CN106399277A - 一种烟草加工用酶制剂及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种酶制剂，以及在烟草制丝加工工艺中利用酶制剂改善烟叶杂味提升香气的方法。经过本发明的酶制剂处理，能够显著降解对烟草吸食品质有害的大分子化合物，从而起到改善烟叶杂味、提升香气的作用。

Description

一种烟草加工用酶制剂及其应用
技术领域
本发明涉及烟草制丝加工技术领域，具体的说是一种在烟草制丝加工工艺中使用的酶制剂，以及通过添加该酶制剂来降低烟叶杂味，提升烟叶香气的方法。
背景技术
在烟草制品中，烟草的香气和吸味是至关重要的。
烟叶的化学成分多而复杂，其中占比例最大的是蛋白质、淀粉及细胞壁物质等大分子化合物。这些大分子化合物不仅对烟草的吸味有副作用，而且是大部分烟气有害成分的前体。
在烟叶众多成分中，以蛋白质含量最为丰富，如白肋烟中蛋白质含量高达20.48％。烟叶中的蛋白质分为可溶性蛋白和不溶性蛋白，而可溶性蛋白中一半左右是叶绿体蛋白质(Fraction I protein,FI蛋白)，另一半为其他可溶性蛋白质的复合物(FractionII protein,F II蛋白)。烟草中的蛋白质是一种不利于卷烟吸味品质的化学成分，燃烧后的蛋白质会使烟气的苦味增加并产生类似烧羽毛的气味。烟叶在生长期问，淀粉含量逐步增加，随叶片的衰老而显著减少。成熟烟叶的淀粉含量通常在25％左右，烤后烟叶的淀粉含量在2％～8％，淀粉含量超过5％时，则认为对烟叶的品质不利。烟草中存在淀粉形态的碳水化合物，一方面影响卷烟的燃烧性，另一方面淀粉在燃吸时会产生焦糊气味，影响烟气的质量。烟叶细胞壁物质主要包括纤维素、木质素、半纤维素、果胶等成份，其含量占烟叶干物质总量的28％，细胞壁物质含量高则致使烟叶具有强烈的刺激性，青杂气重，吸味辛辣、涩口，烟香气不能显露。在卷烟燃吸过程中，木质素作为烟草重要的大分子物质之一，通过燃烧和热裂解参与卷烟烟气的构成，热裂解产物主要为丙烯醛、乙酸、苯酚、CO、稠环芳烃等小分子化合物，对卷烟的感官品质和安全性有负面影响。烤烟烟叶中纤维素含量一般为8％左右，纤维素过多时组织粗糙，容易破碎，并且吸湿性大，易霉，不宜储藏。此外纤维素燃烧后会产生刺辣呛喉的气味，增加烟气的刺激性，使烟气中带有尖刺的刺激性及“烧纸”的气味。烟叶的等级随着纤维素含量的增加而降低。烟草中的果胶含量约在6％～20％，果胶分子结构中含有甲醇，甲醇在烟气中进一步转化为甲醛和甲酸等，给烟草带来刺激性和不安全性。此外，果胶质是吸湿性物质，影响烟叶的燃烧性，导致焦油量升高。影响卷烟的吸味。
现有技术中，采用对烟叶发酵处理的方法提高烟叶的质量。烟叶发酵处理实质上是在一定的温度和湿度条件下，促使烟叶理化特性发生深刻变化，烟叶香气和吸味品质明显改善的加工工程，又称陈化。烟叶陈化后可消除初烤烟叶带有的青色，使烟叶颜色转深并均匀一致，青杂气、刺激性和异味减少，香气显露，香气质和香气量变佳，吸味醇和，余味纯净舒适，粘性和吸湿性降低，弹性和燃烧性得到增强。目前，烟叶陈化主要有自然陈化(也称醇化或发酵)和人工陈化(又称加温发酵)两种方式。前者主要是在烟叶贮存期间，借助自然气候的变化，促使烟叶内各种化学变化加速进行，进而达到改善烟叶品质和理化性状的目的。后者则是在人为控制温湿度的条件下，使堆放于陈化库内的烟叶理化性质变化加速，在较短时间内改善烟叶品质的方法。自然陈化烟叶的缺陷是贮存周期长(一般需1～3年)，占用仓库大，积压资金多，生产成本高，但由于自然陈化具有烟叶色泽鲜亮、香气优美、刺激性弱、工艺简单、操作简便等优点，且提高香气与吸味品质的效果明显优于人工陈化烟叶，所以，经济发达国家普遍采用自然陈化的方法。而人工陈化周期短(一般为12～20天)，资金积压少，生产成本低，但烟叶质量却不及自然陈化好。我国受经济条件的限制，国内中小型卷烟厂仍以人工陈化为主，即使大型卷烟厂也同样面临在提高产品质量的同时，降低生产成本、提高经济效益的问题，故而不能完全摆脱人工陈化。因此，进一步研究和改进烟叶发酵技术，对中国烟草企业改善卷烟香气品质，提高卷烟生产经济效益具有广泛的现实意义。
