CN106544303A - 一株分离自牛粪堆肥的高效解磷菌p18及其应用 - Google Patents

一株分离自牛粪堆肥的高效解磷菌p18及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一株具有解磷能力的不动杆菌P18，其分类命名为帕乌斯氏不动杆菌(Acinetobacter parvus)，该菌株已经与2016年10月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏号为CGMCC13078。该菌株不仅可以通过分泌不同种类有机酸有效分解以Ca3(PO4)2为主要代表的难溶性无机磷酸盐，同时也可以通过释放碱性磷酸酶有效分解以卵磷脂为主要代表的难溶性含磷有机物质，以Ca3(PO4)2为磷源，解磷量可达402.27mg/L以上；以卵磷脂为磷源，解磷量可达9.02mg/L以上。

Description

一株分离自牛粪堆肥的高效解磷菌P18及其应用
技术领域
本发明属于农业微生物领域，具体地说涉及一株高效解磷微生物及其应用。
背景技术
氮磷钾是植物生长所必需的三大营养元素，植物对三大营养元素的摄取主要来源于土壤。因此，土壤中可供植物直接吸收利用的营养元素的含量直接决定着植物的生长发育。构成生物体细胞最重要的组份包括有核酸、核蛋白、磷脂以及三磷酸腺苷等，这些组份中都含有磷元素；与此同时，磷元素也是作物代谢过程中的重要调节剂，作物体内的碳水化合物的合成、分解、互变与转移都需要磷元素的参与。譬如在光合作用中，磷参与光合磷酸化作用，并把光能储藏在ATP中，同时形成NADPH。除此之外，由于磷是植物体内氮素代谢相关的多种酶的重要组成元素之一，因此磷具有促进植物氮素代谢的作用；脂肪的分解与合成同时也需要磷元素的参与，磷对于促进脂肪代谢也具有着重要的意义。
我国约74％土壤缺磷，然而随着粮食需求量的增加，传统磷肥施用量不断上升，从而严重影响了土壤生态系统的组成和功能；进而导致土壤养分的流失和农作物产量的下降。李振东等研究表明，大量使用化学磷肥后，当季作物对磷肥的利用率仅为5％-25％，利用率较低(李振东等.草业学报，2013,06,150-158)；同时大量施入土壤的磷肥易在土壤淋溶作用下淋失，同时磷元素又可以与土壤中的Ca2+,Al3+,Fe2+,Fe3+等金属离子鳌合而形成闭蓄态磷而难以被植物直接吸收利用。(盛荣等.土壤通报，2010,06,1505-1509)。面对全球不断膨胀的人口数量和日益增长的粮食需求，如何在不影响土壤生态系统和农业生态系统的组成和功能的前提下提高现有种植的各类农产品产量和品质逐步成为当前农业微生物学以及农业生态学等领域研究的热点话题。解磷菌作为一类分离自土壤的高效功能菌，可以在低磷浓度的环境中通过分泌大量有机酸和磷酸酶来达到分解不溶性磷源的目的，从而提高土壤环境中可溶性磷浓度，促进植物根系对磷元素的摄取，从而达到农作物增产的目的。
目前解磷菌的解磷机理普遍概括为：解磷微生物通过分泌不同种类有机酸来达到分解难溶性无机磷酸盐的目的；分解难溶性含磷有机物质主要是通过微生物释放的胞外磷酸酶作用于底物来实现的。研究表明，解无机磷细菌主要分泌的有机酸种类有葡萄糖酸，α-酮戊二酸，柠檬酸，苹果酸，草酸等(Sofia et al.Ecological Engineering,2014,73,526-535)。解磷菌分泌相应的有机酸均有相应的酶进行调控，一般来讲，与有机酸合成相关的酶有葡萄糖脱氢酶，葡糖六磷酸脱氢酶以及丙酮酸羧化酶等等(Aditi et al.Research inMicrobiology,2008,159,635-642)。解磷菌作为一种微生物菌肥，具有绿色环保、易获取、低成本以及高效益等优点。
一般来讲，目前大部分高效解磷微生物通常分离自土壤，且不同类型的土壤中解磷微生物种类与数量截然不同，一般磷素缺乏而且较为贫瘠的土壤中解磷菌种类与数量相对较多。目前所研究的大部分高效解磷不动杆菌所利用的磷源种类大多数限于以Ca3(PO4)2或磷矿石为主的难溶性无机磷酸盐以及以肌醇六磷酸为主的含难溶性磷源的有机物质，以AlPO4、FePO4以及卵磷脂为主要难溶性磷源的研究较少。
