CN106461635B - 由加入血浆分离胶凝剂的血液稀释保存容器进行的稀释血浆分离法 - Google Patents
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Abstract
提供将微量的血液利用血液稀释缓冲液进行稀释所得到的试样的血浆的分离方法。在向20~100μL的微量血液添加血液稀释缓冲液、测定稀释的血浆中的生物成分时,需要将稀释的血球成分和稀释的血浆成分分开保存并输送。发现通过向加入有血液稀释缓冲液的容器加入现有的血浆分离用高分子凝胶,血浆分离用高分子胶凝剂也可以从稀释的血球和血浆分离稀释的血浆。稀释的血球被分离至该高分子胶凝剂的下方,稀释的血浆被分离至该胶凝剂的上方。通过以微量的血液测定血液中的生物成分,可以用于健康状态、疾病早期发现及预防的检测。具有不挑选采血的时间和地点的优点。
Description
技术领域
本发明涉及来自使微量的血液利用血液稀释缓冲液进行稀释所得到的血液试样的血浆的分离方法。
背景技术
目前已知有将采集的血液分离成血球和血浆的技术(例如,特开平7-294516号(专利文献1)。
作为该血液的分离操作所使用的分离剂,已知有以硅油、氯化聚丁烯、聚异丁烯、丙烯酸聚合物、碳原子数为6-20的α-烯烃和马来酸二甲酯的共聚物、苯乙烯/马来酸二甲酯共聚物等的分离层形成高分子化合物(a)为主成分,且向该主成分中配合了触变性赋予剂(b)的分离剂,且使其实用化。
作为触变性赋予剂,作为比重、粘度调整用,已知有:二氧化硅、粘土等无机微粒,或山梨醇和苯甲醛的缩合物(二亚苄基山梨醇)、氢化蓖麻油、12-羟基硬脂酸、水溶性蛋白的硝基腐殖酸加合物、谷氨酰胺、二甲醇八氢萘(dimethanol octahydronaphthalene)系共聚物等有机胶凝剂。
另外,目前,已知有一种方法,以采集的血液为试样并收容于加入有血液稀释缓冲液的容器中,来测定容器内的试样血液中的生物成分。
通过使用收容有采集的血液试样的容器内的微量的血液测定血液中的生物成分,可以用于健康状态或疾病早期发现或预防的检测。
该方法中,具有可自由设定用于采集血液检查用的血液的时间和地点的优点。
在该情况下,需要将收容有采集的血液试样的容器从采集地点输送至进行试样分析的地点。即,需要将本案发明的血液试样收容于容器中进行保存,为了得到采集血液试样的准确的分析结果,使在稀释缓冲容器中保存期间的血液试样的状态变化停留在最小是非常重要的。
作为用于保存试样血液的方法,已知有如下方法:将血液利用包含内部标准的血液稀释缓冲液进行稀释,将稀释的血球成分和稀释的血浆成分利用过滤器(过滤装置)进行分离并保存于容器中(例如,参照专利文献2)。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:日本特开平7-294516号
专利文献2:日本特开2001-255323号公报
发明内容
发明所要解决的课题
然而,过滤器进行的血球的分离是施加物理性的压力,因此,血球由于物理性的压力进行溶血,有时也不能准确地测定稀释的血浆成分。
利用微量的血液测定生物成分时,需要利用包含内部标准的血液稀释缓冲液将血液稀释成5~10倍,并利用过滤器分离稀释的血球成分。过滤器进行的血球的分离是施加物理性的压力,因此,血球由于物理性的压力而溶血,由于血浆的稀释倍数上升、测定时的血红蛋白的干扰等,有时不能准确地测定稀释的血浆成分。另外,存在在过滤器内残存稀释的血浆而使稀释的血浆量的回收量降低,精度由于再稀释等而降低等问题。
