CN106190944B - 一种分层培养富集丛枝菌根真菌孢子的方法 - Google Patents
一种分层培养富集丛枝菌根真菌孢子的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106190944B CN106190944B CN201610532342.7A CN201610532342A CN106190944B CN 106190944 B CN106190944 B CN 106190944B CN 201610532342 A CN201610532342 A CN 201610532342A CN 106190944 B CN106190944 B CN 106190944B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- plant
- matrix
- culture vessel
- layer
- culture
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N3/00—Spore forming or isolating processes
Abstract
一种分层培养富集丛枝菌根真菌孢子的方法,是在培养容器内分层放置下层基质、中层基质、隔离网与上层基质,再将无菌的宿主植物植株种植于上层基质内;将该培养容器放置于容器托盘内,培养容器底部设有排吸水口;在植株种植层浇灌低磷营养液,在容器托盘内浇灌高磷营养液,由于将培养容器分为三层且中层作为缓冲层,植株种植层浇灌低磷营养液保持植株基本的生长需求,下层基质虹吸高磷营养液以维持下层高磷环境,同时中层的大颗粒阻断最下层到植株种植层的虹吸作用,丛枝菌根真菌为了帮助宿主吸收磷势必进入下层,在宿主植物将死时在下层大量产孢,从而在最下层获得大量的丛枝菌根真菌孢子,用来单孢扩繁和鉴定。
Description
技术领域
本发明涉及一种富集丛枝菌根真菌的方法,具体是一种分层培养富集丛枝菌根真菌孢子的方法,属于微生物领域。
背景技术
丛枝菌根真菌是土壤中广泛与植物共生的一类真菌,其种类繁多,现在已经被单独规划为球囊菌门。由于其与植物建立互利共生的关系,人们广泛研究其互作机理,并收集不同地域的菌种与菌株,以发现不同特性的菌株或新种。但是,由于野外环境下该类菌有活性的孢子数目较少,难以进行分离与鉴定。故此类真菌的富集工作比较困难,传统的富集方法就是用野外原宿主根际土栽种宿主植物扩繁。但是传统的方法由于受到植物根系的限制不利于富集到丛枝菌根真菌,更不能同时富集到较多的孢子,所需的孢子只能进行二次富集,所以比较费时费力。目前尚没有一种简单实用的既容易富集到丛枝菌根真菌又能获得大量孢子的方法。
发明内容
本发明的目的是为了克服目前富集丛枝菌根真菌方法所存在的不易富集到大量丛枝菌根真菌孢子的缺陷,公开了一种分层培养富集丛枝菌根真菌孢子的方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:
a.首先用粒径为2mm的下层基质填充至培养容器的三分之一至二分之一处,然后再填放1cm厚粒径为4mm的中层基质;
b.再将带有框架的孔径为45um的隔离网放置中层基质上,其框架的四周与培养容器内壁贴合紧实,以使上层根系无法从框架和培养容器的贴合处通过;
c.将采集的新鲜野外宿主根际土与粒径为2mm的基质混合作为上层基质填充在隔离网上面,再将无菌的宿主植物植株种植于上层基质内;
d.将该培养容器放置于容器托盘内,培养容器底部设有排吸水口;
e.在植株种植层对植物浇灌P浓度调为1/100的Hoagland营养液,每30日浇灌一次,平时浇灌蒸馏水保持植株种植层湿润;同时在容器托盘内每15日浇灌P浓度调为2倍的Hoagland营养液,这样容器托盘中的营养液可以通过排吸水口吸入下层基质,以便让培养容器内的下层基质保持高的磷浓度;
f.丛枝菌根真菌的生活史为90日,经过120日的培养后让宿主植株自然干死,然后将植株种植层去掉,利用湿筛倾析法来获得下层基质与中层基质中的带有连孢菌丝的丛枝菌根真菌孢子。
本发明由于将培养容器分为了三层且中层作为缓冲层,植株种植层浇灌少磷营养液保持植株基本的生长需求,下层基质从下面虹吸高磷营养液以维持下层高磷环境,同时采用中层的大颗粒阻断最下层到植株种植层的虹吸作用,这样与植株建立共生关系的丛枝菌根真菌为了帮宿主获得磷势必会进入最下层,并会在宿主植物将死时在下层大量产孢,从而便可在最下层获得大量的丛枝菌根真菌孢子,以用来单孢扩繁和鉴定。本发明所需要的材料,以及培养方式在一般的实验室条件下均可达到,使用简单,且装置可重复利用,可行性高。
附图说明
附图是本发明主视结构剖面示意图。
附图标记说明如下:培养容器1,容器托盘2,上层基质3,隔离网4,中层基质5,下层基质6,排吸水口7。
具体实施方式
以下结合具体实施例及附图对本发明做进一步详细说明,本实施例只是为了解释本发明而不是限制本发明:
