CN106489725A - 一种白鹤芋四倍体的诱导方法 - Google Patents

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Abstract

一种白鹤芋四倍体的诱导方法，以二倍体健壮组培苗的茎尖芽体作为外植体诱导带芽的愈伤组织，采用二倍体健壮组培苗可稳定地获得大量诱导材料，缩短诱导材料的准备时间，并且可以减少污染，并且用二倍体健壮组培苗的茎尖芽体作为外植体诱导的愈伤组织作为处理材料，其具有芽体活性强，易于增生和分化，重复性好等优点。

Description

一种白鹤芋四倍体的诱导方法
技术领域
本发明涉及一种白鹤芋的诱导方法，尤其是指一种白鹤芋四倍体的诱导方法。
背景技术
白鹤芋（Spathiphyllum floribundum）又名白掌，原产于美洲和亚洲的热带地区，为天南星科(Araceae) 白鹤芋属(Spathiphyllum) 多年生草本植物。其植株叶色翠绿，花姿似鹤翘首，色泽洁白无暇，被视为"清白之花"，是重要的观花观叶盆栽植物，极具观赏价值和经济效益。
当前，白鹤芋新品种选育依靠传统杂交育种存在种源单一匮乏、自然变异率低、自然结授粉率低、雌雄花期不一致等局限。现代发展的多倍体育种是利用人工诱变或自然变异等，通过细胞染色体组加倍获得多倍体育种材料，用以选育符合人们需要的优良品种，该技术打破了物种间的生殖隔离，提高了远缘物种的可交配性，利用优良基因性状，用于杂交育种，尤其在观赏花卉上运用选育的多倍体植株表现出巨大性，其叶片增大、叶色加深、花朵变大、花色艳丽等，可大大提高了其观赏价值。
化学诱变剂诱变产生多倍体是目前常用的诱导方法，具操作简易、突变率高、专一性强和适用性广等特点。其中秋水仙素是目前主要采用的诱变剂，诱导材料通常选取种子、顶芽、侧芽以及组织培养中的愈伤组织、圆球茎、不定芽等分裂旺盛的器官或组织，用秋水仙素处理诱导效果与作用时间和使用的浓度及温度、处理的植物种类和器官等因素有关。然而，当前并未有完整的、高效的诱导白鹤芋多倍体研究报道。
发明内容
本发明提供一种白鹤芋四倍体的诱导方法，其主要目的在于克服现有技术中不具备完整的、高效的诱导白鹤芋多倍体方法的缺陷。
为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
一种白鹤芋四倍体的诱导方法，包括以下步骤：
1)选取二倍体生长旺盛，叶色翠绿，株高1.5～3cm，不徒长，不拔节的健壮组培苗植株；
2)切取健壮组培苗植株的茎尖芽体，接种于pH值为5.6～5.8的固体诱导培养基中培养30～45天，获得组培苗带芽体的愈伤组织；
其中，固体诱导培养基的配方为：MS基本培养基, 6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）0.8～1.2mg/L，2,4-D 0.1～0.5mg/L，白糖25～35g/L，琼脂4～6g/L；
3)将愈伤组织接种于pH值为5.6～5.8的固体分化培养基中，预培养4～7天后，再接种于pH值为5.6～5.8的液体分化培养基中浸渍6～10天，并且在液体分化培养基中培养的期间每间隔2天摇匀一次；
其中，固体分化培养基的配方为：MS基本培养基, 6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）0.8～1.2mg/L，萘乙酸（NAA）0.1～0.3mg/L，白糖25～35g/L，琼脂4～6g/L；
液体分化培养基的配方为：MS基本培养基, 6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）0.8～1.2 mg/L，萘乙酸（NAA）0.1～0.3mg/L，白糖25～35g/L，浓度0.06～0.1% 的秋水仙素；
4)将经过步骤3）培养后的愈伤组织取出，经无菌水清洗1～2遍，并用无菌滤纸吸干后，再次接入固体分化培养基中进行分化培养，30～40天后，筛查出芽粗壮、叶片肥厚的植株；
其中，本步骤中的固体分化培养基与步骤３）中的固体分化培养基配方一致；