过滤器进行的稀释血浆成分的分离中,由于过滤时的物理性的压力导致血球破裂而引起溶血,因此,需要提高血液稀释缓冲液的渗透压使血球收缩来防止溶血。因此,血球内的水分向血浆中移出,因而,在生物成分的测定中产生误差,因此存在在每个检查项目中需要测定系数等问题。
在现有的将血液试样利用高分子凝胶且通过离心分离进行血球和血浆的分离方法中,血球和血浆的比重的差不太大,因此,分离效率未必良好。一部分红血球残存在血浆中,由于保存而造成溶血,在测定时带来影响。
用于解决课题的方案
本案发明人鉴于上述那样的情况发现一种方法,在向20~100μL左右微量采集的血液添加血液稀释缓冲液,而将血球成分和血浆成分分开保存的情况下,在加入有血液稀释缓冲液的容器中,通过血浆分离用高分子凝胶有效地分离容器内的血球和稀释的血浆。在该情况下,稀释的血球被分离至该高分子胶凝剂的下部侧的区域,稀释的血浆被分离至该胶凝剂上部侧的区域。
根据本案发明,提供一种对将微量的血液利用稀释缓冲液进行稀释所得到的试样,在其稀释的血浆分离中使用血浆分离用高分子凝胶并进行离心分离的方法和内置有血浆分离用高分子凝胶的微量血液稀释保存容器。
根据本案发明,准备一种血液稀释保存容器,用于通过离心分离将血球和稀释的血浆进行分离。
向该容器中注入用于稀释的血液中的血浆的稀释缓冲液和采集的血液。
向该容器中还导入比重在所述血球和所述稀释血浆的中间的规定量的高分子凝胶。即,在容器中收容所述稀释缓冲液和所述高分子凝胶。
在该情况下,在加入有血液稀释缓冲液的容器中,血浆分离用高分子胶凝剂以血液稀释缓冲液和血浆分离用高分子胶凝剂这两者直接接触的方式共同在容器内共存,但是不会产生两者混合的情况。即血液稀释缓冲液和血浆分离用高分子胶凝剂以分离的状态且占有分开的区域的状态存在于容器内。
在一个方式中,容器内的内容物在上部开口端的密封盖的下侧具有稀释缓冲液的层,在其下侧形成血浆分离用高分子胶凝剂的层。
在另一方式中,在上部开口端侧形成血浆分离用高分子胶凝剂的层,在其下侧形成稀释缓冲液的层。
然后,对于收容有两者的容器,将采集的血液试样从容器的开口端侧导入容器内。对容器以从上方向下方施加力的方式施加离心力。由此,分离成由稀释缓冲液稀释的血球和稀释的血浆。在该情况下,对容器施加的离心力约为1300G、施加约10分钟。
在优选的方式中,稀释缓冲液的比重比血浆的比重小。由稀释缓冲液进行稀释所得到的稀释的血浆的比重约为1.012~1.014,血球和稀释的血浆的比重差变大,稀释的血球和稀释的血浆的分离比血球(比重约1.095)和血浆(比重约1.027)的分离容易。使用的稀释液是与血液具有等渗性的渗透压约为285mOsm/L的液体,其比重约为1.0106,在具有较高的渗透压的稀释缓冲液的情况下,其渗透压约为500mOsm/L左右,其比重约为1.011。优选的收容血液试样的容器由透明的塑料形成。
而且,优选地在容器中形成用于显示加入了规定量的血液的标记。在该情况下,优选地在血液稀释缓冲液的容器的外周,在显示加入有20~100μL的范围内、例如65μL左右的血液处标注标记,由此,通过目视可确认采集规定的血液量。优选的容器可以使用可密闭的盖、例如螺旋式的盖来提高密封性,且打开关闭容器上端的开口部。另外,也可以使容器的底部可开闭或可装卸。通过这样,对血液稀释缓冲液的容器施加离心力,血球沉降至容器的下部,将附着于底部的血球取出,可用于使用血球的糖尿病等糖化血红蛋白的检查。底盖形成构成可稀释血球的容器的形状,因此,也可以用作稀释溶血液的容器。因此,可以将血液分析用结构体不进行变更而直接应用于糖化血红蛋白的检查。
例如容器设为外径14±2mm、高度75±5mm的圆筒形状,且具有在容器的底部安装有外径14±2mm、高度25±2mm的可装卸的圆筒形底盖的结构。容器内表面的形状可以如下,即,最上部的内径为10mm,最底部的内径为5mm,从最上部到上述最低部的深度为30mm,从最上部到上述最低部设为前端细的形状。
