CN106421455A - 一种甜芦粟提取物及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及医药学领域,特别是涉及一种甜芦粟提取物,它包含大于30wt%的总黄酮。本发明还公开了所述甜芦粟提取物的制备方法和用途。
Description
技术领域
本发明涉及医药保健品领域,特别是涉及一种植物提取物及其制备方法和用途。
背景技术
甜芦粟(Sorghum bicolor(L.)Moench)又称甜高粱、甜杆,属禾本科高粱属,是普通粒用高粱的一个变种。
有关甜芦粟的研究,多集中在甜芦粟的含糖量,抗逆性研究及其作物能源植物用以提取工业乙醇的相关领域。甜芦粟的营养价值目前研究应用得较多的,一是其茎秆富含糖分,含糖量为10~12%,最高可达19%,可以作为夏秋时节的平民水果,也可以用来制糖、酿酒(芦粟酒)、造纸、作家畜的青贮饲料等。另外甜芦粟的顶穗子粒是粮食,可供食用或作饲料。此外,还有研究报道显示碳离子辐照对甜高粱茎秆糖分含量的提高有一定的促进作用等。
发明内容
本发明的目的旨在提供一种甜芦粟提取物及其制备方法用途。
具体地说,本发明的第一方面是提供了一种甜芦粟提取物,所述甜芦粟提取物的总黄酮含量大于30wt%。
在一优选例中,所述甜芦粟提取物由如下方法制得:将甜芦粟杆粉碎,水提,醇沉,醇沉浓度为60~80%;将醇沉液用活性炭吸附,去除色素;大孔吸附树脂D101用95%乙醇预处理过夜,预处理之后用乙醇湿法上柱;95%乙醇溶液在柱上流动清洗,至流出液加水不出现白色混浊为止,然后以大量蒸馏水洗去乙醇,至无醇味后上样,再依次用水、30%甲醇、80%甲醇冲柱子,收集80%甲醇部分,旋转蒸发。
在另一优选例中,所述的水提醇沉步骤包括:将甜芦粟杆粉碎,加5倍量的水浸泡,煮沸,过滤,滤液备用;滤渣中加4倍量的水煮沸,过滤,合并两次滤液,浓缩;滤液中加入无水乙醇,使乙醇浓度达到70%,4℃冰箱放置过夜,分层;取上层液体,采用活性炭吸附,去除色素。
本发明的第二方面是提供了一种甜芦粟提取物的制备方法,所述方法包括:将甜芦粟杆粉碎,水提,醇沉,醇沉浓度为60~80%;将醇沉液用活性炭吸附,去除色素;大孔吸附树脂D101用95%乙醇预处理过夜,预处理之后用乙醇湿法上柱;95%乙醇溶液在柱上流动清洗,至流出液加水不出现白色混浊为止,然后以大量蒸馏水洗去乙醇,至无醇味后上样,再依次用水、30%甲醇、80%甲醇冲柱子,收集80%甲醇部分,旋转蒸发。
在一优选例中,所述的水提醇沉步骤包括:将甜芦粟杆粉碎,加5倍量的水浸泡,煮沸,过滤,滤液备用;滤渣中加4倍量的水煮沸,过滤,合并两次滤液,浓缩;滤液中加入无水乙醇,使乙醇浓度达到70%,4℃冰箱放置过液,分层;取上层液体,采用活性炭吸附,去除色素。
本发明还提供了所述的甜芦粟提取物在制备抗炎药物中的应用。
本发明各个方面的细节将在随后的章节中得以详尽描述。通过下文以及权利要求的描述,本发明的特点、目的和优势将更为明显。
附图说明
图1芦丁标准曲线,在芦丁浓度在0~200ug/ml范围内与吸光度线性良好
图2 NO标准曲线,在0~120uM范围内与吸光度线性良好
图3甜芦粟提取物对LPS刺激RAW264.7细胞产生NO的影响,抑制NO产生呈现浓度依赖性
图4甜芦粟提取物对RAW264.7细胞生长的影响,随着浓度增加,对RAW264.7细胞生长基本无影响
图5甜芦粟提取物对角叉菜胶致大鼠足趾肿胀的影响,其在20~120min内具有较好的抑制大鼠足趾肿胀的效果
具体实施方式
本发明的问世部分是基于这样一个意外发现:用本发明的工艺提取获得的甜芦粟提取物可以有效抗炎。因此,该植物提取物可有望开发成为一种抗炎的药物。
具体而言,本发明的甜芦粟提取物可通过本发明的如下工艺从甜芦粟杆中提取获得:
将甜芦粟杆粉碎,水提,醇沉,醇沉浓度为60~80%;将醇沉液用活性炭吸附,去除色素;大孔吸附树脂D101用95%乙醇预处理过夜,预处理之后用乙醇湿法上柱;95%乙醇溶液在柱上流动清洗,至流出液加水不出现白色混浊为止,然后以大量蒸馏水洗去乙醇,至无醇味后上样,再依次用水、30%甲醇、80%甲醇冲柱子,收集80%甲醇部分,旋转蒸发。
经检测证实,本发明的甜芦粟提取物中总黄酮的含量大于30wt%。
