CN106495879A - 一种核桃青皮渣有机肥的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种核桃青皮渣有机肥的制备方法，通过采用核桃青皮渣、食用菌菌渣、草木灰为主要成分，接种微生物菌种发酵等步骤制得。不含畜禽粪便，避免了作物因施用畜禽粪尿有机肥引起的烧苗、烧根、病虫害等副作用，合理有效的解决了核桃青皮、食用菌渣对环境的污染，变废为宝，还含有较高的钾含量，使用后果树的抗病虫害能力增强，果树产量增加，果实品质得到很大改善，经济效益显著提高。

Description

一种核桃青皮渣有机肥的制备方法

技术领域

本发明属于生物肥料技术领域，涉及一种核桃青皮渣有机肥的制备方法。

技术背景

目前，我国核桃栽培面积和产量均居世界首位，核桃总产量逐年平稳增加，青皮污染日趋严重（青皮的产量是核桃干果的4-5倍），核桃青皮含有多种生理活性成分，主要含有挥发油、脂肪酸、核桃多糖、胡桃醌及其衍生物等化学成分，所含次生物质如酚类、黄酮类、香豆素、萜类、甾类和有机酸等，具有较好的农药活性。核桃青皮中的木质素含量高，在自然界中降解速度很慢，不易腐烂，任意堆放的核桃青皮不仅污染环境，还产生难闻的气味。核桃青皮质地松软，经检测，有机质含量约为50% ，纤维素约为18% ，木质素约为40%，氮约0.30%，磷约0.16%，钾约3.68%，同时还含有较多的钙、铁、锰、锌、镁、铜等微量元素。

目前对核桃青皮的研究主要集中在提取有效活性物质上，大多采用溶剂提取、减压蒸馏、冷浸和热回流等普通方法，这些方法存在提取率低、能耗大等缺点，而对核桃青皮整体处理的研究和技术较少，将其资源化的实践更少，不能从根本上解决污染问题。梁淑娟等人虽然利用核桃青皮渣制作生物有机肥，但原料配比主要采用动物粪便，杂质较多，纯度偏差极大，含量极不稳定，无法保证施用养分含量及效果。并且，畜禽粪尿有机肥含盐分较重、易使土壤盐化，升高土壤盐浓度，提高营养元素对农作物的肥效临界点，增大施肥量，严重时会导致种子不发芽、烧苗、烧根；酸性畜禽粪尿有机肥，易生病菌，须用石灰中和，致土壤板结；畜禽粪肥的氮是以尿酸形态氮为主，尿酸盐不能直接被作物吸收利用，它在土壤中分解时消耗大量的氧气，释放出二氧化碳气，故易伤害作物根部；畜禽粪肥自身带较多病菌、虫卵（如芽胞杆菌属、大肠杆菌以及十多个属的真菌和一些寄生虫等），易引病虫害；部分畜禽粪肥还存在着微量元素含量超标的问题。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的上述不足，本发明提供一种核桃青皮渣有机肥的制备方法，采用核桃青皮渣、食用菌菌渣为主要成分，接种微生物菌种发酵制得，不含畜禽粪便，避免了作物因施用畜禽粪尿有机肥引起的烧苗、烧根、病虫害等副作用，并且本发明制备的有机肥还含有较高的钾含量。

本发明技术方案如下：

一种核桃青皮渣有机肥的制备方法，步骤包括：

1）按重量比40-60：30-50：6-10称取核桃青皮渣、食用菌渣和草木灰；核桃青皮渣调整含水量为50-60%，加入出芽短梗霉，三乙醇胺，搅拌均匀后通氧发酵10-20h；食用菌渣中加入氢氧化钙和沸石，升温至85℃后搅拌30min，然后降温至30℃，加入核桃青皮汁，搅拌均匀后静置15-20h；将上述原料混合均匀，得堆肥原料；

