACAATATAACTACACTCTCGTAAAACGGCCCCGAAATACGGTAGTATATGCTGCAAATATACCCTCTACGATTTTTGCGCCAGC；

<210> 20

<211> 200

<212> DNA

<213> 人工序列

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 20

CATTTTCAGCGACGTATATTGACCAATATACTACAGTCGGACATTTGTGCCGACCTATATACTACGATTTACCAAAAATATACTACACTGGCACCTAAATATACTACAACTCCGCTTCAATATAACTACACTCTCGTAAAACGGCCTCAAAATATGGTAGTATATGCTGAAAATACACGTTTAAAAAACGCTACGATTTC；

<210> 21

<211> 200

<212> DNA

<213> 褐带卷蛾核型多角体病毒（Adoxophyes honmai nucleopolyhedrovirus,AdhoNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 21

CTTTTTAGGACGCGTATATTGACCAATATACTACGATCCGACGTTTGCGGACTTATTTTGGCACAAATGCACCATAAATATACTACGATTGACACCAAATATACTCCAATATACGTTCAATATACGTACGAACGCGAAAAAGTGCCAAAAAATATTGTAGTATATCCGTCAAATATAACGGAAAAAAACGCTACAATTGT；

<210> 22

<211> 200

<212> DNA

<213> 茶小卷叶蛾核型多角体病毒（Adoxophyes orana nucleopolyhedrovirus,AdorNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 22

CTTTTTAGGACGCGTATATTGACCAATATACTACGATCCGACGTTTGCGGACTTATTTTGGCACAAATGCATTACAAATATACTACGATGGACACCAAATATACTCCAATATACGTTCAATATACGTACGAACGCGAAAAAGTGCCAAAAAATATTGTAGTATATCCGTCAAATATAACGGTAAAAAACGCTACGATTGA；

<210>23

<211> 200

<212> DNA

<213> 小地老虎核型多角体病毒（Agrotis ipsilon multiplenucleopolyhedrovirus, AgipNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 23

CACTTTACGGCCCAAGTCAACGCCAATATACTACATTCCGACGTTTGTGGTGAAATTTTGGGCCAAATACACAACCAATATACTACAATGGACTCTAAATATACTACGAATTCTTTCGAATATAATTACGAAAGTGTAAAGACGCCAAAATATATTGAACGATATGCGGCAAATATACCAAATATACAGAAATCTAAGAT；

<210> 24

<211> 200

<212> DNA

<213> 黄地老虎核型多角体病毒（Agrotis segetum nucleopolyhedrovirus,AgseNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 24

TATTTTACGACCCAAATCACAACCAATATACTACATTCCGACGTTTGTGGTGTAATTTTGGACAAAATACATGACAAATATACTACGACGATGCCCAAATATACTACAAAATTTTACGAATATAATTACGAAAGTGTAAAACCGGCAAAATATATTGAACGATATGCATCAAATATACCAAATATACAAAATGTAGAGTT；

<210> 25

<211> 200

<212> DNA

<213> 黄地老虎核型多角体病毒B型（Agrotis segetum nucleopolyhedrovirus B,AgseNPV-B）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 25

CATTTTACGACCCAAATTAACACCAATATACTACATTCCGACGTTTGTGGTGAAATTTTGAGTAAAATACACAACCAATATACTACGATGAGCTCCAAATATACTACGAAATCGTTCGAATATAATTACGAAAGTGTAAAACAGCCAAAATATATTGAACGATATGTGGCAAATATACCAAATATACAAAAAGCAAAGAT；

<210> 26

<211> 200

<212> DNA

<213> 沙枣尺蠖核型多角体病毒（Apocheima cinerarium nucleopolyhedrovirus,ApciNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 26

CATTTTAACACCCGTATATTTACCGATATACTACGAAATGACGTTTGCGGTATCATTTTAGAACAAATTCATAATTCATATACTACGATTGCGAGTAAATATACTACGATTGGCACTCCATATAACTACGAAATCGTAAACAAGCCATTTTATATGGATAAAAACACCGCAAATACATACGATATACCCATTACGATTAA；

<210> 27

<211> 200

<212> DNA

<213> 油桐尺蠖核型多角体病毒（Buzura suppressaria nucleopolyhedrovirus,BusuNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 27

CATTTTACGGTTCAAATATTGAACAATATACTACACTCTGATGTTTGCGGCACAATATTAAATCAAATTCATACCAAATATACTACACTTTCCATTTCATATACTACGATTGACGACAAATATAACTACGAAAGTGTAAAAGTGCCATTTTATATGGACCAAAACCATGCAAATACATACGATTTGCCGATTACGATCGA；

<210> 28

<211> 200

<212> DNA

<213> 锞纹夜蛾核型多角体病毒（Chrysodeixis chalcites nucleopolyhedrovirus,ChchNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 28

AATTTTCTCGAAACGTTTTCGGTCAATATACGACAATTCGACGAATGTCATAATATTCTCAATAAAATTCATATCAAATATACTACGATTGACGGTAAATATACTACCGTACAGCCCGAATATAACTTCAAAAGTGTAAACGACCAAAAAAATATCGAAAGATATGCGGAAAATATACAAAATTCCGAGGACACTATACC；

