CN106520873A

CN106520873A - 一种豆丹肽螯合钙的制备方法

Info

Publication number: CN106520873A
Application number: CN201610934164.0A
Authority: CN
Inventors: 夏秀东; 周剑忠; 单成俊; 刘小莉; 王英; 李莹; 张丽霞; 黄自苏
Original assignee: Jiangsu Academy of Agricultural Sciences
Current assignee: Jiangsu Academy of Agricultural Sciences
Priority date: 2016-11-01
Filing date: 2016-11-01
Publication date: 2017-03-22
Anticipated expiration: 2036-11-01
Also published as: CN106520873B

Abstract

本发明公开了一种豆丹肽螯合钙的制备方法，包括如下步骤：将豆丹脱脂后超微粉碎，加水混匀，调节pH为2‑9；向所得混合液中加入蛋白酶，搅拌酶解，结束后灭活蛋白酶，得粗酶解液，离心得上清液；取所得上清液去杂质得纯化液，用至少一种截留分子量为1‑50kD的超滤膜进行分离纯化，得到不同分子量的酶解肽组分；加入钙源，螯合得豆丹肽螯合钙粗产物；浓缩沉淀后收集沉淀物，烘干得豆丹肽螯合钙产品。本发明方法对酶解产物采用截留分子量不同的超滤膜先分级后螯合的方法，一方面解决了肽钙螯合物难以分离的技术瓶颈，另一方面制得不同分子量的豆丹肽螯合钙产品可以针对具有不同需求的人群使用，提高了产品的使用效率和针对性。

Description

一种豆丹肽螯合钙的制备方法

技术领域

本发明属于农产品深加工领域，特别是涉及一种豆丹肽螯合钙的制备方法。

背景技术

肽钙螯合物是通过肽N-端氨基、C-端羧基、氨基酸侧链以及肽链中的羰基和亚氨基与钙离子配位形成，具有易吸收、营养价值好、生物效价高等优点，以及抗菌、抗氧化、降血糖降血脂、免疫调节等诸多生物活性。与植物来源的肽钙螯合物相比，动物性肽钙螯合物具有易吸收、营养价值高等特点。过去，畜禽类动物组织是主要的动物源活性肽源。但是由于疯牛病、口蹄疫等疾病的发生，人们对陆生哺乳动物活性肽的安全性产生了质疑。近年来由于食用昆虫具有营养丰富，种类繁多，繁殖速度较快，生长周期短，食物转变率高等优势，慢慢成为动物源活性肽的研究热点，同时还避免了以上人畜共传染病的威胁，而且消除了因为宗教信仰不同影响产品消售的困扰。因此，以食用昆虫豆丹活性肽为原料制备肽钙螯合物具有独特的优势和广阔的应用前景。

豆丹是传统食用资源昆虫-豆天蛾(Clanis bilineata tsingtauica)幼虫的俗名，是江苏灌云的一套特色美食。豆丹以吃食豆叶、喝甘露为生，在天然无毒、无公害状态下生长，具有高蛋白、低脂肪，营养丰富，味道鲜美等优点，又有滋阴补肾、健胃强身和防治风湿病之功效。据测定，豆丹粗蛋白占总质量的65.5％(干重)，含量大幅高于鸡蛋、牛奶和大豆，其中必需氨基酸占总量氨基酸的52.84％，半必需氨基酸占9.70％。据FAO/WHO推荐，质量较好的蛋白质其必需氨基酸与总氨基酸的比值在0.4左右，必需氨基酸与非必需氨基酸的比值在0.6以上，豆丹中两比值分别为0.53和1.31，是上佳的高蛋白质食物和农产品加工原材料。

