CN106386487A - 一种金线莲组培方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种金线莲组培方法，通过诱导培养、增殖培养、生根培养等步骤，选用金线莲茎段或茎尖作为培养对象，成活率高，不定芽增殖率高。选用了特定的培养基对促进幼苗生长非常有利，叶片净增量、发根数和鲜重净增量高。经过组培试验，增殖率可达6倍以上。

Description

一种金线莲组培方法
技术领域
本发明涉及植物组织培养方法，具体涉及一种金线莲组培方法。
背景技术
金线莲，又称金线兰、金丝草，为兰科开唇植物花叶兰属多年生珍稀中草药，素有“药王”、“金草”、“神药”、“乌人参”等美称。主要分布在我国的福建、台湾、广西、广东等地。具有清热凉血，除湿解毒，平衡阴阳、扶正固本，阴阳互补、生津养颜、调和气血、五脏、养寿延年等功用。主要用于治疗肺热咳嗽，肺结核咯血，尿血，小儿惊风，破伤风，肾炎水肿，风湿痹痛，跌打损伤，毒蛇咬伤、支气管炎、膀胱炎、糖尿病、血尿、急慢性肝炎、风湿性关节炎肿瘤等疑难病症，目前主要作为煲汤、茶饮等保健食品材料使用。
由于金线莲疗效确切，利用价值高，经济效益好，所以近年来金线莲的野生资源被疯狂采挖，到目前为止，野生金线莲资源已经基本绝迹。但在自然条件下，金线莲的资源更新非常缓慢，无法满足市场的需要。而且金线莲种子不具胚乳，无发芽能力，只有在真菌共生下，才促进种子萌发生长，但发芽率非常低。虽然还可以通过分根法式扦插方式繁殖，则所需时间很长，而且繁殖倍率也不高，生产上难以实现大面积栽培。采用生物技术组织培养技术，可以有效快速地提高金线莲种苗的繁殖速度和质量，实现金线莲优质种苗的工厂化育苗，以满足生产上的需要。
发明内容
本发明的目的在于提供一种金线莲组培方法，采用生物技术组织培养技术，可以有效快速地提高金线莲种苗的繁殖速度和质量。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种金线莲组培方法，包括如下：
（1）选择野生金线莲茎段或茎尖为种源，使用10-20wt.%的乐果乳剂稀释600-700倍液浸泡15-30min，取出后，放入超净工作台使用5-6wt%的复合维生素溶液浸泡10-20min，再用0.05%的氯化汞溶液消毒3-5min，无菌水清晰3-5次，用滤水纸吸干水分备用；
（2）将步骤（1）获得的金线莲茎段或茎尖接种于诱导培养基中进行诱导培养，在17-20℃下培养5-10天，光照强度为300-1000LX，避免直射，光照时间为2-3h/天；
（3）将步骤（2）培养获得的不定芽切成具有1-3个不定芽的小块，接种在增殖培养基上，20-25天转接一次；培养温度为15-20℃，光照强度为300-1000LX，避免直射，光照时间为2-3h/天；
（4）当苗长到2-4cm时，将苗切成单株，接种到生根培养基上，培养20-25天，光照强度为500-1500LX，避免直射，光照时间为3-5h/天，培养温度为15-20℃；
（5）选取具叶4-5张、发根3-5条的苗，进行移栽，移栽至有遮阴棚的基质中栽培，温度为20-23℃，相对湿度为80-90%，自然散色光，基质要求疏松透气。
所述的诱导培养基为MS+芸苔素0.1-0.3mg/L+DA-6 0.2-0.5mg/L+激动素0.1-0.4mg/L，pH5.5-6.0。
所述的增殖培养基为MS+6-BA 0.1-0.3mg/L+多效唑0.05-0.1mg/L+椰子汁 2-5g/L+蔗糖10-15g/L+琼脂粉2-3g/L，pH5.0-5.3。
所述的生根培养基为1/2MS+萘乙酸 0.1-0.3mg/L+赖氨酸10-15g/L+赤霉素0.1-0.4mg/L+琼脂10-20g/L+西红柿汁5-10g/L+白糖2-4g/L，pH5.3-5.5。
所述基质由以下重量份原料组成：麸皮6-10份、红糖1-3份、草木灰5-10份、腐殖土3-8份、田园土10-15份、苹果渣5-9份、山竹壳2-6份、杏鲍菇菌渣6-11份。按常规方法制备。
本发明的优点在于：