在该情况下,血液采集容器内腔的上部内径为10mm的圆形,深度为30mm,底的内径为5mm,具有朝向底以倒圆锥形变细的结构。
血浆分离用高分子凝胶组成利用将环戊二烯系树脂、二亚苄基山梨醇、二氧化硅及邻苯二甲酸(2-乙基己基)酯(フタル酸(2-エチルヘキシル))混炼而得到的触变性凝胶状分离剂(专利文献1)等。除此之外,也可以是类似的触变性凝胶状分离剂。
血浆分离用高分子凝胶的物理学特性是,HLB值为4.02~9.0,比重在25℃下为1.02~1.08,通过分子量GPC法得到的分子量分布为700~850。
凝胶状分离剂的特性是,可以在离心力为1300G和离心时间为10分钟的稀释血浆的分离条件下,将稀释的血浆与血球分离。
发明效果
本发明中,将与原血浆相比试样的比重更轻的稀释的血浆分离,因此,提高血球的分离效率。另外,不会破坏血球,因此,可以准确地检查采集的血液。
附图说明
图1是表示在形成有稀释缓冲液和血浆分离用胶凝剂的层的本发明的血液分析用结构体、即血液稀释保存容器中收容有采集的血液的状态的截面结构的概略图;
图2与上述图1一样为概略图,但图2是表示将血浆分离用胶凝剂收容于稀释缓冲液下侧时的血液分析用结构体(血浆分离胶凝剂底封入型)的施加离心力的前后的状态的概略图;
图3与上述图1一样为概略图,但图3是表示将血浆分离用胶凝剂收容于稀释缓冲液上侧时的血液分析用结构体(血浆分离胶凝剂稀释液上表面封入型)的施加离心力的前后的状态的概略图;
图4是表示使在血液稀释缓冲液的容器中通过离心沉降有血球的底的部分处具有使螺旋式的底盖可开闭的结构,且构成具有可用作利用了血球的检查用试样的结构的血液分析用结构体的血液稀释保存容器的截面结构的概略图;
图5是血浆分离胶凝剂底封入型(y)和静脉血浆(x)的相关图;
图6是血浆分离胶凝剂稀释液上表面封入型(y)和静脉血浆(x)的相关图。
具体实施方式
本案发明人等鉴于上述那样的情况发现一种方法,向20~100μL左右微量采集的血液添加血液稀释缓冲液,将血球成分和血浆成分分开保存,在加入有血液稀释缓冲液的血液稀释保存容器中,通过血浆分离用高分子胶凝剂有效地分离容器内的血球和稀释的血浆。
参照图1及图2时,根据本案发明的优选的实施方式,准备血液稀释保存容器1。然后,在该容器1中收容规定量的稀释缓冲液2和血浆分离用高分子胶凝剂3,构成血液分析用结构体。
该稀释缓冲液2是将采集的血液4中的血浆进行稀释的液体。
上述血浆分离用高分子胶凝剂3的比重以具有在血液4中的血球5和由上述稀释缓冲液2稀释的血浆之间的值的方式构成。
在该情况下,在加入有血液稀释缓冲液2的容器1中,血浆分离用高分子胶凝剂3以血液稀释缓冲液2和血浆分离用高分子胶凝剂3这两者直接接触的方式共同在容器1内共存,但是不会产生两者混合的情况。即稀释缓冲液2和血浆分离用高分子胶凝剂3以分离的状态且占有独立的分开的区域的状态存在于容器1内。
在一个方式中,容器1内的内容物在上部开口6的密封盖7的下侧具有稀释缓冲液2的层,在稀释缓冲液2的层的下侧形成血浆分离用高分子胶凝剂3的层。
在另一方式中,在上部开口端侧形成血浆分离用高分子胶凝剂3的层,在血浆分离用高分子胶凝剂3的层的下侧形成稀释缓冲液2的层。
在一个方式中如图2所示,容器内的内容物在上部开口6的下方具有稀释缓冲液2的层,在稀释缓冲液2的层的下侧形成血浆分离用高分子胶凝剂3的层。
在另一方式中,如图3所示,在上部开口侧形成有血浆分离用高分子胶凝剂3的层,在血浆分离用高分子胶凝剂3的层的下侧形成稀释缓冲液的层。