a.首先用粒径为2mm的干净河沙作为下层基质(6)填充至培养容器的三分之一处,然后再填放1cm厚的粒径为4mm的干净河沙为中层基质(5);
b.再将带有框架的孔径为45um的隔离网(4)放置中层基质(5)上,其框架的四周与培养容器(1)内壁贴合紧实,以使上层根系无法从框架和培养容器(1)的贴合处通过;
c.将采集的新鲜野外宿主植物的根际土与2mm的干净河沙混合作为上层基质(3)填充在隔离网(4)上面,再将无菌的宿主植物植株种植于上层基质(3)内;
d.将该培养容器(1)放置于容器托盘(2)内,培养容器(1)底部设有排吸水口(7);
e.每30日从上层对植株种植层浇灌P浓度调为1/100的Hoagland营养液,平时浇灌蒸馏水保持植株种植层湿润,同时在容器托盘(2)内每15日添加40ml的P浓度调为2倍的Hoagland营养液,容器托盘(2)中的营养液可以通过排吸水口(7)吸入下层基质(5);
f.丛枝菌根真菌的生活史为90日,经过120日的培养后停止浇水,让宿主植株自然干死,然后将植株种植层去掉,利用湿筛倾析法来获得下层基质与中层基质中的带有连孢菌丝的丛枝菌根真菌孢子。
Claims (2)
1.一种分层培养富集丛枝菌根真菌孢子的方法,其特征在于所采用的技术方案是:
a.首先用粒径为2mm的下层基质(6)填充至培养容器的三分之一至二分之一处,然后再填放1cm厚粒径为4mm的中层基质(5);
b.再将带有框架的孔径为45um的隔离网(4)放置中层基质上(5),其框架的四周与培养容器(1)内壁贴合紧实,以使上层根系无法从框架和培养容器(1)的贴合处通过;
c.将采集的新鲜野外宿主根际土与粒径为2mm的基质混合作为上层基质(3)填充在隔离网(4)上面,再将无菌的宿主植物植株种植于上层基质(3)内;
d.将该培养容器(1)放置于容器托盘(2)内,培养容器(1)底部设有排吸水口(7);
e.在植株种植层对植物浇灌P浓度调为1/100的Hoagland营养液,每30日浇灌一次,平时浇灌蒸馏水保持植株种植层湿润;同时在容器托盘(2)内每15日浇灌P浓度调为2倍的Hoagland营养液,这样容器托盘(2)中的营养液可以通过排吸水口(7)吸入下层基质(5),以便让培养容器内的下层基质保持高的磷浓度;
f.丛枝菌根真菌的生活史为90日,经过120日的培养后让宿主植株自然干死,然后将植株种植层去掉,利用湿筛倾析法来获得下层基质与中层基质中的带有连孢菌丝的丛枝菌根真菌孢子。
2.根据权利要求1所述的一种分层培养富集丛枝菌根真菌孢子的方法,其特征在于:
a.首先用粒径为2mm的干净河沙作为下层基质(6)填充至培养容器的三分之一处,然后再填放1cm厚的粒径为4mm的干净河沙为中层基质(5);
b.再将带有框架的孔径为45um的隔离网(4)放置中层基质(5)上,其框架的四周与培养容器(1)内壁贴合紧实,以使上层根系无法从框架和培养容器(1)的贴合处通过;
c.将采集的新鲜野外宿主植物的根际土与2mm的干净河沙混合作为上层基质(3)填充在隔离网(4)上面,再将无菌的宿主植物植株种植于上层基质(3)内;
d.将该培养容器(1)放置于容器托盘(2)内,培养容器(1)底部设有排吸水口(7);
e.每30日从上层对植株种植层浇灌P浓度调为1/100的Hoagland营养液,平时浇灌蒸馏水保持植株种植层湿润,同时在容器托盘(2)内每15日添加40ml的P浓度调为2倍的Hoagland营养液,容器托盘(2)中的营养液可以通过排吸水口(7)吸入下层基质(5);
f.丛枝菌根真菌的生活史为90日,经过120日的培养后停止浇水,让宿主植株自然干死,然后将植株种植层去掉,利用湿筛倾析法来获得下层基质与中层基质中的带有连孢菌丝的丛枝菌根真菌孢子。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610532342.7A CN106190944B (zh) | 2016-07-07 | 2016-07-07 | 一种分层培养富集丛枝菌根真菌孢子的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610532342.7A CN106190944B (zh) | 2016-07-07 | 2016-07-07 | 一种分层培养富集丛枝菌根真菌孢子的方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN106190944A CN106190944A (zh) | 2016-12-07 |
CN106190944B true CN106190944B (zh) | 2019-10-01 |
Family
ID=57472430