2）堆肥原料中按照质量分数0.05-0.1%的接种量加入混合菌剂，混合均匀，堆成底部2×2m、顶部0.5×0.5m、高1.5m的梯形，发酵5-7天后，堆肥原料中分别添加质量分数0.025-0.05%的EM菌和0.025-0.05%的光合菌，混合均匀，再次堆成底部2×2m、顶部0.5×0.5m、高1.5m的梯形进行发酵，每隔一天翻堆一次，至发酵温度到达60℃时，温度开始下降，当温度降到30℃时，停止翻堆，发酵结束，发酵时间15-18天；堆至2-3m高，进行第二次腐熟阶段，15-25天；

3）步骤2）产物均匀混合竹醋液，干燥，挤压、造粒，即得核桃青皮渣有机肥。

进一步的，步骤1）中，所述的核桃青皮渣为新鲜核桃青皮压榨后的核桃青皮渣；

进一步的，步骤1）中，每1kg核桃青皮渣中加入10g出芽短梗霉和5g三乙醇胺；

进一步的，步骤1）中，每1kg食用菌渣中加入10g氢氧化钙、5g沸石和300g核桃青皮汁。

进一步的，步骤2）中，所述的混合菌剂中有效活菌数≥10亿/克；

进一步的，步骤2）中，所述的混合菌剂由质量百分数为40%绿色木霉、10%淡紫拟青霉、20%枯草芽孢杆菌、10%米曲霉、10%黑曲霉和10%酵母菌组成的发酵菌粉，混合麸皮制得；所述的发酵菌粉与麸皮质量比为1：4。

进一步的，步骤2）中，发酵结束时，测定含水量25-30%，同时测定有机质含量，氮磷钾含量。

进一步的，步骤3）中，所述的竹醋液用量为发酵产物5-8%wt。

进一步的，步骤3）中，所述的竹醋液的制备方法为：将竹叶和竹枝粉碎，混合，依次在80-100℃保温2-3h、120-150℃保温3-5h、180-200℃保温1.5-2h下进行干馏，合并干馏液，除杂后与水按1:300-350的体积比混合，静置分层，取上清液，100-105℃常压蒸馏，蒸馏液用活性炭处理后过滤，取滤液，得竹醋液。

核桃外皮中含有较多的钾元素，而钾作为“品质元素”，可显著提高作物的品质，如烟草、马铃薯、甘薯、甜菜、西瓜、葡萄等均为喜钾作物。食用菌渣含有丰富的蛋白质、有机物和多种矿质元素,其中氮、磷、钾养分高于稻草和鲜粪。食用菌渣作有机肥原料，不仅为作物提供平衡的氮与碳外,还能改良土壤、提高土壤肥力具有重要意义。此外，食用菌的菌丝体在生长过程中，分泌出激动素类的物质和特殊的酶，而这些酶可使复杂的有机物分解成易被植物吸收的营养物质，可见食用菌渣是非常优质的有机肥原料。因此本发明首先在核桃青皮渣中加入出芽短梗霉进行发酵，适量添加三乙醇胺，能够加快木质素分解速度，减少发酵时间，改变短梗霉细胞的透性，防止肥料的过度扩散，增强吸收等性能，提高肥料利用率。食用菌渣混合核桃青皮汁加入适量氢氧化钙和沸石，能够反应部分硫铵并吸附渣料中的重金属离子等，起到净化作用。核桃皮渣、菌渣接种本发明特定的微生物菌种混合发酵后，大分子物质充分降解，并与竹醋液协同增效，更利于作物吸收利用，同时含有的抑菌成分能够减少病害，显著提高作物的抗病能力。本发明方法制备的有机肥各营养成分协同作用，保水保肥能力好，吸收快，改善土壤的物理性状，通过发酵能够产生促进植物根系生长的腐殖质、氨基酸及其他多糖，促进作物生长。

本发明技术方案有益效果为：

1）采用核桃青皮渣、食用菌菌渣、草木灰为主要成分，接种微生物菌种发酵制得，不含畜禽粪便，避免了作物因施用畜禽粪尿有机肥引起的烧苗、烧根、病虫害等副作用，不仅合理有效的解决了核桃青皮、食用菌渣对环境的污染，变废为宝，保护和改善了农业生态环境，获得生态效益，而且还开发出高附加值的产品。

