CN106244554B - 人子宫内膜癌细胞系及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了人子宫内膜癌细胞系及其应用，其命名为人子宫内膜癌细胞系ZJB‑ENC1，于2016年06月16日保藏于武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2016118。本发明人子宫内膜癌细胞系的分型不同于现有常见的人子宫内膜癌细胞系，可长期在体外传代培养，大量扩增；具有较强的增殖活性及裸鼠成瘤能力，可为研究者深入开展子宫内膜癌的病因学、转移机制、耐药机理、新药筛选等提供新的实验模型。

Description

人子宫内膜癌细胞系及其应用
技术领域
本发明属于细胞系领域，具体涉及人子宫内膜癌细胞系及其应用。
背景技术
子宫内膜癌是女性生殖道三大恶性肿瘤之一，占妇女肿瘤疾病发病的6％，每年有接近20万的新发病例，近年来发病率在世界范围呈上升趋势，其病因至今不是十分清楚。女性对生命期望值的延长及不断增高的发病率都提示我们揭示其致病机理是亟待解决的问题。人子宫内膜腺癌细胞系的建立，为了解肿瘤的生物学特性、研究其癌变、分子遗传以及转移演变机制等提供了丰富的实验材料，可以为肿瘤机理方面的研究和化疗耐药机制相关研究等做出贡献。
由于子宫内膜癌细胞的纯化及体外大量扩增在技术上存在一定的难度，相对于子宫内膜癌表型的多样性及肿瘤异质性，目前已建立的子宫内膜癌细胞系仍然十分有限。而实际作为重要研究工具的相应细胞系非常少见，目前子宫内膜癌常用永生细胞系主要为KLE、HHUA、HEC-1-A、JEC、HEC-1-B、Ishikawa等，这些子宫内膜癌细胞系建立时间也比较早。近年来，新的基因标志物不断涌现，如PTEN等，这些新的标志物在子宫内膜癌预后方面有了进一步的研究。因此，建立新的子宫内膜癌细胞系，以丰富和完备子宫内膜癌细胞系库，为研究肿瘤异质性提供合适的体外模型，以促进子宫内膜癌的基础和临床研究，是非常有必要的。
发明内容
针对现有的人子宫内膜癌细胞系的生物多样性低的问题，尤其是近年来新的人子宫内膜癌细胞系少见而无法满足新的研究的需要的问题，本发明提供了一种新的人子宫内膜癌细胞系及其应用，该新的人子宫内膜癌细胞系的分型不同于现有常见的人子宫内膜癌细胞系，能够稳定传代、成瘤性好，且能大量扩增和长期在体外传代培养，适用于建立动物模型。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是：
一种人子宫内膜癌细胞系，命名为人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1，于2016年06月16日保藏在于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：C2016118。
本发明还提供如上所述的人子宫内膜癌细胞系的子代细胞系。
在本发明的一些实施例中，如上所述的人子宫内膜癌细胞系或其子代细胞系表达PTEN蛋白。
本发明还提供如上所述的人子宫内膜癌细胞系或其子代细胞系的用途，用于在哺乳动物中产生子宫内膜癌瘤块。所述的哺乳动物可以是各种哺乳动物，优选裸鼠。所述的裸鼠优选BALB/c裸鼠。
本发明还提供如上所述的人子宫内膜癌细胞系或其子代细胞系在作为子宫内膜癌发生、子宫内膜癌发展或子宫内膜癌转移的细胞模型中的应用。
本发明还提供如上所述的人子宫内膜癌细胞系或其子代细胞系在建立子宫内膜癌动物模型中的应用。
本发明还提供如上所述的人子宫内膜癌细胞系或其子代细胞系在研究子宫内膜癌发生机理、耐药机理或筛选治疗子宫内膜癌癌药物中的应用。
一种筛选治疗子宫内膜癌的候选药物的方法，包括以下步骤：
测试组中，在含如上所述的人子宫内膜癌细胞系或其子代细胞系的培养体系中添加不同浓度的测试化合物，并观察子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1的数量和/或生长情况；
