CN106399177A

CN106399177A - 具有降解无机磷和抑菌作用的解淀粉芽孢杆菌及其菌剂

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Publication number: CN106399177A
Application number: CN201610876803.2A
Authority: CN
Inventors: 马平; 李社增; 鹿秀云; 郭庆港; 张晓云
Original assignee: Institute of Plant Protection Hebei Academy of Agricultural and Forestry Sciences
Current assignee: Institute of Plant Protection Hebei Academy of Agricultural and Forestry Sciences
Priority date: 2016-10-08
Filing date: 2016-10-08
Publication date: 2017-02-15
Anticipated expiration: 2036-10-08
Also published as: CN106399177B

Abstract

本发明公开了一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)菌株PHODG36，己保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.13041。本发明还公开了利用PHODG36生产的微生物菌剂。并公开了PHODG36在降解无机磷、促进作物生长和防治棉花病害上的应用。本发明PHODG36菌株降解无机磷效果好，肥效高；同时抑菌效果好、抑菌谱广，对棉花黄萎病、枯萎病和立枯病三种病原菌均有很好的抑制作用；此外，本发明微生物菌肥对人、畜安全，没有环境污染问题；本发明菌剂制备方法简单、成本低、使用简单。

Description

具有降解无机磷和抑菌作用的解淀粉芽孢杆菌及其菌剂

技术领域

本发明属于农业微生物领域，具体涉及一种具有降解无机磷和抑菌双重功能的解淀粉芽孢杆菌，以及含有该解淀粉芽孢杆菌的微生物菌剂，还涉及它们在促进作物生长和防病方面的用途。

背景技术

磷是植物生长过程中必需的营养元素之一。我国土壤中总磷含量相当可观，但95％以上是以稳定的铝硅酸盐和磷灰石等无效磷形式存在，植物很难直接吸收利用。因此绝大多数农作物都要追施磷肥。目前主要施用的速效磷肥生产成本高、能耗大，施入的磷肥当年利用率仅为10％-25％，其中一部分磷肥随雨水流入江河湖泊，造成水体的富营养化，引起水质污染；另一部分磷与土壤中的Ca²⁺、Fe²⁺、Fe³⁺、Al³⁺等结合，形成难溶性磷酸盐，植物无法吸收利用，并带来一系列如土壤板结，污染环境，生物多样性遭到破坏等严峻的问题。因此，提高有效磷在土壤中的含量，促进作物吸收磷元素，从而增加作物产量是农业生产上亟待解决的问题。

影响土壤中有效磷含量的因素很多，其中微生物对土壤磷的利用率、土壤磷的转化和有效性影响很大，并且微生物本身具有无毒无害、不污染环境、成本低、节约能源等优点。近年来国内外研究者提出了应用微生物改变磷的固定方式并开展了解磷细菌的研究，该类细菌不仅可以降解难溶性磷，而且具有防治作物病害的功能，大部分以芽孢杆菌为主。为进一步提高磷肥的当季利用率，减少土壤对磷酸盐的吸附固定，充分发挥难溶性磷酸盐的潜力，使其能为作物吸收利用，应筛选并研制具有肥效功能和防病功能的微生物及其微生物菌剂，

发明内容

本发明目的在于提供一种具有降解无机磷和抑菌双重作用的解淀粉芽孢杆菌菌株，该菌株降解无机磷能力强，并且具有高效抑菌和抑菌谱广等优点。

本发明另一目的在于提供一种微生物菌剂。

本发明第三目的在于提供上述微生物菌剂的制备方法。

本发明第四目的在于提供上述解淀粉芽孢杆菌在降解无机磷上的用途。

本发明第五目的在于提供上述解淀粉芽孢杆菌促进作物生长的用途。

本发明第五目的在于提供上述解淀粉芽孢杆菌防治棉花病害的用途。

本发明第六目的在于提供上述微生物菌剂在降解无机磷上的用途。

本发明第七目的在于提供上述微生物菌剂在促进作物生长上的用途。

本发明第八目的在于提供上述微生物菌剂在防治棉花病害上的用途。

本发明通过以下技术方案实现：

本发明提供了一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)菌株PHODG36，己于2016年9月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所)，保藏编号为CGMCCNo.13041。