2）本发明方法制备的有机肥，提高了肥料的稳定性，添加的各菌种间协同作用，增强土壤活性，肥效期增长，并且本发明制备的有机肥还含有较高的钾含量，使用后果树的抗病虫害能力增强，果树产量增加，果实品质得到很大改善，经济效益显著提高。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明进行进一步的阐述，应该明白的是，下述说明仅是为了解释本发明，并不对其内容进行限定。

实施例1

一种核桃青皮渣有机肥的制备方法，步骤包括：

1）按重量比40：50：10称取新鲜核桃青皮压榨后的核桃青皮渣、食用菌渣和草木灰；核桃青皮渣调整含水量为55%，加入出芽短梗霉，三乙醇胺，搅拌均匀后通氧发酵16h（每1kg核桃青皮渣中加入10g出芽短梗霉和5g三乙醇胺）；食用菌渣中加入氢氧化钙和沸石，升温至85℃后搅拌30min，然后降温至30℃，加入核桃青皮汁，搅拌均匀后静置18h（每1kg食用菌渣中加入10g氢氧化钙、5g沸石和300g核桃青皮汁）；将上述原料混合均匀，得堆肥原料；

2）堆肥原料中按照质量分数0.1%的接种量加入混合菌剂（有效活菌数≥10亿/克，混合均匀，堆成底部2m×2m、顶部0.5m×0.5m、高1.5m的梯形，发酵5天后，堆肥原料中分别添加质量分数0.025%的EM菌和0.025%的光合菌，混合均匀，再次堆成底部2×2m、顶部0.5×0.5m、高1.5m的梯形进行发酵，每隔一天翻堆一次，至发酵温度到达60℃时，温度开始下降，当温度降到30℃时，停止翻堆，发酵结束，发酵时间15天；堆至2-3m高，进行第二次腐熟阶段，20天；测定含水量25%-30%，同时测定有机质含量，氮磷钾含量；混合菌剂由质量百分数为40%绿色木霉、10%淡紫拟青霉、20%枯草芽孢杆菌、10%米曲霉、10%黑曲霉和10%酵母菌组成的发酵菌粉，按质量比为1：4混合麸皮制得；

3）步骤2）产物混合6%wt的竹醋液，干燥，挤压、造粒，即得核桃青皮渣有机肥。

所述的竹醋液的制备方法为：将竹叶和竹枝粉碎，混合，依次在80-100℃保温2-3h、120-150℃保温3-5h、180-200℃保温1.5-2h下进行干馏，合并干馏液，除杂后与水按1:320的体积比混合，静置分层，取上清液，100-105℃常压蒸馏，蒸馏液用活性炭处理后过滤，取滤液，得竹醋液。

实施例2

一种核桃青皮渣有机肥的制备方法，步骤包括：

1）按重量比50：40：10称取核桃青皮渣、食用菌渣和草木灰；核桃青皮渣调整含水量为50%，加入出芽短梗霉，三乙醇胺，搅拌均匀后通氧发酵10h（每1kg核桃青皮渣中加入10g出芽短梗霉和5g三乙醇胺）；食用菌渣中加入氢氧化钙和沸石，升温至85℃后搅拌30min，然后降温至30℃，加入核桃青皮汁，搅拌均匀后静置15h（每1kg食用菌渣中加入10g氢氧化钙、5g沸石和300g核桃青皮汁）；将上述原料混合均匀，得堆肥原料；

2）同实施例1；

3）发酵产物混合5%wt的竹醋液，干燥，挤压、造粒、即得核桃青皮渣有机肥。

竹醋液的制备方法同实施例1。

实施例3

一种核桃青皮渣有机肥的制备方法，步骤包括：

1）按重量比60：30：10称取核桃青皮渣、食用菌渣和草木灰；核桃青皮渣调整含水量为60%，加入出芽短梗霉，三乙醇胺，搅拌均匀后通氧发酵20h（每1kg核桃青皮渣中加入10g出芽短梗霉和5g三乙醇胺）；食用菌渣中加入氢氧化钙和沸石，升温至85℃后搅拌30min，然后降温至30℃，加入核桃青皮汁，搅拌均匀后静置20h（每1kg食用菌渣中加入10g氢氧化钙、5g沸石和300g核桃青皮汁）；将上述原料混合均匀，得堆肥原料；