5)将指甲油涂抹于步骤4）中筛查出的植株叶片背部，2min后，通过镊子轻轻撕取其表面组织，并将该表面组织置于载玻片上，盖上盖玻片，进行镜检；
6)将镜检得出的气孔大小大于正常气孔10～50%的表面组织筛选出来，并将与该表面组织相对应的植株接种于生根培养基中培养，待该植株的根长生长到0.5～2cm时进行根尖染色体筛查；
其中，生根培养基的配方为：1/2MS基本培养基, 萘乙酸（NAA）0.1～0.3mg/L，白糖25～35g/L，琼脂4～6g/L，活性炭（AC）0.1～0.3%；
7)在无菌操作条件下，切取已生根的植株0.4～0.8cm的根尖，并进行小苗与根尖编号；
8)在16～20℃的黑暗条件下，将根尖用0.002M的8-羟基喹啉处理液进行预处理6～8h，期间每隔2h换一次0.002M的8-羟基喹啉处理液；
9)将预处理后的根尖用清水洗净，并于3～5℃条件下用新鲜配制的卡诺固定液（95%乙醇：冰醋酸=3:1）固定18～24h；
10)将卡诺固定液中的根尖取出，并在50～60℃条件下，将其依次用1MHCl酸解4～6min，蒸馏水水洗3～4次，漂洗1.5～3h，最后切取根尖分生区，并置于载玻片上将其捣碎，蘸取0.025%甲基紫1～2滴于根尖捣碎区，染色2～3min，盖上盖玻片，用橡皮擦轻压成雾状分散形态；
11)将步骤10）中做好的载玻片根尖在显微镜下镜检，将染色体数为52条的植株进行编号和数量记录统计。
进一步的，步骤2）中的固体诱导培养基的配方为：MS基本培养基, 6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）1.0 mg/L，2,4-D 0.3mg/L，白糖30g/L，琼脂5g/L。
进一步的，步骤3）和4）中的固体分化培养基的配方为：MS基本培养基, 6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）1.0 mg/L，萘乙酸（NAA）0.2mg/L，白糖30g/L，琼脂5g/L。
进一步的，步骤3）中的液体分化培养基的配方为：MS基本培养基, 6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）1.0 mg/L，萘乙酸（NAA）0.2mg/L，白糖30g/L，浓度0.08% 的秋水仙素。
进一步的，步骤6）中的生根培养基的配方为：1/2MS基本培养基, 萘乙酸（NAA）0.2mg/L，白糖30g/L，琼脂5g/L，活性炭（AC）0.2%。
本发明中，固体诱导培养基、固体分化培养基、液体分化培养基、生根培养基内使用的 MS 基本培养或 1/2MS 基本培养基为白鹤芋种苗的生长提供了 N、P、K 等无机营养元素，以满足其生长的基本需求。
本发明中使用的6-苄氨基腺嘌呤，英文名称 6-Benzylaminopurine(简称 6-BA)，属广谱性植物生长调节剂，可促进细胞生长，抑制叶绿素的降解，提高氨基酸的含量，延缓叶片衰老等。
本发明中使用的萘乙酸，英文名称 1-Naphthaleneacetic acid(简称NAA)，是广谱型植物生长调节剂，能促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根增加座果，防止落果，改变雌、雄花比率等。
本发明中使用的活性炭，英文名称 activated carbon(简称 AC)，具有吸附生长中代谢的有毒物质的作用。
和现有技术相比，本发明产生的有益效果在于:
1、本发明是以二倍体健壮组培苗的茎尖芽体作为外植体诱导带芽的愈伤组织，采用二倍体健壮组培苗可稳定地获得大量诱导材料，缩短诱导材料的准备时间，并且可以减少污染。
2、本发明选用二倍体健壮组培苗的茎尖芽体作为外植体诱导的愈伤组织作为处理材料，其具有芽体活性强，易于增生和分化，重复性好等优点。
3、本发明是通过形态学、气孔和根尖染色体检测鉴定四倍体，存在鉴定结果可靠，操作方法简便，时间较短，易于重复等优点。
4、本发明是选用0.025%的甲基紫滴于根尖捣碎区，而现有主要采用石炭酸品红染料，相比于现有技术本发明采用的0.025%的甲基紫成本更低，更加环保，并且染色效果更好。
附图说明