本发明的甜芦粟提取物可以单独使用或以药物组合物的形式使用。药物组合物包括作为活性成分的本发明的甜芦粟提取物及可药用载体。较佳地,本发明的药物组合物含有0.1~99.9%重量百分比的作为活性成分的本发明的甜芦粟提取物。“可药用载体”不会破坏本发明的甜芦粟提取物的药学活性,同时其有效用量,即能发挥药物载体作用时的用量对人体无毒。
所述可药用载体包括但不限于:软磷脂、硬脂酸铝、氧化铝、离子交换材料、自乳化药物传递系统、吐温或其他表面活化剂、血清蛋白、缓冲物质如磷酸盐、氨基乙酸、山梨酸、水、盐、电解质如硫酸盐精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、硅酸镁、饱和脂肪酸部分甘油酯混合物等。
其他常用的药物辅料如粘合剂(如微晶纤维素)、填充剂(如淀粉、葡萄糖、无水乳糖和乳糖珠粒)、崩解剂(如交联PVP、交联羧甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、低取代羟丙基纤维素)、润滑剂(如硬脂酸镁)以及吸收促进剂、吸附载体、香味剂、甜味剂、赋形剂、稀释剂、润湿剂等。
本发明的甜芦粟提取物以及其药物组合物可按本领域常规方法制备并可以通过肠道或非肠道或局部途径给药。口服制剂包括胶囊剂、片剂、口服液、颗粒剂、丸剂、散剂、丹剂、膏剂等;非肠道给药制剂包括注射液等;局部给药制剂包括霜剂、贴剂、软膏剂、喷雾剂等。优选为口服制剂。
本发明的甜芦粟提取物以及其药物组合物的给药途径可以为口服、舌下、经皮、经肌肉或皮下、皮肤粘膜、静脉、尿道、阴道等。
除了制成药剂之外,亦可在本发明的甜芦粟提取物中加入抗氧化剂、色素、酶制剂等各种食品添加剂,按本领域的常规方法制成保健食品。
下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明,否则所有的百分数、比率、比例、或份数按重量计。
除非另行定义,文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外,任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
本发明提到的上述特征,或实施例提到的特征可以任意组合。本专利说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用,说明书中所揭示的各个特征,可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明,所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。
实施例一 甜芦粟总黄酮的提取和定量分析
1.材料与方法
1.1材料
甜芦粟,采于上海崇明,品种为甘蔗芦粟。经上海中医药大学教学实验中心可燕教授鉴定为Sorghum bicolor(L.)Moench;芦丁标准品、D101大孔吸附树脂(上海源叶生物科技有限公司);活性炭、无水乙醇、甲醇(国药集团化学试剂有限公司);722可见光分光光度计(上海精密仪器有限公司);鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)。
1.2方法
1.2.1甜芦粟总黄酮的提取
采集来的新鲜甜芦粟杆至鼓风干燥箱中60℃烘干,直接粉碎机粉碎;取1kg甜芦粟粉末,加5倍量的水浸泡30分钟,煮沸后,小火继续煮沸30分钟,过滤,收取滤液;残渣再加4倍量的水煮沸后,文火半小时,过滤,合并2次滤液,浓缩至100mL。上述滤液取233.3mL加入无水乙醇,使最终的醇浓度达到70%,4℃冰箱放置过夜,分层。取上层液体,采用活性炭吸附,去除色素,大孔吸附树脂D101用95%乙醇预处理过夜,预处理之后用乙醇湿法上柱。95%乙醇溶液在柱上流动清洗,至流出液加水不出现白色混浊为止,然后以大量蒸馏水洗去乙醇,至无醇味之后上样,依次用水、30%甲醇、80%甲醇冲柱子,收集80%甲醇的部分。旋转蒸发得甜芦粟总黄酮2.013g,配制成甜芦粟总黄酮提取液(1mg/mL),用于甜芦粟总黄酮定量分析。
1.2.2甜芦粟总黄酮的定量分析
1.2.2.1芦丁标准曲线的制作