2）、3）同实施例1。

对比例1：

将核桃青皮破碎后压榨得到核桃青皮渣，与食用菌渣、草木灰按照重量比5:4:1比例混合后，并测定PH值，有机质含量，氮磷钾含量、含水率。混合均匀后，按照0.1%的接种量，将由绿色木霉、淡紫拟青霉、枯草芽孢杆菌、米曲霉、黑曲霉、酵母菌组成的发酵剂按照重量比1：4的比例用麸皮将菌剂稀释均匀（发酵剂由质量百分数为40%绿色木霉、10%淡紫拟青霉、20%枯草芽孢杆菌、10%米曲霉、10%黑曲霉和10%酵母菌组成），再洒在堆肥原料中混合均匀。堆成底部2×2m，顶部是0.5×0.5m，高1.5m的梯形进行发酵，每天检测发酵温度，并做记录。每隔一天就进行一次翻堆操作至发酵温度到达60℃时，温度开始下降，当温度降到30℃，停止翻堆，发酵结束，发酵时间30天；堆至2-3米高，进行第二次腐熟阶段，时间大约在15-25天左右，测定含水量25-30%，同时测定有机质含量，氮磷钾含量，干燥、造粒即得。

对比例2：

一种核桃青皮渣有机肥的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

将核桃青皮破碎后压榨得到核桃青皮渣，与食用菌渣、草木灰按照重量比5:4:1比例混合后，并测定PH值，有机质含量，氮磷钾含量、含水率。混合均匀后，按照0.05%的接种量再将由绿色木霉、淡紫拟青霉、枯草芽孢杆菌、米曲霉、黑曲霉、酵母菌组成的发酵剂按照重量比1：4的比例用麸皮将菌剂稀释均匀（发酵剂由质量百分数为40%绿色木霉、10%淡紫拟青霉、20%枯草芽孢杆菌、10%米曲霉、10%黑曲霉和10%酵母菌组成），再洒在堆肥原料中混合均匀。同时添加0.025%EM菌＋0.025%光合菌，堆成底部2×2m，顶部是0.5×0.5m，高1.5m的梯形进行发酵，每天检测发酵温度，并做记录。每隔一天就进行一次翻堆操作至发酵温度到达60℃时，温度开始下降，当温度降到30℃，停止翻堆，发酵结束，发酵时间30天；堆至2-3m高，进行第二次腐熟阶段，时间大约在20天左右，测定含水量25%-30%，同时测定有机质含量，氮磷钾含量，干燥、造粒即得。

对比例3：

一种核桃青皮渣有机肥的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

将核桃青皮破碎后压榨得到核桃青皮渣，与食用菌渣、草木灰按照重量比5:4:1比例混合后，并测定PH值，有机质含量，氮磷钾含量、含水率。混合均匀后，添加0.05%EM菌＋0.05%光合菌洒在堆肥原料中混合均匀。堆成底部2×2m，顶部是0.5×0.5m，高1.5m的梯形进行发酵，每天检测发酵温度，并做记录每隔一天就进行一次翻堆操作，至发酵温度到达60℃时，温度开始下降，当温度降到30℃，停止翻堆，发酵结束，发酵时间35天；堆至2-3米高，进行第二次腐熟阶段，时间大约在20天左右，测定含水量25-30%，同时测定有机质含量，氮磷钾含量，干燥、造粒即得。

产品检测

另外，农田实验表明：施加本发明的有机肥的葡萄，与施加农家肥的葡萄相比，在施肥量相当的情况下；施加本发明的有机肥颗粒的葡萄白腐病病、炭疽病、霜霉病发生率均降低了15％以上。