图1为本发明中气孔大小大于正常气孔10～50%的表面组织的显微镜下镜检示意图。
图2为本发明中气孔为正常的表面组织的显微镜下镜检示意图。
图3为本发明中最后筛选出来的成功诱导四倍体的植株染色体加倍图。
图4为本发明中染色体没有变化的植株染色体示意图。
具体实施方式
下面参照附图说明本发明的具体实施方式。
参照图1、图2、图3和图4。一种白鹤芋四倍体的诱导方法，包括以下步骤：
步骤一：
选取二倍体生长旺盛，叶色翠绿，株高1.5～3cm，不徒长，不拔节的健壮组培苗植株。本发明是以二倍体健壮组培苗的茎尖芽体作为外植体诱导带芽的愈伤组织，采用二倍体健壮组培苗可稳定地获得大量诱导材料，缩短诱导材料的准备时间，并且可以减少污染，并且选用二倍体健壮组培苗的茎尖芽体作为外植体诱导的愈伤组织作为处理材料，具有芽体活性强，易于增生和分化，重复性好等优点。
步骤二：
切取健壮组培苗植株的茎尖芽体，接种于pH值为5.6～5.8的固体诱导培养基中培养30～45天，获得组培苗带芽体的愈伤组织；
固体诱导培养基的配方为：MS基本培养基, 6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）0.8～1.2 mg/L，2,4-D 0.1～0.5mg/L，白糖25～35g/L，琼脂4～6g/L；
其中，较优的固体诱导培养基配方为：MS基本培养基, 6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）1.0 mg/L，2,4-D 0.3mg/L，白糖30g/L，琼脂5g/L。
步骤三：
将愈伤组织接种于pH值为5.6～5.8的固体分化培养基中，预培养4～7天后，再接种于pH值为5.6～5.8的液体分化培养基中浸渍6～10天，并且在液体分化培养基中培养的期间每间隔2天摇匀一次；
固体分化培养基的配方为：MS基本培养基, 6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）0.8～1.2 mg/L，萘乙酸（NAA）0.1～0.3mg/L，白糖25～35g/L，琼脂4～6g/L；
其中，较优的固体分化培养基配方为：MS基本培养基, 6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）1.0 mg/L，萘乙酸（NAA）0.2mg/L，白糖30g/L，琼脂5g/L。
液体分化培养基的配方为：MS基本培养基, 6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）0.8～1.2 mg/L，萘乙酸（NAA）0.1～0.3mg/L，白糖25～35g/L，浓度0.06～0.1% 的秋水仙素；
其中，较优的液体分化培养基配方为：MS基本培养基, 6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）1.0 mg/L，萘乙酸（NAA）0.2mg/L，白糖30g/L，浓度0.08% 的秋水仙素。
步骤四：
将经过步骤三培养后的愈伤组织取出，经无菌水清洗1～2遍，并用无菌滤纸吸干后，再次接入固体分化培养基中进行分化培养，30～40天后，筛查出芽粗壮、叶片肥厚的植株；
其中，本步骤中的固体分化培养基与步骤三中的固体分化培养基配方一致。
步骤五：
将指甲油涂抹于步骤四中筛查出的植株叶片背部，2min后，通过镊子轻轻撕取其表面组织，并将该表面组织置于载玻片上，盖上盖玻片，进行镜检。
步骤六：
将镜检得出的气孔大小大于正常气孔10～50%的表面组织筛选出来，并将与该表面组织相对应的植株接种于生根培养基中培养，待该植株的根长生长到0.5～2cm时进行根尖染色体筛查，另外，大于正常气孔10～50%属于较容易发现并筛选出来的，并不排除个别大于50%的，其也可用于培养。
生根培养基的配方为：1/2MS基本培养基, 萘乙酸（NAA）0.1～0.3mg/L，白糖25～35g/L，琼脂4～6g/L，活性炭（AC）0.1～0.3%；
其中，较优的生根培养基配方为：1/2MS基本培养基, 萘乙酸（NAA）0.2mg/L，白糖30g/L，琼脂5g/L，活性炭（AC）0.2%。
