CN106206226B - 一种扫描电镜样品熏染装置 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种扫描电镜样品熏染装置，装置由外柱形管、筛网套件、和密封外盖组成。使用时将样品放入套装于外柱形管腔内的筛网套件中，盖上密封内盖注入熏染液后盖上密封外盖进行熏染。本发明的有益效果：本发明提供了一种简便、安全、有效的扫描电镜样品熏染装置，克服了一些样品在常规扫描电镜样品固定、漂洗、脱水等制备过程中结构破坏和丢失，无法观察完整结构的缺点，不仅节约试剂用量、减少刺激性有毒试剂对人体和环境的影响，而且节约了实验成本和人力，提高了实验的成功率和样品质量。
Description
技术领域
本发明涉及一种对样品实施熏染的技术，具体是一种扫描电镜样品的熏染装置。该样品在生物医学研究中用于供扫描电镜观察使用。
背景技术
扫描电子显微镜技术是医学生物研究的重要手段，用于观察样品表面的细微结构。对于大多数的生物或材料样品，传统的扫描电镜标本制备方法采用化学或物理方法固定、脱水和干燥，然后喷镀碳或金属，具体步骤为：使用戊二醛固定液浸泡样品进行前固定；磷酸盐缓冲液对前固定后的样品进行漂洗；使用锇酸固定液浸泡样品进行后固定和染色；磷酸盐缓冲液对后固定和染色后的样品进行漂洗；级别酒精或丙酮等进行脱水；使用醋酸异戊酯或六甲基二硅烷胺等作为中间液取代样品中的游离水分；将样品放入真空干燥器进行干燥；使用导电粘合剂将样品粘在金属样品台上并放入真空喷镀仪中喷镀碳或金属膜。对于某些含水量低且不易变形的样品，可以不经固定和干燥而在较低加速电压下直接观察，如植物种子、花粉、动物毛发和昆虫等，但图象质量差，而且观察和拍摄照片时须尽可能迅速。
传统扫描电镜样品的制备常常使用一种非电解质强氧化剂锇酸作为生物样品的固定剂使蛋白质分子和脂肪得以固定，良好地保存组织细胞结构。此外，锇酸能增加样品的导电性和二次电子产额，经过锇酸固定的样品图像有较好的反差,是电镜技术中广泛使用的优良固定剂，但锇酸有剧毒且易升华挥发，对眼、鼻、喉粘膜有强烈的刺激作用，容易对人体和环境造成污染伤害。
常规扫描电镜样品制备的方法存在以下问题：1、对于制备某些含水量低但吸水容易膨胀变形的样品并不适用，固定液的浸泡会使样品吸水膨胀后结构破坏，无法进行完整结构的观察；2、多数不进行常规固定和染色的样品，仅能在较低电压下观察，观察和采图须迅速，而且获得的图像质量较差，严重影响了实验结果的质量和研究的准确性；3、部分学者利用锇酸易升华挥发的特性，使用细针或者细线穿插某些难以进行常规固定和染色的样品悬吊在青霉素瓶等容器中进行锇酸熏染后可提高扫描电镜成像质量，但上述方法所使用的设备性能在克服上述某方面缺陷的同时，又常常带来操作复杂、样品易脱落，且对某些质脆和体积较大的样品不适用等缺点；4、锇酸有剧毒且易升华挥发，进行相关操作时须注意避光和密封，否则容易导致溶液挥发失效、污染环境、伤害人体。
发明内容
本发明针对现有技术中的缺陷，提供一种扫描电镜样品的熏染装置。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：
一种扫描电镜样品熏染装置由外柱形管、筛网套件、密封内盖和密封外盖组成，形成密闭配合装置。
1.各部件结抅
所述外柱形管底端封闭，上端开口形成柱形管腔，外壁中上方设置有突出管壁的定位环和位于定位环上的定位件入口。
所述筛网套件为带筛网套件外翻边的上端开口的柱形筛网状管腔结构，其管腔小于外柱形管的管腔、高度略低于外柱形管管腔高度，套装于外柱形管腔内中上部，所述筛网套件外翻边为环形片，上设置有注入和排出液体的开口。