表2实施例和对比例肥料的使用效果（实验数据来自贵妃玫瑰葡萄）

使用本发明实施例1-3核桃青皮渣有机肥和对比例1-3有机肥对葡萄产量等因素影响效果情况，与施用市场购买的普通有机类菌肥的效果对比，结果见表2：

表1 常规指标检测结果

实施例及对比例制备的核桃青皮渣有机肥常规指标检测结果，见表1；

本发明实施例及对比例中菌种优选下述方法培养：

一、绿色木霉

菌种来源：绿色木霉（提供形式：安瓿管冻干粉）购买至中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号CICC 13002）。

1、培养基

PDA培养基：马铃著200g，葡萄糖20g，琼脂15-20g，自来水1000ml，pH7.5，灭菌方法：121℃灭菌30min。

种子培养基配方：蛋白胨0.8%，酵母膏0.5%，玉米粉2.0%，葡萄糖1%，硫酸镁0.04%，磷酸二氢钾0.2%，pH7.5，灭菌方法：121℃灭菌30 min。

固体发酵培养基配方：麸皮58.86%，稻壳37.9%，硫酸铵1.5%，葡萄糖1%，磷酸二氢钾0.2%，硫酸镁0.04%，碳酸钙0.5%，灭菌方法：121℃灭菌30 min。

2、培养方法

1）菌种活化方法：将绿色木霉在PDA培养基上划线，30℃条件下培养48h，备用；

2）种子液的制备：各自挑取两环活化后的绿色木霉接于装有l00ml种子培养基的500ml锥形瓶中，上摇床，30℃条件下220rpm振荡培养24h；

3）固体发酵培养方法：种子液中挑选菌株，培养温度30℃，装料量1：10，接种量8%，培养时间5天，孢子产量为9.7×10⁹个/克。

二、淡紫拟青霉

菌种来源：淡紫拟青霉（提供形式：安瓿管冻干粉）购买至中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号CICC40276）。

1、液体一级发酵培养基：玉米粉1.2kg，玉米浆1.8 kg，脲0.06 kg，葡萄糖0.6 kg，硫酸铵0.3 kg，磷酸氢二铵0.3 kg，酵母粉0.3 kg，水60kg。

液体二级发酵培养基：玉米粉16kg，玉米浆24 kg，脲0.8 kg，酵母粉4 kg，葡萄糖16kg，水800kg。

固体培养基：陈大米500 kg，玉米粉5 kg，葡萄糖l kg，121℃灭菌30min。。

2、方法：淡紫拟青霉液体一、二级发酵培养基后，接种固体发酵培养基，在淡紫拟青霉固体发酵间内, 用1000mL的无菌量杯接取淡紫拟青霉液体种子600-800mL, 均匀地淋在方盘内的固体发酵培养基上，用铁钯或小铁铲进行混拌，使淡紫拟青霉液体种子与固体发酵培养基充分混合均匀，再用无菌的双层纱布盖上固体发酵培养基，将方盘摆放到发酵间的架子上，开始固体发酵。

淡紫拟青霉固体发酵过程：固体发酵间内保持温度为28±1℃，发酵1～3d保持发酵间内的湿度为70%～80%，从第4d起，不必加湿，保持正常环境下的湿度(10%～40%)，在发酵第3～4d时给固体发酵培养基上喷洒无菌的20%葡萄糖溶液一次，发酵7d，孢子成熟。

三、枯草芽孢杆菌

菌种来源：枯草芽孢杆菌（提供形式：安瓿管冻干粉）购买至中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号CICC20872）。

1、菌种活化

斜面培养基制备：蛋白胨0.5%，牛肉浸取物0.3%，NaCl0.5%，琼脂1.5%，pH7.0，121℃，0.103MPa，灭菌30min，无菌条件下制备斜面试管。