在对照组中，在含如上所述的人子宫内膜癌细胞系或其子代细胞系的培养体系中不添加测试化合物，并观察子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1的数量和/或生长情况；
其中，如果测试组中子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1的数量或生长速度小于对照组，就表明该测试化合物是对子宫内膜癌细胞的生长或增殖有抑制作用的治疗子宫内膜癌的候选药物。
本发明中，从中-低分化的子宫内膜癌患者原发灶分离并建立了一种子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1，持续稳定培养至今，已稳定传代数50代以外。
本发明通过光学形态观察发现该人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1具有较好的贴壁性，且细胞性状稳定，可稳定多次传代。该人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1的病理学鉴定表明其与标本组织形态相同、核分裂像比较多，为癌组织来源细胞，且为中低分化细胞株，区别于现有子宫内膜癌常用细胞株。该人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1的雌激素受体(estrogenreceptor，ER)、孕激素受体(Progesterone receptor，PR)、与张力蛋白同源在10号染色体有缺失的磷酸酶基因(phosphataseandtensinho－mologdeletedfromchromosome10，PTEN)免疫组化分析结果为：ER表达阴性，PR表达阴性，PTEN强阳性表达，明显区别于现有子宫内膜癌常用细胞株。通过对该人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1进行遗传物质STR分析，并在数据库中进行STR序列检索，未发现与该细胞匹配的位点，鉴定其为新的单一细胞株。
同时，本发明研究还表明该人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1大量扩增，具有较强的增殖活性，具有非常强的裸鼠成瘤能力，其病理学鉴定表明裸鼠体内成瘤与该人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1、临床肿瘤组织标本形成对应关系，而裸鼠体内成瘤的ER、PR、PTEN免疫组化分析结果与该人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1相同。
综合可见，本发明人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1作为新的单一细胞株，与现有子宫内膜癌细胞株表型差异大，可作为有效的研究细胞模型；同时，其能够稳定传代、成瘤性好，且能大量扩增和长期在体外传代培养，可以成功制备子宫内膜癌动物模型。PTEN在ZJB-ENC1中具有稳定的阳性表达，为子宫内膜癌研究提供新的更接近于临床肿瘤生物学特性的实验材料，也提示该细胞系可以作为相关机制的研究模型。ZJB-ENC1还可为化疗耐药机制相关研究提供了有效的模型。因此，本发明人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1可为研究者深入研究子宫内膜癌的发病机理、转移机理、发病和转移的特征生物标志物筛选、耐药机理、新药筛选等提供新的实验模型，是人子宫内膜癌基础研究和临床前期应用的理想细胞系。
相比于现有技术，本发明的有益效果如下：
(1)本发明的人子宫内膜癌细胞ZJB-ENC1具有较好的贴壁性，且细胞性状稳定，可稳定多次传代。
(2)本发明的人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1经STR鉴定为新的单一细胞株。