所述密封内盖为带密封内盖外翻边的圆形片状结构，外翻边上设置有注入和排出液体的中空柱形管，其下方开口的内径和方向与筛网套件上的注入和排出液体的开口一致。
所述密封外盖为一端开口的中空圆柱形盖，其下方开口缘侧壁设置有L型定位件。
2.各部件的连接关系
所述密封外盖与密封内盖、筛网套件、外柱形管依次叠合贯通，密封外盖与密封内盖、筛网套件、外柱形管叠合时，L型定位件能垂直贯穿外柱形管外壁的定位环上的定位件入口，通过左右旋动外柱形管或密封外盖使L型定位件偏离定位件入口，实现外柱形管、筛网套件、密封内盖和密封外盖的密闭配合。
上述外柱形管和密封外盖由棕色玻璃等透明材料制成，筛网套件可由玻璃或陶瓷制成，密封内盖由橡胶、硅胶制成。
上述定位环位于外柱形管1外壁的中上1/5～1/2处。
上述外柱形管上方开口与柱形管外壁定位环之间的柱形管外壁磨砂段经过磨砂处理；其外壁下方设有容量刻度线，最高处的容量刻度线低于齐平筛网套件底部；管腔内半径大于筛网套件的柱形筛网状管腔内半径0.4～5mm。
上述筛网套件的柱形筛网状管腔的内径小于或等于50mm，高度小于或等于250mm；其筛网套件底部和筛网套件侧壁均分布有筛网孔，孔径及孔间距小于所熏染样品的最小径；其筛网套件外翻边上设置的注入和排出液体的开口内径为0.4～5mm。
上述密封内盖外翻边上注入和排出液体的中空柱形管内径为0.4～5mm，高度为密封外盖腔内底部到密封内盖外翻边的距离。
上述密封外盖腔内壁经过磨砂处理，腔内高为外柱形管外壁磨砂段、筛网套件的筛网套件外翻边、密封内盖的密封内盖外翻边和注入和排出液体的中空柱形管高度之和；其密封外盖上设置的L型定位件的短臂平行于密封外盖开口边缘朝内、长臂外沿与密封外盖外沿呈直线，宽度小于外柱形管外壁定位环上的定位件入口宽度，内沿高度为外柱形管外壁定位环的高度。
本发明的优点或有益效果：
1.本发明通过利用熏染装置对样品进行锇酸的熏染，克服了某些难以常规进行固定液浸泡固定和染色的样品因浸泡吸水膨胀导致结构破坏、丢失的缺点，不仅减少了样品在处理过程中的变形，更好地保存了样品的组织细胞结构，同时还能通过锇酸熏染增加样品的导电性和二次电子产额，使样品图像有较好的反差,提高扫描电镜采集图像的质量，使最后得到的样品结构完整，无明显破损、丢失现象，样品结构清晰可现，图像立体感强。
2.本发明通过利用棕色玻璃等透明材料制成熏染装置对样品进行锇酸的熏染，在熏染过程中降低了光线对锇酸的影响；装置中的橡胶或硅胶制成的密封盖以及经过磨砂处理的外密封盖内壁和柱形管外壁磨砂段进行嵌合时具有良好的密封性，大幅度降低了锇酸的挥发；此外，由于样品在熏染过程中未直接接触熏染用的锇酸，因此在熏染后可直接对装置中的锇酸进行回收和二次利用，大大减少了剧毒物质锇酸的使用，节约了实验成本，降低了其对人体和环境的影响。
附图说明
图1是本发明扫描电镜样品熏染装置的结构示意图。
图中：外柱形管1、筛网套件2、密封内盖3、密封外盖4、筛网套件外翻边5、定位环6、定位件入口7、注入和排出液体的开口8、注入和排出液体的中空柱形管9、L型定位件10、密封内盖外翻边11、柱形管外壁磨砂段12、外柱形管外壁容量刻度线13、筛网套件底部14、筛网套件侧壁15。
图2为本发明实施例使用熏染装置制备胖大海扫描电镜样品获得的扫描电镜图像。
图3为图2中扫描电镜图像进一步放大后的图像。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步详细描述。
本发明一种扫描电镜样品熏染装置如图1所示，一种扫描电镜样品熏染装置由外柱形管1、筛网套件2、密封内盖3和密封外盖4组成，形成密闭配合装置。
1.各部件结抅
所述外柱形管1底端封闭，上端开口形成柱形管腔，外壁中上方设置有突出管壁的定位环6和位于定位环上的定位件入口7。