1．本发明选用野生金线莲茎段或茎尖作为培养对象，成活率高，不定芽增殖率高。
2．在基质中加入麸皮、红糖、草木灰、腐殖土、田园土、苹果渣、山竹壳、杏鲍菇菌渣等成分对于促进幼苗生长非常有利，叶片净增量、发根数和鲜重净增量高。
3．经过组培试验，增殖率可达6倍以上，成活率达百分百。
具体实施方式
实施例1
一种金线莲组培方法，包括如下：
（1）选择野生金线莲茎段或茎尖为种源，使用15wt.%的乐果乳剂稀释650倍液浸泡25min，取出后，放入超净工作台使用6wt%的复合维生素溶液浸泡15min，再用0.05%的氯化汞溶液消毒4min，无菌水清晰4次，用滤水纸吸干水分备用；
（2）将步骤（1）获得的金线莲茎段或茎尖接种于诱导培养基中进行诱导培养，在18℃下培养8天，光照强度为600LX，避免直射，光照时间为2h/天；
（3）将步骤（2）培养获得的不定芽切成具有2个不定芽的小块，接种在增殖培养基上，23天转接一次；培养温度为18℃，光照强度为600LX，避免直射，光照时间为2h/天；
（4）当苗长到2-4cm时，将苗切成单株，接种到生根培养基上，培养23天，光照强度为1000LX，避免直射，光照时间为4h/天，培养温度为18℃；
（5）选取具叶5张、发根4条的苗，进行移栽，移栽至有遮阴棚的基质中栽培，温度为22℃，相对湿度为85%，自然散色光，基质要求疏松透气。
所述的诱导培养基为MS+芸苔素0.2mg/L+DA-6 0.3mg/L+激动素0.3mg/L，pH5.7。
所述的增殖培养基为MS+6-BA 0.2mg/L+多效唑0.07mg/L+椰子汁 4g/L+蔗糖12g/L+琼脂粉3g/L，pH5.2。
所述的生根培养基为1/2MS+萘乙酸 0.2mg/L+赖氨酸12g/L+赤霉素0.2mg/L+琼脂15g/L+西红柿汁8g/L+白糖3g/L，pH5.4。
所述基质由以下重量份原料组成：麸皮8份、红糖2份、草木灰8份、腐殖土5份、田园土12份、苹果渣7份、山竹壳4份、杏鲍菇菌渣9份。按常规方法制备。
经过试验，增殖率可达7倍，成活率达百分百。
实施例2
一种金线莲组培方法，包括如下：
（1）选择野生金线莲茎段或茎尖为种源，使用10wt.%的乐果乳剂稀释600倍液浸泡15min，取出后，放入超净工作台使用5wt%的复合维生素溶液浸泡10min，再用0.05wt.%的氯化汞溶液消毒3min，无菌水清晰3次，用滤水纸吸干水分备用；
（2）将步骤（1）获得的金线莲茎段或茎尖接种于诱导培养基中进行诱导培养，在17℃下培养5天，光照强度为300LX，避免直射，光照时间为2h/天；
（3）将步骤（2）培养获得的不定芽切成具有1个不定芽的小块，接种在增殖培养基上，20天转接一次；培养温度为15℃，光照强度为300LX，避免直射，光照时间为2-3h/天；
（4）当苗长到2-4cm时，将苗切成单株，接种到生根培养基上，培养20天，光照强度为500LX，避免直射，光照时间为3h/天，培养温度为15℃；
（5）选取具叶4张、发根3条的苗，进行移栽，移栽至有遮阴棚的基质中栽培，温度为20℃，相对湿度为80%，自然散色光，基质要求疏松透气。
所述的诱导培养基为MS+芸苔素0.1mg/L+DA-6 0.2mg/L+激动素0.1mg/L，pH5.5。
所述的增殖培养基为MS+6-BA 0.1mg/L+多效唑0.05mg/L+椰子汁 2g/L+蔗糖10g/L+琼脂粉2g/L，pH5.0。
所述的生根培养基为1/2MS+萘乙酸 0.1mg/L+赖氨酸10g/L+赤霉素0.1mg/L+琼脂10g/L+西红柿汁5g/L+白糖2g/L，pH5.3。
所述基质由以下重量份原料组成：麸皮6份、红糖1份、草木灰5份、腐殖土3份、田园土10份、苹果渣5份、山竹壳2份、杏鲍菇菌渣6份。按常规方法制备。
经过试验，增殖率可达6倍，成活率达百分百。
实施例3
一种金线莲组培方法，包括如下：
（1）选择野生金线莲茎段或茎尖为种源，使用20wt.%的乐果乳剂稀释700倍液浸泡30min，取出后，放入超净工作台使用6wt%的复合维生素溶液浸泡20min，再用0.05wt.%的氯化汞溶液消毒5min，无菌水清晰5次，用滤水纸吸干水分备用；