本发明还提供了利用上述解淀粉芽孢杆菌PHODG36生产的微生物菌剂，其活性成分为解淀粉芽孢杆菌PHODG36菌体。

上述微生物菌剂可以为液体制剂。

上述微生物菌剂的制备方法，包括如下步骤：

(1)菌种活化：将低温保存的PHODB36菌株在LB平板培养基上活化，挑取单菌落在LB斜面培养基上，在25～35℃培养10～16小时，得活化的菌株；

(2)种子液制备：用无菌的接种环刮取一环步骤(1)活化的菌株接种到100mL LB液体培养基中，在25～35℃、摇床转速为150～220rpm的条件下培养10～16小时，得种子液；

(3)发酵培养：按照体积比为1～3％的比例将步骤(2)的种子液接入到玉米粉黄豆粉培养基(pH值为7.2)中，在温度为25～35℃、摇床转速为150～220rpm的条件下发酵培养30～40h，得发酵液；

(4)检测发酵液中菌体和芽胞数量，待发酵液中成熟芽胞占到芽胞和菌体总数的90％时停止发酵培养；所得即为PHODB36菌株的液体制剂。

所述的LB平板培养基、LB斜面培养基和LB液体培养基均按照常规方法制备。

上述制备方法步骤(1)中所述的LB平板培养基或LB斜面培养基的组成成分及其重量比为：胰蛋白胨8～12g，酵母提取物4～6g，氯化钠4～6g，琼脂粉12～18g，水1000mL。

上述制备方法步骤(1)中所述的LB液体培养基的组成成分及其重量比为：胰蛋白胨8～12g，酵母提取物4～6g，氯化钠4～6g，水1000mL。

上述制备方法步骤(3)中所述的玉米粉黄豆粉培养基，其组成成分及其重量百分比为：玉米粉1.0～3.0％，黄豆粉1.0～3.0％，NaCl 0.1～1.0％，MnSO₄·H₂O 0.5～1.0％，其余为水。

所述的玉米粉黄豆粉培养基的制备方法，按照重量百分比将玉米粉、黄豆粉、NaCl和MnSO₄·H₂O混合，再加水，调节pH搅拌均匀即可。

上述微生物菌剂，所述的解淀粉芽孢杆菌PHODG36的活菌数大于1.8×10⁸cfu/mL。

上述解淀粉芽孢杆菌PHODG36在降解无机磷上的应用。

上述解淀粉芽孢杆菌PHODG36在促进作物生长上的应用。

上述解淀粉芽孢杆菌PHODG36在防治棉花病害上的应用。

上述应用中所述的棉花病害是指棉花黄萎菌(V.dahliae)、棉花枯萎菌(F.oxysporum)或棉花立枯菌(R.solani)等。

上述微生物菌剂在降解无机磷上的应用。

上述微生物菌剂在促进作物生长上的应用。

上述微生物菌剂在防治棉花病害上的应用。

上述微生物菌剂的使用方法：用水将上述所得微生物菌剂稀释至活菌体数为10⁷CFU/mL，于番茄移栽定植后进行灌根即可。

PHODG36菌株的筛选分离过程

2012年8月河北省农林科学院植物保护研究所从河北省保定市定兴县东引村玉米田中五点采集土样，称取1.0g风干土样加入带灭菌玻璃珠的三角瓶中，再加入100mL无菌水，静置20min，在摇床上30℃、180r/min充分振荡30min，然后按10倍稀释法进行梯度稀释，分别取10^-3，10^-4，10^-5的稀释液100μL，涂布于解无机磷培养基上，每个浓度3个重复。涂好后在洁净台中静置5-10min，待菌液吸附进培养基内，于35℃恒温培养5-7d，进行细菌的分离和纯化。并以透明圈法、钼锑抗比色法、平板对峙法、盆栽试验法进行筛选具有解磷功能和抑菌功能的菌株，定名为PHODG36。

PHODG36菌株的分类鉴定：

(1)形态特征鉴定

在LB培养基上培养菌体为杆状，培养10h后产生芽胞，芽胞中生，椭圆形，胞囊不膨大，抗酸染色阴性，无伴胞晶体，能运动，鞭毛周生。在营养琼脂平板上，培养初期菌落淡乳白色，脓状，圆形，边缘整齐，菌落隆起呈馒头状，表面湿润；培养后期菌落淡黄色，边缘不整齐，表面干燥有褶皱；在营养琼脂斜面上划线培养，呈直线形；在液体培养基中静止培养，表面形成白色菌膜。这些形态特征与《常见细菌系统鉴定手册》(东秀珠等编著.科学出版社.2001年)中描述的芽孢杆菌属形态特征基本一致，初步判断菌株PHODG36属于芽孢杆菌。

