CN106400126B - 一种仿生的罗布麻高质统合脱胶方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种仿生的罗布麻高质统合脱胶方法，其特征在于包括耐碱菌的筛选过程和罗布麻脱胶过程，所述的耐碱菌的筛选过程为对从果园中选取的土壤菌种进行平板划线分离，利用罗布麻粉选择对分离后的菌种进行初筛，对初筛后的菌种重复进行诱变、复筛、碱性培养基传代培养，得耐碱菌种，将耐碱菌种接种到含有一定外加碳源的罗布麻韧皮纤维碱性发酵液中，进行发酵培养，经发酵罗布麻韧皮纤维在经过进一步的复合处理、调酸、水洗得到罗布麻纤维。本发明充分发挥物理、化学和生物加工的优势，应用仿生理论，构建清洁高效的统合脱胶方法，获得的精干麻纤维整齐、可纺性好，纤维本身的抑菌性能、防紫外线性能等得到很好的保留。

Description

一种仿生的罗布麻高质统合脱胶方法

技术领域

本发明涉及一种麻纤维脱胶加工方法，具体涉及罗布麻纤维的脱胶加工方法，属于麻纤维纺织加工领域。

技术背景

罗布麻为我国特色植物资源，其不仅是传统的药用植物，而且是一种优良生物质纤维的来源。除了一般纤维素纤维所具有的吸湿性好等性能外，罗布麻纤维还具有抗菌、防紫外线和远红外发射等功能，是天然功能纤维。

较之苎麻、亚麻等传统的麻类纤维，罗布麻纺织技术的研究起步较晚，仍有一些加工环节的关键技术尚待突破。和传统的麻纤维一样，罗布麻纤维也属于韧皮纤维，脱胶是罗布麻加工过程的首要环节。在脱胶过程中纤维中的功能物质会被破坏或流失。如何在保证纤维加工性能的同时最大限度保留纤维上的功能成分，是制备罗布麻功能纺织品要解决的问题。

本发明借鉴生物系统中纤维素材料的演化过程，综合发挥物理、化学和生物加工的作用，构建了仿生统合脱胶技术，以获得具有良好加工性能和较高功能性的精于麻纤维，以利于后续的高比例罗布麻纤维的纺纱织造，同时最大限度保留纤维上的功能成分，实现了罗布麻纤维加工性能与罗布麻产品功能性的统一，而且加工过程也比传统化学脱胶法更为清洁。

发明内容

本发明提供了一种仿生的罗布麻高质统合脱胶方法.

本发明所采用的技术方案是：

一种仿生的罗布麻高质统合脱胶方法，包括罗布麻脱胶过程，所述罗布麻脱胶过程依次包括如下步骤：

1)取罗布麻麻皮以1∶10～50的浴比浸渍于水中10～120min，向麻皮浸渍液中加入0.5％～1％蛋白胨，0.5％～0.9％NaCl，然后将麻皮及浸渍液置于115～130℃条件下保温10～30min；

2)将步骤1)处理后的麻皮及浸渍液用氢氧化钠溶液调pH至9～12，并加入0.5～10g/L的渗透剂JFC或渗透剂BX或渗透剂T或吐温80，将微生物种子菌液以5～20％的接种量转接到调整pH后的麻皮浸渍液中，20～28℃，80～320rpm培养4～36h；

3)将步骤2)的麻皮处理液中加入35％的双氧水2～20g/L，35％的硅酸钠1～10g/L，温度85～100℃保温15～120min；

4)将步骤3)处理结束后的麻纤维转移至清水中，加盐酸溶液调整pH为7～8，加入过氧化氢酶0.1～20g/L，20～28℃搅拌状态下保温10～30min，取出纤维即得到脱胶处理后的罗布麻纤维。

进一步的，所述微生物种子菌液的获取过程依次包括如下步骤：

1)在梨树果园中取5～10g离地表10cm的土壤，置100ml浓度为0.2～2g/L的磷酸钠盐缓冲液中，在锥形瓶中50～250rpm振荡0.2～2h，取上清液在平板培养基上划线涂布，将平板倒置在20～28℃下培养12～48h，所述平板培养基中，1L培养基中含有如下成分：琼脂1～2％，蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 5g，pH 5.0～9.0。