生物活性肽简称活性肽，是蛋白质中天然氨基酸以不同组成和排列方式构成的从二肽到复杂的线形、环形结构肽类的总称，具有清除自由基、延缓衰老、降低血压、提高机体免疫力等特殊生物功能。它以非活性状态存在于蛋白质的长链中，经适当酶催化蛋白质水解后，生成较短链肽，其活性被释放出来，是筛选药物的天然资源宝库。生物活性肽的来源主要有动物组织、微生物、乳源蛋白和植物等，它们的组成各不相同，也导致了功能的多样性，但它们的生产方法却大致相同。目前生产生物活性肽的方法和途径主要有天然生物提取法、化学合成法、天然动植物蛋白质酶解法三种。提取法从天然生物体提取活性肽，含量很低，加工成本高，大量提取会造成物种资源的萎缩。化学合成法成本高，反应会产生大量有害物质，酶解天然蛋白质制备活性肽没有上述缺点：一是蛋白质酶解可产生大量短肽，反应条件温和，易于控制，生产时间短，所用的原料和试剂安全性高；二是生产量大且成本低；三是反应对环境没有危害；四是酶解反应可大大降低食品、药品和保健品中致敏蛋白的含量，增加其安全性。因此，釆用酶解蛋白质法制备生物活性肽不失为一种良好的途径，目前酶解法是研究和生产活性肽的主要方法，近年来，该领域的研究工作已受到许多国内外学者的重视，研究成果在迅速增加。有机溶剂脱脂过程存在大量溶剂的损失和造成环境污染等问题，而应用超临界CO₂替代对环境有害的有机溶剂或有机混合溶剂，分离生物产品或其他高附加值产品，是一种非常有前途和实用价值的技术，可以被认为是绿色分离技术。

钙是人体内含量最多的一种无机盐，正常人体内钙的含量1200～1400克，约占人体重量的1.5％～2.0％。缺钙是当今全球性的健康问题，钙营养不足会造成人体许多疾病。因此，各种补钙产品越来越多，年销量也逐年增加，但补钙效果并不理想，主要原因是日常膳食中的植酸、草酸和磷酸等成分在肠道中易与摄入的钙形成不溶性的钙盐，导致钙的生物利用率下降。因此，提高钙的生物利用率是解决缺钙问题的关键。研究表明：肽与钙形成的螯合物由于其独特的螯合体制和转运机制，能维持钙在小肠内的溶解状态，增加小肠对钙的吸收及其在体内的蓄积。此外，研究发现将具有抗氧化活性或抗菌活性的不同来源的蛋白质水解物与一些金属离子螯合(如Fe2+、Cu2+、Zn2+、Ca2+等)后可以增强其抗氧化性、抗菌性等生物活性。一些肽类和金属离子自身都具有抗氧化或抗菌活性，肽类在与金属离子螯合之后抗氧化性或抗菌性一般较原肽都有所提高，某些金属离子螯合肽的抗氧化或抗菌活性接近甚至优于一些目前已经广泛使用的常见抗氧化剂或抗菌剂，因此螯合物作为抗氧化剂或抑菌剂应用于食品、药品和化妆品等行业有巨大的优势和前景。

发明内容

发明目的：基于目前对肽钙螯合物的需求量大，来源有限，以及肽钙螯合物难以分离等技术问题，本发明提供了一种豆丹肽螯合钙的制备方法。

技术方案：本发明所述的豆丹肽螯合钙的制备方法，包括如下步骤：

(1)将豆丹脱脂后超微粉碎，然后加水混合均匀，调节混合液的pH为2-9；

(2)酶解：向步骤(1)所得混合液中加入蛋白酶，搅拌酶解，酶解结束后将酶解液加热灭活蛋白酶，得粗酶解液，离心得上清液；

(3)分级：取步骤(2)所得上清液通过截留分子量200-300kD的超滤膜去杂质得纯化液，将纯化液用至少一种截留分子量为1-50kD的超滤膜进行分离纯化，得到不同分子量的酶解肽组分；

(4)鳌合：向步骤(3)所得酶解肽组分中加入钙源，螯合得豆丹肽螯合钙粗产物；

(5)沉淀和收集：将步骤(4)所得豆丹肽螯合钙粗产物进行浓缩，向所得浓缩物中加无水乙醇沉淀豆丹肽螯合钙，离心收集沉淀物，烘干后经超微粉碎得豆丹肽螯合钙产品。

本发明以豆丹为原料，扩展了螯合钙产品的原料来源，同时对其他昆虫开发类似产品提供实例，也拓展了豆丹产品的市场；使用超微粉碎方法对脱脂豆丹和豆丹肽螯合钙进行粉碎，可大大提高豆丹的酶解效率和豆丹肽螯合钙的吸收利用效率。

优选的，步骤(1)中，豆丹脱脂采用超临界CO₂萃取方法，萃取温度为35-60℃，CO₂流速为15-25L/h，压力为10-35Mpa，萃取时间为1-4h，所得脱脂豆丹中脂肪的质量百分含量小于1％(m/m)。