随着生物技术的发展，科技工作者已经开始研究利用微生物以及酶制剂来降解烟叶中的大分子化合物。在满足现有烟叶制丝生产工艺的条件下，利用酶制剂降解对烟草吸食品质有害的大分子化合物进而起到降低烟叶杂味、提升香气的作用是本发明人研究的主要目的。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种在烟草制丝加工工艺中利用酶制剂改善烟叶杂味提升香气的方法。它利用烟草制丝加工工艺中贮叶柜或人工发酵室的存放周转时间，利用针对具体烟叶叶组特质而定制的酶制剂在合适的条件下短时间内对烟叶进行酶处理，达到提升烟叶质量的效果，进而改善了卷烟产品的质量。
本发明的技术方案是一种在烟草制丝加工工艺中进行酶处理改善烟叶质量的方法，制丝加工工艺依次包括片烟回潮工序、加料工序、贮叶工序、切丝工序、烘丝工序、加香工序等主要工序，本方法是在片烟回潮工序或加料工序，将酶制剂均匀喷洒到配方烟叶叶组上，使加酶后烟叶水分达到12％～30％；再将加酶后的烟叶存入贮叶柜或人工发酵室中进入贮叶工序，在贮叶工序中酶对烟叶进行处理；利用后序烘丝工艺中的高温使酶活性。
因此，本发明的第一方面提供了一种酶制剂。
本发明的酶制剂是表1中的单酶或者它们之中的2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或19种酶组成的复合酶。
表1酶制剂的组成及施用量
编号 酶制剂 施用量(酶活单位/克烟叶) 最佳施用量(酶活单位/克烟叶)
1 α-淀粉酶 0～1000 5～200
2 β-淀粉酶 0～1000 1～200
3 糖化酶 0～3000 90～700
4 普鲁兰酶 0～3000 5～350
5 纤维素酶 0～1500 5～200
6 半纤维素酶 0～1500 20～800
7 木聚糖酶 0～1500 5～250
8 果胶酶 0～1500 50～600
9 漆酶 0～1500 5～200
10 木瓜蛋白酶 0～2000 5～200
11 芒果蛋白酶 0～2000 1～250
12 菠萝蛋白酶 0～2000 15～200
13 无花果蛋白酶 0～2000 1～700
14 胰蛋白酶 0～2000 5～200
15 胃蛋白酶 0～2000 1～160
16 中性蛋白酶 0～2000 1～1100
17 酸性蛋白酶 0～2000 50～500
18 碱性蛋白酶 0～2000 40～160
19 脂肪酶 0～2000 2～200
优选地，酶制剂是包括α-淀粉酶、糖化酶、普鲁兰酶、纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白酶、无花果蛋白酶、胃蛋白酶和脂肪酶的复合酶制剂。
在特定的实施方案中，复合酶制剂可以是：
(1)由α-淀粉酶、β-淀粉酶、糖化酶、普鲁兰酶、纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白酶、芒果蛋白酶、无花果蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶和脂肪酶组成的酶制剂；
(2)由α-淀粉酶、β-淀粉酶、糖化酶、普鲁兰酶、纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白酶、芒果蛋白酶、无花果蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶和脂肪酶组成的酶制剂；
(3)由α-淀粉酶、β-淀粉酶、糖化酶、普鲁兰酶、纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白酶、无花果蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶和脂肪酶组成的酶制剂；
