CN106248849A - 一种明日叶中查尔酮组分的分析检测方法 - Google Patents

一种明日叶中查尔酮组分的分析检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种明日叶中查尔酮组分的分析检测方法，包括如下步骤：(1)将新鲜明日叶冷冻干燥；(2)将冻干后的明日叶与乙醇水溶液混合，匀浆使明日叶与乙醇水溶液充分混合；(3)将步骤(2)所得的物料浸提后震荡混匀，再冷却至室温，离心，得上清液和残渣；(4)以残渣为原料重复步骤(2)和(3)，合并上清液并定容至适当体积，得提取液；(5)将适量上述提取液用氮气吹干后，加入适量乙醇，震荡混匀，并进行超声处理，使其中的查尔酮组分充分溶解，得待检测液；(6)将适量上述待检测液用高效液相色谱结合梯度洗脱进行分析检测。本发明克服了只能测定明日叶中总查尔酮含量和只能分离测定1‑2种组分的不足，而且还具有测定结果准确、操作简单安全、分离效果好等特点。

Description

一种明日叶中查尔酮组分的分析检测方法
技术领域
本发明属于精细化工技术领域，具体涉及一种明日叶中查尔酮组分的分析检测方法。
背景技术
明日叶是一种芹科草本植物，查尔酮是其主要生物活性物质，具有良好的抗氧化、抗肿瘤、抗糖尿病等多种重要的医用价值，在明日叶的根、茎、叶中含量都很丰富。查尔酮是一类含有二苯基丙烯酮结构及其衍生物的化合物。国内外研究发现明日叶查尔酮中含有黄色当归醇、4-羟基德里辛、异补骨脂查尔酮等多种组分，分离并确定明日叶中查尔酮各组分及其含量对明日叶的品种鉴定、功效评价及提取制备具都有重要的意义。
目前国内检测明日叶中查尔酮含量的方法,一般是采用乙醇反复浸提获得查尔酮粗提取物，然后采用紫外分光光度计在308nm波长下测定吸光度，计算确定明日叶中的查尔酮含量。这种方法只能粗略测定明日叶中的总查尔酮的含量，无法准确分析明日叶中各查尔酮组分含量。也有方法报道，采用乙醇浸提，减压回收获得浸提膏，加水后用乙酸乙酯萃取获得明日叶查尔酮样品，再采用高效液相色谱法，以0.1％甲酸溶液和甲醇溶液为流动相，采用梯度洗脱的方法，可以分离测定出4-羟基德里辛和黄色当归醇两种组分及其含量。但这种方法只能分离测定明日叶查尔酮的两种组分，且在提取过程中，需在乙醇提取后再采用乙酸乙酯再次进行处理，而且在采用高效液相色谱测定过程中，采用极性偏强的甲醇溶液进行洗脱，容易发生洗脱不完全，造成查尔酮组分丢失等不足。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种明日叶中查尔酮组分的分析检测方法。
本发明的具体技术方案如下：
一种明日叶中查尔酮组分的分析检测方法，包括如下步骤：
(1)将新鲜明日叶冷冻干燥至含水量小于2％；
(2)将冻干后的明日叶与8～35倍体积的55～65％的乙醇水溶液混合，7000～9000rpm匀浆1.5～3min，使明日叶与乙醇水溶液充分混合；
(3)将步骤(2)所得的物料于38～42℃浸提90～120min后震荡混匀，再冷却至室温，于2～5℃，2000～4000rpm离心3～7min，得上清液和残渣；
(4)以残渣为原料重复步骤(2)和(3)2～3次，合并上清液并定容至适当体积，得提取液；
(5)将适量上述提取液用氮气于25～27℃吹干后，加入适量乙醇，震荡混匀，再用氮气于25～27℃吹干后，加入适量乙醇，震荡混匀，并进行超声处理，使其中的查尔酮组分充分溶解，得待检测液；
(6)将适量上述待检测液用高效液相色谱进行分析检测，采用梯度洗脱法对待检测液中的查尔酮组分进行分离，高效液相色谱采用XDB C18色谱柱，流动相包括流动相A和流动相B，其中流动相A由乙酸和水按0.1:99.9的体积比组成，流动相B由乙酸和乙醇按0.1:99.9的体积比组成，高效液相色谱的梯度洗脱程序如下：
在本发明的一个优选实施方案中，所述步骤(1)为：将新鲜明日叶切成0.4～0.6cm2后冷冻干燥2～10h至含水量小于2％。
在本发明的一个优选实施方案中，所述步骤(2)为：将冻干后的明日叶与10～30倍体积的60％的乙醇水溶液混合，8000rpm匀浆2min，使明日叶与乙醇水溶液充分混合。
在本发明的一个优选实施方案中，所述步骤(3)为：将步骤(2)所得的物料于40℃浸提100min后震荡混匀，再冷却至室温，于4℃，3000rpm离心5min，得上清液和残渣。
进一步优选的，所述步骤(3)中的震荡为：用旋涡混合器1500～3000rpm，震荡30s。
在本发明的一个优选实施方案中，所述步骤(4)为：将适量上述提取液用氮气于26℃吹干后，加入适量乙醇，震荡混匀，再用氮气于26℃吹干后，加入适量乙醇，震荡混匀，并进行超声处理，使其中的查尔酮组分充分溶解，得待检测液。
进一步优选的，所述步骤(4)中的震荡为：用旋涡混合器1500～3000rpm，震荡30s。
本发明的有益效果是：