发明内容
本发明首次以牛粪堆肥作为分离基物筛选高效解磷菌对改善有机肥质量以及研发新型微生物菌肥，牛粪堆肥作为目前广泛被利用的绿色有机肥料，其中同样也含有大量种类丰富的微生物资源，其中一些不乏具有高效的解磷作用，这些微生物随着有机肥施入土壤后也随之进入并定植于土壤中，对土壤磷素有效性转化发挥重要的作用；因此，以牛粪堆肥作为分离基物筛选高效解磷菌对改善有机肥质量以及研发新型微生物菌肥具有重要的意义。
本发明所提供的方案之一，是提供一株具有高效解磷作用的细菌，用于分解土壤中难溶性无机或有机磷源，并释放PO4 3-离子，供农作物根系直接利用，提高农作物对土壤磷素的摄取。
本发明的所提供的一株高效解磷菌，经鉴定为不动杆菌(Acinetobacter sp.)，菌株号命名为P18，该菌株目前保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101)，保藏日期为2016年10月12日，保藏编号为CGMCC NO.13078。该菌株是由发明人于2015年11月分离自江苏省南京市秦邦吉品农业开发有限公司所提供的短期牛粪堆肥制剂中，该牛粪堆肥中包括有牛粪、蛋壳渣以及水稻秸秆等物料。
本发明所述解磷菌P18的生物学特征为G-，菌落乳白色，易挑起，显微镜检表明菌体为短杆状；其具体的形态学特征详见表1。
表1
所述解磷菌P18生理生化特征详见表2。
表2
所述解磷菌P18对pH与温度适应范围均较广，在pH为5～10以及温度为20～35℃的区间内均能良好生长。优选的，所述解磷菌P18在LB培养基中最优发酵条件为：最适温度为25℃，最适装液量为20％，最适pH为7.0，此外，该菌株该菌株在LB液体培养基中的生长曲线表明，26h后到达稳定生长期。
所述解磷菌P18其16SrDNA基因上有效片段上约有1420bp的核苷酸序列，16SrDNA序列如SEQUENCE LISTING No.1所示。将该序列输入到GenBank数据库中，利用Blast软件与数据库信息进行比对，结果表明该株解磷菌与Acinetobacter parvus的16SrDNA序列相似度较高，为100％。基于16SrDNA基因的系统发育分析结果以及生理生化特性，鉴定为不动杆菌属的一株新菌株。
本发明所提供的方案之二，是所述高效解磷菌P18在微生物菌肥或缺磷土壤中的应用。所述的缺磷土壤为含有难溶性无机磷酸盐或/和难溶性磷源的有机物质的缺磷土壤；优选以磷酸盐为主的难溶性无机磷酸盐或/和难溶性磷源的有机物质的缺磷土壤，如以Ca3(PO4)2、AlPO4、FePO4或/和卵磷脂为主的缺磷土壤；更优选的是含有以Ca3(PO4)2为主的难溶性无机磷酸盐或/和以卵磷脂为主要难溶性磷源的有机物质的缺磷土壤。
本发明所述的解磷菌解磷能力较强，其不仅可以高效分解以Ca3(PO4)2为主的难溶性无机磷酸盐，同时也可以高效分解以卵磷脂为主要难溶性磷源的有机物质。通过利用选择性液体培养基培养7天后，对其解磷量的测定结果表明，以Ca3(PO4)2为磷源条件下最大解磷量可达402.27mg/L，并于培养后第3天达到最大值，其后发酵液中可溶性PO4 3-离子含量略有降低并趋于稳定；发酵液pH在培养后第1天降至最低，最低值为4.15，其后发酵液pH略有升高并趋于稳定。通过高效液相色谱法(HPLC)测定第7天的发酵液中有机酸种类与含量结果表明，该菌株在以Ca3(PO4)2为难溶性磷源的条件下，主要分泌有机酸种类有草酸、酒石酸、甲酸以及苹果酸等，其中草酸分泌量最大，可达296.79mg/L。发酵液中可溶性PO4 3-离子略有降低是由于菌体继续生长并且自身利用了一部分PO4 3-离子导致，而pH略有升高与菌体在培养前期分泌的大量有机酸与培养基中Ca3(PO4)2发生化学反应而部分被消耗有关。以卵磷脂为磷源条件下最大解磷量可达9.02mg/L，并于培养后第7天达到最大值，并且该菌株主要分泌碱性磷酸酶，碱性磷酸酶活性于培养后第二天达到最大值，最大值为956.75μmol/(h·L)。Ca3(PO4)2主要是碱性土壤中磷元素的存在方式，而酸性土壤中的磷元素多以AlPO4与FePO4的方式存在，以难溶性磷酸盐AlPO4与FePO4为主要磷源条件下，该菌株亦具有一定的分解能力，测定结果表明，AlPO4为磷源时最大解磷量可达43.63mg/L，FePO4为磷源时最大解磷量可达90.09mg/L，相比对照组分别高出11.41mg/L，6.82mg/L。