(4)由α-淀粉酶、β-淀粉酶、糖化酶、普鲁兰酶、纤维素酶、半纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶、漆酶、木瓜蛋白酶、芒果蛋白酶、菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、酸性蛋白酶和脂肪酶组成的酶制剂；
(5)由α-淀粉酶、糖化酶、普鲁兰酶、纤维素酶、半纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶、漆酶、木瓜蛋白酶、芒果蛋白酶、菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶和脂肪酶组成的酶制剂；
(6)由α-淀粉酶、β-淀粉酶、糖化酶、普鲁兰酶、纤维素酶、半纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶、漆酶、木瓜蛋白酶、芒果蛋白酶、菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶和脂肪酶组成的酶制剂；或
(7)由α-淀粉酶、β-淀粉酶、糖化酶、普鲁兰酶、纤维素酶、半纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶、漆酶、木瓜蛋白酶、芒果蛋白酶、菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶和脂肪酶组成的酶制剂。
酶制剂中酶的种类以及施用量可以根据烟叶叶组的特质进行调整。各种酶的施用量范围如表1所示。施用酶制剂与烟叶叶组之间的质量比为0.01％～25％。
本发明的第二方面还提供了一种利用酶制剂改善烟叶杂味并提升香气的方法。
酶制剂的施用添加在回潮工序或加料工序进行。酶制剂既可以通过松散回潮或真空回潮工艺通过水分喷口施加在烟叶上，也可以在加料工序通过独立加料喷口或与料液混合后施加。通过这两道工序，烟叶的含水率应在12％～30％以保证酶在后续的贮叶工序中对烟叶的处理效率。酶制剂对烟叶的处理通过贮叶工序在贮叶间或人工发酵室中完成，温度为25～55℃，相对湿度为40％～80％，贮叶时间为1～48小时。酶处理完成后，利用烘丝工序的高温处理使酶失活。烘干工序可以选择HXD干燥，工艺热风气体温度为170～210℃。或选用薄板烘干，筒壁温度为130～150℃，热风温度为90～110℃。烘干处理时间为1～5分钟，烟丝经过烘丝工序后的含水率为11％～14％。
本发明具有以下优点：
(1)经过本发明的酶制剂处理，能够显著降解对烟草吸食品质有害的大分子化合物，从而起到改善烟叶杂味、提升香气的作用。
(2)本发明的酶制剂组成多样，能够适用于各种不同类型、不同特质的烟叶叶组。
(3)本发明的方法工艺简单，利用现有的烟叶制丝生产工艺，不需要增加额外的工艺步骤，成本低，应用前景好。
附图说明
图1本发明的工艺流程示意图。
图2酶处理后烟丝中的淀粉、还原糖、蛋白质含量，其中，叶组2和叶组3分别为实施例2和实施例3中的叶组。
具体实施方式
下面通过实施例来进一步说明本发明，但本发明并不受其限制。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1～8酶制剂处理后烟叶叶组的感官评吸
实施例1～8分别选用不同的烟叶叶组(见表2)，针对每种叶组的特质选择了不同的酶制剂配方(见表3)，按照表4的工艺参数对8种不同类型的叶组进行酶处理。
表2实施例1～8中使用的烟叶叶组
表3实施例1～8中酶制剂的组成及施用量(酶活单位/克烟叶)
实施例 1 2 3 4 5 6 7 8
α-淀粉酶 6 15 23 39 80 121 177 27
β-淀粉酶 9 18 2 22 14 0 160 12
糖化酶 96 137 111 169 600 459 485 189
普鲁兰酶 9 130 151 168 5 169 320 6
纤维素酶 160 190 152 88 5 175 23 23
半纤维素酶 199 251 145 66 782 323 48 21
木聚糖酶 0 0 0 177 13 236 5 5
果胶酶 186 199 269 559 187 65 152 459