本发明是通过形态学、气孔和根尖染色体检测鉴定四倍体，存在鉴定结果可靠，操作方法简便，时间较短，易于重复等优点。
步骤七：
在无菌操作条件下，切取已生根的植株0.4～0.8cm的根尖，并进行小苗与根尖编号。
步骤八：
在16～20℃的黑暗条件下，将根尖用0.002M的8-羟基喹啉处理液进行预处理6～8h，期间每隔2h换一次0.002M的8-羟基喹啉处理液。
步骤九：
将预处理后的根尖用清水洗净，并于3～5℃条件下用新鲜配制的卡诺固定液（95%乙醇：冰醋酸=3:1）固定18～24h。
步骤十：
将卡诺固定液中的根尖取出，并在50～60℃条件下，将其依次用1M HCl酸解4～6min，蒸馏水水洗3～4次，漂洗1.5～3h，最后切取根尖分生区，并置于载玻片上将其捣碎，蘸取0.025%甲基紫1～2滴于根尖捣碎区，染色2～3min，盖上盖玻片，用橡皮擦轻压成雾状分散形态。
本发明选用0.025%的甲基紫滴于根尖捣碎区，而现有主要采用石炭酸品红染料，相比于现有技术本发明采用的0.025%的甲基紫成本更低，更加环保，并且染色效果更好。
步骤十一：
将步骤十中做好的载玻片根尖在显微镜下镜检，将染色体数为52条的植株进行编号和数量记录统计。
实施例一
步骤一：
选取二倍体白鹤芋品种“香水百掌”生长旺盛，叶色翠绿，株高2～2.5cm，不徒长，不拔节的健壮组培苗植株。
步骤二：
切取健壮组培苗植株的茎尖芽体，接种于pH值为5.6～5.8的固体诱导培养基中培养32天，获得组培苗带芽体的愈伤组织；
其中，固体诱导培养基的配方为：MS基本培养基, 6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）1.0 mg/L，2,4-D 0.3mg/L，白糖30g/L，琼脂5g/L。
步骤三：
将愈伤组织接种于pH值为5.6～5.8的固体分化培养基中，预培养5天后，再接种于pH值为5.6～5.8的液体分化培养基中浸渍8天，并且在液体分化培养基中培养的期间每间隔2天摇匀一次；
其中，固体分化培养基的配方为：MS基本培养基, 6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）1.0mg/L，萘乙酸（NAA）0.2mg/L，白糖30g/L，琼脂5g/L；
液体分化培养基的配方为：MS基本培养基, 6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）1.0mg/L，萘乙酸（NAA）0.2mg/L，白糖30g/L，浓度0.08% 的秋水仙素。
步骤四：
将经过步骤四培养后的愈伤组织取出，经无菌水清洗2遍，并用无菌滤纸吸干后，再次接入固体分化培养基中进行分化培养，35天后，筛查出芽粗壮、叶片肥厚的植株；
其中，本步骤中的固体分化培养基与步骤四中的固体分化培养基配方一致。
步骤五：
将指甲油涂抹于步骤四中筛查出的植株叶片背部，2min后，通过镊子轻轻撕取其表面组织，并将该表面组织置于载玻片上，盖上盖玻片，进行镜检。
步骤六：
将镜检得出的气孔大小大于正常气孔20～40%的表面组织筛选出来，并将与该表面组织相对应的植株接种于生根培养基中培养，待该植株的根长生长到1.2cm时进行根尖染色体筛查；
其中，生根培养基的配方为：1/2MS基本培养基, 萘乙酸（NAA）0.2mg/L，白糖30g/L，琼脂5g/L，活性炭（AC）0.2%。
步骤七：
在无菌操作条件下，切取已生根的植株0.6cm的根尖，并进行小苗与根尖编号。
步骤八：
在18℃的黑暗条件下，将根尖用0.002M的8-羟基喹啉处理液进行预处理7h，期间每隔2h换一次0.002M的8-羟基喹啉处理液。
步骤九：
将预处理后的根尖用清水洗净，并于4℃条件下用新鲜配制的卡诺固定液（95%乙醇：冰醋酸=3:1）固定20h。
步骤十：
将卡诺固定液中的根尖取出，并在55℃条件下，将其依次用1MHCl酸解56min，蒸馏水水洗3次，漂洗2h，最后切取根尖分生区，并置于载玻片上将其捣碎，蘸取0.025%甲基紫1滴于根尖捣碎区，染色2min，盖上盖玻片，用橡皮擦轻压成雾状分散形态。
步骤十一：