(2)利用16S rDNA序列鉴定分类

以PHODG36的基因组DNA为模板，以27F和1492R为引物对16S rDNA进行PCR扩增，得PCR扩增产物；所述的引物序列为：

27F：5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'；(SEQ ID No:1)

1492R：5'-CTACGGCTACCTTGTTACGA-3'；(SEQ ID No:2)

16S rDNA的PCR反应体系为50μL：10×PCR Buffer(Mg2+)5μL；dNTP Mixture(2.5mM)5μL；rTaq DNA聚合酶(0.5U/μL)1μL，27F(10μmol/L)1μL，1492R(10μmol/L)1μL；PHODG36的基因组DNA 50ng；ddH2O补足至50μL。PCR的反应条件为95℃5min；94℃45s，60℃45s，72℃1.5min，35个循环；72℃10min。将PCR扩增产物进行凝胶电泳，送往上海生工生物工程有限公司测序，得PHODG36的16S rDNA序列(见SEQ ID No:3)。将PHODG36的16S rDNA序列在Genbank中进行同源性比较，结果菌株PHODG36与芽孢杆菌属的16S rDNA同源性达到100％；同时利用MEGA软件(分子进化遗传分析软件)构建系统发育树(见图1)，PHODG36与芽孢杆菌属聚合到一起，说明PHODG36属于芽孢杆菌属(Bacillus)。

(3)利用gyrB基因序列鉴定分类

以PHODG36基因组DNA为模板，以芽孢杆菌gyrB基因兼并引物gyrB-F和gyrB-R为引物进行PCR扩增，得PCR扩增产物；其中所述的gyrB-F和gyrB-R引物的序列为：

gyrB-F：5'-GAAGCACGGACAATCACC-3'(SEQ ID No:4)；

gyrB-R：5'-TCCAAAGCACTCTTACGG-3'(SEQ ID No:5)。

gyrB的PCR反应体系为50μL:10×PCR Buffer(Mg²⁺)5μL；dNTP Mixture(2.5mM)5μL；rTaq DNA聚合酶(0.5U/μL)1μL；gyrB-F(10μmol/L)2μL，gyrB-R(10μmol/L)2μL；PHODG36基因组DNA 50ng；ddH2O补足至50μL。PCR的反应条件为95℃5min；94℃45s，55℃45s，72℃1min，35个循环；72℃10min。将PCR扩增产物送交上海生工生物工程有限公司测序，得PHODG36菌株的gyrB基因序列(见SEQ ID No:6)。将PHODG36菌株的gyrB基因序列在Genbank中进行同源性比较，结果发现PHODG36与解淀粉芽孢杆菌的gyrB基因序列同源性最高，达到99.0％；同时利用MEGA软件(分子进化遗传分析软件)构建系统发育树(见图2)，结果PHODG36菌株与解淀粉芽孢杆菌聚合到一起，说明PHODG36为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)，并且是一个新菌株。

综合以上形态特征、16S rDNA和gyrB基因序列同源性对比分析的结果，可知PHODG36属于解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)，并且和现有的芽孢杆菌菌株不同，是一个新的解淀粉芽孢杆菌菌株。

本发明具有的优点和有益效果：(1)本发明PHODG36菌株降解无机磷效果好，为促进作物生长提供了一个高效的微生物；(2)本发明PHODG36菌株抑菌效果好、抑菌谱广，对棉花黄萎病、枯萎病和立枯病的三种病原菌均有很好的抑制作用；(3)本发明解淀粉芽孢杆菌PHODG36肥效高，经过菌株PHODG36处理番茄株高、地上鲜重、地下鲜重、基质和植株磷含量分别比对照增加了64.27％、26.74％、42.36％、126.42％、27.41％；(4)本发明微生物菌剂对人、畜安全，没有环境污染问题；(5)本发明制备方法简单、成本低、使用简单。

附图说明

图1为根据16S rDNA序列获得的PHODG36菌株系统发育树。

图2为根据gyrB基因序列获得的PHODG36菌株系统发育树。

具体实施方式

下面以具体实施例来进一步清楚地解释本发明，但是不以任何方式构成对本发明的限制。下述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为常规方法。