2)将步骤1)中平板培养后得到的菌落，挑取不同形态菌落置于选择培养基中，培养24～48h后，取上清液，涂布由选择培养基加2％琼脂制成的平板培养基，将平板倒置在20～28℃下培养12～48h，将菌落数最多的菌选出，所述选择培养基中，1L培养基中含有如下成分：罗布麻麻皮粉碎后制备的麻皮粉0.01～2g，NaCl 5g，pH 5.0～7.0。

3)将步骤2)选出的菌接入发酵培养基中培养至对数生长期，移取5ml菌液至直径为9cm的培养皿中，用功率为15W的紫外线灯管距离30cm照射5～20min，避光保存8-24h后，转移至发酵培养基中，20～28℃，80～320rpm培养至对数生长期，然后再以10％的接种量转接到pH为9的选择培养基中20～28℃，80～320rpm培养24h后，取菌液涂布到由选择培养基加2％琼脂制成的平板培养基，倒置条件下20～28℃培养12～48h，同时以10％的接种量转接到新的pH为9的选择培养基中20～28℃，80～320rpm培养24h后，重复上述操作，直至平板上的菌落数不再增加，则在平板上选择最大的单菌落挑出；所述的发酵培养基中，1L培养基含有如下成分：果胶2～3g，木聚糖1～2g，蛋白胨5～10g，NaCl 5g，pH 5.0～7.0。

4)将步骤3)选出的菌按照步骤3)中的操作再次进行紫外线诱变处理后，将诱变菌群接入pH为10的选择培养基中20～28℃，80～320rpm培养，继续按照步骤(3)中的操作进行连续转接，直至平板上的菌落数不再增加，则在平板上选择最大的单菌落挑出。

5)将步骤4)选出的菌接入发酵培养基中20～28℃，80～320rpm培养至对数生长期，加入氯化锂使其浓度为0.1～1.5％，保温0.5-10min，取菌液5ml离心洗涤3次后，转移至pH为11的选择培养基中20～28℃，80～320rpm培养至对数生长期，然后再转接到选择培养基中20～28℃，80～320rpm培养24h后，以10％的接种量转接到新的选择培养基中20～28℃，80～320rpm培养24h后，取菌液涂布到由选择培养基加2％琼脂制成的平板培养基，倒置条件下20～28℃培养12～48h，同时以10％的接种量转接到新的选择培养基中20～28℃，80～320rpm培养24h后，重复上述操作，直至平板上的菌落数不再增加，则在平板上选择最大的单菌落挑出，以10％的接种量转接到新的选择培养基中培养至对数期，得到种子菌液。

本发明从罗布麻纤维成分出发，选取存在产果胶酶、半纤维素酶菌种的果园土壤，对其中所含菌种利用罗布麻粉末培养基等进行初筛、复筛的过程，筛选出目标菌群，并对目标菌群进行进一步的筛选以及碱性传代培养选择，最终得到能在碱性条件下降解罗布麻韧皮中的胶质的目标菌种，并利用菌种的耐碱性特定，设定的特殊的罗布麻脱胶工艺，将物理、化学、生物方法相结合，首先利用物理高温水域浸渍过程对罗布麻韧皮进行灭菌处理，保证脱胶过程中菌种的单一性，并且利用高温水域的作用在一定程度上破除罗布麻纤维胶质外层对生物酶的抗降解作用，再向加入少量外加碳源的碱性罗布麻韧皮发酵液中接种耐碱菌，有外加碳源的存在使得耐碱菌能够迅速的适应环境，生物量迅速上升，同时脱胶前期碱作用下使得较多的胶质组分被降解，这也为菌种的生长提供了营养物质，从而菌种生物量迅速上升，生物酶积累，碱作用不断消耗，生物酶作用增强，在化学生物的共同作用下实现对胶质的去除。本发明有益效果为：本发明针对罗布麻纤维具有天然功能的特性，充分发挥物理、化学和生物加工的优势，应用仿生理论，构建清洁高效的统合脱胶方法，由此加工获得的精干麻纤维整齐、可纺性好，而且纤维本身的抑菌性能、防紫外线性能等功能性得到很好的保留。