活化方法：无菌条件下，将冷冻保藏管中的枯草芽孢杆菌接种到斜面中，29℃条件下活化24h，得到斜面菌种或菌种斜面。

2、三角瓶种子液制备

三角瓶液体培养基制备：蛋白胨0.5%，牛肉浸取物0.3%，NaCl0.5%，MnSO₄·H₂O5ppm，pH7.2，121℃，0.103MPa，灭菌30min。

三角瓶种子液制备方法：无菌条件下，取一环经步骤1活化的枯草芽孢杆菌斜面菌种，接入装量为50mL液体培养基的250mL三角瓶中，置于150r/min中摇床中，29℃恒温培养30h，得到枯草芽孢杆菌三角瓶种子液。

3、枯草芽孢杆菌种子罐培养

种子罐液体培养基制备：谷胱甘肽废液用纯水稀释12倍，pH7.2，121℃，0.103MPa，灭菌1h，降温至29℃，备用。

种子罐培养方法：种子罐体积250L，种子罐的装料量控制在种子罐公称容积的60%，即种子罐的装料量为150L，在无菌条件下，取取经步骤2制备的枯草芽孢杆菌三角瓶种子液（30个三角瓶的种子液共1.5L）接入种子罐中,即接种量为种子罐实际装料量的1%，发酵温度29℃，pH 7.2，搅拌转速150r/min，通气量1.5VVm，培养30h，得到枯草芽孢杆菌种子罐培养液，培养结束时测得芽孢形成率为93.2%，含菌量为11.71×10⁸CFU/mL，杂菌污染率为0.2%。

4、发酵罐发酵

发酵罐液体培养基制备：谷胱甘肽废液用纯水稀释12倍，pH7.2，121℃，0.103MPaMPa，灭菌1h，降温至29℃，备用。

发酵罐培养方法：发酵罐的体积为5m³,装料量为3m³，在无菌条件下，取经步骤3制备的地衣芽胞杆菌种子罐培养液全部接入发酵罐中，经计算，接种量控制在发酵罐实际装料量的5%，发酵温度控制在29℃，pH控制在7.2，搅拌转速控制在150r/min，通气量控制在1.5VVm，培养30h。

四、米曲霉

菌种来源：米曲霉（提供形式：斜面培养物）购买至中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号CICC2005）。

1、斜面菌种活化

将米曲霉原种接种到PDA培养基上。30℃培养3-4天。

2、三角瓶种曲培养

麸皮、淀粉按照8：2（质量比）添加80%的水混合均匀，装入250ml的三角瓶中。料层厚度1cm，0.1MPa，121℃灭菌30min，灭菌后趁热把曲料摇瓶，待冷却后，将活化好的斜面种子接种至三角瓶麸皮培养基上，30℃恒温培养3-4d，培养过程中18-20h第一次摇瓶，将培养基摇散；40-48h进行第二次摇瓶，待固体麸皮上长满黄绿色孢子即为成熟。

3、种曲扩培

按培养基总量1%接入三角瓶种曲，拌匀后放入竹匾，摊匀厚度2cm左右，上面覆盖灭菌后的湿纱布，料层插入温度计，放入制曲室28-30℃培养。培养16-18h，曲料出现白色菌丝并结块，品温升到39℃左右，进行划曲（用消毒后的玻璃棒将曲料划散），根据菌丝生长快慢适当降低曲料料层厚度。再培养12-14h，曲料出现淡黄绿色，曲料再次结块，进行第二次划曲。再培养20h，待曲料长满黄绿色孢子，揭去纱布，降低曲料水分，促进孢子完全成熟。

4、厚层通风固态发酵

配制麸皮培养基灭菌后放入通风曲池，入池时应做到料层松、匀、平，否则通风不一致，影像产品质量，料层厚度25-30cm，以保证米曲霉生长时有足够的空气。按1%接入种曲拌匀，控制料层各部分品温在30℃左右。静置培养6-8h，此时料层开始升温到35-37℃，应立即开动风机通风降温，维持曲料温度到35℃，不低于30℃。曲料入池经12h培养后进行第一次翻曲，使曲料疏风，保持正常品温在34-35℃，继续培养4-6h后，进行第二次翻曲，连续鼓风，品温维持30-32℃。培养20h左右，米曲霉开始产孢子，应注意翻曲时间和翻曲质量。培养至内部菌丝茂盛，外部着生嫩黄绿色孢子，应及时出曲。