将步骤十中做好的载玻片根尖在显微镜下镜检，将染色体数为52条的植株进行编号和数量记录统计。
实施例二
步骤一：
选取二倍体白鹤芋品种“美酒”生长旺盛，叶色翠绿，株高1.8～2.2cm，不徒长，不拔节的健壮组培苗植株。
步骤二：
切取健壮组培苗植株的茎尖芽体，接种于pH值为5.6～5.8的固体诱导培养基中培养36天，获得组培苗带芽体的愈伤组织；
其中，固体诱导培养基的配方为：MS基本培养基, 6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）1.1mg/L，2,4-D 0.4mg/L，白糖30g/L，琼脂5g/L。
步骤三：
将愈伤组织接种于pH值为5.6～5.8的固体分化培养基中，预培养6天后，再接种于pH值为5.6～5.8的液体分化培养基中浸渍9天，并且在液体分化培养基中培养的期间每间隔2天摇匀一次；
其中，固体分化培养基的配方为：MS基本培养基, 6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）1.1 mg/L，萘乙酸（NAA）0.25mg/L，白糖30g/L，琼脂5g/L；
液体分化培养基的配方为：MS基本培养基, 6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）1.1 mg/L，萘乙酸（NAA）0.25mg/L，白糖30g/L，浓度0.09%的秋水仙素。
步骤四：
将经过步骤四培养后的愈伤组织取出，经无菌水清洗2遍，并用无菌滤纸吸干后，再次接入固体分化培养基中进行分化培养，38天后，筛查出芽粗壮、叶片肥厚的植株；
其中，本步骤中的固体分化培养基与步骤四中的固体分化培养基配方一致。
步骤五：
将指甲油涂抹于步骤四中筛查出的植株叶片背部，2min后，通过镊子轻轻撕取其表面组织，并将该表面组织置于载玻片上，盖上盖玻片，进行镜检。
步骤六：
将镜检得出的气孔大小大于正常气孔30～50%的表面组织筛选出来，并将与该表面组织相对应的植株接种于生根培养基中培养，待该植株的根长生长到1.5cm时进行根尖染色体筛查；
其中，生根培养基的配方为：1/2MS基本培养基, 萘乙酸（NAA）0.25mg/L，白糖30g/L，琼脂5g/L，活性炭（AC）0.25%。
步骤七：
在无菌操作条件下，切取已生根的植株0.7cm的根尖，并进行小苗与根尖编号。
步骤八：
在19℃的黑暗条件下，将根尖用0.002M的8-羟基喹啉处理液进行预处理8h，期间每隔2h换一次0.002M的8-羟基喹啉处理液。
步骤九：
将预处理后的根尖用清水洗净，并于5℃条件下用新鲜配制的卡诺固定液（95%乙醇：冰醋酸=3:1）固定22h。
步骤十：
将卡诺固定液中的根尖取出，并在58℃条件下，将其依次用1MHCl酸解6min，蒸馏水水洗4次，漂洗2.5h，最后切取根尖分生区，并置于载玻片上将其捣碎，蘸取0.025%甲基紫2滴于根尖捣碎区，染色3min，盖上盖玻片，用橡皮擦轻压成雾状分散形态。
步骤十一：
将步骤十中做好的载玻片根尖在显微镜下镜检，将染色体数为52条的植株进行编号和数量记录统计。
分别对实施例一与实施例二进行十组试验，得出的四倍体诱导率数据如下表：
由图可知，经过记录统计，实施例一中白鹤芋品种“香水百掌”的四倍体诱导率为11.4%～38%；实施例二中白鹤芋品种“美酒” 的四倍体诱导率为20%～38%，相比于现有的诱导方法，成功率更高，也更加稳定。
上述仅为本发明的具体实施方式，但本发明的设计构思并不局限于此，凡利用此构思对本发明进行非实质性的改动，均应属于侵犯本发明保护范围的行为。

Claims (5)

1.一种白鹤芋四倍体的诱导方法，其特征在于，包括以下步骤：
1) 选取二倍体生长旺盛，叶色翠绿，株高1.5～3cm，不徒长，不拔节的健壮组培苗植株；
2) 切取健壮组培苗植株的茎尖芽体，接种于pH值为5.6～5.8的固体诱导培养基中培养30～45天，获得组培苗带芽体的愈伤组织,其中，固体诱导培养基的配方为：MS基本培养基, 6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）0.8～1.2 mg/L，2,4-D 0.1～0.5mg/L，白糖25～35g/L，琼脂4～6g/L；