漆酶 0 0 0 175 43 33 68 5
木瓜蛋白酶 26 55 182 36 47 55 196 6
芒果蛋白酶 2 0 45 6 99 241 69 9
菠萝蛋白酶 0 0 0 173 55 68 88 18
无花果蛋白酶 159 22 47 662 55 182 42 2
胰蛋白酶 0 6 0 88 185 55 44 0
胃蛋白酶 7 66 43 58 153 59 68 1
中性蛋白酶 458 559 936 1005 550 2 0 36
酸性蛋白酶 56 195 0 63 445 172 68 99
碱性蛋白酶 55 68 47 88 96 151 0 78
脂肪酶 88 195 67 32 55 68 73 4
表4实施例1～8中的酶处理工艺条件
对照试验叶组施加同比例的纯净水，试验工艺条件与酶处理叶组完全相同。
酶处理后对实施例1～8的叶组进行感官评吸。对比感官评吸的结果如表5所示。
表5实施例1～8中酶处理叶组的感官评吸结果
实施例 受施叶组
1 烟气青杂气明显降低，刺激性减轻
2 烟气透发性提升明显，香气质提高
3 杂气刺激性降低，甜感提升，协调性提高
4 杂味降低，香气质、香气量均有提升，透发性改善
5 杂气刺激性降低，香气质提升
6 杂味改善明显，透发性改善
7 青杂气降低，透发性改善，甜感增加，刺激降低
8 杂气刺激性降低，甜感增加
感官评吸结果显示，经过本发明的酶制剂处理，能够显著降低各种类型烟叶的杂味，提升其香气，达到改善烟叶吸食品质的作用。
实施例9酶活测定方法
(1)α-淀粉酶：在10mL试管中依次加入0.5％可溶性淀粉溶液1mL，pH 4.2的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液2.5mL，40℃预热10min。然后加入多倍稀释的0.5mL酶液，40℃保温5min后，加入0.1mol/L H2SO4 1mL终止反应。再取2mL反应液与0.5％KI-I2溶液0.5mL显色，测定OD620。与淀粉梯度标准曲线对照得反应液淀粉浓度后，计算酶活力。
在pH 4.2、温度40℃下，5min水解可溶性淀粉1mg所需的酶量为一个酶活力单位。
(2)β-淀粉酶：在10mL试管中依次加入0.5％可溶性淀粉溶液1mL，pH4.2的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液2.5mL，40℃预热10min。然后加入多倍稀释的0.5mL酶液，40℃保温5min后，加入0.1mol/L H2SO4 1mL终止反应。再取2mL反应液与0.5％KI-I2溶液0.5mL显色，测定OD620。与淀粉梯度标准曲线对照得反应液淀粉浓度后，计算酶活力。
在pH 4.2、温度40℃下，5min水解可溶性淀粉1mg所需的酶量为一个酶活力单位。
(3)糖化酶：采用次碘酸钠法，定义为：40℃，pH 4.5下，1小时水解生成1mg葡萄糖为一个酶活力单位。
(4)普鲁兰酶：将1克普鲁兰酶加入1ml 0.5％的普鲁兰糖溶液，60℃保温20min；冷水降温，加入1ml的DNS溶液沸水浴煮10min；迅速冷却后在540nm波长下测定溶液的吸光值。对照为在加DNS后，沸水浴前加入酶液。酶活单位定义：在相应条件下，每分钟分解普鲁兰所释放的还原糖，其还原力相当于lmmol葡萄糖所需的酶量，以一酶活单位表示。
(5)纤维素酶：采用DNS显色法，定义为：50℃，pH 4.8下，半小时催化水解生成1mg葡萄糖为一个酶活力单位。
(6)半纤维素酶：采用DNS显色法，定义为：50℃，pH 4.8下，半小时催化水解生成1mg葡萄糖为一个酶活力单位。
(7)木聚糖酶：以木聚糖为底物，用DNS法测定还原糖的生成量。取稀释酶液0.1ml，加1％木聚糖液0.9ml，置50℃水浴保温30min后，加DNS 2ml于沸水浴中显色3min，用自来水冷却后，加蒸馏水定容25ml，测OD值。每毫升酶液每分钟水解木聚糖生成1μmol木糖所相当的酶量。
