CN106309528B - 一种隔山消提取物、其制备方法及在降血糖方面的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种隔山消提取物、其制备方法及在降血糖方面的应用,其是以C21甾体皂苷和苷元为主要成分的提取物,其中:C21甾体皂苷和苷元为主要成分的提取物为告达亭或青阳参苷元。其制备方法为:取隔山消块根洗净后,晒干粉碎至细粉;隔山消块根细粉用有机溶剂冷浸或加热回流,经减压浓缩除去有机溶剂得浸膏,浸膏加水溶解除去油脂,然后用乙酸乙酯萃取,乙酸乙酯萃取液合并,经减压浓缩除去乙酸乙酯得隔山消乙酸乙酯提取物即隔山消提取物。本发明能降低血糖。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域,具体涉及一种隔山消提取物,同时还涉及该隔山消提取物的制备方法,以及在降血糖方面的应用。
背景技术
糖尿病是一种常见的高发病率的内分泌代谢性疾病,其发病率逐年增高,已成为世界性的、危害人类健康的常见病和多发病,与心脑血管、肿瘤疾病并列为三大疾病之一。糖尿病的患病率逐年上升,预计2025年将增至3.8亿;中国糖尿病发病率居世界第一位,大约十分之一的人口患有高血糖症或糖尿病。1型糖尿病是由于先天胰岛素缺乏导致的;2型糖尿病是由于胰岛素分泌缺陷和胰岛素抵抗形成的,是最常见的类型。糖尿病常引起各种急、慢性并发症,导致眼、足、肾脏、心脏等脏器发生病变甚至危及生命。深入研究糖尿病的发病机理,研究开发新的降糖药物或天然降糖药物,对日益增加的糖尿病患者十分重要。目前在临床上控制血糖的手段主要还是依赖药物,常用的降糖药物可分为几大类,第一类是磺酰脲类药物,例如氯磺丙脲、格列本脲 (优降糖)、甲苯磺丁脲等,主要机制是刺激胰岛β细胞的分泌,增加血液中胰岛素的量,起到降糖作用。第二类是双胍类药物,例如苯乙双胍、丁二胍、二甲双胍等,主要机制是刺激胰岛受体的敏感性,增加组织对糖的吸收和转运,从而降低血液中糖含量。第三类是α-糖苷酶抑制剂类药物,例如阿卡波糖(拜糖平)、伏格列波糖,主要机制是竞争性抑制小肠上皮细胞上的α-葡萄糖苷酶的活性, 阻断碳水化合物分解成葡萄糖,延缓单糖在小肠的吸收速率,控制餐后血糖。第四类是噻唑烷二酮类药物,例如吡格列酮、罗格列酮、恩格列酮等,主要机制是增加胰岛素的敏感性,改善胰岛素抵抗,增加胰岛素利用。近年来也出现了一些新的剂型药物,如铬制剂,降糖效果比较明显。总体而言,西药的降糖效果比较明显,可以有效地控制血糖,然而长期服用,毒副作用比较大,如磺酰脲类药物容易产生伤肝肾,低血糖、恶心、头痛头昏、视力模糊、增加心血管疾病死亡率的副作用;双胍类药物容易引起恶心、加重心脏负担;噻唑烷二酮类容易伤肝、致癌。为了寻找低毒的降糖药物,越来越多的医药工作者开始研究天然产物中的降血糖活性成分。
目前从天然产物中发现的降血糖活性成分有多糖类化合物、黄酮类化合物、皂苷类化合物、萜类化合物、生物碱类化合物、不饱和脂肪酸等。降糖作用机制方面主要可以归结为以下几个方面:一、胰岛素类似物,葫芦科植物苦瓜(Morodicacharantia L)在传统中草药中被认为可刺激消化功能和促进食欲。现代药理和化学研究表明其主要有效成分是苦瓜素,这是一类多肽类化合物,早在1974年,卡纳(Khanna, P.)发现苦瓜中的多肽成分P多肽具有降糖作用,后来证实其作用机制与类胰岛素相似,通过改变酮体和脂肪酸的代谢水平调节血糖(Khanna, P. Hypoglycemic activity of polypeptide-p isolated from aplant source. J. Nat. Prod., 1981, 44: 648.)。服部(Hattorik, K.)发现大花紫薇中的一种鞣质成分能够促进胰岛素受体β亚基的活性。珠帘藤、异叶山牵牛、海南桫拉木等植物的水提取物或醇提取物均显示类胰岛素样降糖活性(Hattori, K.; Sukenobu, N.;Sasaki, T.; et al. Activation of insulin receptors produced bylagerstroemin.J. Pharmacol. Sci. (Tokyo, Jpn.), 2003, 93(1): 69.)