优选的，步骤(1)中，所述脱脂豆丹的含脂量小于1％(m/m)。

优选的，步骤(1)中，所述脱脂豆丹超微粉碎后粒径小于10μm。

优选的，步骤(1)中，脱脂豆丹和水的质量比为1：5-20。

进一步优选的，步骤(1)中，脱脂豆丹和水的质量比为1：8-10。

优选的，步骤(1)中，使用氢氧化钠、盐酸来调节混合液的pH为2-9。

优选的，步骤(2)中，向步骤(1)所得混合液中加入的蛋白酶质量为脱脂豆丹质量的0.1-1％。

优选的，步骤(2)中，所述蛋白酶为木瓜蛋白酶(50000-100000u/g)、胰蛋白酶(4000-20000u/g)、中性蛋白酶(50000-100000u/g)、碱性蛋白酶(100000-200000u/g)和酸性蛋白酶(50000-200000u/g)中的一种或多种。酶活力：1个酶活力单位(u)是指在特定条件(25℃，其它为最适条件)下，在1分钟内能转化1微摩尔底物的酶量，或是转化底物中1微摩尔的有关基团的酶量。

进一步优选的，步骤(2)中，所述蛋白酶为木瓜蛋白酶和酸性蛋白酶复合使用，比例为1：1-1.5。

进一步优选的，步骤(2)中，所述蛋白酶为胰蛋白酶和碱性蛋白酶复合使用，比例为1：1.5-2。

优选的，步骤(2)中，搅拌速度为25-50转/分，反应温度20-60℃，反应时间12-24h。

优选的，步骤(2)中，酶解结束后将酶解液加热至75-85℃保持10-20分钟灭活蛋白酶，离心转速8000-12000转/分，离心时间10-30分钟。

优选的，步骤(3)中，将纯化液用至少一种截留分子量为1-50kD的超滤膜进行分离纯化时，超滤进口压力0.3-0.5Mpa，磁力搅拌转速为100-200转/分钟。

进一步优选的，使用2-5种截留分子量为1-50kD的超滤膜进行分离纯化。

优选的，步骤(4)中，所述钙源加入量为酶解肽组分质量的2％-8％(m/m)。

优选的，步骤(4)中，所述钙源为CaCl₂、葡萄糖酸钙、硫酸钙、醋酸钙、乳酸钙、氧化钙、磷酸钙和碳酸钙中的一种或多种。

进一步优选的，所述钙源为食品级CaCl₂，加入量为酶解肽组分质量的4％-6％。

优选的，步骤(4)中，螯合反应温度为25℃-60℃，螯合反应时间为1-3h。

优选的，步骤(5)中，无水乙醇的加入量为浓缩物体积的3-5倍，烘干所用温度为40-60℃。豆丹肽螯合钙粗产物可浓缩至很高的浓度，大大减少了无水乙醇的使用量。

本发明超微粉碎所得豆丹肽螯合钙产品吸收利用效率高，同时具有补钙、抗菌、抗氧化、降血糖血脂、免疫调节等诸多生理功能，可在很大程度上缓解国民缺钙的压力，延长了豆丹加工产业链，拓展了豆丹产品的市场，增加了豆丹产品的科技含量，提升了豆丹加工企业的综合竞争力。同时，可带动豆丹养殖户的积极性，增加农民的收入，对于带动当地经济发展和社会繁荣具有重要的意义。

有益效果：相对于现有肽螯合钙的制备方法，本发明豆丹肽螯合钙的制备方法以豆丹为原料，扩展了螯合钙产品的原料来源；采用了超临界CO2萃取法脱脂，绿色环保无污染；对酶解产物采用截留分子量不同的超滤膜先分级后螯合的方法，一方面解决了肽钙螯合物难以分离的技术瓶颈，另一方面制得不同分子量的豆丹肽螯合钙产品可以针对具有不同需求的人群使用，提高了产品的使用效率和针对性；所得豆丹肽螯合钙产品绿色、安全、易吸收，同时具有补钙、抗菌、抗氧化、降血糖血脂、免疫调节等诸多生理功能，可在很大程度上缓解国民缺钙的压力，延长了豆丹加工产业链。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明方法作出详细说明。

