CN106525527A - 一种霉菌毒素生物降解的评定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明是一种霉菌毒素生物降解的评定方法，包括步骤：1）准确称取25g饲料样品放入250ml三角瓶中；2）加入100ml提取液于摇床上震荡提取2h以上；3）定性滤纸过滤，将滤液混合均匀，测定滤液中的毒素含量，记为C1；4）取2mL步骤3中的混合好的滤液，加入18ml配制好的LB培养基，加入0.05g生物降解产品，并混合均匀；5）将上一步的溶液置于37℃，转速为200r/min的条件下培养6h；6）溶液过滤，离心，取上清液，测定其中的毒素含量，记为C2；7）根据C1和C2计算生物降解产品对毒素的降解率。本发明具有一套完整的实验方案，体外模拟肠道环境，不会出现解吸附现象，评定结果说服力强；而且操作简单，能够直接反应出对毒素的降解率。

Description

一种霉菌毒素生物降解的评定方法
技术领域
本发明涉及通过生物技术，尤其是涉及一种霉菌毒素生物降解的评定方法。
背景技术
饲料霉菌毒素：霉菌产生的次级代谢产物，对动物的生长速度、身体器官、繁殖性能、生产性能等带来负面影响。
霉菌毒素生物降解：通过酶解将霉菌毒素化学结构改变，形成一种新的无毒成分。
目前我国原料污染比较严重，且霉菌毒素的污染已是一个全球性问题，据联合国粮农组织调查，全世界每年被真菌污染的谷物，油料种子和饲料约占其总量的10%左右，而据美国人的调查，全世界贸易供应的谷物中，有25%受到霉菌毒素的污染。霉菌毒素严重威胁着动物的生产性能和人类健康，每年给食品工业、饲料工业和畜牧业带来巨大的经济损失。由于物理和化学方法去除霉菌毒素存在种种应用缺陷，且没有国家标准，无法评定产品效果，而生物降解因其安全、高效且环保的解毒方法而备受关注。
动物的消化系统是一个复杂且“运行”有素的整体，动物通过采食，将饲料送到动物的体内，经过口腔、食道、胃、肠道等的逐级消化与传送，最后将无法消化吸收的废弃物经肛门排除体外。动物的口腔可以分泌淀粉酶，将食入的饲料润湿，淀粉酶对其进行初步的分解；初步消化的食物经食管进入动物的胃中进行进一步的消化，由于动物的胃壁可以分泌盐酸，所以胃液呈现酸性，pH值较低，微生物的含量相对较少。饲料经过胃的消化吸收后，会进入肠道，在肠道微生物和分泌的各种消化酶以及肠道的蠕动下，饲料进一步的消化吸收，肠道中的pH值接近中性。肠道是动物体内微生物最活跃的地方，也是饲料消化吸收的主要部位。经过肠道消化吸收后的食物废弃物，会经肛门排出动物体内。动物对饲料的消化吸收是个动态过程，期间会有多种消化酶、微生物的参与，且消化道会有多种形式的消化运动，是个极其复杂的过程。所以，在体外尽可能的模仿动物体内的消化过程，对产品的评估会更加准确，更真实，更具有代表性。
目前市场上解决霉菌毒素的产品基本以霉菌毒素吸附剂为主，但是目前霉菌毒素吸附剂没有国家标准，更不要谈产品如何评估，所以也就形成了市场上该类产品混乱的局面，饲料企业对霉菌毒素吸附剂的质量及产品使用效果没有正确、客观的评估方法，所以也加剧了市场产品良莠不齐的结果。另外，有些饲料企业自我琢磨评估方法，将吸附剂与饲料混合后加入水中，测定毒素前后变化，但是由于毒素在水中不稳定，且会在水溶液中解吸附，造成评定结果差异较大，没有可行性。所以目前对霉菌毒素吸附剂的评定还没有准确可行的办法。如果有一套完整的霉菌毒素生物降解评定方法，进行体外仿生消化产品评估，则可大大加速生物降解剂的推广。
发明内容
本发明的目的是提出一套完整的霉菌毒素生物降解评定方法，进行体外仿生消化产品评估，获得准确的毒素降解率。
为了实现本发明的目的，提出以下工艺方法：
一种霉菌毒素生物降解的评定方法，包括步骤：
1）准确称取25g饲料样品放入250ml三角瓶中；
2）加入100ml提取液于摇床上震荡提取2h以上；
3）定性滤纸过滤，将滤液混合均匀，测定滤液中的毒素含量，记为C1；
4）取2mL步骤3中的混合好的滤液，加入18ml配制好的LB培养基，加入0.05g生物降解产品，并混合均匀；
