CN106434837B - 一种快速检测原浆啤酒酵母的方法 - Google Patents
一种快速检测原浆啤酒酵母的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106434837B CN106434837B CN201610892077.3A CN201610892077A CN106434837B CN 106434837 B CN106434837 B CN 106434837B CN 201610892077 A CN201610892077 A CN 201610892077A CN 106434837 B CN106434837 B CN 106434837B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- yeast
- ynb
- culture medium
- gvba
- beer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及一种从下面啤酒酵母中快速检测原浆啤酒酵母的方法;是先将待测样品中倒入45~50℃的YNB‑GVBA培养基,36℃培养2~3d,观察YNB‑GVBA培养基上的菌落生长情况;如果YNB‑GVBA培养基上有菌落生成,且菌落周边由绿色变为黄色,表明下面啤酒酵母中混入有原浆啤酒酵母;本发明是一种快速、方便、灵敏的从下面啤酒酵母中检出原浆啤酒酵母的方法;本发明同时适用于下面啤酒的种酵母液、发酵液和酵母泥的检测;操作时间仅2~3d,便可实现对啤酒酵母交叉污染的早发现、早预防和早处理。本发明的实施不需要增加额外的仪器设备,不需要专门的人员培训,应用性强。
Description
(一)所属技术领域
本发明涉及一种检测原浆啤酒酵母的方法,目的在于从下面啤酒酵母中快速、方便、灵敏地检测出原浆啤酒酵母,属食品分析技术领域。
(二)背景技术
下面啤酒是我国主要的传统啤酒类型。但随着啤酒行业竞争的日趋激烈与消费者口味需求的多样化,越来越多的啤酒企业使用不同的啤酒酵母来生产风格各异的啤酒产品。原浆啤酒是近几年迅速崛起的新型啤酒产品,深受广大消费者青睐。然而对同时生产下面啤酒与原浆啤酒的企业而言,下面啤酒酵母与原浆啤酒酵母互为污染酵母。与下面啤酒酵母不同的是:原浆啤酒酵母发酵的啤酒具有典型的酵母发酵特征,如浓郁的水果香、酚香和酯香等。倘若下面啤酒被原浆啤酒酵母污染,后者的发酵特征就会在下面啤酒中呈现,导致下面啤酒出现杂味,并且严重影响下面啤酒的品质。如何及时准确的判断下面啤酒被原浆啤酒酵母污染的可能性,是啤酒生产者保证啤酒产品质量的有效手段。因此,研究快速检测原浆啤酒酵母的方法,及时对下面啤酒发酵过程中的潜在危害进行预警,对保障下面啤酒品质具有重要意义。
目前关于啤酒酿造中野生酵母的研究报道较多。例如吴文芳等早在1994年就介绍了啤酒中野生酵母的分类及危害,野生酵母的检测方法及对各方法的评价;林先军研究认为在麦芽浸出物、酵母浸出物、葡萄糖和蛋白胨(MYGP)的琼脂培养基中补充195mg/L的CuSO4制备的培养基可有效的选择性分离野生酵母,能从80%的污染样品中检测到野生酵母;并且这种培养基既能检测酿酒酵母属酵母,也能检测非酿酒酵母属野生酵母。所谓野生酵母,是指在啤酒酿造过程中出现的除培养酵母之外的所有酵母,威尔斯对野生酵母的定义则是:任何未经严密选用与控制的酵母,即为野生酵母。随着原浆啤酒产品的日益盛行,作为非野生酵母属原浆啤酒酵母的研究也引起研究者的广泛兴趣。但对下面啤酒酵母与原浆啤酒酵母交叉污染情况及其分离、鉴别手段的研究目前尚未见报道。
(三)发明内容
为了解决上述问题,本发明提供了一种从下面啤酒酵母中快速检测原浆啤酒酵母的方法;发明人研究发现,原浆啤酒酵母的最高生长温度为36℃,且耐受30mg/L的结晶紫;而下面啤酒酵母在36℃条件下不生长,在含30mg/L结晶紫的培养基上也不生长;该方法适用于所有存在形式的下面啤酒酵母,如啤酒种酵母液、啤酒发酵液与回收酵母泥。
一种从下面啤酒酵母中快速检测原浆啤酒酵母的方法,是先将待测样品冰浴超声5~10min,快速除去样品中的CO2,并打散酵母细胞;然后取1mL超声处理后的样品(或超声处理后再经系列梯度稀释的样品)于9cm的平板培养皿中,倒入45~50℃的酵母氮源-葡萄糖-结晶紫-溴甲酚绿-琼脂培养基(YNB-GVBA培养基),混匀;待YNB-GVBA培养基凝固后,36℃培养2~3d,观察YNB-GVBA培养基上的菌落生长情况;如果YNB-GVBA培养基上有菌落生成,且菌落周边由绿色变为黄色,表明下面啤酒酵母中混入有原浆啤酒酵母;如果培养基上没有菌落生成,则表明下面啤酒酵母中没有混入原浆啤酒酵母。
进一步的,所述YNB-GVBA培养基采用双料YNB-GVBA培养基,待测样品中原浆啤酒酵母的检出率可提高10倍。