然后,对于收容有两者的容器1,将采集的血液试样从容器的开口6侧导入容器1内。对容器1以从上方向下方施加力的方式施加离心力。由此,分离成由稀释缓冲液2稀释的血球5的层和稀释的血浆的层8。在该情况下,对容器1施加的离心力约为1300G、施加约10分钟。在该情况下,为了赋予离心力,在便携式离心机(未图示)中,在将稀释缓冲液2、血浆分离用高分子胶凝剂3及采集的血液试样收容于容器1的状态下,以从容器1的上部向下部的方向产生作用力的方式对容器1进行离心。
在优选的方式中,稀释缓冲液2的比重比血浆的比重小。由稀释缓冲液2稀释所得到的稀释的血浆8的比重约为1.012~1.014,血球和稀释的血浆的比重差变大,稀释的血球和稀释的血浆的分离比血球5(比重约1.095)和血浆(比重约1.027)的分离容易。使用的稀释液是与血液具有等渗性的渗透压约为285mOsm/L的液体,其比重约为1.0106,在具有较高的渗透压的稀释缓冲液的情况下,其渗透压约为500mOsm/L左右,其比重约为1.011。优选的收容血液试样的容器由透明的塑料形成。
而且,优选地在容器1中形成用于显示加入规定量的血液的标记9。在该情况下,优选地在血液稀释缓冲液的容器的外周,在显示加入有20~100μL的范围内、例如65μL左右的血液处标注标记,由此,通过目视可确认采集规定的血液量。
如图4所示,优选的容器可以使用可密闭的盖、例如螺旋式上盖10来提高密封性,且打开关闭容器上端的开口部。另外,也可以使用相同的螺旋式的盖11使容器1的底部可开闭或可装卸。通过这样,产生可以将对血液稀释缓冲液的容器施加离心力而沉降至容器1的下部且附着于底部的血球5取出来进行检查的便利性。
例如容器1设为外径14±2mm、高度75±5mm的圆筒形状,且具有在容器1的下端部安装有外径14±2mm、高度25±2mm的可装卸的圆筒形螺旋式底盖11的结构。容器1内表面的形状可以如下,即,上端部的内径为10mm,下端部的内径为5mm,从最上部到上述下端部的深度为30mm,从上端部到下端部设为前端细的形状。
在该情况下,血液采集容器内腔的上部内径为10mm的圆形,深度为30mm,底的内径为5mm,具有朝向底以倒圆锥形变细的结构。
血浆分离用高分子凝胶组成利用将环戊二烯系树脂、二亚苄基山梨醇、二氧化硅及邻苯二甲酸(2-乙基己基)酯混炼而得到的触变性凝胶(〔公开号〕专利公开平7-294516)等。除此之外,也可以是类似的触变性凝胶状分离剂。
血浆分离用高分子凝胶的物理学特性是,HLB值为4.02~9.0,比重在25℃下为1.02~1.08,通过分子量GPC法得到的分子量分布为700~850。
在优选的方式中,凝胶状分离剂的特性是,可以在离心力为1300G和离心时间为10分钟的稀释血浆的分离条件下,将稀释血浆与血球进行分离。
另外,根据本案发明,提供一种对将微量的血液利用稀释缓冲液进行稀释所得到的试样,在其稀释的血浆分离中使用血浆分离用高分子凝胶进行离心分离的方法。
实施例
示出使用加入血浆分离胶凝剂的血液稀释保存容器的生化检查的实施例。
示出在以EDTA添加上臂静脉血为试样且通过离心分离而得到的血浆的测定值和使该血液的稀释的血浆的测定值乘以稀释倍数而求得的值之间的各检查项目的相关数据。
表1表示血浆分离胶凝剂的层位于稀释缓冲液的层的下侧的血浆分离胶凝剂底封入型(y)和血浆(x)的相关统计数据,图5表示其相关图。
表1血浆分离胶凝剂底封入型
项目 | 回归方程 | 相关系数 | 病例数 |
TP | y=1.02x-0.03 | 0.969 | 20 |
ALB | y=0.84x+0.84 | 0.972 | 20 |
AST | y=0.91x+0.60 | 0.929 | 20 |