有益效果：本发明所述的一株解磷菌可利用难溶性磷源种类多样，不仅对Ca3(PO4)2具有较强的分解能力，同时也能高效分解卵磷脂并释放可溶性PO4 3-离子；与此同时，该菌株对难溶性磷酸盐AlPO4、FePO4亦具有一定的分解能力。该菌株在培养过程中未见产生有毒或有害分泌物，同时该菌株不会使植物感染病害，对人畜致病性较小。在微生物菌肥研发制作中具有较大的应用潜力，属于一种优良微生物的选育，可以应用于农业领域作为优质的微生物菌肥制剂。
附图说明
图1解磷不动杆菌P18复筛结果图。
图2解磷不动杆菌P18显微镜检结果。
图3解磷不动杆菌P18生长曲线。
图4解磷不动杆菌P18在不同pH条件下LB培养基中的OD600吸光值变化情况。
图5解磷不动杆菌P18在不同装液量条件下LB培养基中的OD600吸光值变化情况。
图6解磷不动杆菌P18在不同温度条件下LB培养基中的OD600吸光值变化情况。
图7解磷不动杆菌P18单菌落在Ca3(PO4)2为磷源的选择性培养基上4d后的生长情况及解磷圈。
图8解磷不动杆菌P18单菌落在卵磷脂为磷源的选择性培养基上4d后的生长情况及解磷圈。
图9解磷不动杆菌P18在Ca3(PO4)2为磷源的液体选择性培养基中分解释放PO4 3-浓度动态变化曲线。
图10解磷不动杆菌P18在Ca3(PO4)2为磷源的液体选择性培养基中pH动态变化曲线。
图11解磷不动杆菌P18在AlPO4、FePO4为磷源的液体选择性培养基中培养7d后分解释放PO4 3-浓度变化的比较。
图12解磷不动杆菌P18在卵磷脂为磷源的液体选择性培养基中分解释放PO4 3-浓度动态变化曲线。
图13解磷不动杆菌P18在卵磷脂为磷源的液体选择性培养基中酸性磷酸酶及碱性磷酸酶酶活性动态变化曲线。
具体实施方式
为了更好理解本发明，以下将结合附图列举若干实施案例，并在实验方法方面进行详细阐述。
实施例1解磷菌的分离与纯化
首先制备以下三种培养基：
孟金娜无机磷固体培养基：葡萄糖10.0g，(NH4)2SO4 0.5g，MnSO4·4H2O 0.03g,KCl0.3g,MgSO4·7H2O 0.3g,FeSO4·4H2O 0.03g,NaCl 0.3g,Ca3(PO4)2 10.0g,琼脂18-20g,蒸馏水1000mL,pH 7.0-7.5，121℃灭菌，20min。
孟金娜有机磷固体培养基：葡萄糖10.0g，(NH4)2SO4 0.5g，MnSO4·4H2O 0.03g,KCl0.3g,MgSO4·7H2O 0.3g,FeSO4·4H2O 0.03g,NaCl 0.3g,卵磷脂0.2g,琼脂18-20g,蒸馏水1000mL,pH 7.0-7.5，121℃灭菌，20min。
LB培养基：NaCl 10.0g,蛋白胨10.0g,酵母粉5.0g,琼脂18-20g,蒸馏水1000mL，121℃灭菌，20min。
将10g牛粪堆肥样品置于盛有90mL无菌水的250mL的三角瓶中，在摇床30℃，180r/min条件下振荡40min，静置10min，得到悬浮液。采用稀释涂布平板法梯度稀释后涂于孟金娜有机磷培养基中，将平板倒置，在30℃恒温箱中培养7d后，挑取具有明显解磷圈的单菌落，经孟金娜有机磷培养基平板数次纯化后，4℃保存在LB斜面待用。
然后利用50mL液体LB培养基分别对分离纯化后的解磷菌在30℃，180r/min条件下进行过夜培养，取一定量菌液通过稀释涂布平板法梯度稀释涂布于孟金娜无机磷培养基中，将平板倒置，于30℃恒温箱中培养7d后，观察是否具有明显解磷圈的单菌落，挑取单菌落4℃保存在LB斜面待用。该方法所获得的解磷菌为既能分解Ca3(PO4)2也能分解卵磷脂的细菌。