<210> 29

<211> 200

<212> DNA

<213>豆天蛾核型多角体病毒（Clanis bilineata nucleopolyhedrosisvirus,ClbiNPV）

<223>核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 29

GTGTTCACTACCAAAATTACAACCAATATACGACAATCGGACGTTTGTAATCAATTTTTAGACGCATTTGCGGAAAAATATACTACATTGTGGCAAAAATATACTACACCCAAGCCTAAAATATACTATAAAAATGAAAATAGTGTTTCAAATACAGGAGTGTACCCAGCAAATATACTGAAATCAGATATTGTAAATAA；

<210> 30

<211> 200

<212> DNA

<213> 茶尺蠖核型多角体病毒（Ecotropis obliqua nucleopolyhedrovirus,EcobNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 30

CAGTTTTACGTAACAATATCTAGCGATATACTACGATCCGACGTTTGTGGTACACTTTTGTATGAAATTAATGACCAATATACTACACTTGTCGACAAATATACTACAATATACGTTCAATATAAGTTCGAAAGTGTAAAATCGCCATTGTATATAGACCAAAAACATGCAAATACATACGATATACCCATTACGATTTC；

<210> 31

<211> 200

<212> DNA

<213> 茶黄毒蛾核型多角体病毒（Euproctis pseudoconspersanucleopolyhedrovirus, EupsNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 31

CATTTTTCGACAAGTATATTAACCGATATACTACGAAACGATGTGTGTGGAACAATTTTAGATCAAATTCACATTAAATATACTACACTGGCACATGAATATACTACGATTGACAACAAATACACGTACGAAAGTGTAAAACCGCACACGTATATGGATGAAAACGTCGCAAATATATCAAATTTTGAAACTACGATTTT；

<210> 32

<211> 200

<212> DNA

<213> 棉铃虫多核型多角体病毒（Helicoverpa armigera multiplenucleopolyhedrovirus, HearMNPV）

<223>核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 32

CACTTTACGACGCGTATATTGGCCAATATACTACAATCCGACGTTTGCGGTCAAATTTTACACGAAATTCATGAGAAATATACTACGATTATGAACAAATATACTACGATTACATTCAAATATAACGACAGTGGTGTAAAAACCACTAAATATATTGAACAATATGGGTCAAATATACAAAAATCTGACATTACGAAAAA；

<210> 33

<211> 200

<212> DNA

<213> 棉铃虫核型多角体病毒（Helicoverpa armigera nucleopolyhedrovirus,HearNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 33

CATTTTGCGGCATCGTATATTGGCGATATACTACACAATGACGAATGTTCTACACTTTTGACACAAATTCATGATTCATATACTACACTTTCCCAAAAATATACTACACTCGACTCTAAATATACGTACGAAAACGTAAAAAACGAAAAATTCGTCGAACAATACGGGACGAATATACACAAAAATGAACACTACGATTT；

<210> 34

<211> 200

<212> DNA

<213> 鹿纹天蚕蛾属核多角体病毒（Hemileuca species nucleopolyhedrovirus,HespNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 34

CATTTTACAGCGCGTATATTAGCCGATATACTACACAATGATGTTTGCGGTGAAATTTTAAATGACATTCACGCCTCATATACTACGATTTCAACGAAATATACTACGATTAACGACCAATATAACTACAAAAATGTAAAACCGCAATTTTATATTAATGGAAACGACACGAATATACGAAAAAATGGTATTACGATTTT；

<210> 35

<211> 200

<212> DNA

<213> 东方铁杉尺蠖核型多角体病毒（Lambdina fiscellarianucleopolyhedrovirus, LafiNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 35

GATTTTTTCGTAAATAAAAAAACCCATATACTACAATTTAGCGTTTGCGCGACGGTTTTAAATCAAATACACACTTCATATACTACATTCGGCCGAAAATATACTACGATGGACGGTTCATATACGTTCAAAAGTGTAAAACCTCTGTTTTATATTAACTCCAAAGTACTAAATACACATCGAAATAAAAATGAAATCGA；

<210> 36

<211> 200

<212> DNA

<213> 粘虫核型多角体病毒（Leucania separata nuclear polyhedrosisvirus,LeseNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 36

GATTTTTAACGCGTATATTGGCAAATATACAACAGTCGGACGTTTGCGATCAACTTTTGCACTTGATTCACGAGAAATATACTACGGTCCTCTCGAAATACACTACGACACGAACGAAACCGTCTACAAAAGTGAAAACAGGCCCTGAAAATATTGTAGTATCCGGGGTGAATACACGAAAAAGAGGCTCTACGATTTTG；

<210> 37

<211> 200

<212> DNA

<213> 舞毒蛾核型多角体病毒（Lymantria dispar multiplenucleopolyhedrovirus, LdMNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 37

CATTTCAGGACCGGAAAAACTGTCGATATACTACAATCCGACGCGTGCGAGGTTATTTTGCGCGATTTACACAACAAATATATTTCACAGTCGCGCTCGGCCGTACGATCGCCGGGCAAATATACCGGAAAAAGTGTAAAAAGGAAAAAAAATATTGAAGTATACGGGTCGAATATAAGAAAACGCGCGCGAGTTTCCAC；

<210> 38

<211> 200

<212> DNA

<213> 木毒蛾核型多角体病毒（Lymantria xylina multiplenucleopolyhedrovirus, LyxyMNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 38

CATTTTAGGGCCGGAAAAATTGTCAATATACTACAATCCGACGTGTGCGAGATTATTTTGCGCGATTTGCACAACAAATATATTTCAAAATCGACCCCCGTCGTGAAATCGAGAGGTAAATATACGCGAAAAAGTGTAAAAGGGGAAAAAAATATTGAAGTATACGGGTCAAATATAAGAAAACGTGCGCGCGTTTCCGA；