所述YNB-GVBA培养基的制备方法为:先称取YNB培养基0.67g,葡萄糖2.0g,结晶紫与溴甲酚绿各3.0mg,琼脂1.8g,溶解到100mL的去离子水中,121℃灭菌15min,得到YNB-GVBA培养基。
所述双料YNB-GVBA培养基的配制方法为:将YNB-GVBA培养基中除去离子水外的其它组分按重量比加倍溶解到100mL去离子水中,121℃灭菌15min得到双料YNB-GVBA培养基。
本发明的有益效果是:
本发明针对下面啤酒酵母中可能混有原浆啤酒酵母,从而影响下面啤酒风味的问题提出,是一种快速、方便、灵敏的从下面啤酒酵母中检出原浆啤酒酵母的方法。
YNB-GVBA培养基价格便宜,制备方便,其中的原料YNB培养基来源广泛,可市购得到;冰浴超声5~10min即可快速有效的除去被测样品中的CO2并打散酵母细胞,适用于同时处理大量样品;采用30mg/L的结晶紫与36℃培养双重栅栏因子,可有效抑制下面啤酒酵母生长,测定方法的准确性高,适应性广;本发明同时适用于下面啤酒的种酵母液、发酵液和酵母泥的检测;下面啤酒酵母中原浆啤酒酵母的最低检出限为340个细胞/mL,采用双料培养基时,检出率可提高10倍,灵敏度更高;本发明方法的操作时间仅2~3d,便可实现对啤酒酵母交叉污染的早发现、早预防和早处理。另外,本发明的实施不需要增加额外的仪器设备,不需要专门的人员培训,应用性强,对保障啤酒品质、实现啤酒类型的多样化、安全性生产意义重大。
(四)具体实施方式
本实施例中YNB培养基可购自青岛海博生物技术有限公司。
实施例1由下面啤酒种酵母液中检出原浆啤酒酵母
1、原浆啤酒酵母-下面啤酒种酵母混合液的制备
将待检原浆啤酒酵母培养液冰浴超声5min,快速除去其中的CO2,并打散酵母细胞。用无菌吸管吸取打散酵母细胞后的啤酒酵母培养液1mL,沿管壁缓缓注入含9mL无菌生理盐水的试管中,漩涡振荡,混合均匀,制成10-1的样品匀液。再用无菌吸管吸取10-1的样品匀液1mL,沿管壁缓缓注入含9mL无菌生理盐水的试管中,漩涡振荡,混合均匀,制成10-2的样品匀液。以此类推,分别制成10-3、10-4、10-5、10-6的原浆啤酒酵母稀释液。
将下面啤酒种酵母液冰浴超声5min,快速除去其中的CO2并打散酵母细胞。将打散的下面啤酒种酵母与原浆啤酒酵母按表1比例加入到无菌试管中,充分混匀,得到不同比例的酵母混合液。
表1原浆啤酒酵母与下面啤酒种酵母混合比例
注:下面啤酒种酵母液细胞浓度为4600万个细胞/mL(w/mL);原浆啤酒酵母培养液细胞浓度为3400万个细胞/mL(w/mL)。w代表酵母数量“万个”。
2、检测
分别用无菌吸管吸取1mL酵母混合液于9cm的平板培养皿中,每个培养皿中倒入45℃的YNB-GVBA培养基20mL,充分混匀,静置凝固后36℃培养2d,检测结果如表1所示,即每毫升下面啤酒种酵母液中含有340个原浆啤酒酵母细胞数时便可被检出。
分别用无菌吸管吸取10mL酵母混合液于9cm的培养皿中,倒入50℃的YNB-GVBA双料培养基10mL,充分混匀,静置凝固后36℃培养2d,检测结果如表2所示(含单料培养基检测结果)。
表2原浆啤酒酵母与下面啤酒种酵母混合比例及检测结果
注:“+”代表检出;“-”代表未检出;双料培养基检测过程中,原浆啤酒酵母培养液细胞液浓度为4000万个细胞/mL(w/mL)。w代表酵母数量“万个”。
采用YNB-GVBA双料培养基时,下面啤酒种酵母液中原浆啤酒酵母的最低检出限则为40个细胞/mL,即每毫升下面啤酒种酵母液中含有40个原浆啤酒酵母细胞数时便可被检出。
实施例2由下面啤酒发酵液中检出原浆啤酒酵母
1、原浆啤酒酵母-下面啤酒发酵液混合液的制备
将待检原浆啤酒酵母培养液冰浴超声5min,快速除去其中的CO2,并打散酵母细胞。用无菌吸管吸取打散酵母细胞后的啤酒酵母培养液1mL,沿管壁缓缓注入含9mL无菌生理盐水的试管中,漩涡振荡,混合均匀,制成10-1的样品匀液。再用无菌吸管吸取10-1的样品匀液1mL,沿管壁缓缓注入含9mL无菌生理盐水的试管中,漩涡振荡,混合均匀,制成10-2的样品匀液。以此类推,分别制成10-3、10-4、10-5、10-6的原浆啤酒酵母稀释液。
将下面啤酒发酵液冰浴超声10min,快速除去其中的CO2,并打散酵母细胞。将下面啤酒发酵液中打散的酵母细胞与原浆啤酒酵母按表3比例加入到无菌试管中,充分混匀,得到不同比例的酵母混合液。
表3原浆酵母与下面啤酒发酵液混合比例及检测结果
注:“+”代表检出,“-”代表未检出;本实施例测试过程中,原浆啤酒酵母培养液细胞浓度为390万个细胞/mL(w/mL)。w代表酵母数量“万个”。
2、检测
分别用无菌吸管吸取1mL、10mL酵母混合液于9cm的培养皿中。盛1mL酵母混合液的培养皿中倒入50℃的YNB-GVBA培养基20mL,充分混匀,静置凝固后36℃培养3d;盛10mL酵母混合液的培养皿中倒入50℃的YNB-GVBA双料培养基10mL,充分混匀,静置凝固后36℃培养3d,检测结果如表3所示。下面啤酒发酵液中原浆啤酒酵母的最低检出限为:
YNB-GVBA单料培养基中为390个细胞/mL,即每毫升下面啤酒发酵液中含有390个原浆啤酒酵母细胞数时便可在YNB-GVBA培养基中被检出;
YNB-GVBA双料培养基中为39个细胞/mL,即每毫升下面啤酒发酵液中含有39个原浆啤酒酵母细胞数时便可在YNB-GVBA双料培养基中被检出。
实施例3由下面啤酒回收酵母泥中检测原浆啤酒酵母
1、原浆啤酒酵母-下面啤酒回收酵母泥混合液的制备
将待检原浆啤酒酵母培养液冰浴超声10min,快速除去其中的CO2,并打散酵母细胞。用无菌吸管吸取打散酵母细胞后的啤酒酵母培养液1mL,沿管壁缓缓注入含9mL无菌生理盐水的试管中,漩涡振荡,混合均匀,制成10-1的样品匀液。再用无菌吸管吸取10-1的样品匀液1mL,沿管壁缓缓注入含9mL无菌生理盐水的试管中,漩涡振荡,混合均匀,制成10-2的样品匀液。以此类推,分别制成10-3、10-4、10-5、10-6的原浆啤酒酵母稀释液。
将稀释10倍的下面啤酒回收酵母泥冰浴超声10min,快速除去其中的CO2,并打散酵母细胞。将稀释并打散酵母细胞后的下面啤酒回收酵母泥与原浆啤酒酵母按表4比例加入无菌试管中,充分混匀,得到不同比例的酵母混合液。
2、检测
分别用无菌吸管吸取1mL、10mL酵母混合液于9cm的培养皿中。盛1mL酵母混合液的培养皿中倒入50℃的YNB-GVBA培养基20mL,充分混匀,静置凝固后36℃培养3d;盛10mL酵母混合液的培养皿中倒入50℃的YNB-GVBA双料培养基10mL,充分混匀,静置凝固后36℃培养3d,检测结果如表4所示。下面啤酒发酵液中原浆啤酒酵母的最低检出限为:
YNB-GVBA单料培养基中为370个细胞/mL,即每毫升下面啤酒回收酵母泥中含有370个原浆啤酒酵母细胞数时便可在YNB-GVBA培养基中被检出;
YNB-GVBA双料培养基中为37个细胞/mL,即每毫升下面啤酒回收酵母泥中含有37个原浆啤酒酵母细胞数时便可在YNB-GVBA双料培养基中被检出。
表4原浆啤酒酵母与下面啤酒回收酵母泥混合比例及检测结果
注:“+”代表检出,“-”代表未检出;本实施例测试过程中,原浆啤酒酵母培养液细胞浓度为370万个细胞/mL(w/mL)。w代表酵母数量“万个”。
Claims (1)
1.一种从下面啤酒酵母中快速检测原浆啤酒酵母的方法,其特征在于:是先将待测样品冰浴超声5 ~ 10 min,快速除去样品中的CO2,并打散酵母细胞;然后取1 mL超声处理后的样品于9 cm的平板培养皿中,倒入45 ~ 50 ℃的双料YNB-GVBA培养基混匀;待双料YNB-GVBA培养基凝固后,36 ℃培养2 ~ 3 d,观察双料YNB-GVBA培养基上的菌落生长情况;如果双料YNB-GVBA培养基上有菌落生成,且菌落周边由绿色变为黄色,表明下面啤酒酵母中混入有原浆啤酒酵母;如果双料YNB-GVBA培养基上没有菌落生成,则表明下面啤酒酵母中没有混入原浆啤酒酵母;
所述双料YNB-GVBA培养基为:先称取YNB培养基1.34 g,葡萄糖4.0 g,结晶紫与溴甲酚绿各6.0 mg,琼脂3.6 g,溶解到100 mL的去离子水中,121 ℃灭菌15 min,得到双料YNB-GVBA培养基。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610892077.3A CN106434837B (zh) | 2016-10-13 | 2016-10-13 | 一种快速检测原浆啤酒酵母的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610892077.3A CN106434837B (zh) | 2016-10-13 | 2016-10-13 | 一种快速检测原浆啤酒酵母的方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN106434837A CN106434837A (zh) | 2017-02-22 |
CN106434837B true CN106434837B (zh) | 2019-11-12 |
Family
ID=58175017
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201610892077.3A Active CN106434837B (zh) | 2016-10-13 | 2016-10-13 | 一种快速检测原浆啤酒酵母的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN106434837B (zh) |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104131099B (zh) * | 2014-07-28 | 2016-03-23 | 青岛啤酒股份有限公司 | 快速监控混种酵母增殖的方法 |