实施例1解淀粉芽孢杆菌PHODG36微生物菌剂的制备

按照如下步骤进行：

(1)菌种活化：将保存于-80℃的解淀粉芽孢杆菌菌株PHODG36(该菌株己于2016年9月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.13041)在LB平板培养基(其组成成分及其重量比为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠5g，琼脂粉15g，水1000mL)上进行活化(30℃)，挑取单菌落在LB斜面培养基(其组成成分及其重量比为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠5g，琼脂粉15g，水1000mL)上在30℃下培养12小时，得活化的菌株；

(2)种子液的制备：按常规方法制作LB液体培养基(其组成成分及其重量比为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠5g，水1000mL)，在250mL三角瓶中装入LB液体培养基100mL，高压湿热灭菌，待温度降到室温后，每瓶中接入一接种环步骤(1)中活化好的菌株，在30℃、摇床转速190rpm条件下进行振荡培养12小时，得种子液；

(3)玉米粉黄豆粉培养基的制备：按照重量百分比将玉米粉1.5％，黄豆粉2.0％，NaCl 0.5％，MnSO₄·H₂O 0.6％加入水中，搅拌混合均匀，即得玉米粉黄豆粉培养基；分装于500mL三角瓶中，每瓶200mL；在121℃对玉米粉黄豆粉培养基进行灭菌30分钟，再降温到30℃备用；

(4)发酵培养：向步骤(3)所得每瓶玉米粉黄豆粉培养基200mL中接种步骤(2)所得种子液2mL；在30℃、摇床转速180rpm条件下进行发酵培养24小时，以后每隔30分钟从三角瓶中取样进行镜检，对视野中的芽胞和总菌体数进行计数，并计算芽胞率(芽胞率(％)＝成熟芽胞数/(成熟芽胞数+菌体数)×100)；芽胞率达到90％时停止发酵培养；共发酵培养36小时，得解淀粉芽孢杆菌PHODG36的液体制剂。

实施例2解淀粉芽孢杆菌PHODG36降解无机磷定性测定试验

按照如下方法进行：

用灭菌牙签将实施例1步骤(1)中活化好的菌株PHODG36点接接种在解无机磷平板培养基(其组成成分及其重量比为：葡萄糖10.0g，(NH₄)₂SO₄ 0.5g，MgSO₄·7H₂O 0.5g，NaCl0.2g，Ca₃(PO₄)₂ 5.0g，KCl 0.2g，MnSO₄ 0.03g，FeSO₄ 0.003g，琼脂20.0g，蒸馏水1000mL，pH：7.0-8.0)上，置于30℃恒温培养箱培养5天，测量透明圈直径及菌落的直径。

结果解淀粉芽孢杆菌PHODG36在含有Ca₃(PO₄)₂的无机磷平板培养基上产生直径12.0毫米的透明圈，说明解淀粉芽孢杆菌PHODG36能够很好降解无机磷Ca₃(PO₄)₂，具有降解土壤中无机磷的潜力。

实施例3解淀粉芽孢杆菌PHODG36降解无机磷能力定量测定试验

本试验于2015年8月上旬在河北省农林科学院植物保护研究所植物病害生物防治实验室内进行。按照如下方法进行：

(1)发酵培养基制备：按照比例将葡萄糖10.0g，(NH₄)₂SO₄ 0.5g，MgSO₄·7H₂O0.5g，NaCl 0.2g，Ca₃(PO₄)₂ 5.0g，KCl 0.2g，MnSO₄ 0.03g，FeSO₄ 0.003g加入到蒸馏水1000mL中，混合均匀，即得发酵培养基(pH：7.0-8.0)。将发酵培养基50mL装入300mL锥形瓶中，高温高压灭菌。

(2)发酵液制备：将实施例1步骤(2)所得的PHODG36菌株种子液和空白对照培养液(不接种PHODG36菌株的LB液体培养基)分别按照重量百分比为4％的比例接种到步骤(1)制备的发酵培养基中，每组3个重复，在30℃、180r/min培养6d，得发酵液。