<210> 39

<211> 200

<212> DNA

<213> 甘蓝夜蛾核型多角体病毒（Mamestra brassicae multiple multiplenucleopolyhedrovirus, MbMNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 39

CACTTTACGACGCGTATATTGGCCAATATACTACAATCCGACGTTTGCGGTCAGATTTTACACGAAATTCATGAAAAATATACTACGATTATGAACAAATATACTACGATTACATTCAAATATAACGACAGTGGTGTAAAAACCACTAAATATATTGAACAATATGGGTCAAATATACAAAAATCTGACATTACGAAAAA；

<210> 40

<211> 200

<212> DNA

<213> 蓓带夜蛾核型多角体病毒A型（Mamestra configurata nucleopolyhedrovirusA, MacoNPV-A）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 40

CACTTTACGACGCGTATATTGGCCAATATACTACAATCCGACGTTTGCGGTACAATTTTACACCAAATCCACGAGAAATATACTACGATTACGAACAAATATACTACGATTACATTTAAATATAACGACAGTGGTGTAAAAACTAGTAATTATATTGAACGATATGGGTCGAATATACAAAAATCCAATATTACGAAATT；

<210> 41

<211> 200

<212> DNA

<213> 蓓带夜蛾核型多角体病毒B型（Mamestra configurata nucleopolyhedrovirusB, MacoNPV-B）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 41

<210> 42

<211> 200

<212> DNA

<213> 合毒蛾核型多角体病毒（Orgyia leucostigma nucleopolyhedrovirus,OrleNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 42

CACTTTACCGTCAATATATTGACCAATATACTACGATACGACGCTTGCGGGACAATATTGAACGATTTACACGTTCAATATACTACGAAAGTACATAAATATACTACACCGCGTCGTAAATATACGTACGAAAATGTAAAAAGCGAATTGTATATGGGTACGCCGACCGCAAATATACCCGTAAATGACATTACGATCGA；

<210> 43

<211> 200

<212> DNA

<213> 疆夜蛾属核型多角体病毒（Peridroma species nucleopolyhedrovirus,PespNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 43

CACTTTACGACGCGTATATTGGCAAATATACAACGATCCGACCCGTGCGCTACAATTTTGACCCAAATTCACGACCAATATACTACGATTACGTCCAAATATACTACGATCGCACTCAAATATACCTACGAAAGTGTAAAAGACGATAAATATATTGAACGATATGGGTCAAATATACCCAAAAATTCAATTACGATTTC；

<210> 44

<211> 200

<212> DNA

<213> 大豆尺蠖蛾核型多角体病毒（Pseudoplusia includens singlenucleopolyhedrovirus, PsinSNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 44

GATTTCATCGAAAGGATATCGGTCAATATACGACAATTCGACGAATGTCACTCTATTCTCGATAAAATTCACATCAAATATACTACGATTGACGGTAAATATACTACAGTTCGGCCCGAATATAATTTCAAAAGTGTAAACAGCCCAAAAAATATCGAAAGATATGCGGAAAATATACAAAATTCCGACGACACTATACC；

<210> 45

<211> 200

<212> DNA

<213> 甜菜夜蛾核多角体病毒（Spodoptera exigua multiplenucleopolyhedrovirus, SeMNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 45

CATTTCACTGCCCAAATATCGGCCAATATACTACAATCGGACGTTTGCGGCGAACTCTTGACCAAAATTCACGACCAATATACTACGATTTCCTCAAAATATACTACGATTCGTGACAAATATACTTTCGAAAGTGTAAAACGACCAAAATATATTGAACAATATCGGTCAAATATACAAAATTCAACCAATACACAAAT；

<210> 46

<211> 200

<212> DNA

<213> 草地贪夜蛾核型多角体病毒（Spodoptera frugiperda multiplenucleopolyhedrovirus, SfMNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 46

TATTTTACGACGCAAATAATGGCCAATATACTACAATCTGACGTGTGCGGTGAAATCTTGACCAAGATTCATGACAAATATACTACGATTCCGATCAAATATACTACGATTCCACTCAAATATAATTACGAAAGTGTAAAAGGCCCAAAATATATTGAACGATATCGGGCAAATATACCATTTGAAGCCGATGAAACTGA；

<210> 47

<211> 200

<212> DNA

<213> 斜纹夜蛾核型多角体病毒II（Spodoptera litura nucleopolyhedrovirus,SpltNPVII）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 47

CATTTCATTGCGCAAATTTCGGCCGATATACTACGATCCGACGCTTGCGGCGAACTTTTGACTCAAATCCACGACCAATATACTACGATTTCCTCCAAATATACTACGATTCGTGCCAAATATAATTACGAAAGTGTAAAAGAGCCGAAATATATTGAACGATATCGGGCAAATATACAAAATTCGGCCAATATACAAGA；

<210> 48

<211> 213

<212> DNA

<213> 斜纹夜蛾核型多角体病毒（Spodoptera litura nucleopolyhedrovirus,SpltNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 48

CTTTTGACGTTTCATGTACGCCCGAATCGATAGGACAGAAAATTTTTACTCTTTTACATCGATATACTACGAAACGCTCAAAATATACTACACTGAACTCCAAATATACTACACACGTCGAAAAAAGCGGTGTAAATATGGAAAAAATCGAAAAACACGATGAAAAAGTTGAAATATATTCAGCGAATACACATTTCGATTTCGTAAAATTCG；