本实验所筛得的一株解磷细菌，经南京思普金专业测序公司对该菌株16SrDNA进行测序，基因序列输入GenBank数据库中，利用Blast软件进行比对，鉴定为不动杆菌(Acinetobacter sp.)，目前保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为：CGMCC13078，主要生物学特性为G-，菌落乳白色，易挑起，显微镜检表明菌体为短杆状，如图1,图2所示。进而对其进行生长速率测定，在LB液体培养基中接种单菌落，并定期测量发酵液的OD600值，如图3所示，该菌株在LB液体培养基中于2h后进入对数生长期，生长速度较快，26h后到达稳定生长期。
实施例2解磷菌P18生理生化特性
2.1好氧性试验
灭菌后的LB培养基倒入3个已灭菌的试管中大约在2/3处，用接种针挑取P18菌株单菌落穿刺接种到上述培养基。30℃恒温箱中培养，分别在3天至7天观察菌株在试管培养基中生长状态。若在琼脂表面上生长则为好氧菌，若沿穿刺线生长者则为厌氧菌或兼性厌氧菌。试验结果结果显示P18为严格好氧。
2.2过氧化氢酶的测定
在干净载玻片上滴1滴3％H2O2，挑取P18菌株单菌落，在载玻片上所滴加的H2O2中涂抹，若有气泡产生则为阳性，否则为阴性。试验结果结果显示P18为阳性。
2.3甲基红试验
培养基配方为：蛋白胨5g，葡萄糖5g，NaCl 5g，蒸馏水1000mL，调节pH 7.0～7.2，分装于试管中，每管装4～5mL，121℃灭菌20min。
试剂：甲基红0.1g，95％酒精300mL，蒸馏水200mL。
接种P18菌株于上述培养液中，30℃培养l～2天后，在培养液中加入几滴甲基红试剂，如果培养液呈现红色，为甲基红阳性，黄色则为阴性。试验结果结果显示P18为甲基红阳性。
2.4V-P试验
培养基配方以及接种与培养同甲基红试验。
培养过后取2mL和等量的40％NaOH相混合，加入少量肌酸，充分振荡2～5min，如果培养液出现红色为VP阳性，否则为阴性。试验结果结果显示P18为V-P阴性。
2.5淀粉水解试验
在LB琼脂培养基中添加0.2％的可溶性淀粉，121℃灭菌20min备用。
路哥氏碘液：碘片1g，碘化钾2g，先用少量蒸馏水溶解碘化钾，再加入碘片，待碘完全溶解后，加水稀释至300mL。
取P18单菌落点接于平板上，30℃培养2～4天，形成菌落后，在平板上滴加路哥氏碘液，使其铺满菌落周围。菌落周围如有无色透明圈出现，则为淀粉水解阳性。试验结果显示P18为淀粉水解阴性。
2.6明胶水解试验
培养基配方为：蛋白胨5g，明胶120g，蒸馏水1000mL。调节pH 7.2～7.4，分装于试管中，培养基高度约为4～5cm，121℃灭菌20min。
用穿刺法接种P18单菌落于试管中央。30℃恒温箱中培养一个月，观察明胶液化情况。试验结果显示P18为明胶水解阳性。
2.7硝酸盐还原试验
培养基配方：蛋白胨10g，KNO31g，蒸馏水1000mL，pH 7.0～7.4。
格里斯氏(Gries)试剂：A液：对氨基苯磺酸0.5g，稀醋酸150mL；B液：萘胺0.1g，蒸馏水20mL，稀醋酸150mL。
将P18单菌落接种于硝酸盐液体培养基中，30℃培养1、3、5天。在白色瓷盘小孔中倒入少许培养液，然后在其中分别滴加1滴格里斯氏试剂A和B液，当培养液变为粉红色、玫瑰红色、橙色或棕色等时，表示有亚硝酸盐存在，为硝酸盐还原阳性，否则为阴性。试验结果显示P18为硝酸盐还原阴性。
2.8柠檬酸盐还原试验
培养基配方：柠檬酸钠2g，NaCl 5g，MgSO4·7H2O 0.2g，(NH4)2·HPO4 1g，1％溴百里香酚蓝水溶液10mL，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH 6.8～7.0，121℃灭菌20min。
取P18单菌落接种于斜面上，30℃培养3～7天，培养基呈蓝色为阳性反应，不变者则为阴性。实验结果显示P18为柠檬酸盐还原阳性。