准确称取芦丁标准品10mg,用90%乙醇溶解并定容至10m L,置于棕色瓶中4℃保存备用(1000μg/m L)。分别吸取标准品溶液0.04、0.08、0.16、0.32、0.64、1.28、2mL于10mL容量瓶中,加入0.3mL5%NaNO2溶液,混合均匀,6min后加0.3mL10%Al(NO3)3,混合均匀后静置6min,然后加入4mL 4%NaOH溶液,静置15min后用90%乙醇溶液定容至10mL,混匀,15min后于510nm处测定吸光值。以芦丁浓度(X)对吸光度(Y)进行线性回归分析,绘制芦丁标准曲线。
1.2.2.2甜芦粟总黄酮定量分析
上述1.2.1中的甜芦粟总黄酮提取液稀释后,参照标准曲线的制作方法,分别按比加入5%NaNO2溶液、10%Al(NO3)3和4%NaOH溶液,定容制成样品液,在510nm处测其吸光度。提取率计算公式为:
W=C×V×n/m
其中:C-样品的浓度,根据标准曲线算出;V-样品稀释后的体积;
n-稀释的倍数;m-样品的质量。
2.结果
2.1芦丁浓度在0~200ug/ml范围内与吸光度线性良好。标准曲线为y=0.004x+0.0379。见表1和图1。
表1芦丁标准曲线
2.2根据2.1中标准曲线,代入得甜芦粟提取物中总黄酮含量〉30%。
实施例二 甜芦粟总黄酮体外抗炎活性研究
1.材料与方法
1.1材料
RAW 264.7巨噬细胞株;胰蛋白酶、胎牛血清、DMEM培养基、LPS(Sigma公司);超净工作台(苏州三兴净化公司);酶标仪(美国Fisher公司)。
1.2方法
1.2.1RAW264.7细胞的培养及NO测定:
RAW264.7巨噬细胞用含10%的胎牛血清,100U/ml青霉素、链霉素的DMEM培养基培养,置于5%CO2、37℃培养箱中生长。待细胞融合至80%左右,用0.25%胰蛋白酶消化,悬浮于含10%胎牛血清的培养基中,调整细胞浓度为1×105/ml,接种于96孔培养板中,每孔100μl,培养箱中培养2h使细胞贴壁后进行后续处理,设定空白组(只加培养基)、模型组(加培养基和LPS)、给药组(加不同浓度的甜芦粟总黄酮(按实施例一制备)和LPS)。LPS终浓度为1μg/ml,甜芦粟总黄酮终浓度分别为80、40、20、10、5、2.5μg/ml,同时继续培养48h,收集细胞培养上清液。取50μl培养上清,加GRIESS A(含5%磷酸的1%磺胺溶液),常温避光10min,再加B常温避光10min(1%萘乙二胺溶液),540nm测吸光度。用DMEM培养基作空白对照,以亚硝酸盐的浓度代表NO的水平,以亚硝酸盐的标准曲线计算上清液中NO的含量。
1.2.2RAW264.7细胞的培养及细胞生长抑制作用测定:
RAW264.7巨噬细胞用含10%的胎牛血清,100U/ml青霉素、链霉素的DMEM培养基培养,置于5%CO2、37℃培养箱中生长。待细胞融合至80%左右,用0.25%胰蛋白酶消化,悬浮于含10%胎牛血清的培养基中,接种于96孔培养板中,每孔100μl(5000个细胞),培养箱中培养2h使细胞贴壁后进行后续处理。设定空白组(只加培养基)、给药组(加不同浓度的甜芦粟总黄酮及芦丁标准品)。分别加入100μl,使得甜芦粟总黄酮终浓度分别为80、40、20、10、5、2.5μg/ml,相当于芦丁终浓度分别为20、10、5、2.5、1.25、0.625μg/ml,同时甜芦粟总黄酮组继续培养48h,进行细胞生长抑制作用测定。每孔加入20μL cck-8溶液,将培养板在培养箱内孵育2小时,用酶标仪测定在450nm处的吸光度。细胞生长抑制率=(1-药物组吸光值/细胞对照组吸光值)×100%。
2.结果
2.1NO浓度在0~120uM范围内与吸光度线性良好。标准曲线为y=0.0061x+0.0056。见表2和图2。
表2NO标准曲线
2.2甜芦粟总黄酮作用于LPS刺激的RAW246.7细胞,结果显示:甜芦粟总黄酮具有较好的抑制炎症作用,其作用呈浓度依赖(见表3和图3),但对RAW264.7细胞生长无明显的抑制影响(见表4和图4)。
表3甜芦粟总黄酮及芦丁标准品抑制NO
注:##P<0.01vs control;*P<0.05,**P<0.01vs LPS;ΔP<0.05,ΔΔP<0.01vs相当芦丁浓度甜芦粟组
表4甜芦粟总黄酮对RAW264.7细胞生长的影响
实施例三 甜芦粟总黄酮体内抗炎活性研究
1.材料与方法
1.1材料