<210> 49

<211> 200

<212> DNA

<213> 枣步曲核型多角体病毒（Sucra jujuba nucleopolyhedrovirus, SujuNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 49

CACTTTACGGTGCAAATATTGGCCGATATACTACGATCTGATGTTTGCGGTATGATATTTAGTTCAATATACGATCAATATACTACATTGTCGGGTTCATATACTACGATTGCGCCCAAATATACCTTCGAAAGTGTAAAATCGTCAAATTATATTGGTAAAAACGACACTAAATCATTCGATATACCAATTTCGATTCC；

<210> 50

<211> 200

<212> DNA

<213> 粉纹夜蛾单核衣壳核型多角体病毒（Trichoplusia ni singlenucleopolyhedrovirus, TniSNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 50

GATTTTCTCGAATCGATATCGGTCAATATACGACAATTTGACGAATGTCATAGTATTCTCGATAAAATTCACATCAAATATACTACGATTAACCGTAAATATACTACTCTTCAACCCGAATATACGTTCAAAAGTGTAAACAGCTCAAAAAATATCGAAAGATATGCGGAAAATATACCAAATTCCAAGGACACTATACC；

<210> 51

<211> 200

<212> DNA

<213> 美洲棉铃虫核型多角体病毒（Helicoverpa zea singlenucleopolyhedrovirus, HzSNPV）

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 51

<210> 52

<211> 200

<212> DNA

<213> 人工序列

<223> 核衣壳装配必需元件（NAE）

<400> 52

CATTTTAAGCCACGTATATTGACCAATATACTACAATCGGACGTTTGTGCCGAAATTTTACTAAAATTCACCAAAAATATACTACACTTGCCCCCAAATATACTACAAACTCCGCTTCAATATAACTACAAAAGCGTAAAACGGCCTAAAAATATTGAAGTATATGCGGCAAATATACAAAAAAAAAACGCTACGATTGC；