具体实施方式

下面通过具体的实施方案进一步叙述本发明。除非特别说明，实施方式中未描述的技术手段均可以用本领域技术人员所公知的方式实现。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分、用量、尺寸、形状进行的各种修改、替换、改进也属于本发明的保护范围，并且本发明所限定的具体参数应有可允许的误差范围。

实施例1

罗布麻脱胶工艺依次包括如下几个步骤：

1)取罗布麻麻皮以1∶25的浴比浸渍于水中20min，向麻皮浸渍液中加入0.5％蛋白胨，0.9％NaCl，然后将麻皮及浸渍液置于120℃条件下保温30min；

2)将步骤1)处理后的麻皮及浸渍液用氢氧化钠溶液调pH至9，并加入5g/L的吐温80，将微生物种子菌液以10％的接种量转接到调整pH后的麻皮浸渍液中，28℃，140rpm培养24h；

3)将步骤2)的麻皮处理液中加入35％的双氧水10g/L，35％的硅酸钠5g/L，温度100℃保温60min；

4)将步骤3)处理结束后的麻纤维转移至清水中，加盐酸溶液调整pH为7.0，加入过氧化氢酶10g/L，28℃搅拌状态下保温30min，取出纤维即得到脱胶处理后的罗布麻纤维。

微生物种子菌液的获取过程依次包括如下几个步骤：

1)在梨树果园中取10g离地表10cm的土壤，置100ml浓度为1g/L的磷酸钠盐缓冲液中，在锥形瓶中140rpm振荡1h，取上清液在平板培养基上划线涂布，将平板倒置在28℃下培养24h，所述平板培养基中，1L培养基中含有如下成分：琼脂1％，蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 5g，pH＝7.0。

2)将步骤1)中平板培养后得到的菌落，挑取不同形态菌落置于选择培养基中，培养24h后，取上清液，涂布由选择培养基加2％琼脂制成的平板培养基，将平板倒置在28℃下培养24h，将菌落数最多的菌选出，所述选择培养基中，1L培养基中含有如下成分：罗布麻麻皮粉碎后制备的麻皮粉1g，NaCl 5g，pH＝7.0。

3)将步骤2)选出的菌接入发酵培养基中培养至对数生长期，移取5ml菌液至直径为9cm的培养皿中，用功率为15W的紫外线灯管距离30cm照射15min，避光保存24h后，转移至发酵培养基中，28℃，140rpm培养至对数生长期，然后再以10％的接种量转接到pH为9的选择培养基中28℃，140rpm培养24h后，取菌液涂布到由选择培养基加2％琼脂制成的平板培养基，倒置条件下28℃培养24h，同时以10％的接种量转接到新的pH为9的选择培养基中28℃，140rpm培养24h后，重复上述操作，直至平板上的菌落数不再增加，则在平板上选择最大的单菌落挑出；所述的发酵培养基中，1L培养基含有如下成分：果胶2g，木聚糖1g，蛋白胨5g，NaCl 5g，pH＝7.0。

4)将步骤3)选出的菌按照步骤3)中的操作再次进行紫外线诱变处理后，将诱变菌群接入pH为10的选择培养基中28℃，140rpm培养，继续按照步骤(3)中的操作进行连续转接，直至平板上的菌落数不再增加，则在平板上选择最大的单菌落挑出。