ALT | y=1.07x-0.62 | 0.968 | 20 |
γGTP | y=0.92x+2.12 | 0.997 | 20 |
HDL-c | y=0.91x+5.30 | 0.993 | 20 |
LDL-c | y=0.98x+2.74 | 0.996 | 20 |
TG | y=0.96x+0.33 | 0.997 | 20 |
BUN | y=1.42x-0.90 | 0.961 | 20 |
CRE | y=1.09x+0.06 | 0.985 | 20 |
UA | y=1.10x-0.04 | 0.982 | 20 |
Glu | y=1.41x-7.48 | 0.992 | 20 |
表2表示血浆分离胶凝剂的层位于稀释缓冲液的层的上侧的血浆分离胶凝剂稀释液上表面封入型(y)和静脉血浆(x)的相关统计数据,图6表示其相关图。
表2血浆分离胶凝剂稀释液上表面封入型
项目 | 回归方程 | 相关系数 | 病例数 |
TP | y=0.98x+0.14 | 0.961 | 20 |
ALB | y=0.81x+0.67 | 0.970 | 20 |
AST | y=0.92x-1.32 | 0.958 | 20 |
ALT | y=0.90x+0.72 | 0.966 | 20 |
γGTP | y=0.93x+1.99 | 0.996 | 20 |
HDL-c | y=0.90x+5.30 | 0.993 | 20 |
LDL-c | y=0.98x+2.74 | 0.996 | 20 |
TG | y=0.96x+1.50 | 0.998 | 20 |
BUN | y=1.20x-2.88 | 0.961 | 20 |
CRE | y=1.00x+0.07 | 0.969 | 20 |
UA | y=1.02x-0.07 | 0.992 | 20 |
Glu | y=0.97x+2.09 | 0.995 | 20 |
如表1和表2所示,与血浆的相关性非常良好,结果,通过该加入血浆分离胶凝剂的血液稀释保存容器进行的稀释血浆分离法可以得到不比以血浆为试样的测定值逊色的结果。
产业上的可利用性
该微量血液采集方法对血液采集的时间和地点没有限制,因此,可应用于没有前往医疗机构的时间的情况,灾害时、远程医疗、健康管理等,可提前发现预防的人等,还可有助于节省医疗费。
符号说明
1 血液稀释保存容器
2 稀释缓冲液
3 血浆分离用高分子胶凝剂
4 试样血液
5 血球
6 上部开口
7 密封盖
8 稀释血浆
9 标记
10 螺旋式上盖
11 螺旋式底盖
Claims (14)
1.一种血液分析用结构体,用于收容将微量的采集的血液稀释而生成的生物分析试样,其中,
所述血液分析用结构体包括:
稀释缓冲液,其用于稀释所述采集的血液中的血浆;
血浆分离用高分子凝胶,其用于将稀释的血浆与所述采集的血液中的血球进行分离;
血液稀释保存容器,其用于收容所述稀释缓冲液和所述血浆分离用高分子凝胶,并且将所述采集的血液导入后收容并进行保存;以及
密闭盖,其用于将从所述血液稀释保存容器的上部开口部导入的所述血液与所述稀释缓冲液和所述血浆分离用高分子凝胶一起封入所述血液稀释保存容器中,
所述血液分析用结构体以如下方式构成:
所述稀释缓冲液和所述血浆分离用高分子凝胶在所述血液稀释保存容器的内部空间内在上下方向上分别形成独立的层,
所述采集的血液从所述上部开口导入,对所述血液稀释保存容器施加从上方向下方作用的离心力,由此,包含稀释的所述采集的血液的血浆的稀释缓冲液的血浆层、所述血浆分离用高分子凝胶的层和所述血球的层分别作为独立的层形成于所述血液稀释保存容器内;
其中在所述采集的血液中稀释的血浆的所述血浆层的比重为1.012~1.014,