<210> 53

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列

<223> Ac83KO2-US-U

<400> 53

CGCGAGCTCATGATGTCTGGCGTAATGTTGCTCATGCTTGC；

<210> 54

<211> 36

<212> DNA

<213> 人工序列

<223> Ac83KO2-US-D

<400> 54

CGCGGATCCGTTGGGATTTTCATCATTTGCTCTAAC；

<210> 55

<211> 37

<212> DNA

<213> 人工序列

<223> Ac83KO2-DS-U

<400> 55

CTGCAGATAATACAACAAGTCTGCCGGTCTTTATCCC；

<210> 56

<211> 32

<212> DNA

<213> 人工序列

<223> Ac83KO2-DS-D

<400> 56

AAGCTTTTGATGCACGTTATCAGTTGTGACTC；

<210> 57

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列

<223> Ac83 promoter-U2

<400> 57

AAACTGCAGGAATTCACTAGTGCGTTTCCTTCTTGCTCATCGATAG；

<210> 58

<211> 31

<212> DNA

<213> 人工序列

<223> Ac83KO-CHECK-D

<400> 58

ATGATCCGGAATGATGTCATTTGTTTTCGAC；

<210> 59

<211> 35

<212> DNA

<213> 人工序列

<223> ac83361-U

<400> 59

CCGGAATTCGAGTTTATTTTGAGCGGCGACAAGGC；

<210> 60

<211> 59

<212> DNA

<213> 人工序列

<223> ac832417:FLAG-D

<400> 60

TAGTCTAGATTACTTGTCGTCATCGTCTTTGTAGTCTAACCAACGGTTGTATTTGACGC；

<210> 61

<211> 74

<212> DNA

<213> 人工序列

<223> Ac83:FLAG-D

<400> 61

CGAGCTCGGATCCTTACTTGTCGTCATCGTCTTTGTAGTCCTCGAGTACAATGGAATCTTCTTGTAAATTATCC；

<210> 62

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列

<223> 38KORF-U

<400> 62

CGGGATCCATGGCCTCCTCGCTTCAAAG；

<210> 63

<211> 35

<212> DNA

<213> 人工序列

<223> 38KORF-D

<400> 63

GGGGTACCTTTAATAAAATATTGTTCGTAATCCAT；

<210> 64

<211> 73

<212> DNA

<213> 人工序列

<223> CNEKO-U

<400> 64

AGTACTGCACGACTGATAAGACAATAGTGGTGGGGGAACTTGCCAGGCAACTTCGAATAAATACCTGTGACGG；

<210> 65

<211> 76

<212> DNA

<213> 人工序列

<223> CNEKO-D

<400> 65

CGCCTGAGTGGGGGACAGATAACAGAAACTGCAGCCTGTGATATGATAAAGAACCAGCAATAGACATAAGCGGCTA；

<210> 66

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<223> CNEKO-CHECK-U

<400> 66

CTTGAACTGTGCTTACGAGTAGAACGG；

<210> 67

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<223> CNEKO-CHECK-D

<400> 67

CTTTTATAGCTGCACGCCTGAGT；

<210> 68

<211> 38

<212> DNA

<213> 人工序列

<223> ac831351-U

<400> 68

GCTCTAGATTAAACAACGACGCCATCTTTGCTCAATGG；

<210> 69

<211> 39

<212> DNA

<213> 人工序列

<223> ac831451-U

<400> 69

GCTCTAGAGAGACAACTTGTACGATGTGTTTGACGCTAG；

<210> 70

<211> 35

<212> DNA

<213> 人工序列

<223> ac831551-U

<400> 70

GCTCTAGATTTAAACGTATTGAGCAGCACGCTGAC；

<210> 71

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列

<223> ac831651-U

<400> 71

GCTCTAGACATTTTCAGCGACGTATATT；

<210> 72

<211> 38

<212> DNA

<213> 人工序列

<223> ac831850-D

<400> 72

ACCGCTCGAGGGAATCGTAGCGTTTTTTAAACGTGTAT；

<210> 73

<211> 59

<212> DNA

<213> 人工序列

<223> ac831900:FLAG-D

<400> 73

AACTGCAGTTACTTGTCGTCATCGTCTTTGTAGTCCTCGAGGCTGGTTTTCAAAGGGAT；

<210> 74

<211> 34

<212> DNA

<213> 人工序列

<223> ac831950-D

<400> 74

ACCGCTCGAGTTGAAAAGGGTTAAACAGGGGTAG；

<210> 75

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列

<223> ac832011-D

<400> 75

ACCGCTCGAGGCGCCACTACCCAATGGTC。

Claims

1.一种核苷酸序列，其包括与位于甲型杆状病毒属的病毒基因组的45m.u.至65m.u.的位置内的核苷酸序列相同的序列；尤其包括与位于甲型杆状病毒属的病毒基因组的47.9m.u.至60.8m.u.的位置内的核苷酸序列相同的序列；

优选所述核苷酸序列具有不超过500nt/bp的核苷酸残基，更优选所述核苷酸序列具有不超过300nt/bp的核苷酸残基，更优选所述核苷酸序列具有150nt/bp至250nt/bp的核苷酸残基，最优选所述核苷酸序列具有200nt/bp至213nt/bp的核苷酸残基。

2.根据权利要求1所述的核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列包括从5’端起的如下核苷酸序列：顺序的(1)2-3个选自A、T、G或C的核苷酸残基；(2)T；(3)20-22个选自A、T、G或C的核苷酸残基；(4)AT；(5)0-2个选自A、T、G或C的核苷酸残基；(6)ATA；(7)2个选自A、T、G或C的核苷酸残基；(8)AC；(9)11-16个选自A、T、G或C的核苷酸残基；(10)T；(11)29-32个选自A、T、G或C的核苷酸残基；(12)ATATA；(13)1个选自A、T、G或C的核苷酸残基；(14)T；(15)1个选自A、T、G或C的核苷酸残基；(16)C；(17)18个选自A、T、G或C的核苷酸残基；(18)T；(19)14-15个选自A、T、G或C的核苷酸残基；(20)A；(21)17-25个选自A、T、G或C的核苷酸残基；(22)AA；(23)32个选自A、T、G或C的核苷酸残基；(24)AA；(25)3个选自A、T、G或C的核苷酸残基；(26)A；(27)23或24个选自A、T、G或C的核苷酸残基。

3.根据权利要求2所述的核苷酸序列，其特征如下：

在顺序(1)中，与顺序(2)的核苷酸残基向5’端间隔2个核苷酸残基的核苷酸残基为C或被缺失；与顺序(2)的核苷酸残基向5’端间隔1个核苷酸残基的核苷酸残基为A或T，优选为A；与顺序(2)的核苷酸残基向5’端相邻的核苷酸残基为T、G或C，优选为T；

在顺序(3)中，与顺序(2)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为T或A，优选为T；与顺序(2)的核苷酸残基向3’端间隔8个的核苷酸残基为T或被缺失，优选被缺失；与顺序(2)的核苷酸残基向3’端间隔9个核苷酸残基的核苷酸残基优选为C；与顺序(2)的核苷酸残基向3’端间隔12个的核苷酸残基为A、T或G，优选为A；与顺序(2)的核苷酸残基向3’端间隔13个的核苷酸残基为T或A，优选为T；与顺序(2)的核苷酸残基向3’端间隔14个的核苷酸残基为A、T或C，优选为A；与顺序(2)的核苷酸残基向3’端间隔15个的核苷酸残基为T、C或A，优选为T；与顺序(2)的核苷酸残基向3’端间隔19个的核苷酸残基为C、A、T或被缺失，优选为C；与顺序(2)的核苷酸残基向3’端间隔21个的核苷酸残基为A、G或C，优选为A；

在顺序(7)中，与顺序(6)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为C或G，优选C；与顺序(6)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为T、A或G，优选为T；

在顺序(9)中，与顺序(8)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A或G，优选为A；与顺序(8)的核苷酸残基向3’端间隔3-8个的核苷酸残基为T、G或A，优选为T；与顺序(8)的核苷酸残基向3’端间隔6-11个的核苷酸残基为G、T或A，优选G；与顺序(8)的核苷酸残基向3’端间隔7-12个的核苷酸残基为A、T或G，优选A；与顺序(8)的核苷酸残基向3’端间隔8-13个的核苷酸残基为C或T，优选C；与顺序(8)的核苷酸残基向3’端间隔10-15个的核苷酸残基为T、A或C，优选T；与顺序(8)的核苷酸残基向3’端间隔11-16个的核苷酸残基为T、或G，优选T；

在顺序(11)中，与顺序(10)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为G或T，优选G；与顺序(10)的核苷酸残基向3’端间隔6-9个的核苷酸残基为T或G，优选T；与顺序(10)的核苷酸残基向3’端间隔8-11个的十二核苷酸残基为T或C，优选T；与顺序(10)的核苷酸残基向3’端间隔19-22个的核苷酸残基为T或A，优选T；与顺序(10)的核苷酸残基向3’端间隔22-25个的核苷酸残基为A或G，优选A；与顺序(10)的核苷酸残基向3’端间隔25-28个的核苷酸残基优选为A；与顺序(10)的核苷酸残基向3’端间隔28-31个的核苷酸残基为A或C，优选A；