1、本发明提供的一种明日叶查尔酮各组分检测分析的方法，其工艺过程主要包括样品冷冻干燥，乙醇提取，复溶纯化，高效液相色谱分离测定等步骤，本发明将新鲜明日叶冷冻干燥去除水分，再将冷冻干燥的明日叶样品与一定浓度的乙醇溶液高速匀浆后，进行水浴加热浸提。将浸提液用氮气吹干后加入乙醇使查尔酮复溶纯化，用高效液相色谱进行分离测定；本发明的提取过程中不需要用乙酸乙酯进行萃取，克服了乙酸乙酯萃取过程导致查尔酮组分提取不完全，致使其组分丢失或者测定含量偏低的不足，而且避免了应用毒性大、易挥发的乙酸乙酯为提取溶剂的危险性，操作过程更为简单、安全。
2、本发明用高效液相色谱法分离测定时，采用乙酸/水和乙酸/乙醇作为流动相对明日叶提取物进行分离洗脱，其中乙酸/乙醇作为流动相B主要洗脱明日叶中的查尔酮组分，该流动相呈现弱酸性，而查尔酮组分也呈弱酸性，根据相似相溶的原理，该流动相能更好地将提取物中的查尔酮组分依次洗脱出来，可以分离测定出至少异补骨脂查尔酮、黄色当归醇B、4-羟基德里辛和黄色当归醇等4种组分。也就是说，本发明克服了只能测定明日叶中总查尔酮含量和只能分离测定1-2种组分的不足，而且还具有测定结果准确、操作简单安全、分离效果好等特点。
附图说明
图1为本发明实施例1的HPLC结果图。其中：1、异补骨脂查尔酮(Isobavachaclone)，2、黄色当归醇B(Xanthonagelol B)，3、4-羟基德里辛(4-Hydroxyderricin)4、黄色当归醇(Xanthonagelol)
具体实施方式
以下通过具体实施方式结合附图对本发明的技术方案进行进一步的说明和描述。
实施例1
(1)将自来水清洗晾干的新鲜明日叶(切成0.5cm2左右的小片)10g置于烧杯中，冷冻干燥5h，至含水量小于2％；
(2)将冻干后的明日叶置于15mL试管中，与10mL 60％的乙醇水溶液混合，高速匀浆机8000rpm匀浆2min，将明日叶完全打碎使并与乙醇水溶液充分混合；
(3)将步骤(2)所得的物料于40℃水浴浸提100min后，用漩涡混合器2800rpm震荡30s混匀，再冷却至室温，于4℃，3000rpm离心5min，得上清液和残渣；
(4)以残渣为原料，加入5mL 60％的乙醇水溶液重复步骤(2)和(3)2次，合并上清液并定容至25mL，得提取液；
(5)将5mL上述提取液用氮气于26℃吹干后，加入1.5mL乙醇，用漩涡混合器1500rpm震荡30s混匀，再用氮气于26℃吹干后，加入500μL乙醇，同样用漩涡混合器1500rpm震荡30s混匀，并进行超声处理30s，使其中的查尔酮组分充分溶解，得待检测液；
(6)将20μL上述待检测液用高效液相色谱进行分析检测，采用梯度洗脱法对待检测液中的查尔酮组分进行分离，高效液相色谱采用XDB C18色谱柱，流动相包括流动相A和流动相B，其中流动相A由乙酸和水按0.1:99.9的体积比组成，流动相B由乙酸和乙醇按0.1:99.9的体积比组成，高效液相色谱的梯度洗脱程序如下：
按照本发明的方法对明日叶中的查尔酮进行检测分析，可将明日叶中的异补骨脂查尔酮(Isobavachaclone)、黄色当归醇B(Xanthonagelol B)、4-羟基德里辛(4-Hydroxyderricin)和黄色当归醇(Xanthonagelol)四种查尔酮组分进行分离。高效液相色谱仪分离图谱见图1。将四种查尔酮的峰面积进行积分，计算可得到明日叶中四种查尔酮组分的含量，结果见表1.
表1明日叶中四种查尔酮组分含量
本领域普通技术人员可知，本发明的技术方案在下述范围内变化时，仍然能够得到与上述实施例相同或相近的技术效果：
一种明日叶中查尔酮组分的分析检测方法，包括如下步骤：
(1)将新鲜明日叶冷冻干燥至含水量小于2％；
(2)将冻干后的明日叶与8～35倍体积的55～65％的乙醇水溶液混合，7000～9000rpm匀浆1.5～3min，使明日叶与乙醇水溶液充分混合；
(3)将步骤(2)所得的物料于38～42℃浸提90～120min后震荡混匀，再冷却至室温，于2～5℃，2000～4000rpm离心3～7min，得上清液和残渣；
(4)以残渣为原料重复步骤(2)和(3)2～3次，合并上清液并定容至适当体积，得提取液；
(5)将适量上述提取液用氮气于25～27℃吹干后，加入适量乙醇，震荡混匀，再用氮气于25～27℃吹干后，加入适量乙醇，震荡混匀，并进行超声处理，使其中的查尔酮组分充分溶解，得待检测液；
(6)将适量上述待检测液用高效液相色谱进行分析检测，采用梯度洗脱法对待检测液中的查尔酮组分进行分离，高效液相色谱采用XDB C18色谱柱，流动相包括流动相A和流动相B，其中流动相A由乙酸和水按0.1:99.9的体积比组成，流动相B由乙酸和乙醇按0.1:99.9的体积比组成，高效液相色谱的梯度洗脱程序如下：
以上所述，仅为本发明的较佳实施例而已，故不能依此限定本发明实施的范围，即依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖的范围内。