(3)发酵液处理：将步骤(2)中培养好的发酵液转移至无菌的离心杯中，采用KQ5200DE型数控超生波清洗器进行超声波细胞破碎，破碎条件：200-240V，2A，50/60Hz，时间20min。使之释放出细胞内的有效磷。以8000r/min的转速离心10min后取2.5mL上清液于50mL比色管中，加2滴2，4-二硝基苯酚作指示剂，用10％NaOH和5％稀硫酸溶液调节pH值至溶液刚呈微黄色，加钼锑抗显色剂5mL，定容，反应30min后。用T6新世纪紫外可见分光光度计测定上清液在720nm处的OD值。根据标准曲线得出上清液中的有效磷含量。结果计算：由样品溶液比色所得吸收值在工作曲线上算出相应的比色溶液的含磷量(mg/L)，再按下式计算发酵液中有效磷含量：

有效磷(mg/L)＝比色液的磷(mg/L)×稀释倍数。

结果(见表1)接种解淀粉芽孢杆菌PHODG36的发酵培养液中可溶性磷含量与空白对照相比增加到79.69mg/L，表明解淀粉芽孢杆菌PHODG36菌株具有降解无机磷磷酸三钙的能力。

表1解淀粉芽孢杆菌PHODG36降解无机磷能力定量测定试验结果

菌株编号	OD₇₂₀(nm)	可溶性磷含量(mg/L)
			PHODG36	1.573	79.69

实施例4解淀粉芽孢杆菌PHODG36促进番茄植株的生长对比试验

(一)试验处理：

(1)处理1：磷酸三钙+PHODG36发酵液+缺磷营养液；

(2)处理2：磷酸三钙+原发酵培养基+缺磷营养液。

(二)试验方法：

本试验于2015年12月上旬在河北省农林科学院植物保护研究所植物病害生物防治实验室内进行。试验用花盆(高：21cm、盆口直径：22cm、盆底直径：15cm)装沙量4kg/盆(沙子处理：用水冲洗3遍，风干，pH：6.4左右，底物(磷酸三钙)1g/kg基质)，选取长势一致的番茄幼苗移栽于花盆中，每盆3株，置于温室中培养，缓苗后开始试验。试验设置两个处理，处理1将实施例3制备的解淀粉芽孢杆菌PHODG36菌株发酵液的稀释液(浓度为1×10⁷CFU/mL)300mL/盆浇灌于作物根部，处理2浇灌等量的实施例3步骤(1)制备的发酵培养基的水稀释液为对照。期间加强番茄病虫害管理，适时补充水分，每次500mL/盆。每5d浇一次缺磷营养液(缺磷营养液的组成成分见专利申请201110107663X)，每次300mL/盆。40d后测定番茄的株高、地上部鲜重和地下部鲜重、基质中的有效磷以及番茄植株体内磷含量等指标。

表2 PHODG36菌株对盆栽番茄株高和鲜重的作用试验结果

结果(见表2)接种菌株PHODG36发酵液的番茄株高增长率为64.27％，地上部鲜重增长率为26.74％，地下部鲜重增长率为42.36％，番茄株高、地上部鲜重、地下部鲜重均与空白对照之间差异显著。上述试验结果说明本发明解淀粉芽孢杆菌菌株PHODG36促进番茄植株生长的效果显著。

表3 PHODG36菌株对基质、番茄植株有效磷的影响

处理	基质中磷含量(mg/kg)	增长率(％)	植物磷含量(mg/L)	增长率(％)
					处理1	2.40	126.42	2.51	27.41
处理2	1.06	－	1.97	－

从表3中可以看出，解淀粉芽孢杆菌菌株PHODG36对土壤中难溶性磷酸钙具有一定的降解效果，菌株PHODG36处理后土壤中有效磷增长率为126.42％；在番茄植株磷方面，菌株PHODG36处理后番茄植株中有效磷增长率为27.41％。说明解淀粉芽孢杆菌PHODG36菌株能够有效降解土壤中的无机磷并促进番茄植株对降解后的有效磷的吸收。

实施例5解淀粉芽孢杆菌PHODG36对三种病害病原菌的抑制作用试验

(一)供试病害病原真菌来源：

(1)棉花黄萎菌WX-1：分离自河北省邢台市威县棉花黄萎病病株，经河北农业大学鉴定为大丽轮枝菌(Verticillium dahaliae)。

(2)棉花枯萎菌FOV-1分离自河北省邯郸市曲周县棉花枯萎病病株，经河北农业大学鉴定为尖孢镰刀菌棉花专化型(Fusarium oxyporium f.sp.vasinfectum)。