在顺序(13)中，与顺序(12)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为C或T，优选C；

在顺序(15)中，与顺序(14)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A或T，优选A；

在顺序(17)中，与顺序(16)的核苷酸残基向3’端间隔2个的核苷酸残基为T、C或A，优选T；与顺序(16)的核苷酸残基向3’端间隔10个的核苷酸残基优选为A；与顺序(16)的核苷酸残基向3’端间隔11个的核苷酸残基为A或C，优选A；与顺序(16)的核苷酸残基向3’端间隔12个的核苷酸残基为A、C或G，优选A；与顺序(16)的核苷酸残基向3’端间隔13个的核苷酸残基为T或G，优选T；与顺序(16)的核苷酸残基向3’端间隔14个的核苷酸残基A或被缺失，优选A；与顺序(16)的核苷酸残基向3’端间隔14-15个的核苷酸残基为T或C，优选T；与顺序(16)的核苷酸残基向3’端间隔15-16个的核苷酸残基为A或C，优选A；与顺序(16)的核苷酸残基向3’端间隔16-17个的核苷酸残基为C或G，优选C；

在顺序(19)中，与顺序(18)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A、C或G，优选A；与顺序(18)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为C或A，优选C；与顺序(18)的核苷酸残基向3’端间隔14个的核苷酸残基为A或C，优选A；

在顺序(21)中，与顺序(20)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基优选被缺失0-4个核苷酸残基；与顺序(20)的核苷酸残基向3’端相邻或间隔1-4个的核苷酸残基为T或被缺失，优选T；与顺序(20)的核苷酸残基向3’端相邻或间隔1-5个的核苷酸残基为A、C或G，优选A；与顺序(20)的核苷酸残基向3’端间隔1-6个的核苷酸残基为T或C，优选T；与顺序(20)的核苷酸残基向3’端间隔2-7个的核苷酸残基为A或G，优选A；与顺序(20)的核苷酸残基向3’端间隔7-12个的核苷酸残基为C、T或A，优选C；与顺序(20)的核苷酸残基向3’端间隔8-13个的核苷酸残基优选被缺失0-4个核苷酸残基；与顺序(20)的核苷酸残基向3’端间隔14-23个的核苷酸残基为G或A，优选G；与顺序(20)的核苷酸残基向3’端间隔15-24个的核苷酸残基为T或A，优选T；

在顺序(23)中，与顺序(22)的核苷酸残基向3’端间隔16-25个的核苷酸残基为A或C，优选A；与顺序(22)的核苷酸残基向3’端间隔17-26个的核苷酸残基优选为A；与顺序(22)的核苷酸残基向3’端间隔26-35个的核苷酸残基为A、G或T，优选A；与顺序(22)的核苷酸残基向3’端间隔28-37个的核苷酸残基为A或T，优选A；与顺序(22)的核苷酸残基向3’端间隔29-38个的核苷酸残基为T、C或A，优选T；与顺序(22)的核苷酸残基向3’端间隔30-39个的核苷酸残基为A或G，优选A；与顺序(22)的核苷酸残基向3’端间隔31-40个的核苷酸残基为T或C，优选T；与顺序(22)的核苷酸残基向3’端间隔33-42个的核苷酸残基为G或A，优选G；与顺序(22)的核苷酸残基向3’端间隔35-44个的核苷酸残基第177位为A、T或C，优选A；与顺序(22)的核苷酸残基向3’端间隔37-46个的核苷酸残基为A、G或C，优选A；与顺序(22)的核苷酸残基向3’端间隔38-47个的核苷酸残基为T、A或C，优选T；与顺序(22)的核苷酸残基向3’端间隔40-49个的核苷酸残基为A或C，优选A；与顺序(22)的核苷酸残基向3’端间隔47-56个的核苷酸残基为A、G或T，优选A；

在顺序(25)中，与顺序(24)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为T或A，优选T；与顺序(24)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为A或T，优选A；

在顺序(27)中，与顺序(26)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为C、A或T，优选C；与顺序(26)的核苷酸残基向3’端间隔11-14个的核苷酸残基为T、A或C，优选T；

所述核苷酸序列选自SEQ ID Nos.1-52所示的序列中的至少一种。

4.根据权利要求1所述的核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列包括的从5’端起的如下核苷酸序列：

在顺序(一)中，与顺序(二)的核苷酸残基向5’端间隔2个核苷酸残基的核苷酸残基为C或T，优选为C；与顺序(二)的核苷酸残基向5’端间隔1个核苷酸残基的核苷酸残基为A或T，优选为A；与顺序(二)的核苷酸残基向5’端相邻的核苷酸残基为T或C，优选为T；

在顺序(二)中，为T；

在顺序(三)中，与顺序(二)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为T或A，优选为T；与顺序(二)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为A、T、G或C，优选为T；与顺序(二)的核苷酸残基向3’端间隔2个核苷酸残基的核苷酸残基为C、A或G，优选为C；

在顺序(四)中，为A；

在顺序(五)中，与顺序(四)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A或G，优选为G；与顺序(四)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为C或A，优选为C；与顺序(四)的核苷酸残基向3’端间隔2个核苷酸残基的核苷酸残基为A或G，优选为G；与顺序(四)的核苷酸残基向3’端间隔3个核苷酸残基的核苷酸残基优选为A、T、C或G，优选A；