所述筛网套件2为带筛网套件外翻边5的上端开口的柱形筛网状管腔结构，其管腔小于外柱形管1的管腔、高度略低于外柱形管1管腔高度，套装于外柱形管1腔内中上部，所述筛网套件外翻边5为环形片，上设置有注入和排出液体的开口8。
所述密封内盖3为带密封内盖外翻边11的圆形片状结构，外翻边11上设置有注入和排出液体的中空柱形管9，其下方开口的内径和方向与筛网套件2上的注入和排出液体的开口8一致。
所述密封外盖4为一端开口的中空圆柱形盖，其下方开口缘侧壁设置有L型定位件10。
2.各部件的连接关系
所述密封外盖4与密封内盖3、筛网套件2、外柱形管1依次叠合贯通，密封外盖4与密封内盖3、筛网套件2、外柱形管1叠合时能垂直贯穿外柱形管1外壁的定位环6上的定位件入口7，通过左右旋动外柱形管1或密封外盖4使L型定位件10偏离定位件入口7，实现外柱形管1、筛网套件2、密封内盖3和密封外盖4的密闭配合。
上述外柱形管1和密封外盖4由棕色玻璃等透明材料制成，筛网套件2可由玻璃或陶瓷制成，密封内盖3由橡胶、硅胶等半软材料制成。
上述定位环6位于外柱形管1外壁的中上1/5～1/2处。
上述外柱形管1上方开口与柱形管外壁定位环6之间的柱形管外壁磨砂段12经过磨砂处理；其外壁下方设有容量刻度线13，最高处的容量刻度线低于齐平筛网套件底部14；管腔内半径大于筛网套件2的柱形筛网状管腔内半径0.4～5mm。
上述筛网套件2的柱形筛网状管腔的内径小于或等于50mm，高度小于或等于250mm；其筛网套件底部14和筛网套件侧壁15均分布有筛网孔，孔径及孔间距小于所熏染样品的最小径；其筛网套件外翻边5上设置的注入和排出液体的开口8内径为0.4～5mm。
上述密封内盖外翻边11上注入和排出液体的中空柱形管9内径为0.4～5mm，高度为密封外盖4腔内底部到密封内盖外翻边11的距离。
上述密封外盖4腔内壁经过磨砂处理，腔内高为外柱形管外壁磨砂段12、筛网套件2的筛网套件外翻边5、密封内盖3的密封内盖外翻边11和注入和排出液体的中空柱形管9高度之和；其密封外盖4上设置的L型定位件10的短臂平行于密封外盖4开口边缘朝内、长臂外沿与密封外盖4外沿呈直线，宽度略小于外柱形管1外壁定位环6上的定位件入口7宽度，内沿高度为外柱形管1外壁定位环6的高度。
使用本发明扫描电镜样品熏染装置对样品实施熏染的步骤为：
1.准备：将待熏染的样品放入筛网套件2中，手持筛网套件外翻边5将装有样品的筛网套件2套装于外柱形管1腔内中上部；
2.手持密封内盖外翻边11将密封内盖3叠合于筛网套件2上；
3.调整密封内盖外翻边11上注入和排出液体的中空柱形管9的下方开口，使之对准筛网套件外翻边5上注入和排出液体的开口8，实现二者的贯通；
4.在通风厨中使用一次性注射器吸取适量的锇酸，沿着注入和排出液体的中空柱形管9和注入和排出液体的开口8注入外柱形管1管腔内，通过观察外柱形管1外壁下方的容量刻度线13，避免注入过量的锇酸导致其液面浸没筛网套件底部14；
5.将密封外盖4上的L型定位件10垂直贯穿外柱形管1外壁定位环6上的定位件入口7，通过左右旋动外柱形管1或密封外盖4使L型定位件10偏离定位件入口7，实现外柱形管1、筛网套件2、密封内盖3和密封外盖4的密闭配合；
6.将装有样品的熏染装置放置于4℃避光进行样品熏染15～120min；
7.在通风厨中打开密封外盖4，使用一次性注射器经注入和排出液体的中空柱形管9和注入和排出液体的开口8通道吸出外柱形管1腔内的锇酸回收备用；
8.在通风厨中打开密封内盖3，通风15min后取出筛网套件2中的样品；
9.将样品放入真空干燥器中干燥1～4h；
10.使用导电性良好的粘合剂将样品粘在金属样品座上，放入喷镀仪中进行金属膜喷镀；
11.将完成金属膜喷镀的样品进行扫描电镜观察和采图，如图2和图3所示。