5)将步骤4)选出的菌接入发酵培养基中28℃，140rpm培养至对数生长期，加入氯化锂使其浓度为0.5％，保温5min，取菌液5ml离心洗涤3次后，转移至pH为11的选择培养基中28℃，140rpm培养至对数生长期，然后再转接到选择培养基中28℃，140rpm培养24h后，以10％的接种量转接到新的选择培养基中28℃，140rpm培养24h后，取菌液涂布到由选择培养基加2％琼脂制成的平板培养基，倒置条件下28℃培养24h，同时以10％的接种量转接到新的选择培养基中28℃，140rpm培养24h后，重复上述操作，直至平板上的菌落数不再增加，则在平板上选择最大的单菌落挑出，以10％的接种量转接到新的选择培养基中培养至对数期，得到种子菌液。

实施例2

罗布麻脱胶工艺依次包括如下几个步骤：

1)取罗布麻麻皮以1∶15的浴比浸渍于水中30min，向麻皮浸渍液中加入0.5％蛋白胨，0.5％NaCl，然后将麻皮及浸渍液置于120℃条件下保温30min；

2)将步骤1)处理后的麻皮及浸渍液用氢氧化钠溶液调pH至10，并加入5g/L的渗透剂JFC，将微生物种子菌液以10％的接种量转接到调整pH后的麻皮浸渍液中，28℃，140rpm培养36h；

3)将步骤2)的麻皮处理液中加入35％的双氧水15g/L，35％的硅酸钠10g/L，温度100℃保温60min；

4)将步骤3)处理结束后的麻纤维转移至清水中，加盐酸溶液调整pH为7.0，加入过氧化氢酶15g/L，28℃搅拌状态下保温30min，取出纤维即得到脱胶处理后的罗布麻纤维。

微生物种子菌液的获取过程依次包括如下几个步骤：

1)在梨树果园中取10g离地表10cm的土壤，置100ml浓度为1g/L的磷酸钠盐缓冲液中，在锥形瓶中140rpm振荡1h，取上清液在平板培养基上划线涂布，将平板倒置在28℃下培养24h，所述平板培养基中，1L培养基中含有如下成分：琼脂1％，蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 5g，pH＝7.0。

2)将步骤1)中平板培养后得到的菌落，挑取不同形态菌落置于选择培养基中，培养24h后，取上清液，涂布由选择培养基加2％琼脂制成的平板培养基，将平板倒置在28℃下培养24h，将菌落数最多的菌选出，所述选择培养基中，1L培养基中含有如下成分：罗布麻麻皮粉碎后制备的麻皮粉1g，NaCl 5g，pH＝7.0。

3)将步骤2)选出的菌接入发酵培养基中培养至对数生长期，移取5ml菌液至直径为9cm的培养皿中，用功率为15W的紫外线灯管距离30cm照射10min，避光保存24h后，转移至发酵培养基中，28℃，140rpm培养至对数生长期，然后再以10％的接种量转接到pH为9的选择培养基中28℃，140rpm培养24h后，取菌液涂布到由选择培养基加2％琼脂制成的平板培养基，倒置条件下28℃培养24h，同时以10％的接种量转接到新的pH为9的选择培养基中28℃，140rpm培养24h后，重复上述操作，直至平板上的菌落数不再增加，则在平板上选择最大的单菌落挑出；所述的发酵培养基中，1L培养基含有如下成分：果胶2g，木聚糖1g，蛋白胨5g，NaCl 5g，pH＝7.0。

4)将步骤3)选出的菌按照步骤3)中的操作再次进行紫外线诱变处理后，将诱变菌群接入pH为10的选择培养基中28℃，140rpm培养，继续按照步骤(3)中的操作进行连续转接，直至平板上的菌落数不再增加，则在平板上选择最大的单菌落挑出。

5)将步骤4)选出的菌接入发酵培养基中28℃，140rpm培养至对数生长期，加入氯化锂使其浓度为1％，保温5min，取菌液5ml离心洗涤3次后，转移至pH为11的选择培养基中28℃，140rpm培养至对数生长期，然后再转接到选择培养基中28℃，140rpm培养24h后，以10％的接种量转接到新的选择培养基中28℃，140rpm培养24h后，取菌液涂布到由选择培养基加2％琼脂制成的平板培养基，倒置条件下28℃培养24h，同时以10％的接种量转接到新的选择培养基中28℃，140rpm培养24h后，重复上述操作，直至平板上的菌落数不再增加，则在平板上选择最大的单菌落挑出，以10％的接利量转接到新的选择培养基中培养至对数期，得到种子菌液。