在顺序(六)中，为CGTATATT；

在顺序(七)中，与顺序(六)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A或G，优选为G；与顺序(六)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为A或G，优选为A；

在顺序(八)中，为C；

在顺序(九)中，为A、T或C，优选为C；

在顺序(十)中，为AATATACTACA；

在顺序(十一)中，为G或A，优选为G；

在顺序(十二)中，为T或G，优选为T；

在顺序(十三)中，为C；

在顺序(十四)中，为G或A，优选为G；

在顺序(十五)中，为GAC；

在顺序(十六)中，为A或G，优选为A；

在顺序(十七)中，为TTTG；

在顺序(十八)中，为T或C，优选为T；

在顺序(十九)中，为G或A，优选为G；

在顺序(二十)中，为C；

在顺序(二十一)中，与顺序(二十)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A、T、C或G，优选为C；与顺序(二十)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为A、C或G，优选为G；与顺序(二十)的核苷酸残基向3’端间隔2个的核苷酸残基为A或G，优选为A；与顺序(二十)的核苷酸残基向3’端间隔3个的核苷酸残基为C、G或T，优选为C；与顺序(二十)的核苷酸残基向3’端间隔4个的核苷酸残基为C或A，优选为C；

在顺序(二十二)中，为TATA；

在顺序(二十三)中，为T或C，优选为T；

在顺序(二十四)中，为ACTAC；

在顺序(二十五)中，与顺序(二十四)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A或G，优选为G；与顺序(二十四)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为A、C或T，优选为A；

在顺序(二十六)中，为T；

在顺序(二十七)中，为A、T或G，优选为T；

在顺序(二十八)中，为TA；

在顺序(二十九)中，与顺序(二十八)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为T或C，优选为C；与顺序(二十八)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为A或C，优选为C；与顺序(二十八)的核苷酸残基向3’端间隔2个的核苷酸残基为A或G，优选为A；

在顺序(三十)中，为AAAATATACTACA；

在顺序(三十一)中，为T或C，优选为C；

在顺序(三十二)中，为T；

在顺序(三十三)中，与顺序(三十二)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A、T或G；与顺序(三十二)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为A或G，优选为G；与顺序(三十二)的核苷酸残基向3’端间隔2个的核苷酸残基为A或C，优选为C，与顺序(三十二)的核苷酸残基向3’端间隔3个的核苷酸残基为A、T、C或G；与顺序(三十二)的核苷酸残基向3’端间隔4个的核苷酸残基为T或C，优选为C；与顺序(三十二)的核苷酸残基向3’端间隔5个的核苷酸残基为A、C或G；与顺序(三十二)的核苷酸残基向3’端间隔6个的核苷酸残基为A、T、C或G；

在顺序(三十四)中，为AAATATACTACA；

在顺序(三十五)中，与顺序(三十四)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A或G，优选为A；与顺序(三十四)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为C或G，优选为C；与顺序(三十四)的核苷酸残基向3’端间隔2个的核苷酸残基为T或G，优选为T，与顺序(三十四)的核苷酸残基向3’端间隔3个的核苷酸残基为T或C，优选为C；

在顺序(三十六)中，为C；

在顺序(三十七)中，与顺序(三十六)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A、T、C或G，优选为A或G；与顺序(三十六)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为T、C或G，优选为C；与顺序(三十六)的核苷酸残基向3’端间隔2个的核苷酸残基为T或C，优选为T；与顺序(三十六)的核苷酸残基向3’端间隔3个的核苷酸残基为A、T或C，优选为T；与顺序(三十六)的核苷酸残基向3’端间隔4个的核苷酸残基为A或C，优选为C；

在顺序(三十八)中，为AATA；

在顺序(三十九)中，为T或C，优选为T；

在顺序(四十)中，为A；

在顺序(四十一)中，与顺序(四十)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A或C，优选为A；与顺序(四十)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为T或C，优选为C；与顺序(四十)的核苷酸残基向3’端间隔2个的核苷酸残基为T、C或G，优选为T，与顺序(四十)的核苷酸残基向3’端间隔3个的核苷酸残基为A或G，优选为A；与顺序(四十)的核苷酸残基向3’端间隔4个的核苷酸残基为C或T，优选为C；

在顺序(四十二)中，为A；

在顺序(四十三)中，为T或C，优选为C；

在顺序(四十四)中，为T；

在顺序(四十五)中，为T或C，优选为C；

在顺序(四十六)中，为TCGTAAA；

在顺序(四十七)中，为A或G，优选为A；

在顺序(四十八)中，为C；

在顺序(四十九)中，与顺序(四十八)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A、C或G，优选为G；与顺序(四十八)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为A、C或G，优选为G；与顺序(四十八)的核苷酸残基向3’端间隔2个的核苷酸残基为T或C，优选为C；

在顺序(五十)中，为C；

在顺序(五十一)中，与顺序(五十)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为T或C，优选为T；与顺序(五十)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为A、C或G；与顺序(五十)的核苷酸残基向3’端间隔2个的核苷酸残基为A、C或G，优选为A；

在顺序(五十二)中，为AAATA；

在顺序(五十三)中，与顺序(五十二)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为T或C，优选为T；与顺序(五十二)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为A、C或G，优选为G；