-
2016
- 2016-10-13 CN CN201610892077.3A patent/CN106434837B/zh active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN106434837A (zh) | 2017-02-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN107513561A (zh) | 检测铜绿假单胞和产气荚膜梭菌的引物、试剂盒和方法 | |
CN101131384A (zh) | 利用发光细菌检测水中急性生物毒性的方法 | |
US20160060678A1 (en) | Selective chromogenic medium | |
Gilliland | Determination of yeast viability | |
Dasari et al. | Factors affecting the estimation of intracellular ethanol concentrations | |
CN106434837B (zh) | 一种快速检测原浆啤酒酵母的方法 | |
King et al. | Epifluorescent method for detection of nonviable yeast | |
CN104789635B (zh) | 一种黑曲霉麸曲孢子活力的评价方法 | |
Martyniak et al. | A novel concentration and viability detection method for Brettanomyces using the Cellometer image cytometry | |
CN101671735A (zh) | 一种改进的卷烟烟气冷凝物Ames试验 | |
CN101413872B (zh) | 一种微生物活菌数快速检测方法 | |
CN108982192A (zh) | 一种适于枣染色体倍性测定的细胞核悬浮液快速制备方法 | |
CN115074414A (zh) | 茯砖茶中冠突散囊菌的计数方法 | |
CN104928346A (zh) | 牛奶中细菌总数的检测方法 | |
CN109022536A (zh) | 溴甲酚紫与杜氏小管联合高效检测食醋中产气菌的方法 | |
CN104313113A (zh) | 一种副干酪乳杆菌直投式菌种中霉菌和酵母的定量检测方法 | |
CN210560447U (zh) | 一种降解氨基甲酸乙酯酵母菌的分离装置 | |
Cahill et al. | Improved control of brewery yeast pitching using image analysis | |
CN103336000A (zh) | Atp生物发光法快速检测储粮霉菌的计量方法及其应用 | |
JP2005229956A (ja) | 飲料中微生物の検出方法 | |
CN105624299A (zh) | 高致病性副溶血弧菌快速检测引物及试剂盒 | |
CN104178550A (zh) | 结核分枝杆菌药敏指示剂的使用方法 | |
CN102181490A (zh) | 一种生产柠檬酸的方法 | |
CN105420342A (zh) | 检测原料胶中大肠菌群含量的方法 | |
Zamenhof | Studies on bacterial mutability: the time of appearance of the mutant in Escherichia coli |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20230524 Address after: No. 99, Keji North Street, Mount Taishan District, Tai'an, Shandong 271000 Patentee after: Mount Taishan Beer Co.,Ltd. Address before: 271018 Shandong Province, Tai'an city Taishan District Daizong Street No. 61 Patentee before: Shandong Agricultural University |
|
TR01 | Transfer of patent right |