实施例3

罗布麻脱胶工艺依次包括如下几个步骤：

1)取罗布麻麻皮以1∶50的浴比浸渍于水中10～120min，向麻皮浸渍液中加入1％蛋白胨，0.9％NaCl，然后将麻皮及浸渍液置于115℃条件下保温30min；

2)将步骤1)处理后的麻皮及浸渍液用氢氧化钠溶液调pH至11，并加入5g/L的渗透剂BX，将微生物种子菌液以15％的接种量转接到调整pH后的麻皮浸渍液中，28℃，140rpm培养36h；

3)将步骤2)的麻皮处理液中加入35％的双氧水15g/L，35％的硅酸钠10g/L，温度100℃保温60min；

4)将步骤3)处理结束后的麻纤维转移至清水中，加盐酸溶液调整pH为8，加入过氧化氢酶20g/L，28℃搅拌状态下保温20min，取出纤维即得到脱胶处理后的罗布麻纤维。

微生物种子菌液的获取过程依次包括如下几个步骤：

1)在梨树果园中取5g离地表10cm的土壤，置100ml浓度为2g/L的磷酸钠盐缓冲液中，在锥形瓶中140rpm振荡2h，取上清液在平板培养基上划线涂布，将平板倒置在28℃下培养48h，所述平板培养基中，1L培养基中含有如下成分：琼脂2％，蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 5g，pH＝9.0。

2)将步骤1)中平板培养后得到的菌落，挑取不同形态菌落置于选择培养基中，培养48h后，取上清液，涂布由选择培养基加2％琼脂制成的平板培养基，将平板倒置在28℃下培养48h，将菌落数最多的菌选出，所述选择培养基中，1L培养基中含有如下成分：罗布麻麻皮粉碎后制备的麻皮粉2g，NaCl 5g，pH＝7.0。

3)将步骤2)选出的菌接入发酵培养基中培养至对数生长期，移取5ml菌液至直径为9cm的培养皿中，用功率为15W的紫外线灯管距离30cm照射20min，避光保存16h后，转移至发酵培养基中，28℃，140rpm培养至对数生长期，然后再以10％的接种量转接到pH为9的选择培养基中28℃，140rpm培养24h后，取菌液涂布到由选择培养基加2％琼脂制成的平板培养基，倒置条件下28℃培养48h，同时以10％的接种量转接到新的pH为9的选择培养基中28℃，140rpm培养24h后，重复上述操作，直至平板上的菌落数不再增加，则在平板上选择最大的单菌落挑出；所述的发酵培养基中，1L培养基含有如下成分：果胶3g，木聚糖2g，蛋白胨5g，NaCl 5g，pH＝7.0。

4)将步骤3)选出的菌按照步骤3)中的操作再次进行紫外线诱变处理后，将诱变菌群接入pH为10的选择培养基中28℃，140rpm培养，继续按照步骤(3)中的操作进行连续转接，直至平板上的菌落数不再增加，则在平板上选择最大的单菌落挑出.

5)将步骤4)选出的菌接入发酵培养基中28℃，140rpm培养至对数生长期，加入氯化锂使其浓度为1％，保温10min，取菌液5ml离心洗涤3次后，转移至pH为11的选择培养基中28℃，140rpm培养至对数生长期，然后再转接到选择培养基中28℃，140rpm培养24h后，以10％的接种量转接到新的选择培养基中28℃，140rpm培养24h后，取菌液涂布到由选择培养基加2％琼脂制成的平板培养基，倒置条件下28℃培养48h，同时以10％的接种量转接到新的选择培养基中28℃，140rpm培养24h后，重复上述操作，直至平板上的菌落数不再增加，则在平板上选择最大的单菌落挑出，以10％的接种量转接到新的选择培养基中培养至对数期，得到种子菌液。