雄性SD大鼠(清洁级)18只,体重(150±10)g,购于上海斯莱克实验动物有限责任公司;角叉菜胶(Sigma公司);足趾肿胀仪(安徽正华生物仪器设备有限公司)。
1.2方法
取雄性SD大鼠18只,称重,将其随机分为3组,每组6只,分别为模型组,地塞米松阳性组(5mg/kg)和甜芦粟总黄酮组(100mg/kg,按实施例一制备)。甜芦粟总黄酮组每日灌胃给药1次,模型组灌胃给予同体积生理盐水,地塞米松阳性组腹腔注射给药,连续3天,正常饲喂。用圆珠笔在每鼠右脚踝关节画闭合标记线。测致炎前脚部容积。末次给药后第1小时,于右后肢足趾皮下注射1%角叉菜胶溶液致炎。分别在20min,40min,60min,120min时用容积测量装置测量大鼠脚部标记线下的脚部体积。然后,按下列公式计算大鼠的足趾肿胀率:
足趾肿胀百分率=(致炎后足趾容积-致炎前足趾容积)/致炎前足趾容积×100%。
2.结果
甜芦粟总黄酮对大鼠足趾皮下注射1%角叉菜胶溶液致炎效果显著(见表5和图5)。120min后足趾肿胀率达到72.81%,说明造模成功。甜芦粟总黄酮提取物在造模后20min-120min时间内,与同期模型组相比,可显著抑制角叉菜胶引起的足趾肿胀(P<0.01),其作用效果与5mg/kg地塞米松阳性药接近。
表5甜芦粟总黄酮对角叉菜胶致大鼠足趾肿胀的影响
本发明所涉及的多个方面已做如上阐述。然而,应理解的是,在不偏离本发明精神之前提下,本领域专业人员可对其进行等同改变和修饰,所述改变和修饰同样落入本申请所附权利要求的覆盖范围。
Claims (6)
1.一种甜芦粟提取物,其特征在于,所述甜芦粟提取物的总黄酮含量大于30wt%。
2.如权利要求1所述的甜芦粟提取物,其特征在于,所述甜芦粟提取物由如下方法制得:将甜芦粟杆粉碎,水提,醇沉,醇沉浓度为60~80%;将醇沉液用活性炭吸附,去除色素;大孔吸附树脂D101用95%乙醇预处理过夜,预处理之后用乙醇湿法上柱;95%乙醇溶液在柱上流动清洗,至流出液加水不出现白色混浊为止,然后以大量蒸馏水洗去乙醇,至无醇味后上样,再依次用水、30%甲醇、80%甲醇冲柱子,收集80%甲醇部分,旋转蒸发。
3.如权利要求2所述的甜芦粟提取物,其特征在于,所述的水提醇沉步骤包括:将甜芦粟杆粉碎,加5倍量的水浸泡,煮沸,过滤,滤液备用;滤渣中加4倍量的水煮沸,过滤,合并两次滤液,浓缩;滤液中加入无水乙醇,使乙醇浓度达到70%,4℃冰箱放置过夜,分层;取上层液体,采用活性炭吸附,去除色素。
4.一种甜芦粟提取物的制备方法,其特征在于,所述方法包括:将甜芦粟杆粉碎,水提,醇沉,醇沉浓度为60~80%;将醇沉液用活性炭吸附,去除色素;大孔吸附树脂D101用95%乙醇预处理过夜,预处理之后用乙醇湿法上柱;95%乙醇溶液在柱上流动清洗,至流出液加水不出现白色混浊为止,然后以大量蒸馏水洗去乙醇,至无醇味后上样,再依次用水、30%甲醇、80%甲醇冲柱子,收集80%甲醇部分,旋转蒸发。
5.如权利要求4所述的甜芦粟提取物的制备方法,其特征在于,所述的水提醇沉步骤包括:将甜芦粟杆粉碎,加5倍量的水浸泡,煮沸,过滤,滤液备用;滤渣中加4倍量的水煮沸,过滤,合并两次滤液,浓缩;滤液中加入无水乙醇,使乙醇浓度达到60~80%,4℃冰箱放置过液,分层;取上层液体,采用活性炭吸附,去除色素。
6.如权利要求1所述的甜芦粟提取物在制备抗炎药物中的应用。
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CN115155101A (zh) * | 2022-06-28 | 2022-10-11 | 甘肃省农业科学院畜草与绿色农业研究所(甘肃省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所) | 一种甜高粱总黄酮最佳提取方法及抗氧化性评价方法 |
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Publication number | Publication date |
---|---|
CN106421455B (zh) | 2020-07-31 |
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