实施例3解磷菌P18的发酵条件优化
首先制备以下培养基：
LB液体培养基：NaCl 10.0g,蛋白胨10.0g,酵母粉5.0g,蒸馏水1000mL，121℃灭菌，20min。
本实验选择pH、装液量以及培养温度作为研究解磷菌P18发酵条件优化的三个生长因素。
不同pH对菌株生长的影响：以0.5为梯度，准确调节LB液体培养基pH值为4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10.0、10.5、11.0；121℃灭菌，20min。接种200μL菌液于培养基中，28℃，180r/min摇床培养1d，测定发酵液OD600值。
不同装液量(通气量)对菌株生长的影响：在100mL锥形瓶中分别装入10、15、20、25、30、35、40、45、50和60mL的LB液体培养基；121℃灭菌，20min。接种200μL菌液于培养基中，28℃，180r/min摇床培养1d，测定发酵液OD600值。
不同培养温度对菌株生长的影响：在100mL锥形瓶中装入40mL LB液体培养基；121℃灭菌，20min。接种200μL菌液于培养基中，放置在15℃、20℃、25℃、30℃、35℃和40℃不同温度梯度下，180r/min摇床培养1d，测定发酵液OD600值。
试验结果表明，该株菌最适pH为7.0，最适装液量为10mL，最适培养温度为25℃，如图4,5,6所示。
实施例4解磷菌P18分解难溶性磷酸盐能力的测定
首先准备以下三种培养基：
孟金娜Ca3(PO4)2无机磷液体培养基：葡萄糖10.0g，(NH4)2SO4 0.5g，MnSO4·4H2O0.03g,KCl 0.3g,MgSO4·7H2O 0.3g,FeSO4·4H2O 0.03g,NaCl 0.3g,Ca3(PO4)2 10.0g,酵母粉0.4g,蒸馏水1000mL,pH 7.0-7.5，121℃灭菌，20min。
孟金娜AlPO4无机磷液体培养基：葡萄糖10.0g，(NH4)2SO4 0.5g，MnSO4·4H2O0.03g,KCl 0.3g,MgSO4·7H2O 0.3g,FeSO4·4H2O 0.03g,NaCl 0.3g,AlPO4 10.0g,酵母粉0.4g,蒸馏水1000mL,pH 7.0-7.5，121℃灭菌，20min。
孟金娜FePO4无机磷液体培养基：葡萄糖10.0g，(NH4)2SO4 0.5g，MnSO4·4H2O0.03g,KCl 0.3g,MgSO4·7H2O 0.3g,FeSO4·4H2O 0.03g,NaCl 0.3g,FePO4 10.0g,酵母粉0.4g,蒸馏水1000mL,pH 7.0-7.5，121℃灭菌，20min。
以上三种液体培养基进行高压蒸汽灭菌前各取50mL分别分装于100mL锥形瓶中。
将LB液体培养基过夜培养的解磷菌P18转入灭菌后的2mL离心管中，12000r/min条件下离心5min，弃上清液，并用无菌水洗涤2次。接种前利用无菌水调节菌悬液OD600值为0.5(1×108CFU)。以上三种液体培养基中分别接种1mL菌悬液，设置三组重复，30℃，180r/min摇床培养，每隔1d提取2mL发酵液进行pH与有效磷含量的测定，因该株解磷菌在30℃条件下亦生长良好，故此处未采用最适发酵温度。
有效磷含量的测定方法采用钼蓝比色法，首先将发酵液装入离心管4℃下10000r/min离心15min，吸取离心后的上清液0.2mL于50mL容量瓶中，加水稀释至约30mL，加二硝基酚指示剂2滴，用氢氧化钠及稀硫酸溶液调节pH至溶液刚呈微黄色。然后加入钼锑抗显色剂5mL，摇匀，用水定容。在室温下放置30min后，利用分光光度计在波长880nm处比色。读取光度值，利用标准曲线求出发酵液中有效磷含量，单位mg/L。