5）将上一步的溶液置于37℃，转速为200r/min的条件下培养6h；
6）溶液过滤，离心，取上清液，测定其中的毒素含量，记为C2；
7）计算生物降解产品对毒素的降解率：
毒素降解率（%）=。
所述步骤2）的提取液具体为：对于呕吐毒素，提取液为蒸馏水；对于黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素，提取液均为甲醇水，甲醇:水=73。
所述步骤4）的LB培养基配方为：蛋白胨10g，氯化钠10g，酵母浸粉5g，pH值调整到7.2， 121℃高压灭菌20min。
本发明具有一套完整的实验方案，体外模拟肠道环境，不会出现解吸附现象，评定结果说服力强；而且操作简单，能够直接反应出对毒素的降解率。
附图说明
图1是本发明霉菌毒素生物降解的评定方法的框图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合附图和具体实施例，对本发明进一步详细说明。
本发明是将霉菌毒素通过生物酶解的方式将毒素祛除，然后和饲料混合，加入提取液和特定培养基，调节溶液pH值，模拟动物肠道状态，培养一定时间，测定饲料前后毒素变化，从而得到毒素降解率，达到饲料霉菌毒素评定的目的。这种方法因为是直接将饲料和降解剂混合，且模拟肠道状态，所以可行性强，能够直接反应出对毒素的降解率，是一种非常好的评估方法。工艺如图1所示，具体步骤为：
1）准确称取25g饲料样品放入250ml三角瓶中；
2、加入100ml提取液（呕吐毒素，提取液为蒸馏水；黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素，提取液均为甲醇水=7:3）于摇床上震荡提取2h以上。
3、定性滤纸过滤，将滤液混合均匀，测定滤液中的毒素含量，记为C1。
4、取2mL步骤3中的混合好的滤液，加入18ml配制好的LB培养基（LB培养基配方：蛋白胨10g，氯化钠10g，酵母浸粉5g，pH值调整到7.2，121℃高压灭菌20min），加入0.05g生物降解产品，并混合均匀。
5、将上一步的溶液置于37℃，转速为200r/min的条件下培养6h。
6、溶液过滤，离心，取上清液，测定其中的毒素含量，记为C2。
7、计算生物降解产品对毒素的降解率：
毒素降解率（%）=
以上所述的具体实施例，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步的详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施例而已，并不用于限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种霉菌毒素生物降解的评定方法，其特征在于包括步骤：
1）准确称取25g饲料样品放入250ml三角瓶中；
2）加入100ml提取液于摇床上震荡提取2-3h；
3）定性滤纸过滤，将滤液混合均匀，测定滤液中的毒素含量，记为C1；
4）取2mL步骤3中的混合好的滤液，加入18ml配制好的LB培养基，加入0.05g生物降解产品，并混合均匀；
5）将上一步的溶液置于37℃，转速为200r/min的条件下培养6h；
6）溶液过滤，离心，取上清液，测定其中的毒素含量，记为C2；
7）计算生物降解产品对毒素的降解率：
毒素降解率（%）=。
2.根据权利要求1所述的评定方法，其特征在于，所述步骤2）的提取液具体为：对于呕吐毒素，提取液为蒸馏水；对于黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素，提取液均为甲醇水，甲醇:水=73。
3.根据权利要求1所述的评定方法，其特征在于，所述步骤4）的LB培养基配方为：蛋白胨10g，氯化钠10g，酵母浸粉5g，pH值调整到7.2， 121℃高压灭菌20min。
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