3) 将愈伤组织接种于pH值为5.6～5.8的固体分化培养基中，预培养4～7天后，再接种于pH值为5.6～5.8的液体分化培养基中浸渍6～10天，并且在液体分化培养基中培养的期间每间隔2天摇匀一次,其中，固体分化培养基的配方为：MS基本培养基, 6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）0.8～1.2 mg/L，萘乙酸（NAA）0.1～0.3mg/L，白糖25～35g/L，琼脂4～6g/L；
液体分化培养基的配方为：MS基本培养基, 6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）0.8～1.2 mg/L，萘乙酸（NAA）0.1～0.3mg/L，白糖25～35g/L，浓度0.06～0.1% 的秋水仙素；
4) 将经过步骤3）培养后的愈伤组织取出，经无菌水清洗1～2遍，并用无菌滤纸吸干后，再次接入固体分化培养基中进行分化培养，30～40天后，筛查出芽粗壮、叶片肥厚的植株,其中，本步骤中的固体分化培养基与步骤３）中的固体分化培养基配方一致；
5) 将指甲油涂抹于步骤4）中筛查出的植株叶片背部，2min后，通过镊子轻轻撕取其表面组织，并将该表面组织置于载玻片上，盖上盖玻片，进行镜检；
6) 将镜检得出的气孔大小大于正常气孔10～50%的表面组织筛选出来，并将与该表面组织相对应的植株接种于生根培养基中培养，待该植株的根长生长到0.5～2cm时进行根尖染色体筛查,其中，生根培养基的配方为：1/2MS基本培养基, 萘乙酸（NAA）0.1～0.3mg/L，白糖25～35g/L，琼脂4～6g/L，活性炭（AC）0.1～0.3%；
7) 在无菌操作条件下，切取已生根的植株0.4～0.8cm的根尖，并进行小苗与根尖编号；
8) 在16～20℃的黑暗条件下，将根尖用0.002M的8-羟基喹啉处理液进行预处理6～8h，期间每隔2h换一次0.002M的8-羟基喹啉处理液；
9) 将预处理后的根尖用清水洗净，并于3～5℃条件下用新鲜配制的卡诺固定液（95%乙醇：冰醋酸=3:1）固定18～24h；
10) 将卡诺固定液中的根尖取出，并在50～60℃条件下，将其依次用1M HCl酸解4～6min，蒸馏水水洗3～4次，漂洗1.5～3h，最后切取根尖分生区，并置于载玻片上将其捣碎，蘸取0.025%甲基紫1～2滴于根尖捣碎区，染色2～3min，盖上盖玻片，用橡皮擦轻压成雾状分散形态；
11) 将步骤10）中做好的载玻片根尖在显微镜下镜检，将染色体数为52条的植株进行编号和数量记录统计。
2.如权利要求1所述一种白鹤芋四倍体的诱导方法，其特征在于：步骤2）中的固体诱导培养基的配方为：MS基本培养基, 6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）1.0 mg/L，2,4-D 0.3mg/L，白糖30g/L，琼脂5g/L。
3.如权利要求1所述一种白鹤芋四倍体的诱导方法，其特征在于：步骤3）和4）中的固体分化培养基的配方为：MS基本培养基, 6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）1.0 mg/L，萘乙酸（NAA）0.2mg/L，白糖30g/L，琼脂5g/L。
4.如权利要求1所述一种白鹤芋四倍体的诱导方法，其特征在于：步骤3）中的液体分化培养基的配方为：MS基本培养基, 6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）1.0 mg/L，萘乙酸（NAA）0.2mg/L，白糖30g/L，浓度0.08% 的秋水仙素。
5.如权利要求1所述一种白鹤芋四倍体的诱导方法，其特征在于：步骤6）中的生根培养基的配方为：1/2MS基本培养基, 萘乙酸（NAA）0.2mg/L，白糖30g/L，琼脂5g/L，活性炭（AC）0.2%。
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