(3)本发明的人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1的ER、PR均缺失，表达为阴性，其分型明显不同于现细胞库常用子宫内膜癌细胞株(ER均为阳性)，为人子宫内膜癌研究提供新的与临床肿瘤生物学特性接近的实验材料。
(4)本发明的人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1为中低分化细胞株，分化等级区别于现有子宫内膜癌常用细胞株(中分化或高分化)，丰富中低分化细胞库。
(5)本发明的人子宫内膜癌细胞系PTEN呈强阳性表达，不同于常用株Ishikawa的PTEN活性缺失，由于PTEN对于子宫内膜异位症恶变及内膜癌发生扮演着重要角色，且PTEN与P53同为重要的抑癌基因，故而，本发明的人子宫内膜癌细胞系可作为有效的靶点研究细胞株。
(6)相对于现有技术，本发明的人子宫内膜癌细胞系具有非常强的体外成瘤能力，可以成功制备子宫内膜癌动物模型，以用于基础研究及药物筛选。本发明中，35天瘤径达29mm；而现有细胞系中，该数值通常为10mm。
生物材料的保藏
本发明的人子宫内膜癌细胞，命名为人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1，于2016年06月16日保藏在于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址为：中国.武汉.武汉大学，邮编：430072))，保藏编号为CCTCC NO：C2016118。
附图说明
图1A～图1D依次分别为实施例1得到的ZJB-ENC1细胞系P0、P6、P17、P50代细胞的光学形态图片，放大倍数为10倍。
图2为实施例1得到的ZJB-ENC1细胞系的细胞生长曲线图。
图3A和图3B分别为实施例1中临床子宫内膜癌组织标本与ZJB-ENC1细胞的HE染色图片，放大倍数为40倍。
图4为实施例1得到的ZJB-ENC1细胞在体外进行顺铂耐药试验的结果。
图5A为ZJB-ENC1细胞系裸鼠体外成瘤实验中第35天的裸鼠照片。
图5B为ZJB-ENC1细胞系裸鼠体外成瘤实验中瘤径增长曲线。
图5C为ZJB-ENC1细胞系裸鼠体外成瘤实验中裸鼠瘤块的HE染色图片，放大倍数为40倍。
图6A和图6B分别为ZJB-ENC1细胞系和裸鼠瘤块的ER表达检测结果。
图6C和图6D分别为ZJB-ENC1细胞系和裸鼠瘤块的PR表达检测结果。
图6E和图6F分别为ZJB-ENC1细胞系和裸鼠瘤块的PTEN表达检测结果。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
下列实施例中未注明具体条件的实验方法，可采用本领域中的常规方法，例如参考《分子克隆实验指南》(第三版，纽约，冷泉港实验室出版社，New York：Cold SpringHarbor Laboratory Press，1989)或按照供应商所建议的条件。
下列实施例中未特别说明的各种仪器、原料和试剂均为本领域熟知的市售产品，可通过商业途径获得。在下列实施例中列出的所使用的具体材料及其来源，仅仅是示例性的，并不意图限制本发明，与如下组织、细胞、试剂和仪器的类型、型号、品质、性质或功能相同或相似的材料均可以用于实施本发明。
实施例1：ZJB-ENC1细胞系的建立
1.1标本的来源：
2015年05月，取自我院一名57岁子宫内膜癌患者手术后标本，患者主诉阴道不规则出血2年余，病理诊断为子宫中-低分化子宫内膜样腺癌，子宫体后壁及左宫角局限型，组织大小：2.5cm×2.3cm×0.8cm，术前签署患者知情同意书。
1.2标本处理：
取手术切除的新鲜子宫内膜癌标本，生理盐水冲洗3次，剪除出血坏死组织和脂肪组织，4℃下PBS(含青霉素500IU/mL，链霉素500μg/mL，两性霉素B 5μg/mL)浸泡10min，生理盐水反复漂洗标本共计3次。