总之，以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所作的均等变化与修饰，皆应属本发明专利的涵盖范围。
Claims (7)
1.一种扫描电镜样品熏染装置，其特征在于：装置由外柱形管(1)、筛网套件(2)、密封内盖(3)和密封外盖(4)组成，形成密闭配合装置；
1)各部件结抅
所述外柱形管(1)底端封闭，上端开口形成柱形管腔，外壁中上方设置有突出管壁的定位环(6)和位于定位环上的定位件入口(7)；
所述筛网套件(2)为带筛网套件外翻边(5)的上端开口的柱形筛网状管腔结构，其管腔小于外柱形管(1)的管腔、高度低于外柱形管(1)管腔高度，套装于外柱形管(1)腔内中上部，所述筛网套件外翻边(5)为环形片，上设置有注入和排出液体的开口(8)；
所述密封内盖(3)为带密封内盖外翻边(11)的圆形片状结构，外翻边(11)上设置有注入和排出液体的中空柱形管(9)，其下方开口的内径和方向与筛网套件(2)上的注入和排出液体的开口(8)一致；
所述密封外盖(4)为一端开口的中空圆柱形盖，其下方开口缘侧壁设置有L型定位件(10)；
2)各部件的连接关系
所述密封外盖(4)与密封内盖(3)、筛网套件(2)、外柱形管(1)依次叠合贯通，密封外盖(4)与密封内盖(3)、筛网套件(2)、外柱形管(1)叠合时，L型定位件(10)能垂直贯穿外柱形管(1)外壁的定位环(6)上的定位件入口(7)，通过左右旋动外柱形管(1)或密封外盖(4)使L型定位件(10)偏离定位件入口(7)，实现外柱形管(1)、筛网套件(2)、密封内盖(3)和密封外盖(4)的密闭配合。
2.根据权利要求1所述的一种扫描电镜样品熏染装置，其特征在于：所述外柱形管(1)和密封外盖(4)可由棕色玻璃透明材料制成，筛网套件(2)可由玻璃或陶瓷制成，密封内盖(3)可由橡胶或硅胶制成。
3.根据权利要求1所述的一种扫描电镜样品熏染装置，其特征在于：所述定位环(6)位于外柱形管(1)外壁的中上1/5～1/2处。
4.根据权利要求1所述的一种扫描电镜样品熏染装置，其特征在于：所述外柱形管(1)上方开口与柱形管外壁定位环(6)之间的柱形管外壁磨砂段(12)经过磨砂处理；其外壁下方设有容量刻度线(13)，最高处的容量刻度线低于齐平筛网套件底部(14)；管腔内半径大于筛网套件(2)的柱形筛网状管腔内半径0.4～5mm。
5.根据权利要求1所述的一种扫描电镜样品熏染装置，其特征在于：所述筛网套件(2)的柱形筛网状管腔的内径小于或等于50mm，高度小于或等于250mm；其筛网套件底部(14)和筛网套件侧壁(15)均分布有筛网孔，孔径及孔间距小于所熏染样品的最小径；其筛网套件外翻边(5)上设置的注入和排出液体的开口(8)内径为0.4～5mm。
6.根据权利要求1所述的一种扫描电镜样品熏染装置，其特征在于：所述密封内盖外翻边(11)上注入和排出液体的中空柱形管(9)内径为0.4～5mm，高度为密封外盖(4)腔内底部到密封内盖外翻边(11)的距离。
7.根据权利要求1所述的一种扫描电镜样品熏染装置，其特征在于：所述密封外盖(4)腔内壁经过磨砂处理，腔内高为外柱形管外壁磨砂段(12)、筛网套件(2)的筛网套件外翻边(5)、密封内盖(3)的密封内盖外翻边(11)和注入和排出液体的中空柱形管(9)高度之和；其密封外盖(4)上设置的L型定位件(10)的短臂平行于密封外盖(4)开口边缘朝内、长臂外沿与密封外盖(4)外沿呈直线，宽度小于外柱形管(1)外壁定位环(6)上的定位件入口(7)宽度，内沿高度为外柱形管(1)外壁定位环(6)的高度。
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