。二、刺激胰岛素分泌作用,此作用主要是通过两方面来实现的,第一是保护胰岛素细胞,黄酮类成分具有细胞保护作用,杨新波(Yang Xin-Bo)等发现给糖尿病小鼠重复给以水芹黄酮可以降低血糖,并通过组织学的比较发现其具有保护胰岛损伤的作用(Yang, X.B.; Huang, Z.M.;Cao, W.B.; et al. Anti-diabetic effects from cress flavonoids.Acta. Pharmacol. Sin., 2000, 3: 49.)。第二是促进胰岛细胞再生,吴勇等发现黄芪多糖可以提高胰岛素分泌胰岛细胞的数量,增加胰岛素的分泌(吴勇,欧阳静萍,涂淑等. 黄芪中多糖对糖尿病大鼠的微血管病变改善作用及机制研究。湖北中西医学院学报,2001,3(3):16.)。三、胰岛素增敏作用,娜(NaM.)等发现白檀醇提物中的熊果酸、科罗索酸具有对胰岛素增敏的作用(Na, M.; Yang, S.; He L.; et al. Inhibition of protein tyrosinephosphatasel B produced by Ursane-type triterpenes isolated from Symplocos.paniculata. Planta. Med., 2006, 72 (3): 261.)。此外,人参果、干李子、石榴籽等都有类似的降糖机理。天然产物中存在着大量的具有α-糖苷酶抑制活性的化合物,如大黄中的多糖类成分、杜仲中的黄酮类成分、栀子中的环烯醚萜类成分、玉米须中的皂苷类成分都具有较好的α-糖苷酶抑制活性活性。α-糖苷酶抑制剂副作用小,近年来成为研究降糖药的热点之一。
发明内容
本发明的目的在于提供了一种能降低血糖的隔山消提取物。
本发明的另一目的在于提供该隔山消提取物的制备方法。
本发明的再一目的在于提供该隔山消提取物在降血糖方面的应用。
本发明的一种隔山消提取物,是以C21甾体皂苷和苷元为主要成分的提取物。
上述的一种隔山消提取物,其中:C21甾体皂苷和苷元为主要成分的提取物为告达亭或青阳参苷元。
本发明的一种隔山消提取物的制备方法,包括以下步骤:
(1)取隔山消块根洗净后, 晒干粉碎至100-120目细粉;
(2)隔山消块根细粉用有机溶剂冷浸3次、每次一周或加热回流提取3次、每次2小时,经减压浓缩除去有机溶剂得浸膏,浸膏加水溶解,经石油醚、苯或环己烷等除去油脂,然后用乙酸乙酯萃取,乙酸乙酯萃取液合并,经减压浓缩除去乙酸乙酯得隔山消乙酸乙酯提取物即隔山消提取物。
(3)隔山消提取物用水与醇混合(2:0-1, 3)溶解,加入酸使其水解,经石油醚、苯或环己烷等除去油脂, 然后逐步加入碱调节水解溶液至中性,减压回收甲醇得水解产物,经硅胶H减压短柱层析,分别以不同比例的石油醚-丙酮梯度洗脱,分别得到告达亭,青阳参苷元。
其中:有机溶剂为酒精、甲醇或丙酮等;酸为硫酸、盐酸或磷酸等,碱为氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化钡等。
本发明的一种隔山消提取物在降血糖方面的应用。
本发明与现有技术相比,具有明显的有益效果,从以上技术方案可知:本发明以隔山消块根为原料, 用有机溶剂对隔山消块根进行提取,获得隔山消块根以C21甾体皂苷和苷元为主要成分的提取物,其中含量最大为告达亭和青阳参苷元。在筛选降糖活性天然物质的过程中,利用四氧嘧啶性糖尿病小鼠模型发现了隔山消提取物的乙酸乙酯部位和部分C21甾体苷元具有显著的降血糖作用。在总提物剂量为二甲双胍的五分之一、告达亭为二甲双胍的千分之十四、青阳生苷元为二甲双胍的千分之八时,降血糖的效果相似于二甲双胍。为开发利用隔山消天然活性物质开发新的降血糖药物提供了方法。
具体实施方式
结合具体试验和实施例对本发明的技术方案作进一步说明。
实施例1
一种隔山消乙酸乙酯提取物的制备方法,包括以下步骤:
取隔山消块根洗净后, 晒干粉碎至100目细粉。隔山消块根粉末1公斤,75%乙醇冷浸3次每次一周,经减压浓缩除去乙醇得浸膏,浸膏加水3-5 L溶解,经工业石油醚除脂,然后工业重蒸乙酸乙酯3-5 L分别萃取3次,取乙酸乙酯萃取液合并,经减压浓缩除去乙酸乙酯得隔山消乙酸乙酯提取物即隔山消提取物48.6克。