实施例1

使用超临界CO₂萃取脱脂方法对豆丹进行脱脂处理，萃取温度40℃，CO₂流速25L/h，压力35Mpa，萃取时间1.5h。将脱脂豆丹超微粉碎，按豆丹和水质量比为1:10的比例混匀，调节至pH7.5，温度40℃，加入豆丹质量0.5％的碱性蛋白酶对豆丹进行酶解12h，酶解液以40转/分钟的速度搅拌。酶解结束后将酶解液加热至75℃保持20分钟，灭活蛋白酶。酶解液10000转/分钟离心20分钟，取上清。将上清用截留分子量为300kD超滤膜去除较大分子量的杂质得纯化液。纯化液用截留分子量分别为5kD、10kD、50kD的超滤膜进行分离和纯化。控制超滤杯进口压力为0.5Mpa，磁力搅拌的转速为100转/分钟，收集组分I(<5kD)、II(5kD-10kD)、III(10kD-50kD)和Ⅳ(>50kD)。向不同组中分别加入质量分数5％的食品级CaCl₂，于30℃条件下螯合2h。螯合产物减压浓缩至粘稠状，加入浓缩液5倍体积的无水乙醇，静置30h后12000转/分钟离心10分钟，分别收集沉淀。将沉淀在50℃烘箱中烘干，经超微粉碎至粒径小于10μm，得到分级的豆丹肽螯合钙成品。

对实施例1所得不同组分豆丹肽螯合钙的螯合率、相对抗氧化活性和抑菌活性以及在大鼠体内的吸收率和对大鼠骨钙含量和骨密度的影响进行了测定，具体测定方法如下，结果分别见表1、表2和表3。

螯合率、吸收率和相对氧化抑制率的测定方法为：

1、螯合率测定采用EDTA络合滴定法

式中：V₁为滴定螯合态钙离子所消耗的EDTA溶液体积(m1)；V₀为滴定钙离子总量所消耗的EDTA溶液体积(m1)。

2、钙吸收率的测定

出生4周左右的雄性断乳大鼠喂养30d后，连续灌胃3d，每天钙摄入量为20mg Ca₂₊/l00g大鼠。记录灌胃量及进食饲料的量，收集粪便，测定粪便中钙的含量。饮用去离子水以避免从饮水中获得钙。根据下式计算钙吸收率：

式中：m₁为摄入钙总量/mg；m₂为粪便中排泄钙的量/mg。

3、抗氧化活性分析

取0.2mL亚油酸样品于30mL的试管中，加入10mL 99.5％的酒精和10mL、50mmol、pn7.0的磷酸缓冲液。分别取5mg的样品加入试管并用蒸馏水补加到总体积为25mL，40℃条件下黑暗中培养7d。TBA分析:含0.8mL水、0.2mL 81g/L SDS和1.5mL 200g/L醋酸溶液用10mol/L NaOH和1.5mL0.8％的TBA调整pH至3.5，取50μL已氧化的亚油酸加入到上述混合液中并在5℃条件下放置1h，然后升温到100℃保持1h，在535nm测定吸光度。与α-生育酚的相对氧化抑制率(ROIR)按下式计算：

ROIR＝[(A—B)/(A—C)]×100％

公式中，A为50μL和0.2mL亚油酸混合液的吸光度，B为5mg供试样品与0.2mL亚油酸混合液的吸光度，C为50μLα-生育酚与0.2mL亚油酸混合液的吸光度。

实施例1制备所得不同组分豆丹肽螯合钙的螯合率、吸收率和相对氧化抑制率测定结果见表1。

表1不同组分豆丹肽螯合钙的螯合率、吸收率和相对氧化抑制率

注：不同的小写字母代表处理间存在显著性差异(p<0.05)。

抗菌活性分析方法

抗菌活性采用牛津杯双层平板法进行研究。将10mL平20g/kg的灭菌琼脂加入无菌平板中，待琼脂完全冷却凝固后，将无菌的牛津杯(外径8cm)按顺序放人琼脂平板中，当15mL检测培养基冷却到50℃时与1mL含10⁸cfu/mL的指示菌溶液混合后也加入到平板中，取200μL(10mg/mL)的样品加入到检测平板的圆孔中，于37℃条件下培养24h。抑菌圈直径大小表示抗菌活性。