Claims (7)

1.一种明日叶中查尔酮组分的分析检测方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)将新鲜明日叶冷冻干燥至含水量小于2％；
(2)将冻干后的明日叶与8～35倍体积的55～65％的乙醇水溶液混合，7000～9000rpm匀浆1.5～3min，使明日叶与乙醇水溶液充分混合；
(3)将步骤(2)所得的物料于38～42℃浸提90～120min后震荡混匀，再冷却至室温，于2～5℃，2000～4000rpm离心3～7min，得上清液和残渣；
(4)以残渣为原料重复步骤(2)和(3)2～3次，合并上清液并定容至适当体积，得提取液；
(5)将适量上述提取液用氮气于25～27℃吹干后，加入适量乙醇，震荡混匀，再用氮气于25～27℃吹干后，加入适量乙醇，震荡混匀，并进行超声处理，使其中的查尔酮组分充分溶解，得待检测液；
(6)将适量上述待检测液用高效液相色谱进行分析检测，采用梯度洗脱法对待检测液中的查尔酮组分进行分离，高效液相色谱采用XDB C18色谱柱，流动相包括流动相A和流动相B，其中流动相A由乙酸和水按0.1:99.9的体积比组成，流动相B由乙酸和乙醇按0.1:99.9的体积比组成，高效液相色谱的梯度洗脱程序如下：
0～15min 10％流动相B～60％流动相B，余量为流动相A
15～18min 60％流动相B～100％流动相B，余量为流动相A
18～50min 100％流动相B
50～52min 100％流动相B～10％流动相B，余量为流动相A
52～55min 10％流动相B，余量为流动相A。
2.如权利要求1所述的分析检测方法，其特征在于：所述步骤(1)为：将新鲜明日叶切成0.4～0.6cm2后冷冻干燥2～10h至含水量小于2％。
3.如权利要求1所述的分析检测方法，其特征在于：所述步骤(2)为：将冻干后的明日叶与10～30倍体积的60％的乙醇水溶液混合，8000rpm匀浆2min，使明日叶与乙醇水溶液充分混合。
4.如权利要求1所述的分析检测方法，其特征在于：将步骤(2)所得的物料于40℃浸提100min后震荡混匀，再冷却至室温，于4℃，3000rpm离心5min，得上清液和残渣。
5.如权利要求1或4所述的分析检测方法，其特征在于：所述步骤(3)中的震荡为：用旋涡混合器1500～3000rpm，震荡30s。
6.如权利要求1所述的分析检测方法，其特征在于：所述步骤(4)为：将适量上述提取液用氮气于26℃吹干后，加入适量乙醇，震荡混匀，再用氮气于26℃吹干后，加入适量乙醇，震荡混匀，并进行超声处理，使其中的查尔酮组分充分溶解，得待检测液。
7.如权利要求1或6所述的分析检测方法，其特征在于：所述步骤(4)中的震荡为：用旋涡混合器1500～3000rpm，震荡30s。
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