实施例2
一种隔山消乙酸乙酯提取物的制备方法,包括以下步骤:
取隔山消块根洗净后, 晒干粉碎至120目细粉。隔山消块根粉末1公斤,75%乙醇加热回流提取3次每次2小时,经减压浓缩除去乙醇得浸膏,浸膏加水3-5 L溶解,经工业石油醚除脂,然后工业重蒸乙酸乙酯3-5 L分别萃取3次,取乙酸乙酯萃取液合并,经减压浓缩除去乙酸乙酯得隔山消乙酸乙酯提取物即隔山消提取物52.1克。
实施例3
一种隔山消乙酸乙酯提取物的制备方法,包括以下步骤:
取隔山消块根洗净后, 晒干粉碎至110目细粉。隔山消块根粉末1公斤,95%乙醇加热回流提取3次每次2小时,经减压浓缩除去乙醇得浸膏,浸膏加水3-5 L溶解,经工业石油醚除脂,然后工业重蒸乙酸乙酯3-5 L分别萃取3次,取乙酸乙酯萃取液合并,经减压浓缩除去乙酸乙酯得隔山消乙酸乙酯提取物即隔山消提取物38.6克。
实施例4
一种隔山消乙酸乙酯提取物的制备方法,包括以下步骤:
取隔山消块根洗净后, 晒干粉碎至120目细粉。隔山消块根粉末1公斤,工业75%甲醇加热回流提取3次每次2小时,经减压浓缩除去甲醇得浸膏。膏状加水3-5 L溶解,经工业石油醚除脂,然后乙酸乙酯3-5 L分别萃取3次,取乙酸乙酯萃取液合并,经减压浓缩除去乙酸乙酯得隔山消乙酸乙酯提取物即隔山消提取物47.2克。
实施例5
一种隔山消乙酸乙酯提取物的制备方法,包括以下步骤:
取隔山消块根洗净后, 晒干粉碎至120目细粉。隔山消块根粉末1公斤,75%丙酮水加热回流提取3次每次2小时,经减压浓缩除去乙醇得总提物膏状216克。膏状加水3-5 L溶解,经工业石油醚除脂,然后工业重蒸乙酸乙酯3-5 L分别萃取3次,取乙酸乙酯萃取液合并,经减压浓缩除去乙酸乙酯得隔山消乙酸乙酯提取物即隔山消提取物46.8克。
实施例6
一种隔山消告达亭和青阳参苷元的制备方法,包括以下步骤:
根据实施例1的方法,隔山消块根粉末1公斤,75%乙醇冷浸3次每次一周,经减压浓缩除去乙醇得浸膏,浸膏用H2O/CH3OH (2:1, 3 L)溶解,然后加入10% 浓硫酸(2 L),加热回流使其水解,工业石油醚或石油醚-苯(1:1)萃取3次脱脂,逐步加入10% 氢氧化钠调节水解溶液 pH = 7.0,减压回收甲醇得水解产物,然后用乙酸乙酯进行萃取3次,减压回收乙酸乙酯得总苷元浸膏,总苷元经硅胶H减压短柱层析,分别以不同比例的石油醚-丙酮梯度洗脱,分别得到告达亭(3.008g),青阳参苷元(1.504 g)。
实施例7
一种隔山消告达亭和青阳参苷元的制备方法,包括以下步骤:
根据实施例2的方法,隔山消块根粉末1公斤,75%乙醇加热回流提取3次每次2小时,经减压浓缩除去乙醇得浸膏,浸膏用H2O/CH3OH (2:1, 3 L)溶解,然后加入10% 浓硫酸(2 L),加热回流使其水解,石油醚或石油醚-苯(1:1)萃取3次脱脂,逐步加入10% 氢氧化钠调节水解溶液pH = 7.0,减压回收甲醇得水解产物,然后用乙酸乙酯进行萃取3次,减压回收乙酸乙酯得总苷元浸膏,总苷元经硅胶H减压短柱层析,分别以不同比例的石油醚-丙酮梯度洗脱,分别得到告达亭(3.082mg),青阳参苷元(1.576 mg)。
根据实施例6和7得到的告达亭和青阳参苷元理化数据:
告达亭(Caudatin):白色无定形粉末, C28H42O7;EI-MS, m/z:490 [M]+, 473,447, 429, 411, 393, 362, 319, 301, 283, 265, 181, 163, 145, 129, 111, 43;1H-NMR (CDCl3, 400 MHz)δ:5.52 (1H, s, H-2′), 5.35 (1H, br.s, H-6), 4.55 (1H, dd,J =4.0, 11.2Hz, H-12), 3.41 (1H, m, H-3), 2.93 (1H, m, H-4′), 2.17 (3H, s,21-CH3), 2.13 (3H, s, 7′-CH3), 1.47 (3H, s, 18-CH3), 1.14 (3H, s, 19-CH3),1.08 (6H, d, J =6.8Hz, 5′-CH3、6′-CH3);13C-NMR (CDCl3, 100 MHz)δ:209.0 (C-20),166.8 (C-1′), 165.9 (C-3′), 140.4 (C-5), 117.6 (C-6), 112.8 (C-2′), 91.5 (C-17), 88.0 (C-14), 74.1 (C-8), 71.6 (C-12), 71.4 (C-3), 57.7 (C-13), 43.5(C-9), 41.8 (C-4), 38.6 (C-1), 38.1 (C-4′), 36.8 (C-10), 34.1 (C-7), 32.9 (C-15), 31.8 (C-16), 30.6 (C-2), 27.1 (C-21), 24.1 (C-11), 20.8 (C-6′), 20.7 (C-5′), 18.4 (C-19), 16.4 (C-7′), 9.4 (C-18)。
青阳参苷元(Qingyangshengenin):白色无定形粉末, C28H36O8;(+)ESI-MS m/z:523 [M+Na]+;1H-NMR (CD3COCD3, 400 MHz)δ:7.84 (2H, d, J =8.8Hz, H-4′, 6′), 6.92(2H, d, J =8.8Hz, H-3′, 7′), 5.27 (1H, br.s, H-6), 4.75 (1H, dd, J =4.0,11.6Hz, H-12), 3.45 (1H, m, H-3), 2.08 (3H, s, 21-CH3), 1.65 (3H, s, 18-CH3),1.15 (3H, s, 19-CH3);13C-NMR (CD3COCD3, 100 MHz)δ:208.6 (C-20), 164.3 (C-1′),161.9 (C-5′), 140.0 (C-5), 131.8 (C-3′), 131.8 (C-7′), 122.1 (C-2′), 117.9(C-6), 115.3 (C-4′), 115.3 (C-6′), 92.0 (C-17), 89.0 (C-14), 74.1 (C-8), 72.7(C-12), 71.3 (C-3), 57.8 (C-13), 43.8 (C-9), 42.5 (C-4), 38.8 (C-1), 37.0 (C-10), 34.2 (C-15), 33.3 (C-7), 32.3 (C-16), 31.2 (C-2), 26.9 (C-21), 24.4 (C-11), 17.8 (C-19), 9.9 (C-18)。
实验例:实施例1-5得到的隔山消提取物和实施例6、7得到的告达亭和青阳参苷元的降血糖作用
对四氧嘧啶性糖尿病小鼠的影响。
试验动物:健康ICR小鼠,雄性,体重20-30 g。
供试药品:隔山消提取物、告达亭、青阳参苷元和二甲双胍片。隔山消提取物 50mg/kg、告达亭3.5 mg/kg、青阳参苷元 2.0 mg/kg、二甲双胍250 mg/kg。
实验步骤:
1、取60只20-30 g ICR雄性小鼠,称重编号,禁食6小时,尾静脉一次性注射四氧嘧啶80 mg/kg,给药体积10 mL/kg,诱导成糖尿病小鼠模型;72小时后断尾取血10μL,葡萄糖氧化酶法测定血糖水平,血糖值大于11.1 mmol/L者视为糖尿病小鼠。
2、糖尿病小鼠按体重和血糖值均衡分成5组,每组9只,分别为模型组、隔山消提取物50 mg/kg、告达亭 3.5 mg/kg、青阳参苷元 2.0 mg/kg、二甲双胍250 mg/kg,另设正常对照组,各组按10 mL/kg灌胃给药,1次/d,共四周。实验期间每周断尾取血测定血糖水平。
实验结果:
隔山消提取物、告达亭和青阳参苷元对糖尿病动物随机血糖的影响:
由表1可见,实验期间糖尿病小鼠的血糖水平持续在较高水平,与正常对照组相比,差异有统计学显著意义(P<0.05),灌胃给予糖尿病小鼠隔山消提取物后1周随机血糖水平降低,与糖尿病动物组相比差异有统计学显著意义(P<0.05),降糖作用持续4周,给药后30 min起效,效价相似于二甲双胍,但剂量仅为二甲双胍的1/5。告达亭和青阳参苷元分别于灌胃给药第2周和3周出现随机血糖降低,与糖尿病动物组相比差异有统计学显著意义(P<0.05),效价相似于二甲双胍,但剂量仅为二甲双胍的千分之十四和千分之八。