分析结果见表2：

表2不同组分豆丹肽螯合钙的抑菌活性

注：不同的小写字母代表处理间存在显著性差异(p<0.05)。

大鼠骨钙含量和骨密度的测定分析

出生4周左右的雄性断乳大鼠，个体质量约60-70g，分为5组，每组8只。实验设一个剂量组，每组每天喂食低钙基础饲料(150mg Ca/100g饲料)，除了此以外每组每天灌胃豆丹肽螯合钙或碳酸钙剂量为20mg Ca²⁺/l00g大鼠(根据老鼠体质量每周调整一次灌胃剂量)。受试时间为3个月。其间大鼠饮用去离子水以避免从饮水中获得钙。用双能X线骨密度仪测量股骨的骨密度。骨钙含量测定方法为：取大鼠一侧股骨在105℃烘箱中烘干至恒质量后置于干燥器中冷却后称量。处理好的饲料及股骨分别置于三角瓶中进行消化。消化好的样品按照原子吸收分光光度计仪器说明书的步骤进行测定。测定样品溶液、标准溶液和空白均用0.5％的氧化镧溶液稀释，定容。

测定结果见表3：

表3不同组分豆丹肽螯合钙的吸收率以及对大鼠骨钙含量和骨密度的影响

注：不同的小写字母代表处理间存在显著性差异(p<0.05)。

实施例2

使用超临界CO₂萃取脱脂方法对豆丹进行脱脂处理，萃取温度45℃，CO₂流速15L/h，压力20Mpa，萃取时间3h。将脱脂豆丹超微粉碎，按豆丹和水质量比为1:15的比例混匀，调节至pH4，温度30℃，加入豆丹质量0.3％的中性性蛋白酶对豆丹进行酶解20h。酶解液以50转/分钟的速度搅拌。酶解结束后将酶解液加热至80℃保持10分钟，灭活蛋白酶。酶解液于8000转/分钟离心机中离心30分钟，取上清。将上清用截留分子量为200kD超滤膜去除较大分子量的杂质得纯化液。纯化液用截留分子量分别为1kD、10kD、50kD的超滤膜进行分离和纯化。控制超滤杯进口压力为0.3Mpa，磁力搅拌的转速为150转/分钟，收集组分I(<1kD)、II(1kD-10kD)、III(10kD-50kD)和Ⅳ(>50kD)。向不同组中分别加入质量分数为3％的食品级CaCl₂，于35℃条件下螯合2h。螯合产物减压浓缩至粘稠状，加入浓缩液3倍体积的无水乙醇，静置20h后10000转/分钟离心15分钟，分别收集沉淀。将沉淀在60℃烘箱中烘干，经超微粉碎至粒径小于10μm，得到分级的豆丹肽螯合钙成品。

实施例3

使用超临界CO₂萃取脱脂方法对豆丹进行脱脂处理，萃取温度45℃，CO₂流速15L/h，压力10Mpa，萃取时间1-4h。将脱脂豆丹超微粉碎，按豆丹和水质量比为1:20的比例混匀，调节至pH8，温度20℃，加入豆丹质量1％的胰蛋白酶和碱性蛋白酶的复合酶对豆丹进行酶解18h，其中，胰蛋白酶和碱性蛋白酶的重量比为1:2。酶解液以25转/分钟的速度搅拌。酶解结束后将酶解液加热至85℃保持10分钟，灭活蛋白酶。酶解液于12000转/分钟离心机中离心10分钟，取上清。将上清用截留分子量在250Kd的超滤膜去除较大分子量的杂质得纯化液。纯化液用截留分子量分别为1kD、5kD、50kD的超滤膜进行分离和纯化。控制超滤杯进口压力为0.4Mpa，磁力搅拌的转速为120转/分，收集组分I(<1kD)、II(1kD-5kD)、III(5kD-50kD)和Ⅳ(>50kD)。向不同组中分别加入质量分数5％的食品级CaCl₂，于60℃条件下螯合1h。螯合产物减压浓缩至粘稠状，加入浓缩液4倍体积的无水乙醇，静置15h后12000转/分钟离心10分钟，分别收集沉淀。将沉淀在45℃烘箱中烘干，经超微粉碎至粒径小于10μm，得到分级的豆丹肽螯合钙成品。