无菌条件下将子宫内膜癌标本剪切成1mm×1mm左右大小的组织块，在剪切过程中，向组织块上滴加1～2滴DMEM/F12培养基(购自Gibco)，以保持湿润；
组织剪切后，将组织置于15mL无菌离心管，加入5mL终浓度0.1％(w/v)胶原酶(购自Sigma，美国)，0.125％(w/v)胰蛋白酶-EDTA(购自Gibco，美国)，37℃振荡消化4h，加5mL含10％(v/v)胎牛血清DMEM/F12培养液(购自Gibco，货号:12400-024)，混匀静置15min；
采用70μm无菌滤膜过滤，收集过滤液，1000r/min离心5min弃上清；PBS清洗1次，离心收集细胞，于37℃、5％CO2培养箱中培养4周，培养基为DMEM/F12+10％(v/v)FBS+100U/mL青霉素+100μg/mL链霉素+5mg/L氢化可的松。
1.3单克隆纯化：
挑取活力较强的细胞区，制为10个细胞/mL的单细胞悬液，各取100μL置于96孔板中培养，制成单细胞增殖孔，进行单克隆纯化；
获得单克隆细胞团，采用0.25％(w/v)胰蛋白酶消化1min后进行扩大培养,培养基为DMEM/F12+10％(v/v)FBS+100U/mL青霉素+100μg/mL链霉素+5mg/L氢化可的松，于37℃、5％CO2培养箱中。每周传代1次，目前细胞生长良好，形态较为均一。传代至50代以上。
将上述人子宫内膜癌细胞命名为人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1。人子宫内膜癌细胞ZJB-ENC1已于2016年06月16日保藏在于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址为：中国.武汉.武汉大学，邮编：430072)，保藏编号为CCTCC NO：C2016118。
实施例2：ZJB-ENC1细胞系的生物学特性及应用
a.ZJB-ENC1细胞系的形态学观察
取传代培养的ZJB-ENC1细胞，在光学显微镜下(日本Olympus IMT-2倒置显微镜)观察活细胞生长情况(10×)。结果见图1A～图1D，图1A～图1D依次分别为ZJB-ENC1细胞系P0、P6、P17、P50代细胞光学形态图片，由图1A～图1D可见：本细胞系生长旺盛，背景清晰，杂质少见，贴壁生长细胞为梭形，叠层生长细胞为圆形，呈相互凝集成大小不等的细胞团样生长。
b.ZJB-ENC1细胞系的遗传物质STR分析
短串联重复序列(short tandem repeat，STR)又称为微卫星DNA，是指染色体上，由数个碱基对作为核心单位(2-6个碱基对)，串联重复形成的一类DNA序列(重复次数为10～60多次，基因片段在400碱基对以下)；每个核心单位重复的次数会出现个体差异，从而形成片段长度不同的等位基因。因此，一组STR序列的重复次数在不同个体中几乎是唯一的，是个体的基因身份特征，也是细胞生物学对细胞身份和来源进行鉴定的主要方法。
胰酶消化收集P30代ZJB-ENC1细胞，用Axygen的基因组抽提试剂盒(购自Axygen公司的AxyPrepTM Multisource Genomic DNA Miniprep Kit)提取细胞基因组DNA，采用20-STR扩增方案扩增，在ABI 3730XL型遗传分析仪上对STR位点和性别基因Amelogenin进行检测。
STR位点及Amelogenin位点包括：D5S818、D13S317、D7S820、D16S539、VWA、TH01、AMEL、TPOX、CSF1PO、D12S391、FGA、D2S1338、D21S 11、D18S51、D8S1179、D3S 1358、D6S1043、PENTAE、D19S433、PENTAD。ZJB-ENC1细胞系遗传物质STR分析如表1所示。
在德国微生物菌种保藏中心DSMZ数据库(Deutsche Sammlung vonMikroorganismen und Zellkulturen)、美国典型培养物保藏中心(ATCC)数据库，进行STR序列检索，未发现相同STR检测结果。即，未找到与该细胞匹配的位点，表明此为新细胞株；未发现多等位点，表明此细胞株为单一细胞，无其他细胞污染。