(8)果胶酶：向具塞试管中加入1.8mL 0.30％聚半乳糖醛酸溶液(用0.05mol/LNa2CO3/NaHCO3缓冲溶液配制，调节pH 10.0)，于55℃水浴下保温5min，然后加入一定稀释倍数的酶液0.2mL反应15min，加入DNS试剂1.5mL，混匀，在沸水中加热10min，立即用自来水冷却，再加入21.5mL蒸馏水，混匀，于分光光度计上520nm测定吸光度。空白用煮沸失活的酶液代替。在上述试验条件下，以每分钟分解底物产生1μmol半乳糖醛酸所需的酶量为1个酶活力单位。
(9)漆酶：3.0mL反应液中含20mmol/L ABTS 0.7mL，酶液0.l mL和25mmol/L琥珀酸缓冲液(pH 4.5)，在25℃下反应2min后立即用冰浴终止反应，测定436nm处吸光度的增量。
(10)木瓜蛋白酶：取3支试管(一支空白管，两支样品管)，分别向3支试管中准确加入稀释好的待测酶液1.0mL，将3支试管放入40℃水浴中预热5min，同时将测定底物(1％酪素)置同一温度水浴中预热5min。分别向两只样品管中加入1％酪素溶液1.0mL，准确计时，反应10min取出。迅速准确向两只样品管加入0.4mol/L三氯乙酸2mL，于空白管中加入0.4mol/L三氯乙酸2mL和1.0mL 1％酪素溶液，摇匀。3支试管中反应液用滤纸过滤。另取3支试管，分别吸取上述相应滤出液1.0mL，0.4mol/L碳酸钠溶液5.0mL和稀福林试剂1.0mL，摇匀，置40℃水浴中放置20min(显色)，取出，迅速冷却置室温。以空白管调仪器零点，在分光光度计波长660nm处分别测两支样品管吸光度，取平均值。通过查标准曲线求出生成酪氨酸的含量。
(11)芒果蛋白酶：取3支试管(一支空白管，两支样品管)，分别向3支试管中准确加入稀释好的待测酶液1.0mL，将3支试管放入40℃水浴中预热5min，同时将测定底物(1％酪素)置同一温度水浴中预热5min。分别向两只样品管中加入1％酪素溶液1.0mL，准确计时，反应10min取出。迅速准确向两只样品管加入0.4mol/L三氯乙酸2mL，于空白管中加入0.4mol/L三氯乙酸2mL和1.0mL 1％酪素溶液，摇匀。3支试管中反应液用滤纸过滤。另取3支试管，分别吸取上述相应滤出液1.0mL，0.4mol/L碳酸钠溶液5.0mL和稀福林试剂1.0mL，摇匀，置40℃水浴中放置20min(显色)，取出，迅速冷却置室温。以空白管调仪器零点，在分光光度计波长660nm处分别测两支样品管吸光度，取平均值。通过查标准曲线求出生成酪氨酸的含量。
(12)菠萝蛋白酶：取3支试管(一支空白管，两支样品管)，分别向3支试管中准确加入稀释好的待测酶液1.0mL，将3支试管放入40℃水浴中预热5min，同时将测定底物(1％酪素)置同一温度水浴中预热5min。分别向两只样品管中加入1％酪素溶液1.0mL，准确计时，反应10min取出。迅速准确向两只样品管加入0.4mol/L三氯乙酸2mL，于空白管中加入0.4mol/L三氯乙酸2mL和1.0mL 1％酪素溶液，摇匀。3支试管中反应液用滤纸过滤。另取3支试管，分别吸取上述相应滤出液1.0mL，0.4mol/L碳酸钠溶液5.0mL和稀福林试剂1.0mL，摇匀，置40℃水浴中放置20min(显色)，取出，迅速冷却置室温。以空白管调仪器零点，在分光光度计波长660nm处分别测两支样品管吸光度，取平均值。通过查标准曲线求出生成酪氨酸的含量。
(13)无花果蛋白酶：取3支试管(一支空白管，两支样品管)，分别向3支试管中准确加入稀释好的待测酶液1.0mL，将3支试管放入40℃水浴中预热5min，同时将测定底物(1％酪素)置同一温度水浴中预热5min。分别向两只样品管中加入1％酪素溶液1.0mL，准确计时，反应10min取出。迅速准确向两只样品管加入0.4mol/L三氯乙酸2mL，于空白管中加入0.4mol/L三氯乙酸2mL和1.0mL 1％酪素溶液，摇匀。3支试管中反应液用滤纸过滤。另取3支试管，分别吸取上述相应滤出液1.0mL，0.4mol/L碳酸钠溶液5.0mL和稀福林试剂1.0mL，摇匀，置40℃水浴中放置20min(显色)，取出，迅速冷却置室温。以空白管调仪器零点，在分光光度计波长660nm处分别测两支样品管吸光度，取平均值。通过查标准曲线求出生成酪氨酸的含量。