实验结果表明，以Ca3(PO4)2为难溶性无机磷源条件下，解磷菌P18于培养后第3d解磷量达到最大，最大解磷量为402.27mg/L，如图9所示；pH最低可降至4.15，如图10所示；4d后生长情况与解磷圈如图7所示。以AlPO4以及FePO4为难溶性无机磷源条件下，解磷菌P18生长较为缓慢，但有一定的解磷效果，对培养第7d后的发酵液进行有效磷的测定，结果显示以AlPO4为磷源时解磷量可达43.63mg/L，以FePO4为磷源时解磷量可达90.09mg/L，相比对照组分别高出11.41mg/L，6.82mg/L，如图11所示。
实施例5解磷菌P18分解卵磷脂能力的测定
首先制备以下培养基：
孟金娜有机磷液体培养基：葡萄糖10.0g，(NH4)2SO4 0.5g，MnSO4·4H2O 0.03g,KCl0.3g,MgSO4·7H2O 0.3g,FeSO4·4H2O 0.03g,NaCl 0.3g,卵磷脂0.2g,酵母粉0.4g,蒸馏水1000mL,pH 7.0-7.5，121℃灭菌，20min。
其他接种方法与有效磷含量的测定方法同实施例3。
磷酸酶活性测定方法采用对硝基苯磷酸二钠(pNPP)底物反应法，首先制备MUB储备液，其配方为：硼酸3.15g,柠檬酸7g,顺丁烯二酸5.8g,Tris 6.05g,1mol/L NaOH244mL定容到500mL,冷藏保存。
分别取1g/L标准对硝基酚溶液0、1、2、3、4、5mL分别装于试管中,用无菌水定容至5mL。在每个试管中再加入1mL0.5mol/L氯化钙溶液和4mL 0.5mol/L氢氧化钠溶液，震荡后过滤，测定420nm条件下的吸光值。以每小时1L发酵液中磷酸酶作用于底物并释放出产物的微摩尔数为1个酶活力单位，记做μmol/(h·L)。
酸性磷酸酶活性测定方法为：吸取1mL发酵液，加入4mL pH值为6.5的MUB储备液，再加入0.025mol/L的对硝基苯磷酸二钠溶液1mL，震荡几秒钟。塞住试管塞,37℃培养1h后,加入1mL 0.5mol/L氯化钙溶液和4mL 0.5mol/L氢氧化钠溶液，震荡后过滤，测定420nm条件下的吸光值。碱性磷酸酶活性测定所用MUB储备液pH值为11，其余方法同上。
实验结果表明，以卵磷脂为难溶性有机磷源条件下，解磷菌P18于培养后第7d解磷量达到最大，最大解磷量为9.02mg/L，如图12所示；同时该菌株主要分泌碱性磷酸酶，碱性磷酸酶活性于培养后第二天达到最大值，最大值为956.75μmol/(h·L)。如图13所示；4d后生长情况与解磷圈如图8所示。
序列表
<110> 南京农业大学
<120>一株分离自牛粪堆肥的高效解磷菌P18及其应用
<130> 2016
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1420
<212> DNA
<213>帕乌斯氏不动杆菌（Acinetobacter parvus）
<400> 1
ttaacacatg caagtcgagc ggagtgatgg tgcttgcact atcacttagc 50
ggcggacggg tgagtaatgc ttaggaatct gccatttagt gggggacaac 100
Attccgaaag gaatgctaat accgcatacg tcctacggga gaaagcaggg 150
gatcttcgga ccttgcgcta aatgatgagc ctaagtcgga ttagctagtt 200
ggtggggtaa aggcctacca aggcgacgat ctgtagcggg tctgagagga 250
tgatccgcca cactgggact gagacacggc ccagactcct acgggaggca 300
gcagtgggga atattggaca atgggcggaa gcctgatcca gccatgccgc 350
gtgtgtgaag aaggcctttt ggttgtaaag cactttaagc gaggaggagg 400
ctctcctagt taatacctag gaagagtgga cgttactcgc agaataagca 450
ccggctaact ctgtgccagc agccgcggta atacagaggg tgcgagcgtt 500