实施例4

罗布麻脱胶工艺依次包括如下几个步骤：

1)取罗布麻麻皮以1∶30的浴比浸渍于水中120min，向麻皮浸渍液中加入1％蛋白胨，0.9％NaCl，然后将麻皮及浸渍液置于130℃条件下保温10min；

2)将步骤1)处理后的麻皮及浸渍液用氢氧化钠溶液调pH至12，并加入10g/L的渗透剂T，将微生物种子菌液以20％的接种量转接到调整pH后的麻皮浸渍液中，28℃，140rpm培养36h；

3)将步骤2)的麻皮处理液中加入35％的双氧水20g/L，35％的硅酸钠10g/L，温度100℃保温120min；

4)将步骤3)处理结束后的麻纤维转移至清水中，加盐酸溶液调整pH为8，加入过氧化氢酶10g/L，28℃搅拌状态下保温30min，取出纤维即得到脱胶处理后的罗布麻纤维。

微生物种子菌液的获取过程依次包括如下几个步骤：

1)在梨树果园中取10g离地表10cm的土壤，置100ml浓度为2g/L的磷酸钠盐缓冲液中，在锥形瓶中140rpm振荡2h，取上清液在平板培养基上划线涂布，将平板倒置在28℃下培养48h，所述平板培养基中，1L培养基中含有如下成分：琼脂2％，蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 5g，pH 5.0。

2)将步骤1)中平板培养后得到的菌落，挑取不同形态菌落置于选择培养基中，培养48h后，取上清液，涂布由选择培养基加2％琼脂制成的平板培养基，将平板倒置在28℃下培养48h，将菌落数最多的菌选出，所述选择培养基中，1L培养基中含有如下成分：罗布麻麻皮粉碎后制备的麻皮粉2g，NaCl 5g，pH 5.0。

3)将步骤2)选出的菌接入发酵培养基中培养至对数生长期，移取5ml菌液至直径为9cm的培养皿中，用功率为15W的紫外线灯管距离30cm照射5min，避光保存24h后，转移至发酵培养基中，28℃，140rpm培养至对数生长期，然后再以10％的接种量转接到pH为9的选择培养基中28℃，140rpm培养24h后，取菌液涂布到由选择培养基加2％琼脂制成的平板培养基，倒置条件下28℃培养48h，同时以10％的接种量转接到新的pH为9的选择培养基中28℃，140rpm培养24h后，重复上述操作，直至平板上的菌落数不再增加，则在平板上选择最大的单菌落挑出；所述的发酵培养基中，1L培养基含有如下成分：果胶3g，木聚糖1g，蛋白胨5g，NaCl 5g，pH 5.0。

4)将步骤3)选出的菌按照步骤3)中的操作再次进行紫外线诱变处理后，将诱变菌群接入pH为10的选择培养基中28℃，140rpm培养，继续按照步骤(3)中的操作进行连续转接，直至平板上的菌落数不再增加，则在平板上选择最大的单菌落挑出。

5)将步骤4)选出的菌接入发酵培养基中28℃，140rpm培养至对数生长期，加入氯化锂使其浓度为1.5％，保温5min，取菌液5ml离心洗涤3次后，转移至pH为11的选择培养基中28℃，140rpm培养至对数生长期，然后再转接到选择培养基中28℃，140rpm培养24h后，以10％的接种量转接到新的选择培养基中28℃，140rpm培养24h后，取菌液涂布到由选择培养基加2％琼脂制成的平板培养基，倒置条件下28℃培养48h，同时以10％的接种量转接到新的选择培养基中28℃，140rpm培养24h后，重复上述操作，直至平板上的菌落数不再增加，则在平板上选择最大的单菌落挑出，以10％的接种量转接到新的选择培养基中培养至对数期，得到种子菌液。