表1：ZJB-ENC1细胞系的STR位点和Amelogenin位点的基因分型结果
c.ZJB-ENC1细胞系的生长动力学研究
取传代对数生长细胞制成1×104细胞/mL细胞悬液，按每孔100μL体积接种于96孔板中，依次采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)方法检测0天、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天孔板细胞增殖情况。CCK-8检测方法参照试剂盒说明书，配置体积比为1：9(CCK-8原液：培养基)CCK-8工作液，每孔加入100μL，37℃，5％CO2培养箱孵育2小时，450nm处获得OD值。绘制的ZJB-ENC1细胞系生长曲线如图2所示。
由图2可知，ZJB-ENC1细胞第1、2、3、4、5天进入倍增状态，第6天进入平台期稳定期，具有较强增殖能力。
d.ZJB-ENC1细胞系的病理学鉴定
(ⅰ)将实施例1的ZJB-ENC1细胞和临床子宫内膜癌手术组织标本按以下步骤进行石蜡包埋切片和HE染色：
ZJB-ENC1细胞系蜡块处理程序
0.25％(w/v)胰蛋白酶消化P30代ZJB-ENC1细胞培养标本，用低速自动平衡离心机(LD-Z5-2北京)3000转/分，离心5分钟以每分钟3000转离心10分钟；弃除上清，滴加1ml10％中性缓冲福尔马林固定5h后，将底部沉淀标本以茶叶滤叶包裹；采用75％、80％、95％、95％、100％、100％乙醇依次脱水2h；采用二甲苯透明30min，操作2次；入60℃石蜡，浸蜡2h；采用德国徕卡JUNG包埋机包埋；采用德国徕卡2135石蜡切片机切片，厚度4μm；60℃烤箱，烤片1小时；采用德国徕卡ST5020染色机染色；采用德国徕卡CV5030封片机封片。
子宫内膜癌标本组织蜡块处理程序
将组织切为约1cm×1cm×0.3cm大小，置于组织包埋盒中，采用10％中性缓冲福尔马林固定；采用75％、80％、95％、95％、100％、100％乙醇依次脱水2h；采用二甲苯透明30min，操作2次；入60℃石蜡，浸蜡2h；采用德国徕卡JUNG包埋机包埋；采用德国徕卡2135石蜡切片机切片，厚度4μm；60℃烤箱，烤片1小时；采用德国徕卡ST5020染色机染色；采用德国徕卡CV5030封片机封片。
(ⅱ)在光学显微镜下(日本Olympus IMT-2正置显微镜)进行显微拍照，对比观察临床子宫内膜癌组织标本与ZJB-ENC1细胞的HE染色图片(40×)，结果分别如图3A和图3B所示。由病理科三位诊断医生分别判读，对它们的病理诊断结果为：ZJB-ENC1细胞系形态与临床子宫内膜癌组织标本形态相同，核分裂像较多，确定为癌组织来源细胞，并判定为中低分化细胞株。该分化等级区别于现有子宫内膜癌常用细胞株，如HHUA(高分化)、JEC(中分化)、HEC-1-A(中分化)、Ishikawa(高分化)，可丰富中低分化细胞库。
e.ZJB-ENC1细胞系的药物敏感试验
取传代对数生长细胞制成5×104细胞/mL细胞悬液，按每孔100μL体积接种于96孔板中，待细胞密度达80％左右时，依次每孔加入顺铂浓度为0、2.5、5、10、25、50、100μmol/L，48小时后采用CCK-8方法检测每孔细胞活力，CCK-8检测方法参照试剂盒说明书，配置体积比1：9(CCK-8原液：培养基)CCK-8工作液，每孔加入100μL，37℃，5％CO2培养箱孵育2小时，450nm处获得OD值。药敏试验结果如图4所示，ZJB-ENC1细胞系顺铂半抑制浓度IC50为9.472μmol/L。
关于药物敏感试验的原理，也可以用于筛选治疗子宫内膜癌药物：
测试组中，在含如上所述的人子宫内膜癌细胞系或其子代细胞系的培养体系中添加不同浓度测试化合物，并观察子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1的数量和/或生长情况；