实施例4

豆丹超临界CO₂萃取脱脂条件为：萃取温度为50℃，CO₂流速为25L/h，压力为35Mpa，萃取时间为1h。将脱脂豆丹超微粉碎，按豆丹和水质量比为1:5的比例混匀，调节至pH2，温度60℃，加入豆丹质量0.1％的木瓜蛋白酶和酸性蛋白酶的复合酶对豆丹进行酶解24h，其中，木瓜蛋白酶和酸性蛋白酶的重量比为1:1。酶解液以25转/分钟的速度搅拌。酶解结束后将酶解液加热至80℃保持15分钟，灭活蛋白酶。酶解液于12000转/分钟离心机中离心10分钟，取上清。将上清用截留分子量在300Kd的超滤膜去除较大分子量的杂质得纯化液。纯化液用截留分子量分别为1kD、5kD、50kD的超滤膜进行分离和纯化。控制超滤杯进口压力为0.4Mpa，磁力搅拌的转速为120转/分，收集组分I(<1kD)、II(1kD-5kD)、III(5kD-50kD)和Ⅳ(>50kD)。向不同组中分别加入质量分数8％的食品级CaCl₂，于50℃条件下螯合3h。螯合产物减压浓缩至粘稠状，加入浓缩液4倍体积的无水乙醇，静置15h后12000转/分钟离心10分钟，分别收集沉淀。将沉淀在45℃烘箱中烘干，经超微粉碎至粒径小于10μm，得到分级的豆丹肽螯合钙成品。

实施例5

本实施例中按照豆丹和水质量比为1:8的比例混匀，并且酶解时加入豆丹质量0.1％的木瓜蛋白酶和酸性蛋白酶的复合酶对豆丹进行酶解24h，其中，木瓜蛋白酶和酸性蛋白酶的重量比为1:1.5。其余操作均同实施例4。

实施例6

本实施例中酶解时加入豆丹质量1％的胰蛋白酶和碱性蛋白酶的复合酶对豆丹进行酶解18h，其中，胰蛋白酶和碱性蛋白酶的重量比为1:1.5。其余操作均同实施例3。

实施例1-4均采用截留分子量不同的超滤膜先分级后螯合的方法，一方面解决了肽钙螯合物难以分离的技术瓶颈，另一方面制得不同分子量的豆丹肽螯合钙产品可以针对具有不同需求的人群使用，提高了产品的使用效率和针对性。

Claims

1.一种豆丹肽螯合钙的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的豆丹肽螯合钙的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，豆丹脱脂采用超临界CO₂萃取方法，萃取温度为35-60℃，CO₂流速为15-25L/h，压力为10-35Mpa，萃取时间为1-4h，所得脱脂豆丹中脂肪的质量百分含量小于1％。

3.根据权利要求1所述的豆丹肽螯合钙的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，脱脂豆丹和水的质量比为1：5-20。

4.根据权利要求1所述的豆丹肽螯合钙的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，向步骤(1)所得混合液中加入的蛋白酶质量为脱脂豆丹质量的0.1-1％，所述蛋白酶为木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶和酸性蛋白酶中的一种或多种。

5.根据权利要求1所述的豆丹肽螯合钙的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，搅拌速度为25-50转/分，反应温度20-60℃，反应时间12-24h。

6.根据权利要求1所述的豆丹肽螯合钙的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，酶解结束后将酶解液加热至75-85℃保持10-20分钟灭活蛋白酶，离心转速8000-12000转/分，离心时间10-30分钟。

7.根据权利要求1所述的豆丹肽螯合钙的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，将纯化液用至少一种截留分子量为1-50kD的超滤膜进行分离纯化时，超滤进口压力0.3-0.5Mpa，磁力搅拌转速为100-200转/分钟。

8.根据权利要求1所述的豆丹肽螯合钙的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述钙源为CaCl₂、葡萄糖酸钙、硫酸钙、醋酸钙、乳酸钙、氧化钙、磷酸钙和碳酸钙中的一种或多种，加入的钙源质量为酶解肽组分质量的2％-8％。

9.根据权利要求1所述的豆丹肽螯合钙的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，螯合反应温度为25℃-60℃，螯合反应时间为1-3h。

10.根据权利要求1所述的豆丹肽螯合钙的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，无水乙醇的加入量为浓缩物体积的3-5倍，烘干所用温度为40-60℃。