实施例5

罗布麻脱胶工艺依次包括如下几个步骤：

1)取罗布麻麻皮以1∶25的浴比浸渍于水中30min，向麻皮浸渍液中加入0.5％蛋白胨，0.5％NaCl，然后将麻皮及浸渍液置于130℃条件下保温30min；

2)将步骤1)处理后的麻皮及浸渍液用氢氧化钠溶液调pH至12，并加入5g/L的渗透剂吐温80，将微生物种子菌液以10％的接种量转接到调整pH后的麻皮浸渍液中，20℃，140rpm培养24h；

3)将步骤2)的麻皮处理液中加入35％的双氧水10g/L，35％的硅酸钠5g/L，温度100℃保温15min；

4)将步骤3)处理结束后的麻纤维转移至清水中，加盐酸溶液调整pH为7，加入过氧化氢酶0.1g/L，20℃搅拌状态下保温30min，取出纤维即得到脱胶处理后的罗布麻纤维。

微生物种子菌液的获取过程依次包括如下几个步骤：

1)在梨树果园中取10g离地表10cm的土壤，置100ml浓度为2g/L的磷酸钠盐缓冲液中，在锥形瓶中140rpm振荡2h，取上清液在平板培养基上划线涂布，将平板倒置在28℃下培养48h，所述平板培养基中，1L培养基中含有如下成分：琼脂2％，蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 5g，pH＝9.0。

2)将步骤1)中平板培养后得到的菌落，挑取不同形态菌落置于选择培养基中，培养48h后，取上清液，涂布由选择培养基加2％琼脂制成的平板培养基，将平板倒置在28℃下培养48h，将菌落数最多的菌选出，所述选择培养基中，1L培养基中含有如下成分：罗布麻麻皮粉碎后制备的麻皮粉1g，NaCl 5g，pH＝7.0。

3)将步骤2)选出的菌接入发酵培养基中培养至对数生长期，移取5ml菌液至直径为9cm的培养皿中，用功率为15W的紫外线灯管距离30cm照射15min，避光保存24h后，转移至发酵培养基中，28℃，140rpm培养至对数生长期，然后再以10％的接种量转接到pH为9的选择培养基中28℃，140rpm培养24h后，取菌液涂布到由选择培养基加2％琼脂制成的平板培养基，倒置条件下28℃培养48h，同时以10％的接种量转接到新的pH为9的选择培养基中28℃，140rpm培养24h后，重复上述操作，直至平板上的菌落数不再增加，则在平板上选择最大的单菌落挑出；所述的发酵培养基中，1L培养基含有如下成分：果胶2g，木聚糖2g，蛋白胨5g，NaCl 5g，pH＝7.0。

4)将步骤3)选出的菌按照步骤3)中的操作再次进行紫外线诱变处理后，将诱变菌群接入pH为10的选择培养基中28℃，140rpm培养，继续按照步骤3)中的操作进行连续转接，直至平板上的菌落数不再增加，则在平板上选择最大的单菌落挑出。

5)将步骤4)选出的菌接入发酵培养基中28℃，140rpm培养至对数生长期，加入氯化锂使其浓度为1.5％，保温10min，取菌液5ml离心洗涤3次后，转移至pH为11的选择培养基中28℃，140rpm培养至对数生长期，然后再转接到选择培养基中28℃，140rpm培养24h后，以10％的接种量转接到新的选择培养基中28℃，140rpm培养24h后，取菌液涂布到由选择培养基加2％琼脂制成的平板培养基，倒置条件下28℃培养48h，同时以10％的接种量转接到新的选择培养基中28℃，140rpm培养24h后，重复上述操作，直至平板上的菌落数不再增加，则在平板上选择最大的单菌落挑出，以10％的接种量转接到新的选择培养基中培养至对数期，得到种子菌液。

Claims (1)

1.一种仿生的罗布麻高质统合脱胶方法，其特征在于包括微生物种子菌液获取过程和罗布麻脱胶过程，微生物种子菌液获取过程如下：

1)在梨树果园中取5～10g离地表10cm的土壤，置100ml浓度为0.2～2g/L的磷酸钠盐缓冲液中，在锥形瓶中50～250rpm振荡0.2～2h，取上清液在平板培养基上划线涂布，将平板倒置在20～28℃下培养12～48h，所述平板培养基中，1L培养基中含有如下成分：琼脂1～2％，蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 5g，pH 5.0～9.0；