(14)胰蛋白酶：取3支试管(一支空白管，两支样品管)，分别向3支试管中准确加入稀释好的待测酶液1.0mL，将3支试管放入40℃水浴中预热5min，同时将测定底物(1％酪素)置同一温度水浴中预热5min。分别向两只样品管中加入1％酪素溶液1.0mL，准确计时，反应10min取出。迅速准确向两只样品管加入0.4mol/L三氯乙酸2mL，于空白管中加入0.4mol/L三氯乙酸2mL和1.0mL1％酪素溶液，摇匀。3支试管中反应液用滤纸过滤。另取3支试管，分别吸取上述相应滤出液1.0mL，0.4mol/L碳酸钠溶液5.0mL和稀福林试剂1.0mL，摇匀，置40℃水浴中放置20min(显色)，取出，迅速冷却置室温。以空白管调仪器零点，在分光光度计波长660nm处分别测两支样品管吸光度，取平均值。通过查标准曲线求出生成酪氨酸的含量。
(15)胃蛋白酶：取3支试管(一支空白管，两支样品管)，分别向3支试管中准确加入稀释好的待测酶液1.0mL，将3支试管放入40℃水浴中预热5min，同时将测定底物(1％酪素)置同一温度水浴中预热5min。分别向两只样品管中加入1％酪素溶液1.0mL，准确计时，反应10min取出。迅速准确向两只样品管加入0.4mol/L三氯乙酸2mL，于空白管中加入0.4mol/L三氯乙酸2mL和1.0mL1％酪素溶液，摇匀。3支试管中反应液用滤纸过滤。另取3支试管，分别吸取上述相应滤出液1.0mL，0.4mol/L碳酸钠溶液5.0mL和稀福林试剂1.0mL，摇匀，置40℃水浴中放置20min(显色)，取出，迅速冷却置室温。以空白管调仪器零点，在分光光度计波长660nm处分别测两支样品管吸光度，取平均值。通过查标准曲线求出生成酪氨酸的含量。
(16)中性蛋白酶：取3支试管(一支空白管，两支样品管)，分别向3支试管中准确加入稀释好的待测酶液1.0mL，将3支试管放入40℃水浴中预热5min，同时将测定底物(1％酪素)置同一温度水浴中预热5min。分别向两只样品管中加入1％酪素溶液1.0mL，准确计时，反应10min取出。迅速准确向两只样品管加入0.4mol/L三氯乙酸2mL，于空白管中加入0.4mol/L三氯乙酸2mL和1.0mL 1％酪素溶液，摇匀。3支试管中反应液用滤纸过滤。另取3支试管，分别吸取上述相应滤出液1.0mL，0.4mol/L碳酸钠溶液5.0mL和稀福林试剂1.0mL，摇匀，置40℃水浴中放置20min(显色)，取出，迅速冷却置室温。以空白管调仪器零点，在分光光度计波长660nm处分别测两支样品管吸光度，取平均值。通过查标准曲线求出生成酪氨酸的含量。
(17)酸性蛋白酶：取3支试管(一支空白管，两支样品管)，分别向3支试管中准确加入稀释好的待测酶液1.0mL，将3支试管放入40℃水浴中预热5min，同时将测定底物(1％酪素)置同一温度水浴中预热5min。分别向两只样品管中加入1％酪素溶液1.0mL，准确计时，反应10min取出。迅速准确向两只样品管加入0.4mol/L三氯乙酸2mL，于空白管中加入0.4mol/L三氯乙酸2mL和1.0mL 1％酪素溶液，摇匀。3支试管中反应液用滤纸过滤。另取3支试管，分别吸取上述相应滤出液1.0mL，0.4mol/L碳酸钠溶液5.0mL和稀福林试剂1.0mL，摇匀，置40℃水浴中放置20min(显色)，取出，迅速冷却置室温。以空白管调仪器零点，在分光光度计波长660nm处分别测两支样品管吸光度，取平均值。通过查标准曲线求出生成酪氨酸的含量。
(18)碱性蛋白酶：取3支试管(一支空白管，两支样品管)，分别向3支试管中准确加入稀释好的待测酶液1.0mL，将3支试管放入40℃水浴中预热5min，同时将测定底物(1％酪素)置同一温度水浴中预热5min。分别向两只样品管中加入1％酪素溶液1.0mL，准确计时，反应10min取出。迅速准确向两只样品管加入0.4mol/L三氯乙酸2mL，于空白管中加入0.4mol/L三氯乙酸2mL和1.0mL 1％酪素溶液，摇匀。3支试管中反应液用滤纸过滤。另取3支试管，分别吸取上述相应滤出液1.0mL，0.4mol/L碳酸钠溶液5.0mL和稀福林试剂1.0mL，摇匀，置40℃水浴中放置20min(显色)，取出，迅速冷却置室温。以空白管调仪器零点，在分光光度计波长660nm处分别测两支样品管吸光度，取平均值。通过查标准曲线求出生成酪氨酸的含量。