五、黑曲霉

菌种来源：黑曲霉（提供形式：安瓿管冻干粉）购买至中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号CICC2089）。

1、斜面菌种活化

将黑曲霉接种到PDA培养基上。30℃培养5天。

2、三角瓶扩大培养

豆芽汁液体培养基：蔗糖20g，黄豆芽100g，水1000ml。先将洗净的豆芽放在水中煮沸30min，两层纱布过滤，补充水分，加糖，pH7.2，121℃，0.1MPa，灭菌30min。将黑曲霉菌种接种到三角瓶液体培养基，放入摇床，30℃，200r/min，培养3d。

3、曲盒发酵

固体发酵基质：麸皮与水按照10：7比例进行搅拌均匀（麸皮8.8kg，水6.2kg），然后装入到10个铁制曲盒（每个曲盒装入1.5kg），曲盒内下置灭菌湿纱布，上盖灭菌帆布，置蒸箱内灭菌4h，待冷却后，接入菌液，搅拌均匀，每两瓶菌液接入一盘曲盒中，送至发酵室培养。

将曲盒放入电热发酵箱中培养，调节初始温度30℃，湿度58%，待曲盒表面长满黑色菌丝后，发酵结束（约5天）。

六、酵母菌

菌种来源：产朊假丝酵母菌（提供形式：安瓿管冻干粉）购买至中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号CICC31188）。

1）产朊假丝酵母菌菌种活化

斜面培养基制备：5°Bé麦芽汁，琼脂1.5%，自然pH，121℃，0.103MPa，灭菌30min，无菌条件下制备斜面试管。

活化方法：无菌条件下，将冷冻保藏管中的产朊假丝酵母菌接种到斜面中，28℃条件下活化48h，得到斜面菌种或菌种斜面。

2）产朊假丝酵母菌三角瓶种子液制备

三角瓶液体培养基制备：5°Bé麦芽汁，自然pH，121℃，0.103MPa，灭菌30min。

三角瓶种子液制备方法：无菌条件下，取一环经步骤1）活化的产朊假丝酵母菌斜面菌种，接入装量为50mL液体培养基的250mL三角瓶中，置于200r/min中摇床中，28℃恒温培养24h，得到产朊假丝酵母菌三角瓶种子液。

3）产朊假丝酵母菌种子罐培养

种子罐液体培养基制备：谷胱甘肽废液用纯水稀释12倍，pH6.0，121℃，0.103MPa，灭菌1h，降温至28℃，备用。

种子罐培养过程：种子罐体积250L，种子罐的装料量控制在种子罐公称容积的60%，即种子罐的装料量为150L，在无菌条件下，取经步骤2）制备的产朊假丝酵母菌三角瓶种子液（60个三角瓶的种子液共3L），即接种量为种子罐装料量的2%，接入种子罐中，发酵温度28℃，pH 6.0，搅拌转速200r/min，通气量1.5VVm，培养24h，得到产朊假丝酵母菌种子罐培养液，培养结束时测得活菌数为5.33×10⁸CFU/mL，杂菌污染率为0.36%。

4）发酵罐发酵

发酵罐液体培养基制备：谷胱甘肽废液用纯水稀释12倍，pH6.0，121℃，0.103MPa，灭菌1h，降温至28℃，备用。

发酵罐培养方法：发酵罐的体积为5m³,装料量为3m³，在无菌条件下，取经步骤3）制备的产朊假丝酵母菌种子罐培养液全部接入发酵罐中，经计算，接种量为发酵罐装料量的5%，发酵温度28℃，pH 6.0。发酵温度28℃，pH控制在6.0，搅拌转速200r/min，通气量1.5VVm，培养24h。

七、光合菌

光合菌培养操作流程（100kg）

配方：

碳酸氢钠：250g 氯化钠：100g 丙酸钠：500g硫酸镁：25g

磷酸二氢钾：25g 酵母膏：50g

操作流程：

1、操作前将双手清洗干净，按照配方称出所需试剂，依次将碳酸氢钠、氯化钠、丙酸钠、硫酸镁、磷酸二氢钾、方晶糖倒入清洗干净的白桶内，稍加水用木棍搅拌均匀至试剂溶解（注：酵母膏用温水搅拌之溶解后方可倒入白桶内），