在顺序(五十四)中，为G；

在顺序(五十五)中，与顺序(五十四)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A或T，优选为T；与顺序(五十四)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为A或T，优选为A；与顺序(五十四)的核苷酸残基向3’端间隔2个的核苷酸残基为A、T或G，优选为G；

在顺序(五十六)中，为TATATG；

在顺序(五十七)中，与顺序(五十六)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A、C或G，优选为C；与顺序(五十六)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为A、T或G，优选为T或G；与顺序(五十六)的核苷酸残基向3’端间隔2个的核苷酸残基为A、C或G，优选为A或G；与顺序(五十六)的核苷酸残基向3’端间隔3个的核苷酸残基为A、T或C；

在顺序(五十八)中，为AAATA；

在顺序(五十九)中，为C或T，优选为C；

在顺序(六十)中，为AC；

在顺序(六十一)中，与顺序(六十)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A、C或G，优选为G；与顺序(六十)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为A、T或C，优选为T；

在顺序(六十二)中，为T；

在顺序(六十三)中，与顺序(六十二)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为T或C，优选为T；与顺序(六十二)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为A、T、C或G，优选为A；

在顺序(六十四)中，为A；

在顺序(六十五)中，与顺序(六十四)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A或C，优选为A；与顺序(六十四)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为A或G，优选为A；

在顺序(六十六)中，为A；

在顺序(六十七)中，与顺序(六十六)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A或T，优选为A；与顺序(六十六)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为C或T，优选为C；与顺序(六十六)的核苷酸残基向3’端间隔2个的核苷酸残基为T或G，优选为G；与顺序(六十六)的核苷酸残基向3’端间隔3个的核苷酸残基为T或C，优选为C；

在顺序(六十八)中，为T；

在顺序(六十九)中，为A或G，优选为A；

在顺序(七十)中，为C；

在顺序(七十一)中，与顺序(七十)的核苷酸残基向3’端相邻的核苷酸残基为A或G，优选为G；与顺序(七十)的核苷酸残基向3’端间隔1个的核苷酸残基为A或C，优选为A；与顺序(七十)的核苷酸残基向3’端间隔2个的核苷酸残基为T或C，优选为T；与顺序(七十)的核苷酸残基向3’端间隔3个的核苷酸残基为A或T，优选为T；与顺序(七十)的核苷酸残基向3’端间隔4个的核苷酸残基为T、C或G，优选为T；与顺序(七十)的核苷酸残基向3’端间隔5个的核苷酸残基为T或C，优选为C；

所述核苷酸序列选自SEQ ID Nos.1-20所示的序列中的至少一种。

5.一种核苷酸序列，其与如权利要求1-4中任意一项所述的核苷酸序列具有11％-100％、55％-100％、70％-99.8％、75％-99.8％、80％-99.5％、90％-99.5％或90％-99.5％的一致性；且具有如权利要求2或3所述的核苷酸序列中的顺序(2)、(4)、(6)、(8)、(10)、(12)、(14)、(16)、(18)、(20)、(22)、(24)和(26)中的完全保守序列；或具有如权利要求4所述的核苷酸序列中的顺序(二)、(四)、(六)、(八)、(十)、(十三)、(十五)、(十七)、(二十)、(二十二)、(二十四)、(二十六)、(二十八)、(三十)、(三十二)、(三十四)、(三十六)、(三十八)、(四十)、(四十二)、(四十四)、(四十六)、(四十八)、(五十)、(五十二)、(五十四)、(五十六)、(五十八)、(六十)、(六十二)、(六十四)、(六十六)、(六十八)和(七十)中的完全保守序列；

并且具有与如权利要求1-4中任意一项所述的核苷酸序列的相同的功能。

6.根据权利要求1-5任意一项所述的核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列选自单链DNA、双链DNA、单链cDNA、单链RNA和双链RNA中的至少一种；其中，当所述核苷酸序列为单链RNA和/或双链RNA时，核苷酸序列中的T被替换为U。

7.一种核苷酸序列，其为如权利要求1-6中任意一项所述的核苷酸序列的反向互补序列。

8.根据权利要求7所述的核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列选自单链DNA、单链cDNA和单链RNA中的至少一种；其中，当所述核苷酸序列为单链RNA时，核苷酸序列中的T被替换为U。

9.如权利要求1-6中任意一项所述的核苷酸序列和/或如权利要求7或8所述的反向互补序列在构建含有靶标核苷酸序列的载体中的应用，特别是在构建将含有的靶标核苷酸序列到昆虫、昆虫细胞、人体、人的器官、人的组织、人源细胞、动物体、动物的器官、动物的组织和动物源细胞中的至少一种的载体中的应用。

10.如权利要求1-6中任意一项所述的核苷酸序列和/或如权利要求7或8所述的反向互补序列在病毒核衣壳装配中的应用，优选在杆状病毒科(Baculoviridae)的核衣壳装配中的应用，更优选在甲型杆状病毒属(Alphabaculovirus)的核衣壳装配中的应用；

或者如权利要求1-6中任意一项所述的核苷酸序列和/或如权利要求7或8所述的反向互补序列在通过失活其功能来阻止病毒核衣壳装配中的应用，优选在通过失活其功能来阻止杆状病毒科(Baculoviridae)的核衣壳装配中的应用，更优选在通过失活其功能来阻止甲型杆状病毒属(Alphabaculovirus)的核衣壳装配中的应用；

或者如权利要求1-6中任意一项所述的核苷酸序列和/或如权利要求7或8所述的反向互补序列在寻找失活其功能的药物中的应用。