(19)脂肪酶：在40℃、pH 7.5，以每分钟从橄榄油中释放lμmol脂肪酸的酶量定义为一个酶活力单位。
实施例10酶处理后烟叶叶组的化学成分分析
取实施例2和实施例3中酶处理后的烟叶叶组，与纯净水处理对照样品进行了烟丝化学成分的分析，检测了淀粉、还原糖、总蛋白质的含量，结果如图2所示。
化学成分分析结果显示，经过本发明的酶制剂处理，能够显著降低对烟草吸食品质有害的大分子化合物含量，从而提升了烟叶质量。
本发明不局限于上述最佳实施方式，任何人在本发明的启示下都可得出其它各种形式的产品，但不论在其形状或结构上作任何变化，凡是具有与本申请相同或相近似的技术方案，均落在本发明的保护范围之内。

Claims (16)

1.一种酶制剂，其特征在于由选自以下组的1种酶或2种以上酶组成：α-淀粉酶、β-淀粉酶、糖化酶、普鲁兰酶、纤维素酶、半纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶、漆酶、木瓜蛋白酶、芒果蛋白酶、菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、脂肪酶，优选由上述酶的10种以上组成，更优选由上述酶的14种以上组成。
2.根据权利要求1所述的酶制剂，其包括α-淀粉酶、糖化酶、普鲁兰酶、纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白酶、无花果蛋白酶、胃蛋白酶和脂肪酶。
3.根据权利要求2所述的酶制剂，其选自以下复合酶：
(1)由α-淀粉酶、β-淀粉酶、糖化酶、普鲁兰酶、纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白酶、芒果蛋白酶、无花果蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶和脂肪酶组成；
(2)由α-淀粉酶、β-淀粉酶、糖化酶、普鲁兰酶、纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白酶、芒果蛋白酶、无花果蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶和脂肪酶组成；
(3)由α-淀粉酶、β-淀粉酶、糖化酶、普鲁兰酶、纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白酶、无花果蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶和脂肪酶组成；
(4)由α-淀粉酶、β-淀粉酶、糖化酶、普鲁兰酶、纤维素酶、半纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶、漆酶、木瓜蛋白酶、芒果蛋白酶、菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、酸性蛋白酶和脂肪酶组成；
(5)由α-淀粉酶、糖化酶、普鲁兰酶、纤维素酶、半纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶、漆酶、木瓜蛋白酶、芒果蛋白酶、菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶和脂肪酶组成；
(6)由α-淀粉酶、β-淀粉酶、糖化酶、普鲁兰酶、纤维素酶、半纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶、漆酶、木瓜蛋白酶、芒果蛋白酶、菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶和脂肪酶组成；或