2、向白桶内加入80kg水搅拌均匀，再放入20kg已培养好的菌种（注：需用白布将菌种过滤一下），搅拌均匀。

3、在桶内安装好灯泡接通电源，菌种温度在28～32度适宜，每天搅拌4～5次（2～3小时搅拌一次），清理上面漂浮的杂质，整个过程一定要注意卫生，搅拌前双手清洗干净，木棍都要烫一下。15天左右即可培养好。

（注：若室温达不到所需温度，桶外部先用电热毯包住接通电源，再用毛毡包住。培养前几天可将电热毯打到高档，待温度提升后打到低档。）

八、EM菌

培养操作流程（100Kg)

配方：

EM菌种：1kg麦麸：1kg硫酸铵：480g磷酸二氢钾：20g 糖蜜：1kg

操作流程：

1、先用铝锅烧开水，用开水将100L白桶烫一下消毒。

2、将准备好的麦麸、硫酸铵、磷酸二氢钾、糖蜜倒入桶内，加开水搅拌至溶化。

3、加水至100千克，搅拌均匀，待水温降至35℃将EM菌种倒入白桶内。约一周左右即可培养好。

Claims (9)

1.一种核桃青皮渣有机肥的制备方法，其特征在于，步骤包括：

1）按重量比40-60：30-50：6-10称取核桃青皮渣、食用菌渣和草木灰；核桃青皮渣调整含水量为50-60%，加入出芽短梗霉，三乙醇胺，搅拌均匀后通氧发酵10-20h；食用菌渣中加入氢氧化钙和沸石，升温至85℃后搅拌30min，然后降温至30℃，加入核桃青皮汁，搅拌均匀后静置15-20h；将上述原料混合均匀，得堆肥原料；

2）堆肥原料中按照质量分数0.05-0.1%的接种量加入混合菌剂，混合均匀，堆成底部2×2m、顶部0.5×0.5m、高1.5m的梯形，发酵5-7天后，堆肥原料中分别添加质量分数0.025%-0.05%的EM菌和0.025%-0.05%的光合菌，混合均匀，再次堆成底部2×2m、顶部0.5×0.5m、高1.5m的梯形进行发酵，每隔一天翻堆一次，至发酵温度达到60℃，温度开始下降，当温度降到30℃时，停止翻堆，发酵结束，发酵时间30天；堆至2-3m高，进行第二次腐熟阶段，15-25天；

3）步骤2）产物均匀混合竹醋液，干燥，挤压、造粒，即得核桃青皮渣有机肥。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤1）中，所述的核桃青皮渣为新鲜核桃青皮压榨后的核桃青皮渣。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤1）中，每1kg核桃青皮渣中加入10g出芽短梗霉和5g三乙醇胺。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤1）中，每1kg食用菌渣中加入10g氢氧化钙、5g沸石和300g核桃青皮汁。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤2）中，所述的混合菌剂中有效活菌数≥10亿/克。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述的混合菌剂由质量百分数为40%绿色木霉、10%淡紫拟青霉、20%枯草芽孢杆菌、10%米曲霉、10%黑曲霉和10%酵母菌组成的发酵菌粉，混合麸皮制得；所述的发酵菌粉与麸皮质量比为1：4。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤2）中，发酵结束时，测定含水量25-30%，同时测定有机质含量，氮磷钾含量。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤3）中，所述的竹醋液用量为发酵产物5-8%wt。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于：所述的竹醋液的制备方法为：将竹叶和竹枝粉碎，混合，依次在80-100℃保温2-3h、120-150℃保温3-5h、180-200℃保温1.5-2h下进行干馏，合并干馏液，除杂后与水按1:300-350的体积比混合，静置分层，取上清液，100-105℃常压蒸馏，蒸馏液用活性炭处理后过滤，取滤液，得竹醋液。