aatcggattt actgggcgta aagcgtgcgt aggcggctga ttaagtcgga 550
tgtgaaatcc ctgagcttaa cttaggaatt gcattcgata ctggtcagct 600
agagtatggg agaggatggt agaattccag gtgtagcggt gaaatgcgta 650
gagatctgga ggaataccga tggcgaaggc agccatctgg cctaatactg 700
acgctgaggt acgaaagcat ggggagcaaa caggattaga taccctggta 750
gtccatgccg taaacgatgt ctactagccg ttggggcctt tgaggcttta 800
gtggcgcagc taacgcgata agtagaccgc ctggggagta cggtcgcaag 850
actaaaactc aaatgaattg acgggggccc gcacaagcgg tggagcatgt 900
ggtttaattc gatgcaacgc gaagaacctt acctggcctt gacatactag 950
aaactttcca gagatggatt ggtgccttcg ggaatctaga tacaggtgct 1000
gcatggctgt cgtcagctcg tgtcgtgaga tgttgggtta agtcccgcaa 1050
cgagcgcaac ccttttcctt atttgccagc gagtaatgtc gggaacttta 1100
aggatactgc cagtgacaaa ctggaggaag gcggggacga cgtcaagtca 1150
tcatggccct tacggccagg gctacacacg tgctacaatg gtcggtacaa 1200
agggttgcta cctagcgata ggatgctaat ctcaaaaagc cgatcgtagt 1250
ccggattgga gtctgcaact cgactccatg aagtcggaat cgctagtaat 1300
cgcggatcag aatgccgcgg tgaatacgtt cccgggcctt gtacacaccg 1350
cccgtcacac catgggagtt tgttgcacca gaagtaggta gtctaaccgc 1400
aaggaggacg cttaccacgg 1420

Claims (9)

1.一株帕乌斯氏不动杆菌(Acinetobacter parvus)菌株P18，其保藏编号为CGMCCNO.13078。
2.根据权利要求1所述的菌株P18，其特征在于，其生物学特征为G-，菌落乳白色，易挑起，显微镜检表明菌体为短杆状。
3.根据权利要求1所述的菌株P18，其特征在于，其生理生化特征如下：
4.权利要求1所述的菌株P18在微生物菌肥或缺磷土壤中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的缺磷土壤为含有难溶性无机磷酸盐或/和难溶性磷源的有机物质的缺磷土壤。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的缺磷土壤为以磷酸盐为主的难溶性无机磷酸盐或/和难溶性含磷有机物质的缺磷土壤。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的缺磷土壤为以Ca3(PO4)2为主的难溶性无机磷酸盐或/和以卵磷脂为主要难溶性磷源的有机物质的缺磷土壤。
8.根据权利要求1所述的菌株P18，其特征在于，其发酵条件为：pH为5～10，温度为20～35℃。
9.根据权利要求8所述的菌株P18，其特征在于，其发酵条件为：温度为25℃，装液量为20％，pH为7.0。
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