在对照组中，在含如上所述的人子宫内膜癌细胞系或其子代细胞系的培养体系中不添加测试化合物，并观察子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1的数量和/或生长情况；
其中，如果测试组中子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1的数量或生长速度小于对照组，就表明该测试化合物是对子宫内膜癌细胞的生长或增殖有抑制作用，是治疗子宫内膜癌的候选药物。
f.细胞的成瘤性
收集对数生长期的P40代ZJB-ENC1细胞，用PBS洗一次，制成5×10 7/mL的细胞悬液。单侧注射100μL于雌性BALB/c裸鼠腋下，观察记录是否成瘤，且每周二、五两天记录观察瘤块直径，绘制肿瘤生长曲线。种植35天后取出瘤块。
种植35天裸鼠如图5A所示，可见明显的瘤块，可见该ZJB-ENC1细胞能在裸鼠体内形成肿瘤，具有致瘤性。
种植0-35天的肿瘤生长曲线如图5B所示，可见成瘤0-35天，瘤径快速增长，35天瘤径达29mm。相比于现有细胞系中通常为10mm，该ZJB-ENC1细胞表现非常强的体外成瘤能力。
g.肿瘤的病理学鉴定
(ⅰ)将上述d步骤中ZJB-ENC1细胞在裸鼠腋下接种35天后形成的肿瘤，按以下步骤进行石蜡包埋切片和H&E染色：将瘤块切为约1cm×1cm×0.3cm大小，置于组织包埋盒中，采用10％中性福尔马林进行固定；采用75％、80％、95％、95％、100％、100％乙醇依次脱水2h；采用二甲苯透明30min，操作2次；入60℃石蜡，浸蜡2h；采用德国徕卡JUNG包埋机包埋；采用德国徕卡2135石蜡切片机切片，厚度4μm；60℃烤箱，烤片1小时；采用德国徕卡ST5020染色机染色；采用德国徕卡CV5030封片机封片。
(ⅱ)在光学显微镜下(日本Olympus IMT-2正置显微镜)进行显微拍照，观察ZJB-ENC1细胞在裸鼠体内所形成肿瘤细胞的HE染色形态，结果见图5C。由图5C可知：细胞呈圆形，核浆比例小，与图3A所示的临床子宫内膜癌组织标本、图3B所示的ZJB-ENC1细胞HE染色形态相近，因此，临床子宫内膜癌组织标本、ZJB-ENC1细胞与ZJB-ENC1细胞在裸鼠体内所形成肿瘤细胞形成对应关系。
h.ZJB-ENC1细胞系和裸鼠瘤组织的ER、PR、PTEN免疫组化分析
按照上述步骤d中(ⅰ)的方法制作ZJB-ENC1细胞系细胞蜡块，按照步骤g中(ⅰ)的方法制作裸鼠瘤组织蜡块，4μm切片60℃烤片1小时后，采用二甲苯进行脱蜡处理，3％(质量百分含量)H2O2水孵育 10分钟后；采用小鼠PV两步免疫组化试剂盒测定(北京中杉金桥生物技术有限公司，PV-6002)；分别滴加小鼠来源一抗(雌激素受体ER、孕激素受体PR、PTEN)，4度冰箱过夜，PBS冲洗，2分钟3次；滴加山羊抗小鼠IgG抗体-HRP多聚体，室温孵育20分钟，PBS冲洗，2分钟3次；用DAB显色1分钟后，自来水充分冲洗；采用德国徕卡CV5030封片机封片。
ZJB-ENC1细胞系和裸鼠瘤组织的ER、PR、PTEN免疫组化分析结果如图6A～图6F所示。其中，图6A为ZJB-ENC1细胞系雌激素受体ER检测，表达为阴性(-)，图6B为裸鼠瘤块ER检测，表达为阴性(-)；图6C、图6D分别为ZJB-ENC1细胞、裸鼠瘤块孕激素受体PR表达检测，表达为阴性(-)；图6E、图6F分别为ZJB-ENC1细胞、裸鼠瘤块PTEN表达检测，表达为强阳性(+++)。
根据现有技术的记载，现细胞库常用子宫内膜癌细胞株的ER、PR的情况如下：KLE(ER阳性、PR阳性)、Ishikawa(ER阳性、PR阳性)、HHUA(ER阳性、PR阳性)、HEC-1-A(ER阳性)、RL-952(ER阳性)。而本发明中，ZJB-ENC1细胞系ER、PR均缺失，表达为阴性，可见本发明子宫内膜癌ZJB-ENC1细胞系分型不同于现细胞库常用子宫内膜癌细胞株。