其中所述稀释液具有如下性质:当稀释液是渗透压约为285mOsm/L的液体时,稀释液的比重约为1.0106,而当稀释液的渗透压增加至约500mOsm/L时,稀释液的比重约为1.011。
2.根据权利要求1所述的血液分析用结构体,其中,
所述血浆分离用高分子凝胶的比重比所述血球小,比所述血浆层的比重大。
3.根据权利要求1所述的血液分析用结构体,其中,
所述稀释缓冲液的比重比所述血浆的比重小。
4.根据权利要求1所述的血液分析用结构体,其中,
所述稀释缓冲液具有与所述血液大致等渗的285mOsm/L的渗透压,比重大致为1.0106。
5.根据权利要求1所述的血液分析用结构体,其中,
所述稀释缓冲液具有比所述血液高的大致500mOsm/L的渗透压,比重大致为1.011。
6.根据权利要求1所述的血液分析用结构体,其中,
稀释缓冲液的层位于上部开口端的密封盖的下侧,在稀释缓冲液的层的下侧形成血浆分离用高分子胶凝剂的层。
7.根据权利要求1所述的血液分析用结构体,其中,
在上部开口端侧形成血浆分离用高分子胶凝剂的层,在高分子胶凝剂的层的下侧形成稀释缓冲液的层。
8.根据权利要求1所述的血液分析用结构体,其中,
所述血液稀释保存容器由透明的塑料形成。
9.根据权利要求1所述的血液分析用结构体,其中,
在所述血液稀释保存容器上形成有用于显示加入了规定量的血液的标记。
10.根据权利要求1所述的血液分析用结构体,其中,
所述血液稀释保存容器具备可密闭所述上部开口部的螺旋式的盖。
11.根据权利要求1所述的血液分析用结构体,其中,
所述血液稀释保存容器的底部可开闭或可装卸。
12.根据权利要求11所述的血液分析用结构体,其中,
所述血液稀释保存容器是外径大致为14mm,高度大致为75mm的圆筒形状,
所述血液稀释保存容器的底部形成有外径大致为14mm,高度大致为25mm的可装卸的底盖。
13.根据权利要求1所述的血液分析用结构体,其中,
所述血液稀释保存容器的内表面的形状形成为如下形状:
上端部的内径大致为10mm,下端部的内径大致为5mm,
从所述上端部到所述下端部的深度大致为30mm,
从所述上端部到所述下端部,内径逐渐减少。
14.一种稀释的血液的分离方法,用于收容将微量的采集的血液稀释而生成的生物分析试样并将稀释的血浆和血球进行分离,其特征在于,
所述方法包括如下阶段:
准备用于稀释所述采集的血液中的血浆的稀释缓冲液;
准备用于将稀释的血浆与所述采集的血液中的血球进行分离的血浆分离用高分子凝胶;
准备用于收容所述稀释缓冲液和血浆分离用高分子凝胶,并且将所述采集的血液导入后收容并进行保存的血液稀释保存容器;
准备用于将从所述血液稀释保存容器的上部开口部导入的所述血液与所述稀释缓冲液和所述血浆分离用高分子凝胶一起封入所述血液稀释保存容器中的密闭盖;
将所述稀释缓冲液和所述血浆分离用高分子凝胶以在所述血液稀释保存容器的内部空间内在上下方向上分别形成独立的层的方式,导入所述血液稀释保存容器中;
将所述采集的血液从所述上部开口导入,对所述血液稀释保存容器施加从上方向下方作用的离心力;以及
包含稀释的所述采集的血液的血浆的稀释缓冲液的血浆层、所述血浆分离用高分子凝胶的层和所述血球的层分别作为独立的层形成于所述血液稀释保存容器内,
其中在所述采集的血液中稀释的血浆的所述血浆层的比重为1.012~1.014,
其中所述稀释液具有如下性质:当稀释液是渗透压约为285mOsm/L的液体时,稀释液的比重约为1.0106,而当稀释液的渗透压增加至约500mOsm/L时,稀释液的比重约为1.011。
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