注: ** P<0.01 vs正常组;## P<0.01 vs模型组, # P<0.05 vs模型组。(t-test)
2.隔山消提取物、告达亭和青阳参苷元对糖尿病小鼠空腹血糖的影响
由表2可见,灌胃给予隔山消提取物第3周出现空腹血糖降低,与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05),告达亭和青阳参苷元对糖尿病小鼠空腹血糖影响不明显。阳性药二甲双胍给药后空腹血糖明显降低,与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05)。
3. 隔山消提取物、告达亭和青阳参苷元对糖尿病小鼠体重的影响
结果表明,糖尿病小鼠体重增长明显慢于正常动物,各给药组对体重影响不明显(表3)。
4. 隔山消提取物、告达亭和青阳参苷元对糖尿病小鼠平均进食量的影响
结果表明糖尿病动物进食量明显多于正常动物,给予各受试样品后,糖尿病动物进食量明显减少,与模型组相比,差异有统计学显著意义(P<0.05,0.01),持续三周周,青阳参苷元样品持续二周(表4)。
5.隔山消提取物、告达亭和青阳参苷元对糖尿病小鼠平均饮水量
结果表明糖尿病动物饮水量明显多于正常动物,给予样品隔山消提取物后,糖尿病动物饮水量明显减少,与模型组相比,差异有统计学显著意义(P<0.05,0.01),告达亭、青阳参苷元样品和阳性药二甲双胍组饮水量一过性降低,持续一至二周(表5)。
乙酸乙酯部分用量是二甲双胍的1/5, 效果第四周为二甲双胍的1.5
按实施例1-5得到隔山消提取物及实施例6和7所得到的告达亭和青阳参苷元制备药物时,将其与药物学上可接受的、对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂制备成各种剂型。
所述的药用载体或赋形剂是一种或多种固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。将隔山消提取物及告达亭和青阳生苷元采用制药和食品领域公认的方法制备成各种剂型,如液体制剂(注射剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂等)、固体制剂(片剂、胶囊剂、颗粒剂、冲剂等)等口服给药途径进行血糖的治疗。
以上所述,仅是本发明的较佳实施例而已,并非对本发明作任何形式上的限制,任何未脱离本发明技术方案内容,依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰,均仍属于本发明技术方案的范围内。
Claims (3)
1.一种隔山消提取物在制备降血糖药物中的应用,所述隔山消提取物的制备方法包括以下步骤:
(1)取隔山消块根洗净后,晒干粉碎至100-120目细粉;
(2)隔山消块根细粉用有机溶剂冷浸3次、每次一周或加热回流提取3次、每次2小时,经减压浓缩除去有机溶剂得浸膏,浸膏加水溶解,经石油醚、苯或环己烷除去油脂,然后用乙酸乙酯萃取,乙酸乙酯萃取液合并,经减压浓缩除去乙酸乙酯得隔山消乙酸乙酯提取物即隔山消提取物。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述隔山消提取物的制备方法还包括:
(3)隔山消提取物用水与醇混合溶解,加入酸使其水解,经石油醚、苯或环己烷除去油脂,然后逐步加入碱调节水解溶液至中性,减压回收甲醇得水解产物,经硅胶H减压短柱层析,分别以不同比例的石油醚-丙酮梯度洗脱,分别得到告达亭,青阳参苷元。
3.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述隔山消提取物的制备方法中,有机溶剂为酒精、甲醇或丙酮;酸为硫酸、盐酸或磷酸,碱为氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化钡。
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