由于PTEN在子宫内膜异位症恶变及内膜癌发生扮演着重要角色，子宫内膜癌的PTEN是子宫内膜癌细胞株分型检测的重要的分子标志物，且PTEN与P53同为重要的抑癌基因。不同于常用株Ishikawa PTEN活性缺失，ZJB-ENC1细胞系PTEN呈强阳性表达，可作为有效的靶点研究细胞株。ZJB-ENC1细胞系ER、PR活性皆缺失，PTEN强表达特性，与现有常用细胞系差异较大，可作为有前景的研究细胞株。
综合以上实验观察与验证，体外生长的ZJB-ENC1细胞具有较好的贴壁性，且细胞性状稳定，可稳定多次传代。且呈恶性生长。遗传物质STR鉴定该细胞为新的单一细胞株。免疫组化分析和病理学鉴定表明其ER表达阴性、PR表达阴性、PTEN强阳性表达、为中低分化细胞株，区别于现有子宫内膜癌常用细胞株。该ZJB-ENC1细胞能大量扩增，具有较强的增殖活性，能在裸鼠体内形成肿瘤，具有非常强的裸鼠成瘤能力。该ZJB-ENC1细胞、其在裸鼠体内成瘤和其来源的临床人子宫内膜癌组织标本形成对应关系，可以为研究体外、体内和临床抗癌药物敏感性及耐药性的相关性，以及人子宫内膜癌的发生、发展、转移和生物标志物提供新的试验材料。
由此可见，本发明的目的已经完整并有效的予以实现。本发明的方法以及原理已在实施例中予以展示和说明，在不背离所述原理的情况下，实施方式可作任意修改。所以，本发明包括了基于权利要求精神及权利要求范围的所有变形实施方式。

Claims (9)

1.人子宫内膜癌细胞系，其特征在于，命名为人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1，保藏编号为CCTCC NO：C2016118。
2.如权利要求1所述人子宫内膜癌细胞系的子代细胞系。
3.如权利要求1所述人子宫内膜癌细胞系或如权利要求2所述子代细胞系，其特征在于，所述的人子宫内膜癌细胞系或子代细胞系表达PTEN蛋白。
4.如权利要求1所述人子宫内膜癌细胞系或如权利要求2所述子代细胞系的用途，其特征在于，所述的人子宫内膜癌细胞系或子代细胞系用于在哺乳动物中产生子宫内膜癌瘤块。
5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述的哺乳动物是裸鼠。
6.如权利要求1所述人子宫内膜癌细胞系或如权利要求2所述子代细胞系在作为子宫内膜癌发生、子宫内膜癌发展或子宫内膜癌转移的细胞模型中的应用。
7.如权利要求1所述人子宫内膜癌细胞系或如权利要求2所述子代细胞系在建立子宫内膜癌动物模型中的应用。
8.如权利要求1所述人子宫内膜癌细胞系或如权利要求2所述子代细胞系在研究子宫内膜癌发生机理、耐药机理或筛选治疗子宫内膜癌药物中的应用。
9.如权利要求8所述的应用，包括以下步骤：
测试组中，在含权利要求1所述人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1或如权利要求2所述子代细胞系的培养体系中添加不同浓度测试化合物，并观察所述人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1或所述子代细胞系的数量和/或生长情况；
在对照组中，在权利要求1所述人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1或如权利要求2所述子代细胞系的培养体系中不添加测试化合物，并观察所述人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1或所述子代细胞系的数量和/或生长情况；
其中，如果测试组中所述人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1或所述子代细胞系的数量或生长速度小于对照组，就表明该测试化合物是对子宫内膜癌细胞的生长或增殖有抑制作用的治疗子宫内膜癌的候选药物。
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