(3)棉花立枯菌RHS-1分离自河北省保定市高阳县棉花苗期立枯病病株，经河北农业大学鉴定立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)，

上述菌株致病力测定均表现为强致病力。

(二)试验方法：

本试验于2015年11月上旬在河北省农林科学院植物保护研究所植物病害生物防治实验室内进行。首先将供试的病原真菌在PDA平板上活化培养3-7天，然后用打孔器在菌落边缘区域打孔制成菌片，再将供试病原真菌菌片转接在另一个PDA平板中央，接着将实施例1步骤(1)活化好的解淀粉芽孢杆菌PHODG36点接在距指示菌菌片2.0厘米处，设空白对照(不点接PHODG36菌株)。在25℃恒温培养3-10天，逐日观察PHODG36菌株和供试病原真菌的生长情况，待空白对照病原菌长至培养皿边缘时，测量三种病原菌的对照生长量(菌落半径)和处理生长量(接种PHODG36后的抑制生长半径)，拮抗作用用抑菌率表示。抑菌率计算公式为：

抑菌率(％)＝(对照生长量-处理生长量)/对照生长量×100)。

结果(见表4)解淀粉芽孢杆菌PHODG36对棉花黄萎菌的抑制率为73.71％，对棉花枯萎菌的抑制率为83.95％，对棉花立枯菌的抑制率为89.21％，说明解淀粉芽孢杆菌PHODG36对这三种病原菌具有明显的抑制作用，具有防治棉花黄萎病、棉花枯萎病、棉花立枯病的生防潜力。

表4解淀粉芽孢杆菌菌株PHODG36对三种病原菌的抑菌作用试验结果

病原菌	正常生长(mm)	抑制生长(mm)	抑菌率(％)
				棉花黄萎菌(V.dahliae)	35.0	9.2	73.71
棉花枯萎菌(F.oxysporum)	38.0	6.1	83.95
				棉花立枯菌(R.solani)	38.0	4.1	89.21

Claims

1.一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)菌株PHODG36，己于2016年9月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.13041。

2.利用权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌PHODG36生产的微生物菌剂，其特征在于其活性成分为解淀粉芽孢杆菌PHODG36菌体。

3.根据权利要求2所述的上述微生物菌剂，其特征在于为液体制剂。

4.权利要求3所述的微生物菌剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)将低温保存的PHODB36菌株在LB平板培养基上活化，挑取单菌落在LB斜面培养基上，在25～35℃培养10～16小时，得活化的菌株；其中所述的LB平板培养基或LB斜面培养基的组成成分及其重量比为：胰蛋白胨8～12g，酵母提取物4～6g，氯化钠4～6g，琼脂粉12～18g，水1000mL；

(2)用无菌的接种环刮取一环步骤(1)活化的菌株接种到100mL LB液体培养基中，在25～35℃、摇床转速为150～220rpm的条件下培养10～16小时，得种子液；其中所述的LB液体培养基的组成成分及其重量比为：胰蛋白胨8～12g，酵母提取物4～6g，氯化钠4～6g，水1000mL；

(3)按照体积比为1～3％的比例将步骤(2)的种子液接入到玉米粉黄豆粉培养基(pH值为7.2)中，在温度为25～35℃、摇床转速为150～220rpm的条件下发酵培养30～40h，得发酵液；其中所述的玉米粉黄豆粉培养基，其组成成分及其重量百分比为：玉米粉1.0～3.0％，黄豆粉1.0～3.0％，NaCl0.1～1.0％，MnSO₄·H₂O 0.5～1.0％，其余为水；

5.权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌PHODG36在降解无机磷上的应用。

6.权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌PHODG36在促进作物生长上的应用。

7.权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌PHODG36在防治棉花病害上的应用；其中所述的棉花病害是指棉花黄萎菌(V.dahliae)、棉花枯萎菌(F.oxysporum)或棉花立枯菌(R.solani)。

8.权利要求2或3所述的微生物菌剂在降解无机磷上的应用。

9.权利要求2或3所述的微生物菌剂在促进作物生长上的应用。

10.权利要求2或3所述的微生物菌剂在防治棉花病害上的应用；其中所述的棉花病害是指棉花黄萎菌(V.dahliae)、棉花枯萎菌(F.oxysporum)或棉花立枯菌(R.solani)。