2)将步骤1)中平板培养后得到的菌落，挑取不同形态菌落置于选择培养基中，培养24～48h后，取上清液，涂布由选择培养基加2％琼脂制成的平板培养基，将平板倒置在20～28℃下培养12～48h，将菌落数最多的菌选出，所述选择培养基中，1L培养基中含有如下成分：罗布麻麻皮粉碎后制备的麻皮粉0.01～2g，NaCl 5g，pH 5.0～7.0；

3)将步骤2)选出的菌接入发酵培养基中培养至对数生长期，移取5ml菌液至直径为9cm的培养皿中，用功率为15W的紫外线灯管距离30cm照射5～20min，避光保存8-24h后，转移至发酵培养基中，20～28℃，80～320rpm培养至对数生长期，然后再以10％的接种量转接到pH为9的选择培养基中20～28℃，80～320rpm培养24h后，取菌液涂布到由选择培养基加2％琼脂制成的平板培养基，倒置条件下20～28℃培养12～48h，同时以10％的接种量转接到新的pH为9的选择培养基中20～28℃，80～320rpm培养24h后，重复上述操作，直至平板上的菌落数不再增加，则在平板上选择最大的单菌落挑出；所述的发酵培养基中，1L培养基含有如下成分：果胶2～3g，木聚糖1～2g，蛋白胨5～10g，NaCl 5g，pH 5.0～7.0；

4)将步骤3)选出的菌按照步骤3)中的操作再次进行紫外线诱变处理后，将诱变菌群接入pH为10的选择培养基中20～28℃，80～320rpm培养，继续按照步骤(3)中的操作进行连续转接，直至平板上的菌落数不再增加，则在平板上选择最大的单菌落挑出；

5)将步骤4)选出的菌接入发酵培养基中20～28℃，80～320rpm培养至对数生长期，加入氯化锂使其浓度为0.1～1.5％，保温0.5-10min，取菌液5ml离心洗涤3次后，转移至pH为11的选择培养基中20～28℃，80～320rpm培养至对数生长期，然后再转接到选择培养基中20～28℃，80～320rpm培养24h后，以10％的接种量转接到新的选择培养基中20～28℃，80～320rpm培养24h后，取菌液涂布到由选择培养基加2％琼脂制成的平板培养基，倒置条件下20～28℃培养12～48h，同时以10％的接种量转接到新的选择培养基中20～28℃，80～320rpm培养24h后，重复上述操作，直至平板上的菌落数不再增加，则在平板上选择最大的单菌落挑出，以10％的接种量转接到新的选择培养基中培养至对数期，得到种子菌液；

罗布麻脱胶过程如下：

1)取罗布麻麻皮以1∶10～50的浴比浸渍于水中10～120min，向麻皮浸渍液中加入0.5％～1％蛋白胨，0.5％～0.9％NaCl，然后将麻皮及浸渍液置于115～130℃条件下保温10～30min；

2)将步骤1)处理后的麻皮及浸渍液用氢氧化钠溶液调pH至9～12，并加入0.5～10g/L的渗透剂JFC或渗透剂BX或渗透剂T或吐温80，将所述微生物种子菌液获取过程中的步骤(5)中得到的种子菌液以5～20％的接种量转接到调整pH后的麻皮浸渍液中，20～28℃，80～320rpm培养4～36h；

3)将步骤2)的麻皮处理液中加入35％的双氧水2～20g/L，35％的硅酸钠1～10g/L，温度85～100℃保温15～120min；

4)将步骤3)处理结束后的麻纤维转移至清水中，加盐酸溶液调整pH为7～8，加入过氧化氢酶0.1～20g/L，20～28℃搅拌状态下保温10～30min，取出纤维即得到脱胶处理后的罗布麻纤维。