(7)由α-淀粉酶、β-淀粉酶、糖化酶、普鲁兰酶、纤维素酶、半纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶、漆酶、木瓜蛋白酶、芒果蛋白酶、菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶和脂肪酶组成。
4.权利要求1-3任一项所述的酶制剂在烟草制丝加工工艺中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，所述酶制剂的使用改善烟叶杂味并提升香气。
6.根据权利要求4或5所述的应用，其中，对于每克烟叶，各种酶的施用量如下：α-淀粉酶0～1000U，优选5～200U；β-淀粉酶0～1000U，优选1～200U；糖化酶0～3000U，优选90～700U；普鲁兰酶0～3000U，优选5～350U；纤维素酶0～1500U，优选5～200U；半纤维素酶0～1500U，优选20～800U；木聚糖酶0～1500U，优选5～250U；果胶酶0～1500U，优选50～600U；漆酶0～1500U，优选5～200U；木瓜蛋白酶0～2000U，优选5～200U；芒果蛋白酶0～2000U，优选1～250U；菠萝蛋白酶0～2000U，优选15～200U；无花果蛋白酶0～2000U，优选1～700U；胰蛋白酶0～2000U，优选5～200U；胃蛋白酶0～2000U，优选1～160U；中性蛋白酶0～2000U，优选1～1100U；酸性蛋白酶0～2000U，优选50～500U；碱性蛋白酶0～2000U，优选40～160U；脂肪酶0～2000U，优选2～200U。
7.一种改善烟叶杂味和提升香气的方法，包括在烟草制丝加工工艺中使用权利要求1-3任一项所述的酶制剂处理烟叶。
8.根据权利要求7所述的方法，其中，对于每克烟叶，各种酶的施用量如下：α-淀粉酶0～1000U，优选5～200U；β-淀粉酶0～1000U，优选1～200U；糖化酶0～3000U，优选90～700U；普鲁兰酶0～3000U，优选5～350U；纤维素酶0～1500U，优选5～200U；半纤维素酶0～1500U，优选20～800U；木聚糖酶0～1500U，优选5～250U；果胶酶0～1500U，优选50～600U；漆酶0～1500U，优选5～200U；木瓜蛋白酶0～2000U，优选5～200U；芒果蛋白酶0～2000U，优选1～250U；菠萝蛋白酶0～2000U，优选15～200U；无花果蛋白酶0～2000U，优选1～700U；胰蛋白酶0～2000U，优选5～200U；胃蛋白酶0～2000U，优选1～160U；中性蛋白酶0～2000U，优选1～1100U；酸性蛋白酶0～2000U，优选50～500U；碱性蛋白酶0～2000U，优选40～160U；脂肪酶0～2000U，优选2～200U。
9.根据权利要求7或8所述的方法，其中，施用的酶制剂与烟叶叶组的质量比为0.01％～25％。
10.根据权利要求7或8所述的方法，其中，酶制剂的施用在回潮工序或加料工序进行。
11.根据权利要求10所述的方法，其中，酶制剂通过松散回潮或真空回潮工艺通过水分喷口施加在烟叶上，或者在加料工序通过独立加料喷口施加或与料液混合后施加。
12.根据权利要求10所述的方法，其中，经过这两道工序，烟叶的含水率为12％～30％。
13.根据权利要求10所述的方法，其中，酶制剂对烟叶的处理通过贮叶工序在贮叶间或人工发酵室中完成，温度为25～55℃，相对湿度为40％～80％，贮叶时间为1～48小时。
14.根据权利要求7或8所述的方法，其中，利用烘丝工序的高温处理使酶制剂中的酶失活。
15.根据权利要求14所述的方法，其中，烘干工序选自：HXD干燥，工艺热风气体温度为170～210℃；或者薄板烘干，筒壁温度为130～150℃，热风温度为90～110℃。
16.根据权利要求15所述的方法，其中，烘干处理时间为1～5分钟，烟丝经过烘丝工序后的含水率为11％～14％。
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