（2）将步骤（1）获得的金线莲茎段或茎尖接种于诱导培养基中进行诱导培养，在20℃下培养10天，光照强度为1000LX，避免直射，光照时间为3h/天；
（3）将步骤（2）培养获得的不定芽切成具有3个不定芽的小块，接种在增殖培养基上，25天转接一次；培养温度为20℃，光照强度为1000LX，避免直射，光照时间为2h/天；
（4）当苗长到2-4cm时，将苗切成单株，接种到生根培养基上，培养25天，光照强度为1500LX，避免直射，光照时间为3h/天，培养温度为20℃；
（5）选取具叶5张、发根5条的苗，进行移栽，移栽至有遮阴棚的基质中栽培，温度为23℃，相对湿度为90%，自然散色光，基质要求疏松透气。
所述的诱导培养基为MS+芸苔素0.3mg/L+DA-6 0.5mg/L+激动素0.4mg/L，pH6.0。
所述的增殖培养基为MS+6-BA 0.3mg/L+多效唑0.1mg/L+椰子汁5g/L+蔗糖15g/L+琼脂粉3g/L，pH5.3。
所述的生根培养基为1/2MS+萘乙酸0.3mg/L+赖氨酸15g/L+赤霉素0.4mg/L+琼脂20g/L+西红柿汁10g/L+白糖4g/L，pH5.5。
所述基质由以下重量份原料组成：麸皮10份、红糖3份、草木灰10份、腐殖土8份、田园土15份、苹果渣9份、山竹壳6份、杏鲍菇菌渣11份。按常规方法制备。
经过试验，增殖率与现有的培养方法相比可达6.5倍以上，成活率达百分百。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims (5)

1.一种金线莲组培方法，其特征在于：所述方法包括如下：
（1）选择野生金线莲茎段或茎尖为种源，使用10-20wt.%的乐果乳剂稀释600-700倍液浸泡15-30min，取出后，放入超净工作台使用5-6wt%的复合维生素溶液浸泡10-20min，再用0.05%的氯化汞溶液消毒3-5min，无菌水清晰3-5次，用滤水纸吸干水分备用；
（2）将步骤（1）获得的金线莲茎段或茎尖接种于诱导培养基中进行诱导培养，在17-20℃下培养5-10天，光照强度为300-1000LX，避免直射，光照时间为2-3h/天；
（3）将步骤（2）培养获得的不定芽切成具有1-3个不定芽的小块，接种在增殖培养基上，20-25天转接一次；培养温度为15-20℃，光照强度为300-1000LX，避免直射，光照时间为2-3h/天；
（4）当苗长到2-4cm时，将苗切成单株，接种到生根培养基上，培养20-25天，光照强度为500-1500LX，避免直射，光照时间为3-5h/天，培养温度为15-20℃；
（5）选取具叶4-5张、发根3-5条的苗，进行移栽，移栽至有遮阴棚的基质中栽培，温度为20-23℃，相对湿度为80-90%，自然散色光，基质要求疏松透气。
2.根据权利要求1所述的一种金线莲组培方法，其特征在于：所述的诱导培养基为MS+芸苔素0.1-0.3mg/L+DA-6 0.2-0.5mg/L+激动素0.1-0.4mg/L，pH5.5-6.0。
3.根据权利要求1所述的一种金线莲组培方法，其特征在于：所述的增殖培养基为MS+6-BA 0.1-0.3mg/L+多效唑0.05-0.1mg/L+椰子汁 2-5g/L+蔗糖10-15g/L+琼脂粉2-3g/L，pH5.0-5.3。
4.根据权利要求1所述的一种金线莲组培方法，其特征在于：所述的生根培养基为1/2MS+萘乙酸 0.1-0.3mg/L+赖氨酸10-15g/L+赤霉素0.1-0.4mg/L+琼脂10-20g/L+西红柿汁5-10g/L+白糖2-4g/L，pH5.3-5.5。
5.根据权利要求1所述的一种金线莲组培方法，其特征在于：所述基质由以下重量份原料组成：麸皮6-10份、红糖1-3份、草木灰5-10份、腐殖土3-8份、田园土10-15份、苹果渣5-9份+山竹壳2-6份、杏鲍菇菌渣6-11份。
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