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201610532342.7A Active CN106190944B (zh) | 2016-07-07 | 2016-07-07 | 一种分层培养富集丛枝菌根真菌孢子的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN106190944B (zh) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107036873B (zh) * | 2017-05-09 | 2023-07-04 | 黑龙江大学 | 一种原位提取丛枝菌根化植物根系分泌物的装置及方法 |
CN108504726B (zh) * | 2018-03-28 | 2021-10-26 | 华南农业大学 | 采用amf单个孢子微量dna进行pcr预处理的方法 |
CN109355244A (zh) * | 2018-12-15 | 2019-02-19 | 西北农林科技大学 | 丛枝菌根真菌孢子富集筛选方法及装置 |
CN110521564B (zh) * | 2019-09-17 | 2021-07-20 | 华南农业大学 | 活体菌丝网侵染植物的菌根化育苗方法 |
CN110476713B (zh) * | 2019-09-26 | 2021-03-16 | 华南农业大学 | 连续收集丛枝菌根真菌菌丝的装置及方法 |
CN111165266B (zh) * | 2020-01-08 | 2021-06-29 | 华南农业大学 | 分室培养连续扩繁丛枝菌根真菌孢子的方法 |
CN114657074A (zh) * | 2022-04-15 | 2022-06-24 | 北京市农林科学院 | 一种基质养分分层高效繁殖丛枝菌根真菌孢子的培养方法 |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1354252A (zh) * | 2000-11-21 | 2002-06-19 | 李晓林 | 以玻璃珠为培养基质的丛枝菌根真菌的培养 |
CN201424469Y (zh) * | 2009-06-16 | 2010-03-17 | 贵州省烟草科学研究所 | 渗透营养式丛枝菌根真菌扩繁装置 |
CN103875447A (zh) * | 2014-02-19 | 2014-06-25 | 西北农林科技大学 | 一种植物与am真菌共生的双向培养盒 |
CN203999584U (zh) * | 2014-08-06 | 2014-12-10 | 兰州大学 | 复合式丛枝菌根真菌分室培养装置 |
CN104371932A (zh) * | 2014-10-21 | 2015-02-25 | 宁夏农林科学院 | 一种am真菌菌剂的生产方法 |
CN103548660B (zh) * | 2013-10-21 | 2015-07-22 | 西北农林科技大学 | 一种能自动吸液的植物育苗盆 |
-
2016
- 2016-07-07 CN CN201610532342.7A patent/CN106190944B/zh active Active
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1354252A (zh) * | 2000-11-21 | 2002-06-19 | 李晓林 | 以玻璃珠为培养基质的丛枝菌根真菌的培养 |
CN201424469Y (zh) * | 2009-06-16 | 2010-03-17 | 贵州省烟草科学研究所 | 渗透营养式丛枝菌根真菌扩繁装置 |
CN103548660B (zh) * | 2013-10-21 | 2015-07-22 | 西北农林科技大学 | 一种能自动吸液的植物育苗盆 |
CN103875447A (zh) * | 2014-02-19 | 2014-06-25 | 西北农林科技大学 | 一种植物与am真菌共生的双向培养盒 |
CN203999584U (zh) * | 2014-08-06 | 2014-12-10 | 兰州大学 | 复合式丛枝菌根真菌分室培养装置 |
CN104371932A (zh) * | 2014-10-21 | 2015-02-25 | 宁夏农林科学院 | 一种am真菌菌剂的生产方法 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
低磷与接种菌根对柑橘菌根形成及果实品质的影响;隋宝强等;《南方农业》;20070731;第1卷(第4期);5-7 * |
柑橘丛枝菌根真菌生长与根际有效磷和磷酸酶活性的相关性;吴强盛等;《应用生态学报》;20060430;第17卷(第4期);685-689 * |
菌根与磷素之间的关系;James Buwalda 郑守林译;《国外畜牧学.草原与牧草》;19870630;32-33 * |
银杏丛枝菌根及其与土壤有效磷的关系;吴强盛;《长江大学学报》;20080930;第5卷(第3期);49-51 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN106190944A (zh) | 2016-12-07 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN106190944B (zh) | 一种分层培养富集丛枝菌根真菌孢子的方法 | |
CN104215747B (zh) | 土柱淋溶装置 | |
Rossiter | Wine and oil processing at Roman farms in Italy | |
CN103749205A (zh) | 一种根际土壤分离与收集的植物根袋综合培养装置 | |
CN110476713A (zh) | 连续收集丛枝菌根真菌菌丝的装置及方法 | |
Valadbeigi et al. | Megaspora rimisorediata (Pertusariales, Megasporaceae), a new sorediate species from Iran and its affinities with Aspicilia sensu lato | |
CN103548660B (zh) | 一种能自动吸液的植物育苗盆 | |
Dodd | The archaeology of wine production in Roman and pre-Roman Italy | |
CN105219652A (zh) | 一种野生巴楚蘑菇菌丝的分离纯化方法 | |
CN204539833U (zh) | 一种集雨施肥装置 | |
CN206061622U (zh) | 立体生态种植器 | |
Chen et al. | Four species of polyporoid fungi newly recorded from Taiwan | |
CN210143587U (zh) | 一种新型鱼菜共生栽培装置 | |
CN208964617U (zh) | 一种用于削减农业面源污染的装置 | |
CN206182135U (zh) | 一种泥鳅幼苗收集装置 | |
Leuchtmann et al. | The taxonomic position of the genus Heydenia (Pyronemataceae, Pezizales) based on molecular and morphological data | |
Yamamoto et al. | Endogone corticioides sp. nov. from subalpine conifer forests in Japan and China, and its multi-locus phylogeny | |
CN209247757U (zh) | 一种作物根系发育试验观察室 | |
CN207167003U (zh) | 盐碱地改良系统 | |
CN206940700U (zh) | 一种污泥利用系统 | |
ARAGÓN et al. | Aspicilia uxoris, an epiphytic species from Algeria, Morocco and Spain | |
CN206118559U (zh) | 一种环保育苗板 | |
Kout et al. | Revision of the genus Cotylidia (Basidiomycota, Hymenochaetales) in the Czech Republic | |
CN210202581U (zh) | 一种双围堰树池 | |
CN108935054A (zh) | 一种矩形玻璃容器在筛选适应喀斯特地貌植物的应用及其筛选方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20171225 Address after: 510642 Guangdong city of Guangzhou province Tianhe District five mountain forestry and landscape architecture, South China Agricultural University Applicant after: South China Agricultural University Address before: 712100 Xianyang city of Shaanxi province Yangling Demonstration Zone Road No. 3 Tai Forestry College Applicant before: Northwest A & F University |
|
TA01 | Transfer of patent application right | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |